CN102879389B - 一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法 - Google Patents
一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。本发明第一次对藏药组合物益肝活血明目丸中铁的含量进行了检测，使用操作简便、快速准确的无汞重铬酸钾滴定法对藏药组合物六味明目丸中的铁进行了含量控制，确保了该制剂的安全；同时采用高效液相色谱法对红花中羟基红花黄色A、甘草中甘草酸进行了含量测定，确保了该制剂的稳定、质量可控。本发明方法能够有效控制藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种藏药组合物制剂的质量检测方法，特别涉及一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法。
背景技术
益肝活血明目丸最早收载于宇妥·元丹贡布（708-835）的《四部医典》，原方的藏文名为“塞西阿哇角阿”（十五味阿哇明目散），至今有1300余年的临床应用史。益肝活血明目丸收载于中成药地方标准上升国家标准部分，标准编号：WS-11183(ZD-1183)-2002，大多使用益肝活血之药物，如红花、岩精膏、葛缕子等，具有养肝益气，活血明目的功效，主要用于肝阴不足，视物不清，视疲劳，青少年视力低下。
铁粉为益肝活血明目丸配方中君药。铁粉在《本草纲目拾遗》、《开宝本草》、《东医宝鉴》均有记载，具有平肝，镇心，治惊痫，发狂，脚气冲心，疔疮等作用。铁为人体的微量元素，具有促进红细胞生成等重要作用。藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂配方中所用铁粉是通过炮制后进行入药，更加有利于吸收。但是铁摄入过多可能造成急性铁中毒，严重者可能造成休克，甚至于死亡。因此为了保证患者的安全用药，应该对铁的含量进行控制，在能达到治疗疾病的同时，不造成其他健康隐患。
益肝活血丸原标准只有丁香酚鉴别、丁香酚含量测定项，质量标准偏低，不能保证该制剂的质量，因此有必要进行标准提高，对方中君药铁粉中铁含量进行全面控制，增加红花、甘草等有效成分的含量测定，从而保证该制剂的安全、有效。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是公开一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法。
发明概述
本发明提供了一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂铁粉中铁含量的控制方法，红花中羟基红花黄色素A、甘草中甘草酸的含量测定方法，保证铁含量在安全有效范围之内，使得该制剂在有效治疗疾病的同时，确保用药的安全性。
术语说明：
益肝活血明目丸是国家中成药标准汇编（中成药地方标准上升国家标准部分）记载的药品名称。
益肝活血明目丸及其制剂包括用益肝活血明目丸原料药配方制备的其他制剂，包括益肝活血明目丸。各原料药的配比可以与益肝活血明目丸配比相同，也可以在药效范围内适当调整。
本发明的技术方案如下：
一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法，该制剂的原料药组成为北寒水石、天竺黄、红花、丁香、诃子、毛诃子、余甘子、甘草、金钱白花蛇、木贼、葛缕子、绿绒蒿、岩精膏、铁粉(制)、文石，所述质量检测方法包括以下含量测定方法中的一种或几种：
A.铁粉的含量测定：将待测定的中药制剂灰化后，用浓盐酸溶解，加入甲基橙指示液，滴加二氯化锡溶液将Fe3+还原为Fe2+，溶液变为淡粉色，然后以二苯胺磺酸钠为指示剂，用重铬酸钾标准溶液滴定至溶液呈紫色即为终点，以已知的重铬酸钾标准溶液的量计算铁粉的含量；
B.红花的含量测定：取羟基红花花色素A对照品加体积份数比25%甲醇水溶液配制成对照品溶液，取待检测制剂粉末加入体积份数比25%甲醇水溶液经超声溶解、除杂后配制成供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比25-35:75-65的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为400-410nm的高效液相色谱法；
C.甘草的含量测定：取甘草酸铵对照品加甲醇配制成对照品溶液，取待检测制剂粉末加入体积份数比70%乙醇水溶液经超声溶解、除杂后配制成供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比32-36:68-64的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相，检测波长为250nm的高效液相色谱法。
作为本发明的进一步改进，所述铁粉的含量测定具体步骤是：
取藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂粉末1-2g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸0.5-2ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于500-700℃炽灼3-5小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在60-70℃左右加热溶解3-5小时，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸0-15ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液2-10ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。
作为本发明的进一步改进，所述红花含量测定的具体步骤是：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25-35:75-65的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为400-410nm；理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含60-70μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目丸或制剂粉末3-5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液20-30ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
