CN102590433B - 一种肝畅制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗肝病的药物组合物的质量检测方法，属于医药技术领域。本发明对现有的肝畅胶囊的质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了红花、波棱瓜子的鉴别方法，还新增加了制剂中西红花的有效成分西红花苷‑I和西红花苷‑II、红花的有效成分羟基红花黄色素A、人工牛黄的有效成分胆红素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量测定方法，进一步确保了产品质量安全、均一、稳定、质量可控。从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂的质量检测方法，特别涉及一种肝畅制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。
背景技术
肝脏是人体的代谢中心，为维持生命的重要脏器之一，它的机能状态密切关系人体的健康，肝脏细胞受到破坏，肝脏的功能受到损害，可能引起身体的系列不适应症状。肝炎属中医“肝病”范畴，肝病多由感受时疫湿浊之毒；或饮食不节，损伤脾胃，以致水谷之气运化失常，湿浊内阻，郁蒸化热而使湿热相混，脾胃壅阻，肝气郁结，不能疏泄；或由七情内伤，肝失疏运；或气郁化火，肝络瘀阻；或阴血不足，肝阳偏亢，以及湿热内蕴，寒滞肝脉而成此病；或热迫胆汁外泄；或肝气郁结，日久伤络，血瘀阻滞，致胆汁排泄不畅，胆汁外泄，溢于肌肤为黄疸。临床主要表现右肋胀痛，据按、食欲不振，四肢无力，呕吐、头痛、眩晕、耳鸣，目赤，易怒，全身发黄，肝脏肿大等。据统计，全球携带乙型肝炎表面抗原的人数超过2.8亿，我国是肝炎大国，目前我国人群中有8-10％为乙肝病毒携带者，且每年仍有相当数量的新增患者。
肝畅胶囊为金诃藏药股份有限公司独家产品，收载于中成药地方标准上升国家标准部分，标准编号：WS-10927(ZD-0927)-2002。肝畅胶囊制剂是由如下重量配比的药材制成的：松石20.1g、天竺黄20.1g、红花40.0g、西红花8.0g、绿绒蒿59.6g、甘青青兰40.1g、塞北紫堇40.1g、岩精膏40.1g、丁香20.1g、人工牛黄4.0g、印度獐牙菜20.1g、波棱瓜子12.0g、木香马兜铃12.0g、石花4.0g、麝香1.6g、银朱1.7g。以上药味，除人工牛黄、人工麝香研细粉外，其余松石等药味粉碎成细粉，过筛，与上述细粉混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。用于肝胆湿热所引起的胸胁胀痛，食欲不振，急性肝炎见上述证候者。
目前该制剂质量标准存质量标准简单、手段单一、产品质量不易控制。原质量标准无含量测定项，现有技术中也未发现对于肝畅胶囊的其他质量检测方法。因此，造成肝畅胶囊制剂产品质量检测不精准，质量标准有待提高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种肝畅制剂的质量检测方法。
发明概述
本发明对现有的肝畅制剂质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了红花、波棱瓜子的鉴别方法，还新增加了制剂中西红花的有效成分西红花苷-I和西红花苷-II、红花的有效成分羟基红花黄色素A、人工牛黄的有效成分胆红素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量测定方法，进一步确保了产品质量安全、均一、稳定、质量可控。
术语说明：
肝畅胶囊是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药品名称。
肝畅制剂包括肝畅胶囊及用肝畅胶囊原料药配方制备的其他制剂。
本发明的技术方案如下：
一种原料药组成为松石20.1重量份、天竺黄20.1重量份、红花40.0重量份、西红花8.0重量份、绿绒蒿59.6重量份、甘青青兰40.1重量份、塞北紫堇40.1重量份、岩精膏40.1重量份、丁香20.1重量份、人工牛黄4.0重量份、印度獐牙菜20.1重量份、波棱瓜子12.0重量份、木香马兜铃12.0重量份、石花4.0重量份、麝香1.6重量份、银朱1.7重量份的肝畅制剂的质量检测方法，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：
鉴别：
A.红花的鉴别：
取肝畅制剂2g-6g，加体积百分比70％-80％丙酮15-20ml，密塞，振摇20-30分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g-1.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为4-12∶1-3∶1-3的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B.波棱瓜子的鉴别：
取肝畅制剂2.5g-7.5g，加乙醚20-30ml，加热回流1-1.5小时，滤过，滤液浓缩至2-3ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为5-12∶0.5-1.5的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5％香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
A.西红花的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比0.1％甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为20-30∶70-80；检测波长440nm；理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含20μg和10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅制剂研细后，取粉末0.6-1g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50-60ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
B.红花的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比0.5％甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28-30∶72-75；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25％甲醇制成每1ml含0.13-0.15mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅制剂研细后，取粉末3-5g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25％甲醇水溶液50-60ml，密塞，称定重量，超声处理40-50min，放冷，再称定重量，用体积百分比25％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
C.人工牛黄的含量测定：
照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比0.5％醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80-83∶10-13∶10-13检测波长为450nm；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含10ug的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅制剂研细后，取粉末4-5g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50-60ml，密塞，称定重量，超声30-40min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
D.印度獐牙菜的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22-25∶78-75；检测波长237nm；理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500；
对照品溶液的制备：取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.12mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅制剂研细后，取粉末5-7g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇25-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
E.丁香的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62-65∶38-40；检测波长280nm；理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅制剂研细后，取粉末0.5-1g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25-30ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
