CN102353732B - 一种珍龙醒脑制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种关于珍龙醒脑制剂的质量检测方法，该方法包括荜茇、木香、肉桂、没食子酸、豆蔻、丁香、珍珠、胆酸、西红花、桂皮醛的鉴别方法，还包括荜茇中胡椒碱、牛黄中胆酸、肉桂中桂皮醛、西红花中西红花苷-I、西红花苷-II的含量测定方法。经过试验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，方法简便可行，特征性强。用本发明所述的含量测定方法测定珍龙醒脑制剂中的胡椒碱、胆酸、西红花苷-I、西红花苷-II的含量，结果表明，方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制珍龙醒脑制剂的质量。
Description
技术领域
本发明属于药物的质量检测方法，尤其涉及一种珍龙醒脑制剂的质量检测方法。
背景技术
脑中风、语言蹇涩，半身不遂、口眼歪斜是临床上的常见病、多发病，治疗方法颇多，但疗效不一，珍龙醒脑制是藏医传统古验方，经藏医长期临床应用，该药具有开窍醒神、消热通络的作用，对脑组织缺血、缺氧引起的局限性神经功能障碍所致的偏瘫、失语等症状功效显著。珍龙醒脑胶囊记载于国家药品标准，标准编号：WS-10708(ZD-0708)-2002。具有开窍醒神、消热通络的作用，用于痰瘀阻络所致的中风，语言蹇涩，半身不遂，口眼歪斜。
珍龙醒脑制剂由于效果良好，且剂型较为先进，经临床验证，疗效显著，在临床上备受患者青睐。现行珍龙醒脑胶囊的质量检测标准包括西红花、珍珠、胆酸和桂皮醛的鉴别，对制剂的质量不能充分控制。目前无珍龙醒脑制剂含量测定的相关文献及专利报道，其质量标准中含量测定只有肉桂的含量测定，无法很好的控制其质量。亟需研究一套关于珍龙醒脑制剂的更准确、严密的质量检测方法。为更好的控制珍龙醒脑制剂的成品质量，使之达到稳定、可控、均一，我们对原珍龙醒脑胶囊进行标准提高。通过试验研究在原质量标准基础上增加了薄层色谱法定性鉴别产品中荜茇、木香、肉桂、没食子酸、豆蔻、丁香的专属性较强的鉴别方法。增加了荜茇、牛黄和西红花的含量测定方法。通过改进质量标准，对本品的工艺要求更严格，同时质量标准更严谨、科学、适用、准确。
发明内容
本发明的目的在于，克服现有技术的不足，提供了一种珍龙醒脑制剂的质量检测方法。本发明公开了6个处方中药材鉴定及4个主要指标成分的含量测定，目的在于提供一种珍龙醒脑制剂的质量标准及其检测方法，可增强该药的有效性、质量可控性及稳定性。通过试验研究可增加药材荜茇、牛黄和西红花的含量测定，可以更好的控制药品质量。
本发明珍龙醒脑制剂包括下列成份：
珍珠17.3g、天竺黄2.2g、西红花8.7g、丁香9.7g、肉豆蔻8.7g、豆蔻8.7g、草果6.5g、檀香8.7g、紫檀香21.6g、沉香17.3g、诃子28.1g、毛诃子17.3g、余甘子21.6g、木香21.6g、肉桂17.3g、荜茇8.7g、螃蟹10.8g、金礞石8.7g、香旱芹5.4g、人工牛黄2.2g、麝香2.2g、广枣6.5g、烈香杜鹃6.5g、塞北紫堇13.0g、短穗兔耳草43.3g、铁粉（制）4.3g、冬葵果17.3g、甘草13.0g、黑种草子5.4g。
本发明的珍龙醒脑制剂可以为上述处方药材直接粉碎制成或经提取加工后制成的胶囊剂、颗料剂、散剂或片剂等口服剂型，都适用于本发明的检测方法。
本发明珍龙醒脑胶囊制剂为：珍珠17.3g、天竺黄2.2g、西红花8.7g、丁香9.7g、肉豆蔻8.7g、豆蔻8.7g、草果6.5g、檀香8.7g、紫檀香21.6g、沉香17.3g、诃子28.1g、毛诃子17.3g、余甘子21.6g、木香21.6g、肉桂17.3g、荜茇8.7g、螃蟹10.8g、金礞石8.7g、香旱芹5.4g、人工牛黄2.2g、麝香2.2g、广枣6.5g、烈香杜鹃6.5g、塞北紫堇13.0g、短穗兔耳草43.3g、铁粉（制）4.3g、冬葵果17.3g、甘草13.0g、黑种草子5.4g。 以上二十九味，取人工牛黄、麝香、西红花研成细粉，其余珍珠等二十六味粉碎成细粉，过筛，与上述细粉配研，混匀，装入胶囊，每粒装0.3g，即得。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种珍龙醒脑制剂的质量检测方法，所述荜茇、木香、肉桂、没食子酸、豆蔻、丁香的定性鉴别方法。
荜茇鉴别方法：
取产品内容物粉末2~4g，分别加乙醇溶液20ml，超声提取30分钟，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液。取荜茇对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述3种溶液各10μl、10μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-醋酸乙酯-丙酮（体积分数比为4~8∶2~6∶0.5~1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10%的硫酸乙醇溶液显色。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
木香鉴别方法：
取产品内容物粉末0.5~1.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为对照药材溶液。另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品及对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷体（积分数比为7~10∶0.3~2∶0.5~1）为展开剂，展开，取出，晾干，用体积百分比为1%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
肉桂鉴别方法：
取产品内容物粉末0.5~1.5g，加醋酸乙酯10ml， 超声处理30分钟， 滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述3种溶液各10μl点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（体积比为8.5~85∶1~15）为展开剂，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液显色，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
没食子酸鉴别方法：
取产品内容物粉末1.0~3.0g，加无水乙醇10ml，超声处理20 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述对照品溶液5μl，供试品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸（体积分数比为5~8∶3~5∶0.5~1）为展开剂，展开取出，晾干，喷以体积百分比为1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
豆蔻鉴别方法：
取产品内容物粉末1.0~3.0g，加二氯甲烷10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取豆蔻对照品药材1.0g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（体积分数比为19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为5%香草醛试液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中。在与对照品药材相应的位置上，显相同的颜色斑点。
丁香鉴别方法：
