CN110187044A - 一种银翘解毒口服液的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种银翘解毒口服液的质量检测方法。该银翘解毒口服液的质量检测方法，通过对金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的成分鉴定及对绿原酸和牛蒡苷的含量测定，建立了银翘解毒口服液的薄层色谱鉴别(TLC)和高效液相色谱(HPLC)含量测定方法，专属性强、色谱斑点清晰、阴性对照无干扰，可快速确定制剂中金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的存在；所建立的HPLC测定法，精确性、稳定性、重复性良好，可快速准确地测定出制剂中绿原酸、牛蒡苷的含量，可对银翘解毒口服液的质量进行有效控制。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，特别涉及一种银翘解毒口服液的质量检测方法。
背景技术
银翘解毒口服液处方源于《温病条辨》之银翘散，是中医辛凉解表的经典代表方，其组成为连翘、金银花、桔梗、薄荷、竹叶、甘草、荆芥、淡豆豉、牛蒡子，功效辛凉透表，清热解毒，常用于治疗各种畜禽的风热感冒或温病初起，也可用于治疗流感、急性咽喉炎、支气管炎、肺炎及某些传染病初期而见有表热证者。
现代药理学研究表明，本方有较强的抗菌抗病毒、抗炎抗过敏、解热镇痛作用，并能调节机体免疫功能。在体内外对革兰氏阳性和阴性菌都有广泛抑制作用，对甲型流感病毒有明显抑制作用，能增强炎灶巨噬细胞的吞噬能力，对多型变态反应有明显的抗过敏作用。许多动物实验表明，银翘散对不同致热剂所引起的家兔发热均有明显解热作用并能抑制三联疫苗引起的体温升高。实验室证明，本方能增强炎灶巨噬细胞对异物的吞噬作用，促进鼠刚果红吞噬功能；还能促进抗内毒素抗体的产生，从而加速机体内毒素的清除。
在抗家禽大肠杆菌中草药的筛选研究中，通过对几十种中药方剂临床疗效进行对比试验，发现本方对鸡人工感染大肠杆菌具有较好的疗效。在家禽病毒性疾病中药防治研究中，通过鸡胚试验发现其煎煮液对新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)具有很好的抑制作用。在此基础上对临床上发生的许多大肠杆菌病及其它传染病所引起的温热病症，采用银翘散煎煮液进行了治疗，均取得了较为满意的治疗效果。由于家禽消化道短、粗纤维的消化能力差，故中药散剂不利于药物有效成分的消化吸收。家禽多为集约化规模饲养，采用饮水用药法，不仅使用方便，而且吸收迅速、起效快。因此，中药口服液与散剂相比在禽病防治上具有更大的优势。为了开发这一宝贵医学资源，使之质量更加可控、疗效更加稳定、临床用药更加方便，申请人在银翘散处方基础上，对组方进行了优化，并开展了药理学、毒理学、提取工艺、质量标准、临床试验等新兽药系统化研究，最终研制出了银翘解毒口服液。为了保证银翘解毒口服液的产品质量，以制定出科学的质量标准，申请人又对其质量检测方法进行了系统研究。
银翘解毒口服液由9味中药组成，复方中成分极其复杂，不同的药味之间可能存有共同成分，不同成分之间可能存在相互干扰，这就为质量检测带来了困难，而目前并没有专门针对银翘解毒口服液的质量检测方法。因此，制定出科学有效的质量检测方法，精确检测中药产品中有效成分及含量，是研发的关键因素之一。
发明内容
本发明提供了一种对银翘解毒口服液质量进行有效控制、检测、评价的质量检测方法，以保证银翘解毒口服液的质量可控和临床疗效，解决了现有技术中存在的问题。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种鉴定银翘解毒口服液的方法，所述方法包括对银翘解毒口服液中的金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗中的一种或任意几种成分进行鉴定的步骤，具体包括如下步骤：
(1)金银花的薄层色谱鉴别方法：
制备金银花对照药材溶液、绿原酸对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取绿原酸对照品溶液、金银花对照药材溶液和供试品溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为9:1:0.5的异丙醇-甲醇-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱、金银花对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)连翘的薄层色谱鉴别方法：
制备连翘对照药材溶液、连翘苷对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取连翘苷对照品溶液、连翘对照药材溶液和供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与连翘苷对照品色谱、连翘对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
(3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法：
制备牛蒡子对照药材溶液、牛蒡苷对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取牛蒡苷对照品溶液5μL，牛蒡子对照药材溶液10μL，供试品溶液5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以体积比为50:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与牛蒡苷对照品色谱、牛蒡子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法：