F.麝香的含量测定：
照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ E)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以体积百分比50％苯基-甲基硅酮OV-17为固定相，涂布浓度为2％；柱温180℃；理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅制剂研细后，取粉末3.5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯50-60ml，密塞，称定重量，超声处理30-40min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
所述的制剂是指取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括丸剂、微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。
优选的，一种原料药组成为松石20.1重量份、天竺黄20.1重量份、红花40.0重量份、西红花8.0重量份、绿绒蒿59.6重量份、甘青青兰40.1重量份、塞北紫堇40.1重量份、岩精膏40.1重量份、丁香20.1重量份、人工牛黄4.0重量份、印度獐牙菜20.1重量份、波棱瓜子12.0重量份、木香马兜铃12.0重量份、石花4.0重量份、麝香1.6重量份、银朱1.7重量份肝畅制剂的质量检测方法，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：
鉴别：
A.红花的鉴别：
取肝畅胶囊4g，加体积百分比80％丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为8∶2∶2的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B.波棱瓜子的鉴别：
取肝畅胶囊5g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9∶1的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5％香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
A.西红花的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比0.1％甲酸水溶液为流动相；流动相的体积份数比为24∶76；检测波长440nm；理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含20μg和10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末0.6g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含西红花以西红花苷-I(C44H64O24)和西红花苷-II(C38H54O19)的总量计，不得少于0.7mg/粒；
B.红花的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比0.5％甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28∶72；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末3g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25％甲醇水溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用体积百分比25％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊每粒含红花以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计，不得少于0.36mg/粒；
C.人工牛黄的含量测定：
照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比0.5％醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80∶10∶10检测波长为450nm；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含10ug的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末4g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别：吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含人工牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于0.022mg/粒；
D.印度獐牙菜的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22∶78；检测波长237nm；理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500；
对照品溶液的制备：取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.12mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷(C16H22O10)计，不得少于0.05mg/粒；
E.丁香的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62∶38；检测波长280nm；理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末0.5-1g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明组合物胶囊含丁香以丁香酚C10H18O2计，不得少于2mg/粒。
F.麝香的含量测定：
照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ E)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以体积百分比50％苯基-甲基硅酮OV-17为固定相，涂布浓度为2％；柱温180℃；理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末3.5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.029mg/粒。
本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。
肝畅胶囊原质量标准项下只有西红花、人工牛黄、齐墩果酸的薄层鉴别，无含量测定项，不能有效的检测其他主要成分的质量。本发明对现有的肝畅制剂质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了红花、波棱瓜子的鉴别方法，还新增加了制剂中西红花的有效成分西红花苷-I和西红花苷-II、红花的有效成分羟基红花黄色素A、人工牛黄的有效成分胆红素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量测定方法，进一步确保了产品质量安全、均一、稳定、质量可控，从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 鉴别实验
肝畅胶囊由青海金诃藏药药业股份有限公司提供。
A.红花的鉴别：
取肝畅胶囊4g，加体积百分比80％丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开剂体积份数比4-12∶1-3∶1-3的范围内分别取(10∶3∶3)、(8∶2∶2)、(8∶1∶1)的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
结果分析：在体积份数比为4-12∶1-3∶1-3的醋酸乙酯-甲酸-水展开剂条件下，有较好的展开效果。其中，体积份数比(8∶2∶2)的醋酸乙酯-甲酸-水的展开剂展开效果最好。
B.波棱瓜子的鉴别：
取肝畅胶囊5g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮为展开剂，展开剂体积份数比5-12∶0.5-1.5的范围内分别取(12∶0.5)、(9∶1)、(8∶1.5)环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5％香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
结果分析：在体积份数比为(12∶0.5)、(9∶1)、(8∶1.5)环己烷-丙酮展开剂条件下，有较好的展开效果。其中，体积份数比(9∶1)的醋酸乙酯-甲酸-水的展开剂展开效果最好。
实验例2：含量测定实验
A.西红花的含量测定：