作为本发明的进一步改进，所述甘草的含量测定具体步骤是：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比32-36:68-64的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目丸或制剂粉末1-3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70%乙醇水溶液20-30ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比70%乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明优选下面原料药组成的解毒胶囊及其制剂：北寒水石111.0重量份、天竺黄28.0重量份、红花27.9重量份、丁香28.0重量份、诃子28.0重量份、毛诃子28.0重量份、余甘子28.0重量份、甘草28.0重量份、金钱白花蛇27.9重量份、木贼28.0重量份、葛缕子28.0重量份、绿绒蒿28.0重量份、岩精膏28.0重量份、铁粉（制）78.0重量份、文石83.0重量份。
对于上述优选制剂，所述质量检测方法是：
A.铁粉的含量测定
取藏药组合物益肝活血明目丸粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃左右加热溶解4小时（不时摇动，避免沸腾），冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。
B.红花的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目丸粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
C.甘草的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比34:66的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目丸粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70%乙醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比70%乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
在对优选制剂的质量检测方法中，所述铁粉的含量测定中铁含量为7.6mg/g-12.8mg/g。所述红花的含量测定中红花含量以羟基红花黄色素A（C27H30O15）计，不得少于0.33mg/g。所述甘草的含量测定中甘草以甘草酸（C42H62O16）计，不得少于0.75mg/g。
所述制剂是指取藏药组合物益肝活血明目丸原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。
本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。
本发明公开了一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。本发明第一次对藏药组合物益肝活血明目丸中铁的含量进行了控制，使用操作简便、快速准确的无汞重铬酸钾滴定法对藏药组合物六味明目丸中的铁进行了含量检测，确保了该制剂的安全；同时采用高效液相色谱法对红花中羟基红花黄色A、甘草中甘草酸进行了含量测定，确保了该制剂的稳定、质量可控。本发明方法能够有效控制藏药组合物益肝活血明目丸的质量。同时本法还可用于益肝活血明目丸的其他制剂，如益肝活血明目颗粒、益肝活血明目胶囊、益肝活血明目明目片等。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1：铁粉的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：BT125D型赛多利斯电子分析天平（德国赛多利斯sartorius公司）；2.5-10型箱式电阻炉（北京市永光明医疗器械厂）；HH-4型数显恒温水浴锅（常州荣冠实验分析仪器厂）。
主要试剂：重量百分浓度5%二氯化锡溶液（称取二氯化锡溶于40ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸，加水稀释至100ml。临用前用水稀释一倍，即得）；甲基橙指示液（取甲基橙0.1g溶于100ml水中，即得）；二苯胺磺酸钠指示液（取二苯胺磺酸钠0.2g溶于100ml水中，即得）；硫磷混酸溶液（将150ml质量百分浓度95%-98%浓硫酸在搅拌下缓慢注入500ml水中，冷却后再加入150ml磷酸，用水稀释至1000ml，混匀，即得）。重铬酸钾标准溶液（基准试剂于150-160℃干燥2小时，存于干燥器中，准确称取0.0980g重铬酸钾于250ml烧杯中，加适量水溶解后定量转入1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，其浓度为0.002mol/l）。
样品：益肝活血明目丸（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20100901、20100902、20100903。
2.样品的灰化
将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温。滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸适量，使炭化物全部湿润，以0.5ml至2ml为优，其中1ml为最优。继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于500-700℃炽灼3-5小时。其中以600℃炽灼4小时为最优。使用灼烧炭化，然后加入硫酸，再灰化的方法目的在于：除去藏药制剂中其他药味的干扰，同时提高了铁的含量，使铁转化为Fe3+，便于测定。
3.盐酸浓度的选择
反应在盐酸（HCl）介质中进行，还原Fe3+时盐酸（HCl）浓度以4mol/l为好，大于6mol/l时Sn2+则先还原甲基橙为无色，使其无法指示Fe3+的还原，同时Cl-浓度过高也可能消耗K2Cr2O7，HCl浓度低于2mol/l则甲基橙褪色缓慢。