取产品内容物粉末2~5g，加二氯甲烷10ml，振摇数分钟，滤过，滤液浓缩至2ml。取丁香酚对照品，加二氯甲烷制成每1ml含5μl的丁香酚作为对照品溶液。另取丁香对照药材1g，加二氯甲烷10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述3种溶液各15μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-醋酸乙酯（体积分数比为4.5~15∶0.5~1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，用体积百分比为5%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点清晰。在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
珍珠的鉴别：
取产品内容物粉末1.0~2.0g，置具塞锥形瓶中，加稀盐酸试液10ml（按中国药典2010年版一部附录109页稀盐酸配制方法配制），在105℃加热20小时，取出，取上清液作为供试品溶液。另取珍珠对照药材20mg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯酚-水（体积分数比为7∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，立即喷以0.2%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热5~10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。
胆酸的鉴别：
取产品内容物粉末1.5~2.5g，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸（体积分数比为15∶7∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
西红花的鉴别：
取产品内容物粉末1.5~2.5g，加浓氨试液（按中国药典2010年版一部附录108页浓氨试液配制方法配制）润湿，加无水乙醇5ml，超声5 分钟，静置，滤过，滤液作为供试品溶液。另取西红花对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（体积分数比为4∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
桂皮醛的鉴别：
取产品内容物粉末2~3g，加乙醇10ml，冷浸1小时，时时振摇，静置，取上清液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-醋酸乙酯（体积分数比为17∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液（按中国药典2010年版一部附录107页二硝基苯肼乙醇试液配制方法配制），加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明还提供了通过测定珍龙醒脑制剂中荜茇、牛黄和西红花的含量的方法，控制珍龙醒脑胶囊的质量。
珍龙醒脑胶囊中荜茇的含量是采用高效液相色谱法测定荜茇中胡椒碱的含量确定；牛黄含量是采用高效液相色谱法测定牛黄中胆酸的含量确定；西红花含量是采用高效液相色谱法测定西红花中西红花苷-I、西红花苷-II的含量确定。
荜茇中胡椒碱的测定方法为：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水体积分数比80~60∶20~40为流动相；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含10μg~50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取产品或产品内容物研细，取粉末0.7~2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟~50分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
HPLC法测定珍龙醒脑胶囊荜茇中胡椒碱的含量
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立检测器L-2400检测器；岛津AUW220D电子天平
对照品：胡椒碱对照品（中国药品生物制品检定所）批号：0775-200203
样品：珍龙醒脑胶囊（青海金诃藏药药业股份有限公司）批号：095001、090502、090503
2.流动相选择
经过研究发现以流动相甲醇-水(70∶30)，能达到含量检查要求。
3.对照品制备
取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。
4.供试品制备
本品研细后，取粉末1.5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声20分钟~50分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取时间考察试验结果
| 超声时间(分钟) | 20 | 30 | 40 | 50 |
| 胡椒碱含量(mg/粒) | 0.177 | 0.189 | 0.190 | 0.190 |
结果表明：按药典中荜茇的含量测定超声时间为30分钟，无法保证如意珍宝丸制剂中胡椒碱充分溶出，故选择40分钟，超声提取。
5.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中胡椒碱与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见附图1-a、1-b和1-c。
6.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取胡椒碱对照品贮备液溶液（40.15μg/ml）1ml、2 ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A = 44933C - 12366，相关系数：R=0.9997。结果表明：在4.02μg/ml~40.15μg/ml范围内，胡椒碱的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。
回归方程：A = 44933C - 12366
相关系数：R=0.9997,见图2。
7.精密度试验
分别精密吸取胡椒碱对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD=1.54%。结果表明，仪器精密度良好。
8.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD=0.49%。结果表明：供试品中胡椒碱在6小时内测定结果稳定。
9.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中胡椒碱的含量，RSD=0.99%。表明分析方法重复性良好。
10.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入胡椒碱对照品，测定其含量，计算回收率，胡椒碱平均回收率为98.8%，RSD=1.45%。表明该测定方法测定结果准确。
11.样品测定
取珍龙醒脑胶囊3批，测定并计算胡椒碱含量，结果如下。
牛黄中胆酸的测定方法为：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为1%冰醋酸（体积分数比为90~60∶10~40）为流动相；用蒸发光散射检测器。理论板数按胆酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.10mg~0.40mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取产品或产品内容物研细，取粉末4~8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，挥干溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
HPLC法测定珍龙醒脑胶囊人工牛黄的胆酸的含量
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-7110泵，Alltech 2000ES蒸发光散射检测器；岛津AUW220D电子天平