制备薄荷和荆芥对照药材溶液、胡薄荷酮对照品溶液、薄荷脑对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取胡薄荷酮对照品溶液2μL，薄荷脑对照品溶液5μL，薄荷和荆芥对照药材溶液20μL，供试品溶液20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19:1:2的石油醚-三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出晾干，喷以体积比为1:4的香草醛硫酸试液-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胡薄荷酮和薄荷脑对照品色谱、薄荷和荆芥对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)甘草的薄层色谱鉴别方法：
制备甘草对照药材溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，取甘草对照药材溶液、供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)桔梗的薄层色谱鉴别方法：
制备桔梗对照药材溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，取桔梗对照药材溶液、供试品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:5:0.5:0.35的石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸为展开剂，展开，展距12cm，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与桔梗对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选地，(1)金银花的薄层色谱鉴别方法中，金银花对照药材溶液的制备方法为：取金银花对照药材0.5g，加水50mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加1mL丙酮溶解，作为金银花对照药材溶液；
绿原酸对照品溶液的制备方法为：取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为绿原酸对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加丙酮20mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加丙酮2mL溶解，作为供试品溶液；
优选地，(2)连翘的薄层色谱鉴别方法中，连翘对照药材溶液的制备方法为：取连翘对照药材0.4g，加水40ml，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为连翘对照药材溶液；
连翘苷对照品溶液的制备方法为：取连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.3mg的溶液，作为连翘苷对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
优选地，(3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法中，牛蒡子对照药材溶液的制备方法为：取牛蒡子对照药材0.4g，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为牛蒡子对照药材溶液；
牛蒡苷对照品溶液的制备方法为：取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为牛蒡苷对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，加2g粒径为100～200目的中性氧化铝混匀，过内径为1～1.5cm、质量为5g、粒径为100～200目的中性氧化铝柱，用体积分数80％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，取上清液作为供试品溶液；
优选地，(4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法中，薄荷和荆芥对照药材溶液的制备方法为：取薄荷对照药材3g、荆芥对照药材2g，置圆底烧瓶中，加水200mL，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，将冲洗液与取出的乙酸乙酯层合并，自然挥干，残渣用甲醇0.5mL溶解，作为薄荷和荆芥对照药材溶液；
胡薄荷酮对照品溶液的制备方法为：取胡薄荷酮对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为胡薄荷酮对照品溶液；
薄荷脑对照品溶液的制备方法为：取薄荷脑对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为薄荷脑对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液80mL，加水40mL，混匀，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，合并乙酸乙酯层，自然挥干，用甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
优选地，(5)甘草的薄层色谱鉴别方法中，甘草对照药材溶液的制备方法为：取甘草对照药材0.4g，加水30mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为甘草对照药材溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
优选地，(6)桔梗的薄层色谱鉴别方法中，桔梗对照药材溶液的制备方法为：取桔梗对照药材2g，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿20mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水40mL，弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇1mL溶解，作为桔梗对照药材溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液20mL，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水的混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿25mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水50mL，每次弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