4.溶样温度的选择
溶样温度对铁含量的测定结果有较大影响。溶样温度低于55℃时，溶样缓慢；超过75℃HCl挥发太快，浓度降低，溶样不完全。实验表明溶样温度控制在65℃左右效果最佳。
5.氧化还原温度的控制
在用二氯化锡还原时，温度应控制在70-80℃，并不断摇动。而在最后的氧化滴定中，溶液温度应控制在20-30℃为好，以使反应能较快进行。
6.硫磷混酸溶液的选择
滴定过程中生成的Fe3+呈黄色，影响终点的观察，若在溶液中加入磷酸（H3PO4），H3PO4与Fe3+生成无色的Fe(HPO4)2-，可掩蔽Fe3+。同时由于Fe(HPO4)2-的生成，使得Fe3+/Fe2+电对的条件电位降低，滴定突跃增大，指示剂可在突跃范围内变色，从而减少滴定误差。
7.原理
本品试样经样品灰化、盐酸溶解后，其中的铁转化为Fe3+。在强酸性条件下，Fe3+可通过SnCl2还原为Fe2+。Sn2+将Fe3+还原完毕后，甲基橙也可被Sn2+还原成氢化甲基橙而褪色，因而甲基橙可指示Fe3+还原终点。Sn2+还能继续使氢化甲基橙还原成N，N-二甲基对苯二胺和对氨基苯磺酸钠。其反应式为：
(CH3)2NC6H4N＝NC6H4SO3Na+2e-+2H+→(CH3)2NC6H4NH-NHC6H4SO3Na
(CH3)2NC6H4NH-NHC6H4SO3Na＋2e-＋2H+→(CH3)2NC6H4NH2+NH2C6H4SO3Na
这样一来，略为过量的Sn2+也被消除。由于上述反应是不可逆的，因此甲基橙的还原产物不消耗K2Cr2O7。反应完后，以二苯胺磺酸钠为指示剂，用K2Cr2O7标准溶液滴定至溶液呈紫色即为终点，主要反应式如下：
2FeCl4 -+SnCl2-+2Cl-＝2FeCl4 2-+SnCl6 2-
6Fe2++Cr2O7 2-+14H+＝6Fe3++2Cr3++7H2O
8.样品中铁的含量测定
取益肝活血明目丸粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃左右加热溶解4小时（不时摇动，避免沸腾），冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。结果见表1。
表1益肝活血明目丸中铁含量测定结果
9.重现性试验
取同一批益肝活血明目丸样品（生产批号：20100901），精密称定，共6份，分别按照铁含量测定法进行测定。结果表明，该方法重复性良好。结果见表2。
表2益肝活血明目丸中铁含量测定重复性试验
10.回收率试验
按藏药组合物益肝活血明目丸配方用量的比例自配不含铁粉的样品，取此空白样品约1g，精密称定，精密加入已知含量的标准铁粉约0.1g，进行灰化处理，按上述方法测定含量，并计算回收率。结果表明，该测定方法测定结果准确。见表3。
表3回收率试验测定结果
实验例2：红花的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪；AuW220D型岛津电子天平。
对照品：羟基红花黄色素A对照品（中国药品生物制品鉴定所），批号：111637-200905。
样品：益肝活血明目丸（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20100901、20100902、20100903。
2.检测波长的选择
取羟基红花黄色素A对照品溶液，于190-500nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定403nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现，以体积份数比25-35:75-65的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相时，均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-体积份数比0.5%甲酸溶液的体积比为28:72为流动相最优，相对保留时间10min左右。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，对照品、供试品色谱中羟基红花黄色素A与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，阴性对照溶液在羟基红花黄色素A出峰位置无干扰。结果见图1、图2、图3。
5.对照品制备
取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得。
6.供试品制备
6.1提取方法的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别超声、回流、振揺处理40分钟。以每克药品中羟基红花黄色素A的含量为指标确定提取方法。结果见表4。
表4提取方法考察试验结果
结果表明，超声提取所得每克药品中羟基红花黄色素A的含量最高，故选用提取方法为超声提取。
6.2提取溶剂的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别精密加入水、体积份数比25%甲醇水溶液、甲醇各25ml。以每克药品中羟基红花黄色素A的含量为指标确定提取溶剂。结果见表5。
表5提取溶剂考察试验结果
结果表明，水、体积份数比25%甲醇水溶液与甲醇所测的羟基红花黄色素A含量基本一致，由于用水作提取溶剂过滤困难，纯甲醇毒性大，故选用提取溶剂为体积份数比25%甲醇水溶液。
6.3提取时间的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别超声处理30分钟、40分钟、50分钟。以每克药品中羟基红花黄色素A的含量为指标确定提取时间。结果见表6。
表6提取时间考察试验结果
结果表明，超声提取40分钟和50分钟所得每克药品中羟基红花黄色素A的含量基本一致，故选用提取时间为40分钟。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取羟基红花黄色素A对照品贮备液溶液（羟基红花黄色素A含量为131.2μg/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，体积份数比25%甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得羟基红花黄色素A回归方程：A＝21.204C-35.521，相关系数：R＝0.9998。结果表明，羟基红花黄色素A在13.12μg/ml-131.20μg/ml范围内，羟基红花黄色素A的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好。结果见表7、图4。