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪：岛津AuW220D电子天平。
对照品：西红花苷-I对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：111588-200501；西红花苷-II对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：100001-200504。
样品：肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号：20100414、20100415、20100416。
2.检测波长的选择
取西红花苷-I、西红花苷-II对照品，于190-500nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定440nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现，分别以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-体积份数比0.1％甲酸水溶液、乙腈-体积份数比0.1％甲酸水溶液为流动相，乙腈-体积百分比0.1％甲酸水溶液具有较好的色谱分离效果。其中以乙腈∶体积份数比0.1％甲酸水溶液的体积比为24∶76为流动相最优。
4.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中西红花苷-I、西红花苷-II与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，且阴性对照无干扰。见附图1，图2，图3。
5.对照品制备
取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含20μg和10μg的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1 提取方法选择
本品研细后，取粉末0.6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声、回流、振摇处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表1 提取方法考察试验结果
| 提取方法 | 超声 | 回流 | 振摇 |
| 西红花苷-I含量(mg/粒) | 0.207 | 0.161 | 0.139 |
| 西红花苷-II含量(mg/粒) | 0.565 | 0.385 | 0.357 |
结果表明，超声提取所测定的西红花苷-I、西红花苷-II含量最高，故确定提取方法为超声提取。
6.2 提取溶剂选择
本品研细后，取粉末0.6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇、体积百分比70％乙醇、无水乙醇各50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表2 提取溶剂考察试验结果
| 提取溶剂 | 甲醇 | 70％乙醇 | 无水乙醇 |
| 西红花苷-I含量(mg/粒) | 0.210 | 0.186 | 0.192 |
| 西红花苷-II含量(mg/粒) | 0.562 | 0.517 | 0.523 |
结果表明，甲醇溶剂所测的西红花苷-I、西红花苷-II含量最高，故选用甲醇作为供试品的提取溶剂。
6.3 提取时间选择
本品研细后，取粉末0.6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声处理20、30、40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表3 提取时间考察试验结果
| 提取时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 西红花苷-I含量(mg/粒) | 0.207 | 0.209 | 0.208 |
| 西红花苷-II含量(mg/粒) | 0.563 | 0.566 | 0.537 |
结果表明，西红花苷-I、西红花苷-II在提取时间为20min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择30min为提取时间。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取西红花苷-I、西红花苷-II混合对照品贮备液溶液(西红花苷-I：43.6μg/ml；西红花苷-II：20.5μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，分别得西红花苷-I、西红花苷-II回归方程：A1＝44.29C1-24.49、A2＝165.73C2+14.95，相关系数：R1＝0.9995、R2＝0.9997。结果表明：西红花苷-I、西红花苷-II分别在4.36μg/ml～43.60μg/ml、2.05μg/ml～20.50μg/ml范围内，西红花苷-I、西红花苷-II的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见附图4，图5，表4。
表4 西红花苷-I、西红花苷-II线性关系考察结果
| 序号 | 浓度C1(μg/ml) | 峰面积A1 | 浓度C2(μg/ml) | 峰面积A2 |
| 1 | 4.36 | 193.2 | 2.05 | 360.2 |
| 2 | 13.08 | 545.7 | 6.15 | 1048.1 |
| 3 | 21.80 | 905.6 | 10.25 | 1700.6 |
| 4 | 34.88 | 1530.9 | 16.40 | 2692.3 |
| 5 | 43.60 | 1916.5 | 20.50 | 3446.8 |
回归方程：A1＝44.29C1-24.49、A2＝165.73C2+14.95
相关系数：R1＝0.9995、R2＝0.9997。
8.精密度试验
分别精密吸取西红花苷-I、西红花苷-II混合对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD1＝0.86％、RSD2＝1.09％。结果表明，仪器精密度良好。
表5 精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD1＝1.58％、RSD2＝1.11％。结果表明：供试品中西红花苷-I、西红花苷-II在6小时内测定结果稳定。
表6 样品稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中西红花苷-I、西红花苷-II的含量，RSD1＝1.86％、RSD2＝1.38％。表明分析方法重复性良好。
表7 重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入西红花苷-I、西红花苷-II对照品，测定其含量，计算回收率，西红花苷-I、西红花苷-II平均回收率分别为98.8％、98.6％，RSD1＝1.40％、RSD2＝1.82％。表明该测定方法测定结果准确。
表8 回收率实验结果
12.样品测定
取肝畅胶囊三批，测定并计算西红花苷-I、西红花苷-II含量，结果如下。
表9 样品含量测定结果
| 批号 | 西红花苷-I含量(mg/粒) | 西红花苷-II含量(mg/粒) |
| 20100414 | 0.205 | 0.581 |
| 20100415 | 0.201 | 0.579 |
| 20100416 | 0.211 | 0.589 |
综上：
本发明含量测定的方法通过控制组合物中西红花的西红花苷-I(C44H64O24)和西红花苷-II(C38H54O19)的含量从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以乙腈-体积份数比0.1％甲酸水为流动相的检测方法。
B.红花的含量测定：
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪：岛津AuW220D电子天平。
对照品：羟基红花黄色素A对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：111637-200905。
样品：肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号：20100414、20100415、20100416；红花药材(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)。
2.检测波长的选择
取羟基红花黄色素A对照品，于190-500nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定403nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现，以甲醇-体积份数比为0.5％甲酸溶液体系适宜比例为流动相，均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇∶体积份数比为0.5％甲酸溶液的体积比为28∶72为流动相最优，相对保留时间12min左右。
4.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中羟基红花黄色素A与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，且阴性对照无干扰。见附图6，图7，图8，图9。
