CN104280507B - 一种筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法，属于药物分析技术领域。本发明提出的筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法能够有效地对当归、虎杖、肉桂、红花、木香、续断进行鉴别，提高了该药酒的质量标准。
Description
技术领域
本发明公开一种筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法，属于药物分析技术领域。
背景技术
筋骨疼痛酒，最早收载于《江苏省药品标准》1977年版，后转收于《卫生部药品标准》中药成方制剂第五册，标准编号：WS3-B-1045-91。该方是由当归、木香、玉竹、黄芪、党参、重楼、虎枚、桂枝、枸杞子、秦艽、制川乌、制草乌、续断、肉桂、红花等在白酒中浸渍、渗漉所制得。质量标准仅有乙醇量检查。
发明内容
本发明所需要解决的技术问题是筋骨疼痛酒中缺少鉴别检测的问题，完善其质量标准，提出了一种筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法。
技术方案：
一种筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法，包括有对续断鉴别步骤，所述的对续断鉴别的方法包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取供试品200ml，水浴上蒸至无醇味，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔吸附树脂柱上，以水80ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇80ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取川续断皂苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)薄层层析：吸取上述两种溶液各5～10μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水按体积比13:5:1的混合溶液在10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，氨蒸汽预饱和20分钟，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
(4)将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
进一步地，还包括有对当归鉴别步骤，方法如下：
（1）供试品溶液的制备：取供试品50ml，蒸至20ml，加乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
（2）对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.25g，加乙醚2ml，振摇10分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液；
（3）薄层层析：吸取上述两种溶液各5μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯按体积比9：1的混合溶剂为展开剂，展开后，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
（4）将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
进一步地，还包括有对虎杖鉴别步骤，方法如下：
(1)供试品溶液的制备：取供试品50ml，加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加热水解30分钟，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)薄层层析：吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5:1)的上层溶液为展开剂，展开后，取出，晾干，置氨蒸气中熏；
(4)将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
进一步地，还包括有对肉桂鉴别步骤，方法如下：
（1）供试品溶液：取供试品50ml，加石油醚提取2次，每次20ml，合并提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
（2）对照品溶液：取桂皮醛对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；
（3）薄层层析：吸取供试品溶液、对照品溶液2μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯按照体积比17:3的混合溶剂为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液；
（4）将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
进一步地，还包括有对红花鉴别步骤，方法如下：
(1)供试品溶液的制备：取供试品50ml，蒸至约20ml，加乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取红花对照药材0.5g，加50%的乙醇溶液浸渍过夜，滤过，滤液蒸至无醇味，同法制成对照药材溶液；
(3)薄层层析：吸取上述两种溶液各5μl，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇(7:2:3:0.4)为展开剂，上行展开，取出，晾干；
(4)将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
进一步地，还包括有对木香鉴别步骤，方法如下：
（1）供试品溶液的制备：取供试品50ml，低温蒸至无醇味，加乙醚萃取两次（30min，20ml），合并乙醚提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
（2）对照药材溶液的制备：取木香对照药材0.2g，加乙醚20ml振摇提取15分钟，提取液挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为对照品溶液；
（3）薄层层析：吸取上述三种溶液各5μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环已烷(5:1)为展开剂，上行展开约10cm，取出，晾干，喷以1%香醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；
（4）将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
进一步地，还包括有对乌头碱限量检查步骤，方法如下：
（1）供试品溶液：取供试品250ml，蒸至约50ml，加氨水调节pH值为9～10；加三氯甲烷提取三次,合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
（2）对照药材溶液：取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；