表7羟基红花黄色素A线性关系考察结果
8.精密度试验
精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表8。
表8羟基红花黄色素A精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，供试品溶液中羟基红花黄色素A在8小时内测定结果稳定。结果见表9。
表9羟基红花黄色素A稳定性试验结果
10.重复性试验
取同一批益肝活血明目丸样品（生产批号：20100901）4g，精密称定，共6份，按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，计算样品中羟基红花黄色素A的含量。结果表明，该分析方法重复性良好。结果见表10。
表10羟基红花黄色素A重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批益肝活血明目丸样品（生产批号：20100901）6份，各精密加入羟基红花黄色素A对照品，测定其含量，计算回收率。结果表明，该测定方法测定结果准确。结果见表11。
表11羟基红花黄色素A回收率试验结果
12.样品测定
取藏药组合物益肝活血明目丸三批，测定并计算羟基红花黄色素A含量。结果见表12。
表12样品含量测定结果
实验例3：甘草的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：1220型安捷伦高效液相色谱仪；AuW220D型岛津电子天平。
对照品：甘草酸铵对照品（中国药品生物制品检定所），批号：110731-200615。
样品：益肝活血明目丸（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：20100901、20100902、20100903。
2.检测波长的选择
取甘草酸铵对照品溶液，于200-400nm波长范围内进行扫描。根据紫外吸收图谱，甘草酸铵在250nm处有最大紫外吸收，与文献一致。故选定250nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现，以体积份数比32-36:68-64的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相时，均能达到很好的色谱分离效果，其中以乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液的体积比为34:66为流动相最优。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，对照品、供试品色谱中甘草酸与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，阴性对照溶液在甘草酸出峰位置无干扰。结果见图5、图6、图7。
5.对照品制备
精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）。
6.供试品制备
6.1提取方法的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别超声、回流、振揺处理30分钟。以每克药品中甘草酸的含量为指标确定提取方法。结果见表13。
表13提取方法考察试验结果
结果表明，超声与回流提取所得每克药品中甘草酸的含量基本一致，考虑到超声提取简便、易操作，故选用提取方法为超声提取。
6.2提取溶剂的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别精密加入体积份数比70%乙醇水溶液、无水乙醇、甲醇各25ml。以每克药品中甘草酸的含量为指标确定提取溶剂。结果见表14。
表14提取溶剂考察试验结果
结果表明，体积份数比70%乙醇水溶液所测的甘草酸含量最高，故选用提取溶剂为体积份数比70%乙醇水溶液。
6.3提取时间的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份，分别超声处理20分钟、30分钟、40分钟。以每克药品中甘草酸的含量为指标确定提取时间。结果见表15。
表15提取时间考察试验结果
结果表明，超声提取30分钟和40分钟所得每克药品中甘草酸的含量基本一致，故选用提取时间为30分钟。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取甘草酸铵对照品贮备液溶液（甘草酸铵含量为167.8μg/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，体积份数比70%乙醇水溶液稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得没食子酸回归方程：A＝6.3202C+78.092，相关系数：R＝0.9996。结果表明，甘草酸铵在16.78μg/ml-167.80μg/ml范围内，甘草酸铵的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好。结果见表16、图8。
表16甘草酸铵线性关系考察结果
8.精密度试验
精密吸取甘草酸铵对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表17。
表17甘草酸铵精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，供试品溶液中甘草酸在8小时内测定结果稳定。结果见表18。
表18甘草酸铵稳定性试验结果
10.重复性试验
取同一批益肝活血明目丸样品（生产批号：20100901）2g，精密称定，共6份，按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，计算样品中甘草酸的含量。结果表明，该分析方法重复性良好。结果见表19。
表19甘草酸重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批益肝活血明目丸样品（生产批号：20100901）6份，各精密加入甘草酸铵对照品，测定其含量，计算回收率。结果表明，该测定方法测定结果准确。结果见表20。