5.对照品制备
取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加体积百分比为25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1 提取方法选择
本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积百分比为25％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声、回流、振摇处理40min，放冷，再称定重量，用体积百分比为25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表10 提取方法考察试验结果
| 提取方法 | 超声 | 回流 | 振摇 |
| 羟基红花黄色素A含量(mg/粒) | 0.418 | 0.386 | 0.311 |
结果表明，超声提取所测定的羟基红花黄色素A含量最高，故确定提取方法为超声提取。
6.2 提取溶剂选择
本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水、体积百分比为25％甲醇、甲醇各50ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表11 提取溶剂考察试验结果
| 提取溶剂 | 水 | 25％甲醇 | 甲醇 |
| 羟基红花黄色素A含量(mg/粒) | 0.415 | 0.416 | 0.413 |
结果表明，水、体积百分比为25％甲醇与甲醇所测的羟基红花黄色素A含量基本一致，由于用水作提取溶剂过滤困难，纯甲醇毒性大，故选用体积百分比为25％甲醇溶液作为供试品的提取溶剂。
6.3 提取时间选择
本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积百分比为25％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别超声处理20、30、40min，放冷，再称定重量，用体积百分比为25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表12 提取时间考察试验结果
| 提取时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 羟基红花黄色素A含量(mg/粒) | 0.359 | 0.414 | 0.415 |
结果表明，羟基红花黄色素A在提取时间为30min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择40min为提取时间。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取羟基红花黄色素A对照品贮备液溶液(0.267mg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，得羟基红花黄色素A回归方程：A＝24101C+1.662，相关系数：R＝0.9998。结果表明：羟基红花黄色素A在0.0267mg/ml～0.267mg/ml范围内，羟基红花黄色素A的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见附图10。
表13 羟基红花黄色素A线性关系考察结果
| 序号 | 浓度C(mg/ml) | 峰面积A |
| 1 | 0.0267 | 626.2 |
| 2 | 0.0801 | 1976.4 |
| 3 | 0.1335 | 3222.3 |
| 4 | 0.2136 | 5072.3 |
| 5 | 0.2670 | 6485.6 |
回归方程：A＝24101C+1.662
相关系数：R＝0.9998.
8.精密度试验
精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝1.18％。结果表明，仪器精密度良好。
表14 精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝1.32％。结果表明：供试品中羟基红花黄色素A在6小时内测定结果稳定。
表15 样品稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中羟基红花黄色素A的含量，RSD＝1.57％。表明分析方法重复性良好。
表16 重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入羟基红花黄色素A对照品，测定其含量，计算回收率，羟基红花黄色素A平均回收率为98.79％，RSD＝1.86％。表明该测定方法测定结果准确。
表17 回收率实验结果
12.样品测定
取肝畅胶囊三批，测定并计算羟基红花黄色素A含量，结果如下。
表18 样品含量测定结果
| 批号 | 羟基红花黄色素A含量(mg/粒) |
| 20100414 | 0.4337 |
| 20100415 | 0.4328 |
| 20100416 | 0.4359 |
综上：
本发明含量测定的方法通过控制组合物中红花的羟基红花黄色素A的含量从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以甲醇-体积百分比0.5％甲酸溶液为流动相的检测方法。
C.人工牛黄的含量测定：
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪：岛津AuW220D电子天平。
对照品：胆红素对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：100077-200805，含量98.5％。
样品：肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号：20100414。
2.检测波长的选择
取胆红素对照品，于190-500nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定450nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现，选用甲醇-四氢呋喃-体积份数比0.5％醋酸为流动相，流动相的体积份数比80∶10∶10，在此条件下，胆红素与其它相邻峰分离度大于1.5，且峰形较好。
4.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中主峰与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，且阴性对照无干扰。见附图11，图12。
5.对照品制备
精密称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含10ug的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1 提取方法选择
本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
表19 提取方法考察试验结果
| 提取方法 | 超声 | 回流 | 振摇 |
| 胆红素含量(mg/粒) | 0.0309 | 0.0215 | 0.0183 |
结果表明，超声提取所测定的胆红素含量最高，故确定提取方法为超声提取。
6.2 提取溶剂选择
本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷、甲醇、无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
表20 提取溶剂考察试验结果
| 提取溶剂 | 二氯甲烷 | 甲醇 | 无水乙醇 |
| 胆红素含量(mg/粒) | 0.0316 | 0.0223 | 0.0175 |
结果表明，二氯甲烷为提取溶剂所测的胆红素含量最高，故选用二氯甲烷作为供试品的提取溶剂。
6.3 提取时间选择
本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷、甲醇、无水乙醇50ml，密塞，称定重量，分别超声处理20、30、40min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
表21 提取时间考察试验结果
| 提取时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 胆红素含量(mg/粒) | 0.0299 | 0.0303 | 0.0302 |
结果表明，胆红素在提取时间为20min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择30min为提取时间。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取胆红素对照品贮备液溶液(19.76μg/ml)2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)为纵坐标，对照品浓度(C)为横坐标，进行线性回归，得胆红素回归方程：A＝54.726C+2.5125，相关系数：R＝0.9998。结果表明：胆红素在3.95μg/ml～19.76μg/ml范围内，胆红素的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见附图13.