一种银翘解毒口服液的含量测定方法，银翘解毒口服液中所含绿原酸和牛蒡苷的含量测定，包括如下步骤：
(1)混合对照品溶液的制备：分别称取绿原酸和牛蒡苷为对照品，以甲醇为溶剂，制得绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液；绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液中绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL；
(2)供试品溶液的制备：取银翘解毒口服液2mL，置100mL量瓶中，加入50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；
(3)确定色谱条件：
色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温35℃，流速1mL/min，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液-甲醇，梯度洗脱；乙腈、0.2％磷酸水溶液、甲醇流动相分别记作A、B、C；
(4)测定：
分别吸取绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪中，在波长327nm下，测定绿原酸的峰面积；在波长276nm下，测定牛蒡苷的峰面积，理论板数按绿原酸峰、牛蒡苷峰计算均应不低于1000；根据峰面积分别计算绿原酸和牛蒡苷的含量。
优选地，步骤(1)中，绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液中绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL。
优选地，步骤(3)中梯度洗脱程序为：0～9min，10％A-84％B-6％C，10～25min，23％A-71％B-6％C，26～40min，10％A-84％B-6％C。
优选地，绿原酸的峰面积的测定波长为327nm，牛蒡苷的峰面积的测定波长为276nm。
所述银翘解毒口服液采用如下方法制备得到：
(1)蒸馏提取薄荷和荆芥的有效成分，取薄荷饮片、荆芥饮片，加7-9倍薄荷饮片和荆芥饮片药量的水浸泡0.5-1小时后，蒸馏1-1.5小时，得挥发油、煎煮液和药渣；
(2)将步骤(1)得到的药渣与其余的几种原料混合后，浸泡1.5-2.5小时后进行煎煮，每次煎煮加9-11倍药量的水，共煎煮3次，每次煎煮1-2小时，每次煎煮后分离得到煎煮液和药渣，将三次煎煮液与步骤(1)得到的煎煮液混合，滤过，减压浓缩至相对密度为1.05-1.20，浓缩液静置10-12小时，分离上清液，滤过，得滤液；
(3)将步骤(2)得到的滤液与步骤(1)得到的挥发油合并，加入0.1％-0.2％的表面活性剂，搅匀，加水定容至1mL药液相当于生药1g；
(4)加入0.2％％-0.3％的防腐剂苯甲酸钠，搅匀，即得该银翘解毒口服液；
该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花175-185份、连翘175-185份、薄荷105-110份、荆芥65-75份、淡豆豉85-95份、牛蒡子105-115份、桔梗100-110份、淡竹叶65-75份和甘草85-95份。
该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花179份、连翘179份、薄荷107份、荆芥71份、淡豆豉89份、牛蒡子107份、桔梗107份、淡竹叶71份和甘草90份。银翘解毒口服液含金银花以绿原酸(C16H18O9)计，每1mL不得少于1.0mg。
银翘解毒口服液含牛蒡子以牛蒡苷(C27H34O11)计，每1mL不得少于3.5mg。
本发明采用上述方法，建立了银翘解毒口服液的薄层色谱鉴别(TLC)和高效液相色谱(HPLC)含量测定方法，对银翘解毒口服液质量进行有效的检测、评价和控制，以保证银翘解毒口服液的质量可控和临床疗效。
本发明所建立的TLC鉴别方法，专属性强、色谱斑点清晰、阴性对照无干扰，可快速确定制剂中金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的存在；所建立的HPLC测定法，精确性、稳定性、重复性良好，可快速准确地测定出制剂中绿原酸、牛蒡苷的含量，可对银翘解毒口服液的质量进行有效控制。
另外本发明所确定的HPLC含量测定方法，实现了在同一色谱条件、不同检测波长下，一次进样能同时对样品中绿原酸和牛蒡苷含量的测定，操作简单，大大提高了检测效率。
附图说明
图1为金银花TLC色谱；
图2为连翘TLC图谱；
图3甘草TLC图谱；
图4为牛蒡子TLC图谱；
图5为桔梗TLC图谱；
图6为薄荷、荆芥TLC图谱；
图7为绿原酸对照品HPLC图谱；
图8为供试品绿原酸HPLC图谱；
图9为绿原酸阴性对照品HPLC图谱；
图10为牛蒡苷对照品HPLC图；
图11为供试品牛蒡苷HPLC图；
图12为绿原酸阴性对照品HPLC图；
图13为绿原酸线性关系图；
图14为牛蒡苷线性关系图；
图15为绿原酸色谱图；
图16为牛蒡苷色谱图。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于此，实施例中的制备方法均为常规制备方法，不再详述。
实施例1：
(一)仪器与试剂：
对照品：绿原酸标准品、牛蒡苷标准品；
供试品：银翘解毒口服液，由山东昊泰科技药业有限公司生产，批号20170901；
仪器：高效液相色谱仪，岛津公司产品；MS205DU型分析天平，METTLER TOLEDO公司产品；KQ5200DB型超声仪，昆山市超声仪器有限公司产品。
试剂：乙腈、磷酸、甲醇为色谱纯试剂；
(二)银翘解毒口服液的制备方法：
(1)蒸馏提取薄荷和荆芥的有效成分，取薄荷饮片、荆芥饮片，加8倍薄荷饮片和荆芥饮片药量的水浸泡0.5小时后，蒸馏1小时，得挥发油、煎煮液和药渣；
