CN107727787A - 一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液：取待检药材粉末，加入甲醇提取，过滤，浓缩，得供试品溶液；(2)制备对照品溶液：取雪胆素甲、雪胆素乙对照品，混合，加甲醇配制成混合对照品溶液；(3)薄层鉴别：分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，展开剂展开，显色，检视，比对即可；所述展开剂由下述体积份的成分组成：石油醚4‑6份、乙酸乙酯0.5‑1.5份、甲醇0.1‑1份。本发明方法，通过选择合适的对照品和展开条件，可以准确可靠地鉴别不苦的峨眉雪胆，将其与苦味雪胆(长果雪胆和巨花雪胆)区分开来，为临床用药提供了有效保障。

Description

一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法

技术领域

本发明属于药材检测领域，具体涉及一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法。

背景技术

川标所收载的雪胆为葫芦科雪胆属植物长果雪胆Hemsleya dolichocarpaW.J.Chang，峨眉雪胆Hems-leya omeiensis L.T.Shen et W.J.Chang或巨花雪胆Hemsleyagigantha W.J.Chang的干燥块根。秋末春初采挖，除去杂质，趁鲜切片，干燥。别名金龟莲金盆罗锅底，四川省习称金龟莲。能清热解毒，消炎止痛，用于菌痢，肠炎，支气管炎，急性扁桃体炎，虚火牙痛，胃痛。本品历代本草均有记载。《本草便方》称金盆，《修订增补天宝本草》和《四川中药志》均称金龟莲，《分类草药性》以金银盆收载。

其中，长果雪胆味极苦，巨花雪胆味苦，峨眉雪胆味不苦。长果雪胆和巨花雪胆由于其苦味使得患者接受度差，而峨眉雪胆味不苦的特点更易被患者接纳宜于临床服用，同时峨眉雪胆对治疗胃火牙痛的良好效果使其被市场大量需求。因此，有必要将峨眉雪胆与苦味雪胆包括长果雪胆、彭县雪胆进行区分。

然而，由于目前对于雪胆的研究较少，许多有效成分或特征性成分是未知的，从而对其缺乏可量化的治疗评价方法和标准，难以有效区分其中的苦味雪胆，尤其是干燥后的药材。为了确保雪胆的质量和接受度，需要一种能准确、可靠鉴别是否为苦味雪胆的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法。

本发明提供了一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：

取待检药材粉末，加入甲醇提取，过滤，浓缩，得供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：

取雪胆素甲、雪胆素乙对照品，混合，加甲醇配制成混合对照品溶液；

(3)薄层鉴别：

分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，展开剂展开，显色，检视，比对即可；所述展开剂由下述体积份的成分组成：

石油醚4-6份、乙酸乙酯0.5-1.5份、甲醇0.1-1份。

其中，所述展开剂由下述体积份的成分组成：

石油醚5份、乙酸乙酯1份、甲醇0.5份。

其中，步骤(1)中，所述提取是超声提取；优选的，所述超声提取的时间为40分钟。

其中，步骤(1)中，每2g雪胆粉末用甲醇20mL。

其中，步骤(1)中，浓缩时，将滤液浓缩2.5倍体积。

其中，所述步骤(3)中，所述薄层板为高效硅胶G板。

其中，步骤(3)中，所述对照品溶液点样的点样量为3μL，供试品溶液点样的点样量为5μL。

其中，步骤(3)中，所述显色是以2％香草醛硫酸乙醇溶液为显色剂，105℃下加热显色。

其中，步骤(3)中，所述比对的方法如下：

首先，在供试品色谱中，是否存在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，确定供试品是否为雪胆；

其次，供试品色谱中，是否存在Rf值为0.47-0.52的亮蓝色斑点。

其中，鉴别的雪胆品种为不苦的雪胆和苦味雪胆，其中不苦的雪胆为峨眉雪胆、彭县雪胆，苦味的雪胆为长果雪胆、巨花雪胆。

苦味雪胆：包括长果雪胆和巨花雪胆；而峨眉雪胆和彭县雪胆不苦。

本发明的峨眉雪胆薄层色谱鉴别方法，通过选择合适的对照品和展开条件，可以准确可靠地鉴别不苦的峨眉雪胆和彭县雪胆，将其与苦味雪胆(长果雪胆和巨花雪胆)区分开来，为临床用药提供了有效保障。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1使用展开系统I的薄层色谱检测结果；图1-4、图9中，1、2、3峨眉雪胆药材；4彭县雪胆药材；5长果雪胆药材；6巨花雪胆；7a雪胆甲素b雪胆乙素。