表22 胆红素线性关系考察结果
| 序号 | 浓度C(μg/ml) | 峰面积A |
| 1 | 3.95 | 215.1 |
| 2 | 7.90 | 436.2 |
| 3 | 11.86 | 661.3 |
| 4 | 15.81 | 858.5 |
| 5 | 19.76 | 1085.6 |
回归方程：A＝54.726C+2.5125
相关系数：R＝0.9998
8.精密度试验
精密吸取胆红素对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.83％。结果表明，仪器精密度良好。
表23 精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝0.87％。结果表明：供试品中胆红素在6小时内测定结果稳定。
表24 样品稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中胆红素的含量，RSD＝1.23％。表明分析方法重复性良好。
表25 重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入胆红素对照品，测定其含量，计算回收率，胆红素平均回收率为98.68％，RSD＝1.57％。表明该测定方法测定结果准确。
表26 回收率实验结果
12.样品测定
取肝畅胶囊三批，测定并计算胆红素含量，结果如下。
表27 样品含量测定结果
| 批号 | 胆红素含量(mg/粒) |
| 20100414 | 0.0313 |
| 20100415 | 0.0307 |
| 20100416 | 0.0311 |
综上：
本发明含量测定的方法通过控制组合物中人工牛黄的胆红素的含量从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以甲醇-四氢呋喃-体积份数比0.5％醋酸溶液为流动相的检测方法。
D.印度獐牙菜的含量测定
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪：岛津AuW220D电子天平。
对照品：獐牙菜苦苷对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：0785-200203。
样品：肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号：20100414、20100415、20100416；印度獐牙菜药材(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)。
2.检测波长的选择
取獐牙菜苦苷对照品，于190-400nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定237nm为检测波长。
3.流动相选择
分别研究了流动相体积份数比22∶78的甲醇-水和体积份数比22∶78的甲醇-体积份数比0.1％冰醋酸溶液的供试品分离效果，结果，后者溶剂干扰大，故选用了前者。
4.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中獐牙菜苦苷与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，且阴性对照无干扰。
5.对照品制备
取獐牙菜苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.12mg的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1 提取方法选择
本品研细后，取粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，分别超声、回流、振摇处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表28 提取方法考察试验结果
| 提取方法 | 超声 | 回流 | 振摇 |
| 獐牙菜苦苷含量(mg/粒) | 0.0611 | 0.0607 | 0.0435 |
结果表明，超声和回流提取所测定的獐牙菜苦苷含量基本一样，但考虑到超声提取操作方便、低温避免热损失等优点，故确定提取方法为超声提取。
6.2 提取溶剂选择
本品研细后，取粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇、乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表29 提取溶剂考察试验结果
| 提取溶剂 | 甲醇 | 乙醇 |
| 獐牙菜苦苷含量(mg/粒) | 0.0615 | 0.0536 |
结果表明，甲醇所测得獐牙菜苦苷含量高，故选用甲醇作为供试品的提取溶剂。
6.3 提取时间选择
本品研细后，取粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，分别超声处理20、30、40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表30 提取时间考察试验结果
| 提取时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 獐牙菜苦苷含量(mg/粒) | 0.0457 | 0.0609 | 0.0611 |
结果表明，獐牙菜苦苷在提取时间为30min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择40min为提取时间。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取獐牙菜苦苷对照品贮备液溶液(0.256mg/ml)1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，得獐牙菜苦苷回归方程：A＝778246C+1051.7，相关系数：R＝0.9997。结果表明：獐牙菜苦苷在0.0256mg/ml～0.2304mg/ml范围内，獐牙菜苦苷的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见附图14.