对照品：胆酸对照品（中国药品生物制品检点所）批号：100078-200414
样品：珍龙醒脑胶囊（青海金诃藏药药业股份有限公司）批号：090501、090502、090503
2.流动相选择
经过研究发现以流动相甲醇-体积百分含量为1%冰醋酸水溶液（体积分数比为75:25）能达到含量检查要求。
3.对照品制备
取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
4.供试品制备
本品研细后，取粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液20ml，挥发溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，去续滤液，即得。
5.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中胆酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见附图3-a、3-b和3-c。
线性试验
精密量取胆酸对照品贮备液溶液（260ug/ml）1ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积的对数(A)对对照品浓度的对数（C）进行线性回归.
得回归方程：A = 1.2577C + 4.2609，相关系数：R=0.9994。结果表明：在26ug/ml-260ug/ml范围内，胆酸的峰面积(A)的对数与浓度(C)的对数线性关系良好。见图4。
7.精密度试验
分别精密吸取胆酸对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD=0.66%。结果表明，仪器精密度良好。
8.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD=0.923%。结果表明：供试品中胆酸在8小时内测定结果稳定。
9.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中胆酸的含量，RSD=0.644%。表明分析方法重复性良好。
10.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入胆酸对照品，测定其含量，计算回收率，结果如下。胆酸平均回收率为98.22%，RSD=1.36%。表明该测定方法测定结果准确。
11.样品测定
取珍龙醒脑胶囊3批，测定并计算胆酸含量，结果如下。
西红花中西红花苷-I、西红花苷-II的测定方法为：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积比1%冰醋酸水溶液（体积分数比为15~35∶85~65）为流动相；检测波长为440nm。理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500。
对照品溶液的制备 精密称取西红花苷-I、西红花苷-II对照品适量，加甲醇制成每1ml含20-40μg和10-20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取产品或产品内容物研细，取粉末0.3~0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，避光，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，冰浴中超声30分钟，放至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
HPLC法测定珍龙醒脑胶囊西红花中的西红花苷-I和西红花苷-II的含量
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-7110泵，Alltech 2000ES蒸发光散射检测器；岛津AUW220D电子天平
对照品：西红花苷-I对照品（批号：111588-200501 ）、西红花苷-II对照品(批号：100001-200504)
样品：珍龙醒脑胶囊（青海金诃藏药药业股份有限公司）批号：090501、090502、090503
2.流动相选择
研究发现以乙腈-体积百分比为1%冰醋酸水溶液（体积分数比25:75）能达到色谱分离要求。
3.对照品制备
取西红花苷-I、西红花苷-II对照品适量，精密称定，加甲醇制成分别每1ml含30μg和12μg的溶液，即得。
4.供试品制备
本品研细后，取粉末0.4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，避光，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，冰浴中超声30分钟，放至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中胆酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见附图4-a、4-b和4-c。
线性试验
精密量取西红花苷-I对照品贮备液溶液（65.1μg/ml）1ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A = 23578C + 17313，相关系数：R=0.9996。结果表明：在6.51μg/ml~65.1μg/ml范围内，西红花苷-I的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见图6。
精密量取西红花苷-II对照品贮备液溶液（25.2μg/ml）1ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μL，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A = 34783C - 2494.7，相关系数：R=0.9995。结果表明：在2.51μg/ml~25.10μg/ml范围内，西红花苷-II的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。见图7。
7.精密度试验
分别精密吸取西红花苷-I、西红花苷-II对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，分别为RSD=1.36%、RED=1.32%。结果表明，仪器精密度良好。
8.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中西红花苷-I、西红花苷-II的总含量，RSD=0.20%。表明分析方法重复性良好。
9.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入西红花苷-I、西红花苷-II对照品，测定其含量，计算回收率，结果如下。胆酸平均回收率为98.21%，RSD=1.88%。表明该测定方法测定结果准确。
10.样品测定
取珍龙醒脑胶囊3批，测定并计算西红花苷-I、西红花苷-II的总量，结果如下。
本发明所述方法中所采用的高效液相法的基本操作条件均符合“中国药典2010年版”的规定，其未加注明的具体工艺条件均可参常规技术。
本发明的有益效果是：经过实验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。
用本发明所述的含量测定方法分别测定珍龙醒脑胶囊中的荜茇、人工牛黄和西红花的含量，结果表明，方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制珍龙醒脑胶囊的质量。
说明书附图：
附图1为荜茇中胡椒碱的含量检测的色谱图，其中：
图1-a：胡椒碱对照；
图1-b：珍龙醒脑荜茇测定样品；
图1-c：珍龙醒脑荜茇测定阴性；
附图2 荜茇测定标准曲线；
附图3为人工牛黄的胆酸的含量检测的色谱图，其中：
图3-a：胆酸对照；
图3-b：珍龙醒脑牛黄测定样品；
图3-c：珍龙醒脑牛黄测定阴性；
图4 人工牛黄测定标准曲线
图5为西红花中的西红花苷-I和西红花苷-II的含量检测的色谱图，其中：
