CN101306082B - 一种喉康散的检测方法 - Google Patents

Abstract

一种喉康散的检测方法，包括采用：(1)显微镜鉴别法鉴别喉康散中含有人参、天花粉、甘草；(2)氯化钡试剂沉淀法检测玄明粉中的硫酸盐；(3)薄层色谱法检测喉康散中含有青黛，以靛蓝、靛玉红作对照品；(4)薄层色谱法同时检测冰片、薄荷脑；(5)薄层色谱法检测喉康散中含有人参，以人参、人参皂R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1为对照；(6)薄层色谱法检测喉康散中含有甘草；(7)高效液相色谱法检测喉康散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。本发明的喉康散的检测方法，克服了现有的鉴别方法中特异性不强，薄层色谱同时检测青黛、冰片、薄荷脑，点样量难以掌握和达到较好分离效果、薄层色谱法仅检测青黛、冰片、薄荷脑，检测成份有限，不足以有效鉴别本品，且无有效成份含量测定方法，不能有效控制产品质量的缺点，提高了喉康散检测方法的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全和有效性。

Description

一种喉康散的检测方法

技术领域

本发明涉及中成药的检测方法，具体地说，本发明涉及一种喉康散的检测方法。 

背景技术

喉康散是一种清热解毒，消炎止痛的中成药，在我国已应用多年，临床用于各种咽喉疾患，如急性、慢性咽炎，喉炎，扁桃腺炎，口腔溃疡等。喉康散由冰片、珍珠层粉、人参、硼砂(煅)、玄明粉、薄荷脑、天花粉、青黛、穿心莲叶、甘草按照中成药散剂的常规工艺制备而成。该标准收载于该标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第5册，标准号WS₃-B-1040-91。该标准中的鉴别方法包括有：(1)人参、天花粉、甘草的显微鉴定；(2)通过氯化钡试液测定法检测玄明粉中的硫酸盐，该沉淀不溶于盐酸、硝酸；(3)通过碱性3，5-二硝基苯甲酸试验检测穿心莲中穿心莲内酯；(4)薄层色谱法同时检测冰片、薄荷脑、靛蓝、靛玉红。其中实验(3)特异性不强，实施(4)薄层色谱法存在着点样量难以掌握和达到较好分离效果的缺点；其中，点样量大时，薄荷脑、冰片的分离效果差，点样量少时，靛蓝、靛玉红的斑点太弱，显色不强。另外，薄层色谱法仅检测了青黛、冰片、薄荷脑，检测成份有限，不足以有效鉴别本品，且无有效成份含量测定方法，不能有效控制产品质量。 

发明内容

本发明的目的就是为了克服目前喉康散的质量标准的缺点，提供一种专属性强、能更准确控制产品质量的喉康散的检测方法。 

本发明是这样实现的。 

本发明采用：(1)显微镜鉴别法鉴别喉康散中含有人参、天花粉、甘草；(2)氯化钡试液测定法检测玄明粉中的硫酸盐；(3)薄层色谱法检测喉康散中含有青黛，以靛蓝、靛玉红作对照品；(4)薄层色谱法同时检测冰片、薄荷脑；(5)薄层色谱法检测喉康散中含有人参，以人参、人参皂R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1为对照；(6)薄层色谱法检测喉康散中含有甘草；(7)高效液相色谱法检测喉康散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。 

实际上，喉康散为散剂，可以通过显微鉴定来鉴别人参、天花粉、甘草；通过氯化钡试液可以较特异性的检测玄明粉中的硫酸盐，薄层色谱法分别鉴别青黛(靛蓝、靛玉红作为其有效成份)，冰片、薄荷脑，人参(以多种人参皂苷同时作对照，避免人参替代品的代用)，甘草，能较有效地鉴别本品，而本品的方解表明，本药中的君药为穿心莲叶，增加其有效成份穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的高效液相色谱的含量测定，能较有效地控制本品的质量。 

1显微镜鉴别法鉴别喉康散中含有人参、天花粉、甘草的较佳条件是： 

取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～68μm，棱角锐尖(人参)。淀粉粒类球形，半圆形或盔帽形，直径27～48μm，脐点点状、短缝状或人字状，层纹隐约可见(天花粉)。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维(甘草)。 

2氯化钡试液沉淀法检测  玄明粉中的硫酸盐的较佳条件是： 

取本品0.5g，加水5ml，振摇提取，滤过，取滤液2ml，加氯化钡试液，即生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。 

3薄层色谱法检测喉康散中含有青黛，以靛蓝、靛玉红作对照品的较佳条件是： 

取本品，加乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液。另取靛蓝对照品、靛玉红对照品，加乙酸乙酯置温水浴中使溶解，制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》 2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

4薄层色谱法同时检测冰片、薄荷脑的较佳条件是： 

取本品，加无水乙醇，超声处理。静置或离心，取上清液作供试品溶液。另取冰片、薄荷脑分别加无水乙醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液，对照品溶液各，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲苯-醋酸乙酯(9∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

5薄层色谱法检测喉康散中含有人参，以人参、人参皂R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1为对照的较佳条件是： 

取本品，加乙醚，超声处理，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和正丁醇提取，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和水洗涤，分取部分正丁醇液，加3倍量的氨试液，摇匀，放置分层，取上层溶液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色 谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。 

6薄层色谱法检测喉康散中含有甘草的较佳条件是： 

取鉴别(5)项下剩余的正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液，分别点于同一用1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上使成条状，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，立即置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。 

