CN103063792B - 小儿化痰止咳颗粒的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小儿化痰止咳颗粒质量检测方法，包括采用了高效液相色谱法对小儿化痰止咳颗粒中盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量进行测定，每袋5g含盐酸麻黄碱应为1.6mg～2.2mg；本品每袋含吐根以盐酸吐根碱和氢溴酸吐根酚碱的总量计,应为0.23～0.32mg。对桑白皮、盐酸麻黄碱和吐根进行薄层鉴别。本发明测定效率高，精确度高，测定含量准确，从而能有效地检测产品质量。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂的质量检测领域，特别涉及小儿化痰止咳颗粒的质量检测方法。
背景技术
小儿化痰止咳颗粒由桔梗、吐根酊、盐酸麻黄碱、桑白皮四味药物组成，具有祛痰镇咳之功效，用于小儿咳嗽，支气管炎。盐酸麻黄碱是处方中主药，主要用于治疗咳嗽、哮喘，也是处方中有效成分之一，但同时也具有成瘾性，盐酸麻黄碱含量的多少直接影响到产品的疗效。吐根酊是一种天然的袪痰剂，小剂量使用就有很好的祛痰效果，所以很多祛痰止咳药中都用吐根酊为原料，定量检测吐根中的生物碱含量也尤为重要。作为原料的桑白皮，不对其进行鉴别则影响产品的质量。本品收载于中国药品部颁标准第九册，标准号WS3-B-1691-94，而小儿化痰止咳颗粒（每袋5g）原有标准只提供了盐酸麻黄碱与吐根酊的定性鉴别方法，无含量测定及桑白皮鉴别指标，质量控制指标过于简单，不能对产品进行有效的质量控制。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点，提供一种测定效率高，精确度高，测定含量准确，从而能有效地检测产品质量的小儿化痰止咳颗粒的质量检测方法。
本发明是一种小儿化痰止咳颗粒的质量检测方法，包括以下步骤：
（1）盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈—0.01mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺－磷酸（11:89:0.4:0.2）为流动相；检测波长为205nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：精密称取盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱对照品适量，加流动相溶液制成每1ml含盐酸吐根碱10μg 、氢溴酸吐根酚碱20μg、盐酸麻黄碱160μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取小儿化痰止咳颗粒本品细粉约5g，精密称定，精密加入氨试液2ml与氯仿50ml，称定重量，超声处理（功率260w，频率40KHz）60分钟，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，加入1％盐酸无水乙醇溶液2.5ml，摇匀，水浴蒸干，残渣加水超声使溶解完全，定容至5ml，过微孔滤膜，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含吐根以盐酸吐根碱（C29H40N2O4·2HCl·XH2O）和氢溴酸吐根酚碱（C28H384N2O4·HBr）的总量计，应为0.23～0.32mg。、盐酸麻黄碱（C10H15NO·HCl）应为1.6～2.2mg。
（2）小儿化痰止咳颗粒中桑白皮薄层鉴别：称取本品细粉5g，加乙酸乙酯20ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，过滤，滤液挥干，加0.5ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。另取桑白皮对照药材0.3g，加乙酸乙酯2ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，静置，上层液为对照药材溶液。分别取以上溶液各15-20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-丙酮-甲酸=4：2：2：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
（3）小儿化痰止咳颗粒中吐根与盐酸麻黄碱薄层鉴别：称取本品细粉2g于试管中，加水2ml，使溶解，加氨水0.2ml，摇匀，加乙酸乙酯0.5ml，充分振摇，静置，分层，上清液为供试品溶液。另取吐根对照药材0.2g，加乙醇－氨水（10：0.1）1ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，静置，上清液作为对照药材溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加乙醇－氨水（10：0.1）制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。分别取以上溶液各15-20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-丙酮：氨水=2：2：2：1：0.3为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与吐根对照药材相应的位置上，显相同颜色荧光斑点,再喷茚三酮试液，105℃加热显色。在盐酸麻黄碱对照品相应的位置，显相同颜色斑点。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，由以上技术方案可知：采用了高效液相色谱法对小儿化痰止咳颗粒中盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量进行测定，同一系统同时测定三种生物碱，质量检测方法简单易行，准确可靠，精确度高。增加了桑白皮的薄层鉴别，简化了盐酸麻黄碱和吐根的鉴别方法的提取方法，且试样的提取及展开剂均采用无毒试剂，绿色环保。本发明能更好地检测该中药颗粒的质量，保证用药的安全性，从而确保其临床疗效。
具体实施方式
以下通过实验例来进一步说明本发明方法的有益效果。
实验例：盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量测定
（1）流动相的选择：
流动相1：水－乙腈－0.1%磷酸（90：10：0.1）；
流动相2：乙腈－甲醇－0.1%磷酸（12：2：15：86）；
流动相3：0.05mol/l磷酸二氢钾－甲醇－乙腈－三乙胺（80：10：10：0.3）；
流动相4：0.05mol/l磷酸二氢钾－甲醇－乙腈－三乙胺（75：7：18：0.4）；
流动相5：0.01mol/l磷酸二氢钾－乙腈－（90：10：0.1）；
流动相6：0.01mol/l磷酸二氢钾－乙腈－磷酸-三乙胺（90：5：0.2：0.2）；
流动相7：0.01mol/l磷酸二氢钾-乙腈-三乙胺-磷酸（89:11:0.4:0.2）