表31 羟基红花黄色素A线性关系考察结果
| 序号 | 浓度C(mg/ml) | 峰面积A |
| 1 | 0.0256 | 20061 |
| 2 | 0.0768 | 60367 |
| 3 | 0.1280 | 103119 |
| 4 | 0.1792 | 140627 |
| 5 | 0.2304 | 179162 |
回归方程：A＝778246C+1051.7
相关系数：R＝0.9997
8.精密度试验
精密吸取獐牙菜苦苷对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.69％。结果表明，仪器精密度良好。
表32 精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝0.54％。结果表明：供试品中獐牙菜苦苷在6小时内测定结果稳定。
表33 样品稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中獐牙菜苦苷的含量，RSD＝1.16％。表明分析方法重复性良好。
表34 重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入獐牙菜苦苷对照品，测定其含量，计算回收率，獐牙菜苦苷平均回收率为98.04％，RSD＝0.95％。表明该测定方法测定结果准确。
表35 回收率实验结果
12.样品测定
取肝畅胶囊三批，测定并计算獐牙菜苦苷含量，结果如下。
表36 样品含量测定结果
| 批号 | 獐牙菜苦苷含量(mg/粒) |
| 20100414 | 0.0621 |
| 20100415 | 0.0615 |
| 20100416 | 0.0619 |
综上：
本发明含量测定的方法通过控制组合物中印度獐牙菜的獐牙菜苦苷的含量从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以甲醇-水为流动相的检测方法。
E.丁香的含量测定：
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪：岛津AuW220D电子天平。
对照品：丁香酚对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：110725-200711。
样品：肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号：20100414；丁香药材(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)。
2.检测波长的选择
取丁香酚对照品，于190-400nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定280nm为检测波长。
3.流动相选择
分别考察了甲醇-水、甲醇-体积份数比0.2％冰醋酸水溶液、乙腈-水、乙腈-体积份数比0.2％冰醋酸水溶液为流动相的分离效果，结果体积份数比为62∶38甲醇-水系统分离效果较好。
4.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中丁香酚与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，且阴性对照无干扰。
5.对照品制备
取丁香酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1 提取方法选择
本品研细后，取粉末0.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，分别超声、振摇处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表37 提取方法考察试验结果
| 提取方法 | 超声 | 振摇 |
| 丁香酚含量(mg/粒) | 2.5325 | 1.7259 |
结果表明，超声提取所测定的丁香酚含量明显高于振摇提取，故确定提取方法为超声提取。
6.2 提取溶剂选择
本品研细后，取粉末0.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入正己烷、甲醇、乙醇各25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表38 提取溶剂考察试验结果
| 提取溶剂 | 正己烷 | 甲醇 | 乙醇 |
| 丁香酚含量(mg/粒) | 1.8533 | 2.5257 | 2.1571 |
结果表明，甲醇所测得丁香酚含量最高，故选用甲醇作为供试品的提取溶剂。
6.3 提取时间选择
本品研细后，取粉末0.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，分别超声处理20、30、40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表39 提取时间考察试验结果
| 提取时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 丁香酚含量(mg/粒) | 2.5265 | 2.5286 | 2.5283 |
结果表明，丁香酚在提取时间为20min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择30min为提取时间。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取丁香酚对照品贮备液溶液(0.4156mg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，得丁香酚回归方程：A＝11.064C-3.6377，相关系数：R＝0.9997。结果表明：丁香酚在41.56μg/ml～415.6μg/ml范围内，丁香酚的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见附图15.
表40 丁香酚线性关系考察结果
| 序号 | 浓度C(μg/ml) | 峰面积A |
| 1 | 41.56 | 453.6 |
| 2 | 124.68 | 1365.9 |
| 3 | 207.80 | 2271.5 |
| 4 | 290.92 | 3278.1 |
| 5 | 415.6 | 4565.6 |
回归方程：A＝11.064C-3.6377
相关系数：R＝0.9997
8.精密度试验
精密吸取丁香酚对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.47％。结果表明，仪器精密度良好。
表41 精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝0.59％。结果表明：供试品中丁香酚在6小时内测定结果稳定。
表42 样品稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中丁香酚的含量，RSD＝0.93％。表明分析方法重复性良好。
表43 重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入丁香酚对照品，测定其含量，计算回收率，丁香酚平均回收率为97.84％，RSD＝1.15％。表明该测定方法测定结果准确。
表44 回收率实验结果
12.样品测定
取肝畅胶囊三批，测定并计算丁香酚含量，结果如下。
表45 样品含量测定结果
| 批号 | 丁香酚含量(mg/粒) |
| 20100414 | 2.5367 |
| 20100415 | 2.5526 |
| 20100416 | 2.5481 |
综上：
本发明含量测定的方法通过控制组合物中丁香的丁香酚的含量从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以甲醇-水为流动相的检测方法。
F.麝香的含量测定：
1.仪器、试药和供试样品
仪器：GC-2014C型岛津气相色谱仪：岛津AuW220D电子天平。
对照品：麝香酮对照品(中国药品生物制品鉴定所)，批号：0819-200006。
样品：肝畅胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号：20100414；麝香药材(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)。
2.色谱条件
色谱柱：固定液2％OV-17，玻璃柱(4m×3mm)，氢火焰离子化检测器(FID)，柱温180℃，进样口温度225℃，检测器温度240℃，氮气：N2，流速2ml/min，柱前压：80kPa，氢气40ml/min，空气400ml/min。在上述条件下，供试品溶液中麝香酮色谱峰能达到基线分离，峰形对称。
3.色谱柱选择
研究了OV-17和HP 50+毛细管色谱柱，结果OV-17柱的分离效果、峰形、理论板数较合适。
4.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中麝香酮与其相邻色谱峰的分离度均大于2.0，且阴性对照无干扰。
5.对照品制备
取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1 提取方法选择