7高效液相色谱法检测喉康散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量的较佳条件是： 

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。 

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(52∶48)为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000。 

对照品溶液的制备  精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的溶液，即得。 

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得(必须在4小时内测定)。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。 

本品每1g含穿心莲叶以穿心莲内酯(C₂₀H₃₀O₅)和脱水穿心莲内酯(C₂₀H₂₈O₄)的总量计，不得少于0.40mg。 

该测定方法经过方法学验证，穿心莲内酯回归方程为：y＝20536827.358166x+19872.041667，r＝0.999994，显示在0.02469mg/ml～0.39504mg/ml的范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系；脱水穿心莲内酯回归方程为：15442751.319247x+32215.833333，r＝0.999987，显示在0.0244mg/ml～0.3896mg/ml的范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。准确度试验平均回收率＝98.81％，RSD＝1.785％，重复性试验RSD＝2.406％。 

10批供试品含量测定表 

批号	总含量	批号	总含量
				5018	1.00	4015-0	0.45
5017	0.93	4014-0	0.45
				5003	0.55	4001-0	0.47
4002-0	0.55	5008	0.74
				5014	0.74	5016	0.94

本发明的喉康散的质量控制方法，克服了现有的鉴别方法中特异性不强，薄层色谱同时检测青黛、冰片、薄荷脑，点样量难以掌握和达到较好分离效果、薄层色谱法仅检测青黛、冰片、薄荷脑，检测成份有限，不足以有效鉴别本品，且无有效成份含量测定方法，不能有效控制产品质量的缺点，提高了喉康散质量控制方法的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全和有效性。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。 

取申请人生产的批号为5018的喉康散。 

【鉴别】(1)取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～68μm，棱 角锐尖(人参)。淀粉粒类球形，半圆形或盔帽形，直径27～48μm，脐点点状、短缝状或人字状，层纹隐约可见(天花粉)。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维(甘草)。 

(2)取本品0.5g，加水5ml，振摇提取，滤过，取滤液2ml，加氯化钡试液，即生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。 

(3)取本品1g，加乙酸乙酯10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液。另取靛蓝对照品、靛玉红对照品，加乙酸乙酯置温水浴中使溶解，制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(4)取本品1g，加无水乙醇5ml，超声5分钟。静置或离心，取上清液作供试品溶液。另取冰片、薄荷脑分别加无水乙醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液1～4μl，对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲苯-醋酸乙酯(9∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(5)取本品20g，加乙醚40ml，超声处理15分钟，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加甲醇40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和水洗涤2次，每次25ml，分取正丁醇液20ml[余下的正丁醇液留作鉴别(6)备用]，加3倍量的氨试液，摇匀，放置分层，取上层溶液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材0.5g，同法制成 对照药材溶液。再取人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开12cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。 

(6)取鉴别(5)项下剩余的正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10~20μl、甘草对照药材溶液3μl，分别点于同一用1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上使成条状，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，立即置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。 

【检查】应符合散剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版一部附录IB)。 

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(52∶48)为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000。 

对照品溶液的制备  精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照 品适量，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的溶液，即得。 

供试品溶液的制备  取装量差异项下的内容物约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得(必须在4小时内测定)。 

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

本品每1g含穿心莲叶以穿心莲内酯(C₂₀H₃₀O₅)和脱水穿心莲内酯(C₂₀H₂₈O₄)的总量计，不得少于0.40mg。 

本批号产品每1g含穿心莲叶以穿心莲内酯(C₂₀H₃₀O₅)和脱水穿心莲内酯(C₂₀H₂₈O₄)的总量计，为1.00mg。 

Claims (1)

1.一种喉康散的检测方法，包括采用：(1)显微镜鉴别法鉴别喉康散中含有人参、天花粉、甘草；(2)氯化钡试剂沉淀法检测玄明粉中的硫酸盐；(3)薄层色谱法检测喉康散中含有青黛，以靛蓝、靛玉红作对照品；(4)薄层色谱法同时检测冰片、薄荷脑；(5)薄层色谱法检测喉康散中含有人参，以人参、人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1为对照；(6)薄层色谱法检测喉康散中含有甘草；(7)高效液相色谱法检测喉康散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量；

其特征在于薄层色谱法检测喉康散中含有青黛的条件是：取本品，加乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液；另取靛蓝对照品、靛玉红对照品，加乙酸乙酯置温水浴中使溶解，制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯3∶2为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

薄层色谱法同时检测冰片、薄荷脑的条件是，取本品，加无水乙醇，超声处理；静置或离心，取上清液作供试品溶液；另取冰片、薄荷脑分别加无水乙醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-甲苯-醋酸乙酯9∶4∶1为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

薄层色谱法检测喉康散中含有人参的条件是：取本品，加乙醚，超声处理，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和正丁醇提取，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和水洗涤，分取部分正丁醇液，加3倍量的氨试液，摇匀，放置分层，取上层溶液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e、人参皂苷R_g1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

薄层色谱法检测喉康散中含有甘草的条件是：取薄层色谱法检测含有人参项下剩余的正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液，分别点于同一用1％氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上使成条状，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水15∶1∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，立即置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

高效液相色谱法检测喉康散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量的条件是：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水52∶48为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm；理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1g含穿心莲叶以穿心莲内酯C₂₀H₃₀O₅和脱水穿心莲内酯C₂₀H₂₈O₄的总量计，不得少于0.40mg。