（3）薄层层析：吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－乙醇按体积比6.4:3.6:1的混合溶剂为展开剂，置氨蒸气饱和15分钟的上行展开缸内上行展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点清晰；
（4）将供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上与对照品的斑点进行比较。
有益效果
本发明提出的筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法能够有效地对当归、虎杖、肉桂、红花、木香、续断进行鉴别，提高了该药酒的质量标准。
附图说明
图1是实施例1中续断的薄层色谱鉴别比较图。
图2是对照例1中续断的薄层色谱鉴别比较图。
图3是对照例2中续断的薄层色谱鉴别比较图。
图4是实施例2中当归的薄层色谱鉴别比较图。
图5是实施例3中虎杖的薄层色谱鉴别比较图。
图6是实施例4中肉桂的薄层色谱鉴别比较图。
图7是实施例5中红花的薄层色谱鉴别比较图。
图8是实施例6中木香的薄层色谱鉴别比较图。
图9是实施例7中乌头碱的薄层色谱鉴别比较图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考严拯宇编著的《中药薄层色谱分析技术与应用》，中国医药科技出版社，2009)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本发明中所述的溶液配比在无特殊说明的条件下，都为体积比。
药品与试剂
当归对照药材（中国药品生物制品检定所，120927-200512）；川续断皂苷对照品（中国药品生物制品检定所，111658-200401）；木香对照药材（中国药品生物制品检定所，120921-200506）；红花对照药材（中国药品生物制品检定所，120907-200408）；桂皮醛对照品（中国药品生物制品检定所，710-200212）；大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，110756-200110）；大黄素甲醚对照品（中国药品生物制品检定所，110758-200509）。
筋骨疼痛酒由江苏七0七天然制药有限公司生产，批号为060204、060302、060401；阴性样品均按处方工艺自制。
制法如下：
【处方】
当归29.7g木香23.9g玉竹119.8g
黄芪44.9g党参44.9g重楼59.9g
虎杖57.5g桂枝44.9g枸杞子44.9g
秦艽29.9g制川乌23.9g制草乌23.9g
续断59.9g肉桂29.9g红花59.9g
【制法】
以上十五味，酌予碎断，用白酒10251g作溶剂，浸渍48小时后渗漉或循环提取，收集渗漉液或提取液，加入砂糖479g，搅拌溶化，并加白酒适量使成总量为10000ml，静置二周，滤过，分装，即得。
硅胶G薄层板（自制。硅胶G由青岛海洋化工厂生产（供薄层层析用），厚度0.6mm，黏合剂为0.05%羧甲基纤维素钠。）。其它试剂均为分析纯。
实施例1续断的鉴别
①供试品溶液的制备：取供试品200ml，水浴上蒸至无醇味，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长约8cm）上，以水80ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇80ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。（水饱和的正丁醇的备制方法是：将正丁醇和蒸馏水混合（混合比例为体积比1:1），振摇，混匀，放置过夜（可利用超声，超声时间为10min）。得到的混合液分层，上层为水饱和的正丁醇溶液，下层为正丁醇的饱和水溶液。）
②对照品溶液的制备：取川续断皂苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性对照溶液的制备：取缺续断的阴性样品相当于供试品200ml，同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取上述三种溶液各5～10μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:5:1）10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，氨蒸汽预饱和20分钟，上行展开约15cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（附图1），图中从左至右依次为：批号为060204、060302、060401三个样品、川续断皂苷对照品、阴性对照。
对照例1
与实施例1的区别在于：供试品溶液未经过大孔吸附树脂柱的吸附除杂，具体的步骤是：取供试品200ml，水浴上蒸至无醇味，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。其它溶液及薄层展开方法同实施例1，展开图如图2所示，从图中可以看出，当未采用树脂吸附时，在阴性对照品条带上出现有斑点；且供试品溶液的条带与对照品色谱相应的位置的斑点不清晰。
对照例2
与实施例1的区别在于：在用大孔吸附树脂柱的吸附除杂之后，未采用40％乙醇80ml洗脱，具体的步骤是：取供试品200ml，水浴上蒸至无醇味，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长约8cm）上，以水80ml洗脱，弃去水液，继续用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。其它溶液及薄层展开方法同实施例1，展开图如图3所示，从图中可以看出，当未采用40％乙醇80ml洗脱时，供试品溶液的条带与对照品色谱相应的位置的斑点不清晰。
对照例3
与实施例1的区别在于：在用大孔吸附树脂柱的吸附除杂之后，未水洗脱，具体的步骤是：取供试品200ml，水浴上蒸至无醇味，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，加在D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长约8cm）上，用40％乙醇80ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。其它溶液及薄层展开方法同实施例1，当未采用水洗脱时，供试品溶液的条带与对照品色谱相应的位置的斑点不清晰。
由于本处方中黄芪也含有皂苷成分，特别是黄芪甲苷与川续断皂苷互相干扰，曾使用展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）10℃以下放置分层的下层溶液、1，2-二氯乙烷-正丁醇-甲醇-水（6∶8∶3∶5）的下层溶液、正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5）的上层溶液、正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）的上层溶液（氨蒸气饱和上行展开），均不容易将两者分开，供试品溶液的条带与对照品色谱相应的位置的斑点不清晰。
实施例2当归的鉴别
①供试品溶液的制备：取供试品50ml，蒸至约20ml，加乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.25g，加乙醚2ml，振摇10分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液。