表20甘草酸回收率试验结果
12.样品测定
取藏药组合物益肝活血明目丸三批，测定并计算甘草酸含量。结果见表21。
表21样品含量测定结果
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
附图说明
图1是羟基红花黄色素A对照高效液相色谱图；
图2是藏药组合物益肝活血明目丸红花供试品高效液相色谱图；
图3是藏药组合物益肝活血明目丸缺红花阴性对照高效液相色谱图；
图4是羟基红花黄色素A的线性关系图；
图5是甘草酸铵对照高效液相色谱图；
图6是藏药组合物益肝活血明目丸甘草供试品高效液相色谱图；
图7是藏药组合物益肝活血明目丸缺甘草阴性对照高效液相色谱图；
图8是甘草酸铵的线性关系图；
其中，图1、图2、图3、图4、图5、图6的横坐标是时间，单位：分钟（min）；纵坐标是吸光度（mAU）。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细的阐述，但不限于这些具体记载的实施例。所检测的藏药组合物益肝活血明目丸为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。
实施例1：益肝活血明目丸的质量检测
益肝活血丸包括丁香酚鉴别、丁香酚含量测定项（也可以不包括这两个测定项），还包括以下测定项：
A.铁粉的含量测定
取藏药组合物益肝活血明目丸粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃左右加热溶解4小时（不时摇动，避免沸腾），冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。
本品铁含量为7.6mg/g-12.8mg/g。
B.红花的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目丸粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品红花含量以羟基红花黄色素A（C27H30O15）计，不得少于0.33mg/g。
C.甘草的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比34:66的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）。
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目丸粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70%乙醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比70%乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16）计，不得少于0.75mg/g。
实施例2：益肝活血明目颗粒的质量检测
益肝活血颗粒包括丁香酚鉴别、丁香酚含量测定项（也可以不包括这两个测定项），还包括以下测定项：
A.铁粉的含量测定
取藏药组合物益肝活血明目颗粒粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃左右加热溶解4小时（不时摇动，避免沸腾），冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。
本品铁含量为7.6mg/g~12.8mg/g。
B.红花的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目颗粒粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品红花含量以羟基红花黄色素A（C27H30O15）计，不得少于0.33mg/g。
C.甘草的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比34:66的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）。
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目颗粒粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70%乙醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用体积份数比70%乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16）计，不得少于0.75mg/g。
所述的藏药组合物益肝活血明目颗粒是指用益肝活血明目丸原料药配方北寒水石111.0g、天竺黄28.0g、红花27.9g、丁香28.0g、诃子28.0g、毛诃子28.0g、余甘子28.0g、甘草28.0g、金钱白花蛇27.9g、木贼28.0g、葛缕子28.0g、绿绒蒿28.0g、岩精膏28.0g、铁粉（制）78.0g、文石83.0g，加入常规辅料，按照常规工艺制备的颗粒剂。
实施例3：益肝活血明目胶囊的质量检测
益肝活血胶囊包括丁香酚鉴别、丁香酚含量测定项（也可以不包括这两个测定项），还包括以下测定项：
A.铁粉的含量测定
取藏药组合物益肝活血明目胶囊内容物粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃左右加热溶解4小时（不时摇动，避免沸腾），冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。
本品铁含量为7.6mg/g~12.8mg/g。
B.红花的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目胶囊内容物粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品红花含量以羟基红花黄色素A（C27H30O15）计，不得少于0.33mg/g。
C.甘草的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比34:66的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）。