(2)将步骤(1)得到的药渣与其余的几种原料混合后，浸泡2小时后进行煎煮，每次煎煮加10倍药量的水，共煎煮3次，每次煎煮1.5小时，每次煎煮后分离得到煎煮液和药渣，将三次煎煮液与步骤(1)得到的煎煮液混合，板框过滤机100目滤过，减压浓缩至相对密度为1.10(70℃)，浓缩液静置12小时，分离上清液，用板框过滤机300目滤过，得滤液；
(3)将步骤(2)得到的滤液与步骤(1)得到的挥发油合并，加入0.1％的聚山梨酯80，搅匀，加水定容至1mL药液相当于生药1g；
(4)加入0.3％的防腐剂苯甲酸钠，搅匀，即得该银翘解毒口服液；
该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花179份、连翘179份、薄荷107份、荆芥71份、淡豆豉89份、牛蒡子107份、桔梗107份、淡竹叶71份和甘草90份。
(三)银翘解毒口服液的鉴别方法：
常用的银翘散的制作工艺简单，是将各味药材粉碎过筛后混合，不经过炮制过程，因此对于各成分进行检测时相对简单。而银翘解毒口服液制备工艺复杂，过程中使用的各种辅料尤其是助溶剂会对检测时成分的分离造成影响，且各成分可能会在煎煮过程中互相影响并发生反应，在检测时互相干扰，因此口服液的质量检测对样品处理方法、点样量、展开剂等要求更高，更复杂。
为对银翘解毒口服液中的金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的薄层色谱鉴别方法的可靠性进行证实：本发明申请还设定了分别去除金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗后所制得的银翘解毒口服液作为相应的阴性对照品，按下述实施例中所述金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的薄层色谱鉴别方法，对三批银翘解毒口服液进行鉴别；
(1)金银花的薄层色谱鉴别方法：
取绿原酸对照品，加甲醇制成浓度为0.2mg/mL的绿原酸对照品溶液；
取金银花对照药材0.5g，加水50mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加1mL丙酮溶解，作为金银花对照药材溶液；
取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加丙酮20mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加丙酮2mL溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取绿原酸对照品溶液、金银花对照药材溶液和供试品溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为9:1:0.5的异丙醇-甲醇-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱和金银花对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)连翘的薄层色谱鉴别方法：
取连翘苷对照品，加甲醇制成浓度为0.3mg/mL的连翘苷对照品溶液；
取连翘对照药材0.4g，加水40ml，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为连翘对照药材溶液；
取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取连翘苷对照品溶液、连翘对照药材溶液和供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与连翘苷对照品色谱和连翘对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
(3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法：
取牛蒡苷对照品，加甲醇制成浓度为5mg/mL的牛蒡苷对照品溶液；
取牛蒡子对照药材0.4g，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为牛蒡子对照药材溶液；
取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，加2g粒径为100～200目的中性氧化铝混匀，过内径为1～1.5cm、质量为5g、粒径为100～200目的中性氧化铝柱，用体积分数80％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，取上清液作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取牛蒡苷对照品溶液5μL，牛蒡子对照药材溶液10μL，供试品溶液5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以体积比为50:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与牛蒡苷对照品色谱和牛蒡子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法：
取胡薄荷酮对照品，加甲醇制成浓度为1mg/mL的胡薄荷酮对照品溶液；
取薄荷脑对照品，加甲醇制成浓度为5mg/mL的薄荷脑对照品溶液；
取薄荷对照药材3g、荆芥对照药材2g，置圆底烧瓶中，加水200mL，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，将冲洗液与取出的乙酸乙酯层合并，自然挥干，残渣用甲醇0.5mL溶解，作为薄荷和荆芥对照药材溶液；
取所述银翘解毒口服液80mL，加水40mL，混匀，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，合并乙酸乙酯层，自然挥干，用甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取胡薄荷酮对照品溶液2μL，薄荷脑对照品溶液5μL，薄荷和荆芥对照药材溶液20μL，供试品溶液20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19:1:2的石油醚(60-90℃)-三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出晾干，喷以体积比为1:4的香草醛硫酸试液-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与胡薄荷酮对照品色谱、薄荷脑对照品、薄荷和荆芥对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)甘草的薄层色谱鉴别方法：