图5-a：西红花苷-I、西红花苷-II；
图5-b：珍龙醒脑西红花测定样品；
图5-c：珍龙醒脑西红花测定阴性；
图6：西红花苷-I测定标准曲线；
图7：西红花苷-II测定标准曲线。
具体实施方式
以下各实施例中的成分比值均为体积分数比，成分的百分含量均为体积百分含量。
实施例1
珍龙醒脑胶囊的质量检测方法
鉴别：
取产品内容物粉末3g，分别加乙醇溶液20ml， 超声提取30分钟，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液。取荜茇对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各10μl、10μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-醋酸乙酯-丙酮（6∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10%的硫酸乙醇溶液显色。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
取产品内容物粉末1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为对照药材溶液。另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品及对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷体（10∶0.5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，用体积百分比为1%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定
胡椒碱
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品内容物研细后，取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
胆酸
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为1%冰醋酸（75∶25）为流动相；用蒸发光散射检测器。理论板数按胆酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品内容物研细后，取粉末6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，挥干溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
实施例2
珍龙醒脑胶囊的质量检测方法
鉴别
取产品内容物粉末1g，加醋酸乙酯10ml， 超声处理30分钟， 滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述3种溶液各10μl点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（8.5∶1）为展开剂，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液显色，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
取产品内容物粉末2g，加无水乙醇10ml，超声处理20 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述对照品溶液5μl，供试品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸（6∶4∶1）为展开剂，展开取出，晾干，喷以体积百分比为1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取产品内容物粉末2g，加二氯甲烷10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取豆蔻对照品药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为5%香草醛试液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中。在与对照品药材相应的位置上，显相同的颜色斑点。
取产品内容物粉末5g，加二氯甲烷10ml，振摇数分钟，滤过，滤液浓缩至2ml。取丁香酚对照品，加二氯甲烷制成5μl/ml的丁香酚作为对照品溶液。另取丁香对照药材1g，加二氯甲烷10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各15μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，用体积百分比为5%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点清晰。在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定
胡椒碱
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品内容物研细后，取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
胆酸
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为1%冰醋酸（75∶25）为流动相；用蒸发光散射检测器。理论板数按胆酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品内容物研细后，取粉末6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，挥干溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
西红花苷-I、西红花苷-II
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积比1%冰醋酸水溶液（25∶75）为流动相；检测波长为440nm。理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500。
对照品溶液的制备 精密称取西红花苷-I、西红花苷-II对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg和12μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品内容物研细后，取粉末0.3~0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，避光，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，冰浴中超声30分钟，放至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例3
珍龙醒脑提取物颗粒的质量检测方法
本品为珍龙醒脑处方药材经提取加工后制成的颗粒制剂。
鉴别
取本品粉末3g，分别加乙醇溶液20ml， 超声提取30分钟，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液。取荜茇对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各10μl、10μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-醋酸乙酯-丙酮（6∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10%的硫酸乙醇溶液显色。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为对照药材溶液。另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品及对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷体（10∶0.5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，用体积百分比为1%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定