本品研细后，取粉末3.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯50ml，密塞，称定重量，分别超声处理30min、浸渍12h，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得。
表46 提取方法考察试验结果
| 提取方法 | 超声 | 浸渍 |
| 麝香酮含量(mg/粒) | 0.0372 | 0.0369 |
结果表明，超声提取和浸渍提取所测定的麝香酮含量基本一致，故选择了相对快速的超声提取。
6.2 提取溶剂选择
本品研细后，取粉末3.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇各50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得。
表47 提取溶剂考察试验结果
| 提取溶剂 | 乙酸乙酯 | 无水乙醇 | 甲醇 |
| 麝香酮含量(mg/粒) | 0.0375 | 0.0316 | 0.0337 |
结果表明，乙酸乙酯所测的麝香酮含量最高，故选用乙酸乙酯作为供试品的提取溶剂。
6.3 提取时间选择
本品研细后，取粉末3.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得。
表48 提取时间考察试验结果
| 提取时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 麝香酮含量(mg/粒) | 0.0372 | 0.0376 | 0.0375 |
结果表明，麝香酮在提取时间为20min时已经基本提取完全，为了保证供试品提取完全选择30min为提取时间。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取麝香酮对照品贮备液溶液(0.5122mg/ml)2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样1μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，得麝香酮回归方程：A＝5555.6C+12641，相关系数：R＝0.9998。结果表明：麝香酮在102.44μg/ml～512.20μg/ml范围内，麝香酮的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见附图16.
表49 麝香酮线性关系考察结果
| 序号 | 浓度C(μg/ml) | 峰面积A |
| 1 | 102.44 | 569910.5 |
| 2 | 204.88 | 1149926.7 |
| 3 | 307.32 | 1749732.6 |
| 4 | 409.76 | 2279843.8 |
| 5 | 512.20 | 2850531.2 |
回归方程：A＝5555.6C+12641
相关系数：R＝0.9998
8.精密度试验
精密吸取麝香酮对照品溶液1μl，注入气相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.37％。结果表明，仪器精密度良好。
表50 精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取1μl，注入气相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝0.66％。结果表明：供试品中麝香酮在6小时内测定结果稳定。
表51 样品稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中麝香酮的含量，RSD＝1.26％。表明分析方法重复性良好。
表52 重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入麝香酮对照品，测定其含量，计算回收率，麝香酮平均回收率为98.50％，RSD＝1.47％。表明该测定方法测定结果准确。
表53 回收率实验结果
12.样品测定
取肝畅胶囊三批，测定并计算麝香酮含量，结果如下。
表54 样品含量测定结果
| 批号 | 麝香酮含量(mg/g) |
| 20100414 | 0.0376 |
| 20100415 | 0.0375 |
| 20100416 | 0.0379 |
综上：
本发明含量测定的方法通过控制组合物中麝香的麝香酮的含量从而控制制剂的质量。本品采用高效气相色谱法，比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以体积份数比50％苯基-甲基硅酮为固定相的检测方法。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
附图说明：
图1是西红花的含量测定对照品高效液相色谱图；
图2是西红花的含量测定样品高效液相色谱图；
图3是西红花的含量测定阴性对照高效液相色谱图；
图4是西红花苷-I测定标准曲线图；
图5是西红花苷-II测定标准曲线图；
图6是羟基红花黄色素A的含量测定对照品高效液相色谱图；
图7是羟基红花黄色素A的含量测定对照药材高效液相色谱图；
图8是羟基红花黄色素A的含量测定样品高效液相色谱图；
图9是羟基红花黄色素A的含量测定阴性对照高效液相色谱图；
图10是羟基红花黄色素A测定标准曲线；
图11是胆红素的含量测定对照品高效液相色谱图；
图12是胆红素的含量测定样品高效液相色谱图；
图13是胆红素测定标准曲线；
图14是獐牙菜苦苷测定标准曲线；
图15是丁香酚测定标准曲线；
图16是麝香酮测定标准曲线；
其中，图1-3、6-9、11-12的横坐标是时间，单位：分钟(Minutes)；纵坐标是电压，单位：伏特(Volts)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细的阐述，但不限于这些具体记载的实施例。所检测的肝畅胶囊为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。
实施例1：质量检测方法
鉴别：
A.红花的鉴别：
取肝畅胶囊4g，加体积百分比80％丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为8∶2∶2的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B.波棱瓜子的鉴别：
取肝畅胶囊5g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9∶1的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5％香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
A.西红花的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比0.1％甲酸水溶液为流动相；流动相的体积份数比为24∶76；检测波长440nm；理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含20μg和10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末0.6g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含西红花以西红花苷-I(C44H64O24)和西红花苷-II(C38H54O19)的总量计，不得少于0.7mg/粒；
B.红花的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比0.5％甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28∶72；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末3g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25％甲醇水溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用体积百分比25％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊每粒含红花以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计，不得少于0.36mg/粒；
C.人工牛黄的含量测定：
照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比0.5％醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80∶10∶10检测波长为450nm；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含10ug的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末4g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别：吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含人工牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于0.022mg/粒；