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目胶囊内容物粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70%乙醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用体积份数比70%乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16）计，不得少于0.75mg/g。
所述的藏药组合物益肝活血明目胶囊是指用益肝活血明目丸原料药配方北寒水石111.0g、天竺黄28.0g、红花27.9g、丁香28.0g、诃子28.0g、毛诃子28.0g、余甘子28.0g、甘草28.0g、金钱白花蛇27.9g、木贼28.0g、葛缕子28.0g、绿绒蒿28.0g、岩精膏28.0g、铁粉（制）78.0g、文石83.0g，加入常规辅料，按照常规工艺制备的胶囊剂。
实施例4：益肝活血明目片的质量检测
益肝活血片包括丁香酚鉴别、丁香酚含量测定项（也可以不包括这两个测定项），还包括以下测定项：
A.铁粉的含量测定
取藏药组合物益肝活血明目片粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧（避免燃烧、膨胀、溢出），炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95%-98%浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36%-38%浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃左右加热溶解4小时（不时摇动，避免沸腾），冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36%-38%浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5%二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）滴定。每1ml重铬酸钾滴定液（0.002mol/l）相当于0.6702mg的铁。
本品铁含量为7.6mg/g~12.8mg/g。
B.红花的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目片粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品红花含量以羟基红花黄色素A（C27H30O15）计，不得少于0.33mg/g。
C.甘草的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比34:66的乙腈-体积份数比0.05%磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（甘草酸重量＝甘草酸铵/1.0207）。
供试品溶液的制备取藏药组合物益肝活血明目片粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70%乙醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用体积份数比70%乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16）计，不得少于0.75mg/g。
所述的藏药组合物益肝活血明目片是指用益肝活血明目丸原料药配方北寒水石111.0g、天竺黄28.0g、红花27.9g、丁香28.0g、诃子28.0g、毛诃子28.0g、余甘子28.0g、甘草28.0g、金钱白花蛇27.9g、木贼28.0g、葛缕子28.0g、绿绒蒿28.0g、岩精膏28.0g、铁粉（制）78.0g、文石83.0g，加入常规辅料，按照常规工艺制备的片剂。
Claims (6)
1.一种藏药组合物益肝活血明目丸及其制剂的质量检测方法，该制剂的原料药组成为北寒水石、天竺黄、红花、丁香、诃子、毛诃子、余甘子、甘草、金钱白花蛇、木贼、葛缕子、绿绒蒿、岩精膏、制铁粉、文石，其特征是，所述质量检测方法包括以下含量测定方法：
A.铁粉的含量测定：将待测定的中药制剂灰化后，用浓盐酸溶解，加入甲基橙指示液，滴加二氯化锡溶液将Fe3+还原为Fe2+，溶液变为淡粉色，然后以二苯胺磺酸钠为指示剂，用重铬酸钾标准溶液滴定至溶液呈紫色即为终点，以已知的重铬酸钾标准溶液的量计算铁粉的含量；
B.红花的含量测定：取羟基红花黄色素A对照品加体积份数比25％甲醇水溶液配制成对照品溶液，取待检测制剂粉末加入体积份数比25％甲醇水溶液经超声溶解、除杂后配制成供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比25-35:75-65的甲醇-体积份数比0.5％甲酸水溶液为流动相；检测波长为400-410nm的高效液相色谱法；
C.甘草的含量测定：取甘草酸铵对照品加甲醇配制成对照品溶液，取待检测制剂粉末加入体积份数比70％乙醇水溶液经超声溶解、除杂后配制成供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比32-36:68-64的乙腈-体积份数比0.05％磷酸水溶液为流动相，检测波长为250nm的高效液相色谱法；
所述铁粉的含量测定具体步骤是：
取待检测制剂粉末1-2g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95％-98％浓硫酸0.5-2ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于500-700℃炽灼3-5小时，放冷，用50ml质量百分浓度36％-38％浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在60-70℃加热溶解3-5小时，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36％-38％浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5％二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，则补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液2-10ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用0.002mol/l重铬酸钾滴定液滴定。