取甘草对照药材0.4g，加水30mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为甘草对照药材溶液；
取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，取甘草对照药材溶液、供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)桔梗的薄层色谱鉴别方法：
取桔梗对照药材2g，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿20mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水40mL，弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇1mL溶解，作为桔梗对照药材溶液；
取所述银翘解毒口服液20mL，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水的混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿25mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水50mL，每次弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，取桔梗对照药材溶液、供试品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:5:0.5:0.35的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸为展开剂，展开，展距12cm，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与桔梗对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
鉴别结果：图1-图6中三批样品的薄层色谱鉴别试验表明，供试品色谱中在与对照品和对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点或斑点，而阴性对照品在相同位置则没有相同颜色的斑点，本鉴别方法色谱明显、分离效果好、斑点清晰、专属性强、阴性对照样品无干扰。
(四)银翘解毒口服液的含量测定方法：
(1)混合对照品溶液的制备：分别称取绿原酸和牛蒡苷为对照品，以体积分数为50％的甲醇溶液为溶剂，制得绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL的混合对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取银翘解毒口服液2mL，置100mL量瓶中，加入50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；
(3)确定色谱条件：
色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温35℃，流速1mL/min，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液-甲醇，梯度洗脱；乙腈、0.2％磷酸水溶液、甲醇流动相分别记作A、B、C，梯度洗脱程序为：0～9min，10％A-84％B-6％C；10～25min，23％A-71％B-6％C；26～40min，10％A-84％B-6％C；
(4)测定：
分别吸取绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪中，在波长327nm下，测定绿原酸的峰面积；在波长276nm下，测定牛蒡苷的峰面积，理论板数按绿原酸峰、牛蒡苷峰计算均应不低于1000；根据峰面积分别计算绿原酸和牛蒡苷的含量。
测定结果：绿原酸含量为1.7817mg/mL，牛蒡苷含量为4.7781mg/mL。
实施例2：
本实施例银翘解毒口服液的制备方法和鉴别方法同实施例1，含量测定方法如下：
(1)混合对照品溶液的制备：分别称取绿原酸和牛蒡苷为对照品，加50％甲醇溶液制成绿原酸浓度为40.2μg/mL、牛蒡苷浓度为50.3μg/mL的混合对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备：取银翘解毒口服液2mL，置100mL量瓶中，加入50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；
(3)确定色谱条件：
色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温35℃，流速1mL/min，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液-甲醇，梯度洗脱；乙腈、0.2％磷酸水溶液、甲醇流动相分别记作A、B、C，梯度洗脱程序为：0～9min，10％A-84％B-6％C；10～25min，23％A-71％B-6％C；26～40min，10％A-84％B-6％C；
(4)测定：
分别吸取绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪中，在波长327nm下，测定绿原酸的峰面积；在波长276nm下，测定牛蒡苷的峰面积，理论板数按绿原酸峰、牛蒡苷峰计算均应不低于1000；根据峰面积分别计算绿原酸和牛蒡苷的含量。
测定结果：绿原酸含量为1.7489mg/mL，牛蒡苷含量为4.6481mg/mL。
为对绿原酸或牛蒡苷的含量测定方法的可靠性进行证实，本发明申请进行了以下试验：
(1)系统适应性试验及空白试验