D.印度獐牙菜的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22∶78；检测波长237nm；理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500；
对照品溶液的制备：取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.12mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷(C16H22O10)计，不得少于0.05mg/粒；
E.丁香的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62∶38；检测波长280nm；理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末0.5-1g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本发明组合物胶囊含丁香以丁香酚C10H18O2计，不得少于2mg/粒。
F.麝香的含量测定：
照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ E)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以体积百分比50％苯基-甲基硅酮OV-17为固定相，涂布浓度为2％；柱温180℃；理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末3.5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；
本发明肝畅胶囊含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.029mg/粒。
Claims (1)
1.一种原料药组成为松石20.1重量份、天竺黄20.1重量份、红花40.0重量份、西红花8.0重量份、绿绒蒿59.6重量份、甘青青兰40.1重量份、塞北紫堇40.1重量份、岩精膏40.1重量份、丁香20.1重量份、人工牛黄4.0重量份、印度獐牙菜20.1重量份、波棱瓜子12.0重量份、木香马兜铃12.0重量份、石花4.0重量份、麝香1.6重量份、银朱1.7重量份的肝畅制剂的检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和含量测定方法：
鉴别：
A.红花的鉴别：
取肝畅胶囊4g，加体积百分比80％丙酮15ml，密塞，振摇20分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法附录Ⅵ B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为8:2:2的醋酸乙酯-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B.波棱瓜子的鉴别：
取肝畅胶囊5g，加乙醚20ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取波棱瓜子对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法附录Ⅵ B试验，吸取上述两种溶液各5μl-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积份数比为9:1的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以重量体积份数比5％香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
A.西红花的含量测定：
照高效液相色谱法《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积份数比0.1％甲酸水溶液为流动相；流动相的体积份数比为24:76；检测波长440nm；理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取西红花苷-I对照品、西红花苷-II对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含20μg和10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末0.6g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
肝畅胶囊含西红花以西红花苷-IC44H64O24和西红花苷-IIC38H54O19的总量计，不得少于0.7mg/粒；
B.红花的含量测定：
照高效液相色谱法《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比0.5％甲酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为28：72；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，加体积百分比25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末3g，置具塞的锥形瓶中，加入体积百分比25％甲醇水溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用体积百分比25％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
肝畅胶囊每粒含红花以羟基红花黄色素A C27H30O15计，不得少于0.36mg/粒；
C.人工牛黄的含量测定：
照高效液相法中国药典2010年版一部附录VI D测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-四氢呋喃-体积份数比0.5％醋酸溶液为流动相；流动相的体积份数比为80：10：10检测波长为450nm；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：称取胆红素对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含10ug的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末4g，置具塞的锥形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别:吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
肝畅胶囊含人工牛黄以胆红素C33H36N4O6计，不得少于0.022mg/粒；
D.印度獐牙菜的含量测定
照高效液相色谱法《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为22：78；检测波长237nm；理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500；
对照品溶液的制备：取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.12mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
肝畅胶囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷C16H22O10计，不得少于0.05mg/粒；
E.丁香的含量测定：
照高效液相色谱法《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；流动相的体积份数比为62：38；检测波长280nm；理论板数按丁香酚峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取丁香酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末0.5-1g，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
肝畅胶囊含丁香以丁香酚C10H18O2计，不得少于2mg/粒；
F.麝香的含量测定：
照气相色谱法《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ E测定；
色谱条件与系统适用性试验：以体积百分比50％苯基-甲基硅酮OV-17为固定相，涂布浓度为2％；柱温180℃；理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：肝畅胶囊研细后，取粉末3.5g，置具塞的锥形瓶中，加入乙酸乙酯50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压浓缩，残渣加无水乙醇使溶解并定容至2ml，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；
肝畅胶囊含麝香以麝香酮C16H30O计，不得少于0.029mg/粒。
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