胡椒碱
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
胆酸
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为1%冰醋酸（75∶25）为流动相；用蒸发光散射检测器。理论板数按胆酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，挥干溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
实施例4
珍龙醒脑片的质量检测方法
鉴别
取本品粉末3g，加乙醇溶液20ml，超声提取30分钟，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液。取荜茇对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各10μl、10μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-醋酸乙酯-丙酮（6∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液显色。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
取本品粉末2g，加无水乙醇10ml，超声处理20 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述对照品溶液5μl，供试品溶液2μl分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸（6∶4∶1）为展开剂，展开取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：
胡椒碱
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
胆酸
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为1%冰醋酸（75∶25）为流动相；用蒸发光散射检测器。理论板数按胆酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.10mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，挥干溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
西红花苷-I、西红花苷-II
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积比1%冰醋酸水溶液（25∶75）为流动相；检测波长为440nm。理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500。
对照品溶液的制备 精密称取西红花苷-I、西红花苷-II对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg和12μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末0.3~0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，避光，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，冰浴中超声30分钟，放至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
Claims (1)
1.一种珍龙醒脑制剂的检测方法，所述珍龙醒脑制剂由二十九种成分组成，具体为：珍珠17.3g、天竺黄2.2g、西红花8.7g、丁香9.7g、肉豆蔻8.7g、豆蔻8.7g、草果6.5g、檀香8.7g、紫檀香21.6g、沉香17.3g、诃子28.1g、毛诃子17.3g、余甘子21.6g、木香21.6g、肉桂17.3g、荜茇8.7g、螃蟹10.8g、金礞石8.7g、香旱芹5.4g、人工牛黄2.2g、麝香2.2g、广枣6.5g、烈香杜鹃6.5g、塞北紫堇13.0g、短穗兔耳草43.3g、铁粉4.3g、冬葵果17.3g、甘草13.0g、黑种草子5.4g，其特征在于：
通过定量测定珍龙醒脑制剂中荜茇、牛黄、肉桂和西红花的含量，以及定性鉴别荜茇、木香、肉桂、没食子酸、豆蔻、丁香、珍珠、西红花、胆酸、桂皮醛的方法，构成对珍龙醒脑制剂的整体检测方法；
所述的定量测定制剂中荜茇的含量是通过测定制剂中胡椒碱的含量以确定荜茇的含量，所述的定量测定制剂中人工牛黄的含量是通过测定制剂中胆酸的含量以确定人工牛黄的含量，所述的定量测定制剂中西红花的含量是通过测定制剂中西红花苷-I、西红花苷-II的含量以确定西红花的含量，所述的定量测定制剂中肉桂的含量是通过测定制剂中桂皮醛的含量，确定肉桂的含量；
所述的定量测定制剂中胡椒碱的含量的具体操作方法如下：
液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇：水的体积份数比为70:30；检测波长为343nm，理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取所述制剂或所述制剂内容物研细，取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述的定量测定制剂中胆酸的含量的具体操作方法如下：
液相色谱条件： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积比为1%冰醋酸为流动相，甲醇：体积百分比为1%冰醋酸水溶液的体积份数比为75:25；用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.10mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取所述制剂或所述制剂内容物研细，取粉末6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，挥干溶剂，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；
所述的定量测定制剂中西红花苷-I、西红花苷-II含量的具体操作方法如下：
液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-体积比1%冰醋酸水溶液为流动相，乙腈：体积百分比1%冰醋酸水溶液的体积份数比为25:75；检测波长为440nm，理论板数按西红花苷-I峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备 精密称取西红花苷-I、西红花苷-II对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg和12μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取所述制剂或所述制剂内容物研细，取粉末0.3~0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，避光，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，冰浴中超声30分钟，放至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述的定量测定制剂中桂皮醛的含量的具体操作方法如下：