取对照品溶液、供试品溶液及不含绿原酸或牛蒡苷的两种阴性对照品溶液各20μL，按以上所建立的色谱条件进行HPLC测定；在波长327nm下对绿原酸含量进行测定，在波长276nm下对牛蒡苷含量进行测定，记录色谱图。
①绿原酸测定结果
波长327nm下色谱图显示，供试品中绿原酸峰与对照品保留时间一致，并且绿原酸与其它组分达到了较好分离，而绿原酸阴性对照品在相同保留时间处未出现该峰。结果表明，理论板数＞1000，绿原酸峰与最相邻峰分离度R＞1.5，阴性对照溶液对绿原酸测定无干扰作用，色谱图见图7-9。
②牛蒡苷测定结果
在波长276nm下色谱图显示，对照品中牛蒡苷峰保留时间为26.72min,供试品中牛蒡苷峰与对照品保留时间一致，并且牛蒡苷与其它组分达到了较好分离，而牛蒡苷阴性对照品在相同保留时间处未出现该峰。结果表明，理论板数＞1000，牛蒡苷峰与最相邻峰分离度R＞1.5，阴性对照溶液对牛蒡苷测定无干扰作用，色谱图见图10-12。
(2)线性关系考察
分别配制不同浓度的标准品溶液，按实施例1建立的色谱条件依次测定，分别在波长327nm和276nm下测定绿原酸和牛蒡苷峰面积，对标准品浓度和峰面积线性关系进行考察。
①波长327nm时，绿原酸线性关系测定结果，见表1。
表1 不同浓度的绿原酸色谱峰面积结果
以绿原酸浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制绿原酸标准曲线，见图13。将表1中的数据进行线性回归，得到线性回归方程：y＝71238.6x-187566.3，(R2＝0.9994)。结果表明，进样浓度在10.4-166.4μg/mL范围内绿原酸浓度与峰面积呈良好的线性关系。
②波长276nm时，牛蒡苷线性关系测定结果，见表2。
表2 不同浓度的牛蒡苷色谱峰面积结果
以牛蒡苷含量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制牛蒡苷标准曲线，见图8。将表2中的数据进行线性回归，得到线性回归方程：y＝12473.4x-25512.9，(R2＝0.9994)。结果表明，进样浓度在12.3-196.8μg/mL范围内牛蒡苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。
(3)精密度试验
主要考察仪器的测定结果重现性。精密吸取对照品溶液20μL，重复进样测定6次，分别在波长327nm和276nm下测定绿原酸和牛蒡苷峰面积，记录色谱图与峰面积，结果见表3、4。结果表明，仪器的精密度良好。
表3 绿原酸精密度试验结果
表4 牛蒡苷精密度试验结果
(4)重复性试验
将同一批号的样品，按供试品溶液制备方法，平行制备成6份供试品溶液，按建立的色谱条件分别进行试验，分别在波长327nm和276nm下测定绿原酸和牛蒡苷峰面积，记录色谱图与峰面积，结果见表5、6。结果表明，试验方法的重现性良好。
表5 绿原酸重复性试验结果
表6 牛蒡苷重复性试验结果
(5)日内稳定性试验
将同一批号的样品，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，按建立的色谱条件分别于0、2、4、6、8、10、12h进行试验，分别在波长327nm和276nm下测定绿原酸和牛蒡苷峰面积，记录色谱图与峰面积，结果见表7、8。结果表明，供试品溶液在12h内稳定。
表7 绿原酸日内稳定性试验结果
表8 牛蒡苷日内稳定性试验结果
(6)加样回收率试验(准确度)
精密量取已知含量(0.9071mg/mL)的同批号样品1mL，共9份，分别置100mL量瓶中，分别加入含有绿原酸对照品浓度为0.416mg/mL和牛蒡苷对照品浓度为0.492mg/mL的混合溶液1.733mL、2.16mL、2.60mL各三份，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，取上清液作为供试品溶液。按照建立的色谱条件进行试验，分别在波长327nm和276nm下测定绿原酸和牛蒡苷峰面积，记录色谱图及峰面积。以峰面积计算绿原酸、牛蒡苷含量，按下式计算回收率，结果见表9、10。结果表明，试验方法的准确性良好。
表9 绿原酸加样回收率试验结果
表10 牛蒡苷加样回收率试验结果
最后应说明的是，实施例只是本发明最优的具体实施方式而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种鉴定银翘解毒口服液的方法，其特征在于，所述方法包括对银翘解毒口服液中的金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗中的一种或任意几种成分进行鉴定的步骤，具体包括如下步骤：
(1)金银花的薄层色谱鉴别方法：
制备金银花对照药材溶液、绿原酸对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取绿原酸对照品溶液、金银花对照药材溶液和供试品溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为9:1:0.5的异丙醇-甲醇-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱、金银花对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)连翘的薄层色谱鉴别方法：
制备连翘对照药材溶液、连翘苷对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取连翘苷对照品溶液、连翘对照药材溶液和供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与连翘苷对照品色谱、连翘对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
(3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法：
制备牛蒡子对照药材溶液、牛蒡苷对照品溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取牛蒡苷对照品溶液5μL、牛蒡子对照药材溶液10μL，供试品溶液5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以体积比为50:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与牛蒡苷对照品色谱和牛蒡子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法：