图2使用展开系统II的薄层色谱检测结果。

图3使用展开系统III的薄层色谱检测结果。

图4不同显色剂的的薄层色谱检测结果。

图5不同点样量的考察；其中，1雪胆甲素2μl、2雪胆甲素3μl、3雪胆甲素5μl；4雪胆乙素2μl、5雪胆乙素3μl、6雪胆乙素5μl；7峨眉雪胆药材3μl、8峨眉雪胆药材5μl、9峨眉雪胆药材7μl、10峨眉雪胆药材10μl；11长果雪胆药材3μl、12长果雪胆药材5μl、13长果雪胆药材7μl、14雪胆药材10μl。

图6展开条件(不同温度)的耐用性考察；图6-7中，1峨眉雪胆药材；2彭县雪胆药材；3长果雪胆药材；4巨花雪胆药材；5a雪胆甲素对照品、b雪胆乙素对照品。

图7展开条件(不同相对湿度)的耐用性考察。

图8自制板的薄层色谱检测结果；其中，1、2、3峨眉雪胆药材；4长果雪胆药材；5巨花雪胆药材；6彭县雪胆药材；7、9b雪胆乙素对照品；8、9a雪胆甲素对照品。

图9预制板的薄层色谱检测结果。

具体实施方式

下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

实施例1 本发明的薄层色谱鉴别方法

1、供试品溶液制备

取雪胆药材粉末(过二号筛)2g，加甲醇20ml，超声处理40分钟，滤过，取滤液10mL浓缩至4mL作为供试品溶液。

2、对照品溶液配制

取雪胆素甲对照品，加甲醇制成每lml含1.5mg的溶液，作为对照品溶液；取雪胆素乙对照品，加甲醇制成每lml含1.5mg的溶液，作为对照品溶液。

3、固定相：高效硅胶G薄层板。

4、薄层色谱鉴别

分别吸取供试品溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇(5:1：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点清晰，取出，分别在365nm紫外和日光灯下检视，即可。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果：

试验例1 本发明方法工艺条件的考察

一、实验材料

1.仪器

BSA224S型精密电子天平(北京赛多利斯天平有限公司，d＝0.1mg，max220g)；HHS-8S电子恒温不锈钢水浴锅(上海宜昌仪器纱器厂)；ZF-90型紫外分析仪(温州奥利生物医学仪器厂)；UPH-Ⅰ-10T超纯水器(成都超纯科技有限公司)；毛细管(0.3mm,100mm华西医科大学仪器厂)

1.试剂试药

乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚、甲酸等(试剂均有成都市科龙化工厂试剂提供；高效硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂)。

雪胆素甲对照品(供含量测定用)：成都菲普德有限公司，批号16061504。

雪胆素乙(供鉴别用)：成都菲普德有限公司，批号150801。

长果雪胆为葫芦科植物长果雪胆Hemsleya dolichocarpa W.J.Chang的干燥块根，产地为四川省彭州。

巨花雪胆：葫芦科植物巨花雪胆Hemsleya gigantha W.J.Chang的干燥块根，产地为四川省石绵。

峨眉雪胆为葫芦科植物峨眉雪胆Hemsleya omeiensis L.T.Shen et W.J.Chang的干燥块根，产地为四川省峨眉山。

彭县雪胆为葫芦科植物彭县雪胆Hemsleya pengxianensis W.J.Chang的干燥块根，产地为四川省彭州。

4种雪胆均由四川辅正药业股份有限公司提供。

二、薄层色谱鉴别条件考察

在实施例1的薄层条件下，分别考察薄层色谱的展开条件、耐用性。

1、展开溶剂系统(展开剂)的考察

三种展开系统如下：

展开系统Ⅰ(川标)：氯仿-乙醇(95:5)。

展开系统Ⅱ(川标优化)：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(90:10:10)。

展开系统Ⅲ(优化条件)：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(5:1：0.5)。

结果分别见图1-3。

由图1-3可知：

展开系统Ⅰ中的对照品Rf值偏小、展开系统Ⅱ和展开系统Ⅲ中的对照品Rf值较好；

其中，日光下检视，三个展开系统展开的苦味雪胆在与雪胆甲素、雪胆乙素对照品相应位置处，都有相同颜色的斑点。但峨眉雪胆和彭县雪胆均有明显紫红色斑点(其中，展开系统Ⅰ和Ⅱ中的斑点在比雪胆甲素对照品Rf值稍大的位置，展开系统Ⅲ中的斑点在比雪胆甲素对照品Rf值稍小的位置)。