2.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征是，所述红花的含量测定具体步骤是：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25-35:75-65的甲醇-体积份数比0.5％甲酸水溶液为流动相；检测波长为400-410nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备:取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25％甲醇水溶液制成每1ml含60-70μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备:取待检测制剂粉末3-5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25％甲醇水溶液20-30ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征是，所述甘草的含量测定具体步骤是：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比32-36:68-64的乙腈-体积份数比0.05％磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm,理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备:精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备:取待检测制剂粉末1-3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70％乙醇水溶液20-30ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比70％乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
4.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂的原料药组成为北寒水石111.0重量份、天竺黄28.0重量份、红花27.9重量份、丁香28.0重量份、诃子28.0重量份、毛诃子28.0重量份、余甘子28.0重量份、甘草28.0重量份、金钱白花蛇27.9重量份、木贼28.0重量份、葛缕子28.0重量份、绿绒蒿28.0重量份、岩精膏28.0重量份、制铁粉78.0重量份、文石83.0重量份。
5.如权利要求4所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法是：
A.铁粉的含量测定
取待检测制剂粉末1g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加质量百分浓度95％-98％浓硫酸1ml，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600℃炽灼4小时，放冷，用50ml质量百分浓度36％-38％浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65℃加热溶解4小时，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置250ml锥形瓶中，加入质量百分浓度36％-38％浓盐酸5ml，加热至70-80℃，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加重量百分浓度5％二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，则补加1滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用0.002mol/l重铬酸钾滴定液滴定；
B.红花的含量测定
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比0.5％甲酸水溶液为流动相；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备:取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25％甲醇水溶液制成每1ml含65μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备:取待检测制剂粉末4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25％甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25％甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
C..甘草的含量测定
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比34:66的乙腈-体积份数比0.05％磷酸水溶液为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备:精密称取甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备:取待检测制剂粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比70％乙醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比70％乙醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
6.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征是，所述的制剂是指取藏药组合物益肝活血明目丸原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。
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