制备胡薄荷酮对照品溶液、薄荷脑对照品溶液、薄荷和荆芥对照药材溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取胡薄荷酮对照品溶液2μL，薄荷脑对照品溶液5μL，薄荷和荆芥对照药材溶液20μL，供试品溶液20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19:1:2的石油醚-三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出晾干，喷以体积比为1:4的香草醛硫酸试液-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胡薄荷酮和薄荷脑对照品色谱、薄荷和荆芥对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)甘草的薄层色谱鉴别方法：
制备甘草对照药材溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，取甘草对照药材溶液、供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)桔梗的薄层色谱鉴别方法：
制备桔梗对照药材溶液和供试品溶液；
照薄层色谱法试验，取桔梗对照药材溶液、供试品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:5:0.5:0.35的石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸为展开剂，展开，展距12cm，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与桔梗对照品色谱和桔梗对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.根据权利要求1所述的银翘解毒口服液的鉴别方法，其特征在于：
(1)金银花的薄层色谱鉴别方法中，
金银花对照药材溶液的制备方法为：取金银花对照药材0.5g，加水50mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加1mL丙酮溶解，作为金银花对照药材溶液；
绿原酸对照品溶液的制备方法为：取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为绿原酸对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加丙酮20mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加丙酮2mL溶解，作为供试品溶液；
(2)连翘的薄层色谱鉴别方法中，
连翘对照药材溶液的制备方法为：取连翘对照药材0.4g，加水40ml，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为连翘对照药材溶液；
连翘苷对照品溶液的制备方法为：取连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.3mg的溶液，作为连翘苷对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
(3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法中，
牛蒡子对照药材溶液的制备方法为：取牛蒡子对照药材0.4g，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为牛蒡子对照药材溶液；
牛蒡苷对照品溶液的制备方法为：取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为牛蒡苷对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，加2g粒径为100～200目的中性氧化铝混匀，过内径为1～1.5cm、质量为5g、粒径为100～200目的中性氧化铝柱，用体积分数80％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，取上清液作为供试品溶液；
(4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法中，
薄荷和荆芥对照药材溶液的制备方法为：取薄荷对照药材3g、荆芥对照药材2g，置圆底烧瓶中，加水200mL，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，将冲洗液与取出的乙酸乙酯层合并，自然挥干，残渣用甲醇0.5mL溶解，作为薄荷和荆芥对照药材溶液；
胡薄荷酮对照品溶液的制备方法为：取胡薄荷酮对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为胡薄荷酮对照品溶液；
薄荷脑对照品溶液的制备方法为：取薄荷脑对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为薄荷脑对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液80mL，加水40mL，混匀，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，合并乙酸乙酯层，自然挥干，用甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
(5)甘草的薄层色谱鉴别方法中，
甘草对照药材溶液的制备方法为：取甘草对照药材0.4g，加水30mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为甘草对照药材溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
(6)桔梗的薄层色谱鉴别方法中，