③阴性对照溶液的制备：取缺当归的阴性样品相当于供试品50ml，同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取上述三种溶液各5μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，上行展开约10cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（图4）。（从左至右依次为：阴性对照、批号为060204、060302、060401三个样品、当归对照药材），Rf值约0.4。
曾选择正己烷-乙酸乙酯（7：2）作为展开剂，，其它条件同上，Rf值约0.1，且斑点不清晰。
另外，使用石油醚（60～90℃）-醋酸乙醋（9：1）、石油醚（30～60℃）-醋酸乙醋（9：1）、苯-正己烷-乙酸乙酯（3：14：3）、甲苯-乙酸乙酯（9：1）作为展开剂时，都出现条带斑点不清晰的问题。
实施例3虎杖的鉴别
以大黄素、大黄素甲醚作为虎杖的鉴别成分。
①供试品溶液的制备：取供试品50ml，加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加热水解30分钟，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性对照溶液的制备：取缺虎杖的阴性样品相当于供试品50ml，同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取供试品溶液、阴性对照溶液各4μl、对照品溶液各2μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5:1)的上层溶液为展开剂，上行展开约10cm，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（附图5）。（从左至右依次为：阴性对照、批号为060204、060302、060401三个样品、大黄素、大黄素甲醚对照品）
实施例4肉桂的鉴别
以桂皮醛作为肉桂的鉴别成分。本方中桂枝亦含有桂皮醛，但含量较少，在本方法取样量、点样量下无干扰。
①供试品溶液：取供试品50ml，加石油醚（30～60℃）提取2次，每次20ml，合并提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液：取桂皮醛对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液。
③阴性对照溶液：取缺肉桂的阴性样品相当于供试品50ml，同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取供试品溶液、阴性对照溶液2～5μl,对照品溶液2μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯(17:3)为展开剂，上行展开约10cm，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（图6）。（从左至右依次为：阴性对照、批号为060204、060302、060401三个样品、桂皮醛对照品）
实施例5红花的鉴别
以红花药材作为对照进行鉴别。
①供试品溶液的制备：取供试品50ml，蒸至约20ml，加乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备：取红花对照药材0.5g，加50%的乙醇溶液浸渍过夜，滤过，滤液蒸至无醇味，同法制成对照药材溶液。
③阴性对照溶液的制备：取缺红花的阴性样品相当于供试品50ml，同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取上述两种溶液各5μl，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇(7:2:3:0.4)为展开剂，上行展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（图7）。（从左至右依次为：阴性对照、批号为060204、060302、060401三个样品、红花对照药材）
曾选择乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水－甲醇(5:3:1:1)、正丁醇－甲醇－水(4:1:5)的上层溶液为展开剂，以上述的乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇(7:2:3:0.4)得到的斑点最为清晰。
另外，曾采用比较硅胶G、硅胶H、4%醋酸钠制备的硅胶G板，以上述的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板得到的斑点最为清晰。
实施例6木香的鉴别
①供试品溶液的制备：取供试品50ml，低温蒸至无醇味，加乙醚萃取两次（30min，20ml），合并乙醚提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备：取木香对照药材0.2g，加乙醚20ml振摇提取15分钟，提取液挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为对照品溶液。
③阴性对照溶液的制备：取缺木香的阴性样品相当于供试品50ml，同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取上述三种溶液各5μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环已烷(5:1)为展开剂，上行展开约10cm，取出，晾干，喷以1%香醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（图8）。（从左至右依次为：阴性对照、批号为060204、060302、060401三个样品、木香对照药材）
实施例7乌头碱限量检查
1）药品与试剂
乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，110720-200410）。
筋骨疼痛酒由江苏七0七天然制药有限公司生产，批号为060204、060302、060401；阴性样品按处方工艺自制。
硅胶G薄层板（自制。硅胶G由青岛海洋化工厂生产（供薄层层析用），厚度0.6mm，黏合剂为0.05%羧甲基纤维素钠。）。其它试剂均为分析纯。
2）方法与结果
①供试品溶液：取供试品250ml，蒸至约50ml，加氨水调节pH值为9～10；加三氯甲烷提取三次（30、25、20ml）,合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液：取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性对照溶液：取缺制川乌、制草乌的阴性样品（按药品的处方工艺自制）相当于供试品200m同法制成阴性对照溶液。
④薄层层析：吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别接触式点样于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－乙醇(6.4:3.6:1)为展开剂，置氨蒸气饱和15分钟的上行展开缸内上行展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置未出现斑点。而阴性对照溶液无此斑点，表明阴性无干扰（附图9）。（从左至右依次为：阴性对照、批号为060204、060302、060401三个样品、乌头碱对照品）。
方中制川乌、制草乌可能含有毒性很强的乌头碱。参考文献，制川乌、制草乌一日安全剂量为1.5～3g，乌头碱含量不得过0.15%。该制剂一日服用量为45ml，本方法取样量远大于一日服用量，而且点样量增至10μl时，出现的斑点仍小于对照品所现斑点（5μl）。