365nm紫外检视，三个展开系统中峨眉雪胆和彭县雪胆均含有苦味雪胆没有的亮蓝色荧光斑点(Rf值为0.47-0.52)。但在展开系统Ⅰ和Ⅱ中，峨眉雪胆和彭县雪胆所含的亮蓝色荧光斑点与雪胆甲素的Rf值基本一样，不能充分证明苦味雪胆不含有该成分(可能苦味成分所含的亮蓝色斑点被雪胆甲素遮盖)；而展开系统Ⅲ中展开的峨眉雪胆和彭县雪胆所含的亮蓝色荧光斑点与雪胆甲素的Rf值不同，可以清晰看到苦味雪胆在此位置不含有亮蓝色的荧光斑点，由此可以证明该亮蓝色荧光斑点是鉴别是否为苦味雪胆的区分点之一。

因此展开系统Ⅲ分离更准确、清楚，作为本发明展开剂。

2、显色剂的考察

比较10％磷钼酸乙醇溶液和2％香草醛硫酸乙醇溶液的显色效果，结果见图4。

由图4可知，以2％香草醛硫酸显色，斑点颜色丰富，区别明显，可明显判断出与对照品相同的位置有相同颜色的斑点，在365nm的紫外检视下，有明显荧光现象，可以清楚地区分出苦味雪胆与不苦的峨眉雪胆、彭县雪胆，即365nm的紫外检视下含有一个亮蓝色的荧光斑点，日光检视下则无斑点。

而使用10％磷钼酸显色，整体呈蓝色，斑点之间没有明显的颜色变化区分，在与雪胆甲素Rf值相近的位置难以与其他斑点区分，且在365nm紫外检视下无荧光现象，无法进行清楚区分。

因此选择2％香草醛硫酸作为显色剂。

3、点样量的考察

分别取雪胆甲素、雪胆乙素及不同雪胆药材，考察点样量的影响，结果见图5。

由图5可知，雪胆甲素、雪胆乙素对照品最佳点样量为3μl、样品的点样量为5μl时，各斑点清晰，无拖尾现象，分离效果良好。因此确立对照品的点样量为3μl、样品点样量为5μl。

4、薄层色谱展开条件(不同温度)的耐用性考察

分别在4℃(冰箱冷藏室)和30℃(水浴控温)进行展开比较，结果见图6。

由图6可知，使用本发明的展开系统Ⅲ在4℃和30℃的不同温度条件下，展开情况均较好，说明展开条件的耐用性较好。

5、薄层色谱展开条件(不同湿度)的耐用性考察

比较相对湿度32％(配制硫酸:水＝68:100的溶液)和相对湿度72％(配制硫酸:水＝27.5:100的溶液)，分别将上述2种不同浓度的硫酸溶液倒入干燥器内，薄层点样后将薄层板放入干燥器，密闭1小时，取出，立即置展开缸内展开，结果见图7。

由图7可知，使用本发明的展开系统Ⅲ在相对湿度32％和72％的不同湿度条件下，展开情况均较好，说明展开条件的耐用性较好。

6、不同薄层板的考察

比较自制版与预制板的展开情况，结果见图8-9。

从图8-9可知，使用本发明的展开系统Ⅲ在自制板和预制板不同的薄层板条件下，展开效果均较好。

Claims (10)

1.一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：

取待检药材粉末，加入甲醇提取，过滤，浓缩，得供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：

取雪胆素甲、雪胆素乙对照品，混合，加甲醇配制成混合对照品溶液；

(3)薄层鉴别：

分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，展开剂展开，显色，检视，比对即可；所述展开剂由下述体积份的成分组成：

石油醚4-6份、乙酸乙酯0.5-1.5份、甲醇0.1-1份。

2.根据权利要求1所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述展开剂由下述体积份的成分组成：

石油醚5份、乙酸乙酯1份、甲醇0.5份。

3.根据权利要求1或2所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(1)中，所述提取是超声提取；优选的，所述超声提取的时间为40分钟。

4.根据权利要求1或2所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(1)中，每2g雪胆粉末用甲醇20mL。

5.根据权利要求1或2所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(1)中，浓缩时，将滤液浓缩2.5倍体积。

6.根据权利要求1或2所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述薄层板为高效硅胶G板。

7.根据权利要求1-6任一项所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(3)中，所述对照品溶液点样的点样量为3μL，供试品溶液点样的点样量为5μL。

8.根据权利要求1-6任一项所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(3)中，所述显色是以2％香草醛硫酸乙醇溶液为显色剂，105℃下加热显色。

9.根据权利要求1-6任一项所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(3)中，所述比对的方法如下：

首先，在供试品色谱中，是否存在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，确定供试品是否为雪胆；

其次，供试品色谱中，是否存在Rf值为0.47-0.52的亮蓝色斑点。

10.根据权利要求1-9任一项所述的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：鉴别的雪胆品种为不苦的雪胆和苦味雪胆，其中不苦的雪胆为峨眉雪胆、彭县雪胆，苦味的雪胆为长果雪胆、巨花雪胆。