桔梗对照药材溶液的制备方法为：取桔梗对照药材2g，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿20mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水40mL，弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇1mL溶解，作为桔梗对照药材溶液；
供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液20mL，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水的混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿25mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水50mL，每次弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
3.一种银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：银翘解毒口服液中所含绿原酸和牛蒡苷的含量测定，包括如下步骤：
(1)混合对照品溶液的制备：分别称取绿原酸和牛蒡苷为对照品，以甲醇为溶剂，制得绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液；绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液中绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL；
(2)供试品溶液的制备：取银翘解毒口服液2mL，置100mL量瓶中，加入50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；
(3)确定色谱条件：
色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温35℃，流速1mL/min，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液-甲醇，梯度洗脱；乙腈、0.2％磷酸水溶液、甲醇流动相分别记作A、B、C；
(4)测定：
分别吸取绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪中，在波长327nm下，测定绿原酸的峰面积；在波长276nm下，测定牛蒡苷的峰面积，理论板数按绿原酸峰、牛蒡苷峰计算均应不低于1000；根据峰面积分别计算绿原酸和牛蒡苷的含量。
4.根据权利要求3所述的银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：步骤(1)中，绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液中绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL。
5.根据权利要求3所述的银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：步骤(3)中梯度洗脱程序为：0～9min，10％A-84％B-6％C，10～25min，23％A-71％B-6％C，26～40min，10％A-84％B-6％C。
6.根据权利要求3所述的银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：绿原酸的峰面积的测定波长为327nm，牛蒡苷的峰面积的测定波长为276nm。
7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述银翘解毒口服液采用如下方法制备得到：
(1)蒸馏提取薄荷和荆芥的有效成分，取薄荷饮片、荆芥饮片，加7-9倍薄荷饮片和荆芥饮片药量的水浸泡0.5-1小时后，蒸馏1-1.5小时，得挥发油、煎煮液和药渣；
(2)将步骤(1)得到的药渣与其余的几种原料混合后，浸泡1.5-2.5小时后进行煎煮，每次煎煮加9-11倍药量的水，共煎煮3次，每次煎煮1-2小时，每次煎煮后分离得到煎煮液和药渣，将三次煎煮液与步骤(1)得到的煎煮液混合，滤过，减压浓缩至相对密度为1.05-1.20，浓缩液静置10-12小时，分离上清液，滤过，得滤液；
(3)将步骤(2)得到的滤液与步骤(1)得到的挥发油合并，加入0.1％-0.2％的表面活性剂，搅匀，加水定容至1mL药液相当于生药1g；
(4)加入0.2％％-0.3％的防腐剂苯甲酸钠，搅匀，即得该银翘解毒口服液；
该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花175-185份、连翘175-185份、薄荷105-110份、荆芥65-75份、淡豆豉85-95份、牛蒡子105-115份、桔梗100-110份、淡竹叶65-75份和甘草85-95份。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)蒸馏提取薄荷和荆芥的有效成分，取薄荷饮片、荆芥饮片，加8倍薄荷饮片和荆芥饮片药量的水浸泡0.5小时后，蒸馏1小时，得挥发油、煎煮液和药渣；
(2)将步骤(1)得到的药渣与其余的几种原料混合后，浸泡2小时后进行煎煮，每次煎煮加10倍药量的水，共煎煮3次，每次煎煮1.5小时，每次煎煮后分离得到煎煮液和药渣，将三次煎煮液与步骤(1)得到的煎煮液混合，滤过，减压浓缩至相对密度为1.10，浓缩液静置12小时，分离上清液，滤过，得滤液；
(3)将步骤(2)得到的滤液与步骤(1)得到的挥发油合并，加入0.1％的聚山梨酯80，搅匀，加水定容至1mL药液相当于生药1g；
(4)加入0.3％的防腐剂苯甲酸钠，搅匀，即得该银翘解毒口服液；
该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花179份、连翘179份、薄荷107份、荆芥71份、淡豆豉89份、牛蒡子107份、桔梗107份、淡竹叶71份和甘草90份。
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