液相色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-醋酸体积份数比45-35∶35-45∶0.5-2为流动相；检测波长为270nm，理论板数按桂皮醛峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取桂皮醛对照品适量，用甲醇制成每1ml含2μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取所述制剂或所述制剂内容物研细，取0.5~2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷20ml，超声提取40分钟，滤过，用三氯甲烷10ml分次洗涤，合并滤液，挥干溶剂，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述的定性鉴别荜茇、木香、肉桂、没食子酸、豆蔻、丁香、珍珠、西红花、胆酸、桂皮醛的方法，是采用薄层色谱法分别进行鉴别；
具体操作步骤和条件如下：
荜茇的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末3g，分别加乙醇溶液20ml，超声提取30分钟，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；取荜茇对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各10μl、10μl、5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-醋酸乙酯-丙酮体积份数比为5∶4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10%的硫酸乙醇溶液显色；供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
木香的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液，另取木香对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为对照药材溶液；另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品及对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷体积分数比为10∶0.5∶1，展开，取出，晾干，用体积百分比为1%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
肉桂的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末1g，加醋酸乙酯10ml，超声处理30分钟， 滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取肉桂对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，分别吸取上述3种溶液各10μl点于同一硅胶 G薄层板上，以沸程60~90℃石油醚-醋酸乙酯体积比为8.5∶1为展开剂，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液显色，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；
没食子酸的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末2g，加无水乙醇10ml，超声处理20 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述对照品溶液5μl，供试品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸体积分数比为6∶4∶1为展开剂，展开取出，晾干，喷以体积百分比为1%三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
豆蔻鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末2g，加二氯甲烷10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取豆蔻对照品药材1.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯体积分数比为19∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为5%香草醛试液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中；在与对照品药材相应的位置上，显相同的颜色斑点；
丁香的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末5g，加二氯甲烷10ml，振摇数分钟，滤过，滤液浓缩至2ml；取丁香酚对照品，加二氯甲烷制成每ml含5μl的丁香酚作为对照品溶液；另取丁香对照药材1g，加二氯甲烷10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述3种溶液各15μl，点于同一硅胶G薄层板上，以沸程60~90℃石油醚-醋酸乙酯体积分数比为9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，用体积百分比为5%香草醛硫酸溶液喷雾显色，加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
珍珠的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末1.0~2.0g，置具塞锥形瓶中，加质量比10%HCL水溶液10ml，在105℃加热20小时，取出，取上清液作为供试品溶液；另取珍珠对照药材40mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯酚-水体积分数比为5~8∶1~2为展开剂，展开，取出，晾干，立即喷以0.2%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热5~10分钟；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；
胆酸的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末1.5~2.5g，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇4ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸体积分数比为12-18∶5~8∶3~5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
西红花的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末1.5~2.5g，加浓氨试液润湿，加无水乙醇5ml，超声处理5 分钟，静置，滤过，滤液作为供试品溶液；另取西红花对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水体积分数比为3~5∶0.8~1.2∶0.8~1.2为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
桂皮醛的鉴别：取所述制剂或所述制剂内容物粉末2~3g，加乙醇10ml，冷浸1小时，时时振摇，静置，取上清液作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程60~90℃石油醚-醋酸乙酯（体积分数比为15~20∶2~5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
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