对于显色方法，曾采用喷改良碘化铋钾试液、稀碘化铋钾试液、碘化铋钾试液—碘化钾碘试液（1:1），以上述的碘蒸气熏的显色斑点最为清晰。
对于薄层板，曾使用硅胶G、碱性氧化铝薄层板，以上述的采用羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板得到的斑点最为清晰。
对于展开剂，曾使用正己烷－乙酸乙酯(1:1)、乙酸乙酯－丙酮－氨水(17:2:1)等，以上班的正己烷－乙酸乙酯－乙醇(6.4:3.6:1)得到的斑点最为清晰。
Claims (1)
1.一种筋骨疼痛酒的薄层色谱鉴别方法，其特征在于，包括对续断鉴别的步骤，所述的对续断鉴别的步骤如下：
第1步，供试品溶液的制备：取供试品200mL，水浴上蒸至无醇味，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5mL使溶解，加在D101大孔吸附树脂柱上，以水80mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇80mL洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照品溶液的制备：取川续断皂苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；
第3步，薄层层析：吸取上述两种溶液各5～10μL，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水按体积比13:5:1混合的溶液在10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，氨蒸汽预饱和20分钟，展开后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
第4步，将供试品与对照品的色谱斑点进行比较；
还包括有对当归鉴别的步骤，步骤如下：
第1步，供试品溶液的制备：取供试品50mL，蒸至20mL，加乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.25g，加乙醚2mL，振摇10分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液；
第3步，薄层层析：吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μL，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯按体积比9：1混合的溶液为展开剂，展开后，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
第4步，将供试品与对照药材的色谱斑点进行比较；
还包括有对虎杖鉴别的步骤，步骤如下：
第1步，供试品溶液的制备：取供试品50mL，加2.5mol/L硫酸溶液5mL，加热水解30分钟，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照品溶液的制备：分别取大黄素和大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
第3步，薄层层析：吸取供试品溶液、对照品溶液各2μL，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以30～60℃的石油醚－甲酸乙酯－甲酸按体积比15：5：1混合的溶液的上层溶液为展开剂，展开后，取出，晾干，置氨蒸气中熏；
第4步，将供试品与对照品的色谱斑点进行比较；
还包括有对肉桂鉴别的步骤，步骤如下：
第1步，供试品溶液：取供试品50mL，加石油醚提取2次，每次20mL，合并提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照品溶液：取桂皮醛对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1μl的溶液，作为对照品溶液；
第3步，薄层层析：吸取供试品溶液、对照品溶液2μl，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯按照体积比17:3的混合溶剂为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液；
第4步，将供试品与对照品的色谱斑点进行比较；
还包括有对红花鉴别的步骤，步骤如下：
第1步，供试品溶液的制备：取供试品50mL，蒸至约20mL，加乙醚振摇提取2次，每次20mL，弃去乙醚液，水层加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照药材溶液的制备：取红花对照药材0.5g，加50%的乙醇溶液浸渍过夜，滤过，滤液蒸至无醇味，制成对照药材溶液；
第3步，薄层层析：吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μL，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇按体积比7：2：3：0.4混合的溶液为展开剂，展开后，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
第4步，将供试品与对照药材的色谱斑点进行比较；
还包括有对木香鉴别的步骤，步骤如下：
第1步，供试品溶液的制备：取供试品50mL，低温蒸至无醇味，加乙醚萃取两次，合并乙醚提取液，挥干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照药材溶液的制备：取木香对照药材0.2g，加乙醚20mL振摇提取15分钟，提取液挥干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为对照药材溶液；
第3步，薄层层析：吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μL，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环已烷按体积比5:1混合的溶液为展开剂，展开后，取出，晾干，喷以1%香醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；
第4步，将供试品与对照药材的色谱斑点进行比较；
还包括有对乌头碱限量检查的步骤，步骤如下：
第1步，供试品溶液：取供试品250mL，蒸至约50mL，加氨水调节pH值为9～10；加三氯甲烷提取三次,合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
第2步，对照品溶液：取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
第3步，薄层层析：吸取供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别接触式点样于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－乙醇按体积比6.4:3.6:1混合的溶液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内上行展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点清晰；
第4步，将供试品与对照品的色谱斑点进行比较。
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