通过以上对比试验结果的分析，流动相7具有保留时间适当，样品分离效果好、阴性无干扰等特点。同时根据后续试验分析总结，当盐酸麻黄碱理论塔板数达到5000时，分离均大于1.5，故以盐酸麻黄碱峰计理论塔板数应不低于5000。
（2）供试品溶液制备方法筛选
根据生物碱的理化特性，我们分别采用不同的提取方法，以盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量作为指标，结果见下表。
试验结果表明，将方法5作为样品的提取方法，提取效率高，即：取本品，研细，过80目筛，取约5g，精密称定，精密加入氨试液2ml与氯仿50ml，称定重量，超声处理（功率260w，频率40KHz）60分钟，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，加入1％盐酸无水乙醇溶液2.5ml，摇匀，水浴蒸干，残渣加水超声使溶解完全，定容至5ml，过微孔滤膜，即得。
（3）提取时间选择
采用不同提取时间进行考察，以盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量作为指标，选择最佳提取时间，结果见下表。
（6）精密度试验
精密量取盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱混合对照品溶液（0.0102mg/ml、0.0204mg/ml、0.162mg/ml）10μl注入液相色谱仪，重复进样5次，以盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的峰面积计算，盐酸吐根碱RSD为0.23%，氢溴酸吐根酚碱RSD为0.22%，盐酸麻黄碱RSD为0.12%。结果见下表
（7）重复性试验
取同一批号供试品，照 [含量测定]方法制备供试品溶液5份，以盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的峰面积计算，盐酸吐根碱RSD=1.90%，氢溴酸吐根酚碱RSD=1.35%，盐酸麻黄碱RSD=1.89%，。结果见下表。
（8）稳定性试验
精密量取同一供试品溶液,按规定的时间进样，共测6次,以盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱峰面积计算，结果表明,供试品在10h内,盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱峰面积积分值前后无明显变化。
（9）加样回收率试验
取本品2.5g，9份，精密称定，精密加入用流动相溶解的三个不同浓度梯度的盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱混合对照品溶液（5.1μg/ml、10.2μg/ml、81μg/ml; 10.2μg/ml、20.4μg/ml、162μg/ml; 15.3μg/ml、30.6μg/ml、243μg/ml），每个浓度梯度加样3份,照供试品处理方法及[含量测定]方法，进行盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱含量测定，结果见下表。
试验结果表明，盐酸吐根碱加样平均回收率为93.93%，RSD为1.40%；氢溴酸吐根酚碱加样平均回收率为93.55%，RSD为1.48%；盐酸麻黄碱加样平均回收率为97.18%，RSD为0.55%；达到标准要求，方法可行。
（10）十批样品含量测定
按含量测定操作，测定10个批号制剂的盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱含量，结果见下表。
小儿化痰止咳颗粒中盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱含量限度（mg/g）=吐根酊投料量（mL ）×吐根酊中盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱含量范围(%)×吐根酊的密度÷成品量（g）= 60mL×(0.095～0.105％) ×0.916÷1000g=0.052mg/g～0.057mg/g，限度定为标示量的±15％，0.046mg/g～0.064mg/g，即0.23mg/～0.32mg/袋；
盐酸麻黄碱含量限度 盐酸麻黄碱为化学药品，限度定为标示量的±15％，即为本品每袋含盐酸麻黄碱1.6mg～2.2mg。
根据计算，本品每袋（5g）含吐根以盐酸吐根碱（C29H40N2O4·2HCl·XH2O）和氢溴酸吐根酚碱（C28H384N2O4·HBr）的总量计，应为0.23～0.32mg。、盐酸麻黄碱（C10H15NO·HCl）应为1.6～2.2mg。
实施例：
小儿化痰止咳颗粒的质量检测方法，包括以下步骤：
（1）桑白皮的鉴别：
称取本品细粉5g，加乙酸乙酯20ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，过滤，滤液挥干，加0.5ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。另取桑白皮对照药材0.3g，加乙酸乙酯2ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，静置，上层液为对照药材溶液。分别取以上溶液各15-20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-丙酮-甲酸=4：2：2：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
（2）盐酸麻黄碱和吐根的鉴别：
称取本品细粉2g于试管中，加水2ml，使溶解，加氨水0.2ml，摇匀，加乙酸乙酯0.5ml，充分振摇，静置，分层，上清液为供试品溶液。另取吐根对照药材0.2g，加乙醇-氨水（10：0.1）1ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，静置，上清液作为对照药材溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加乙醇-氨水（10：0.1）制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。分别取以上溶液各15-20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-丙酮：氨水=2：2：2：1：0.3为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与吐根对照药材相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。再喷茚三酮试液，105℃加热显色。在与盐酸麻黄碱对照品相应的位置，显相同颜色斑点。
（3）盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量测定
色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈:0.01mol/l磷酸二氢钾溶液:三乙胺:磷酸＝11: 89: 0.4:0.2为流动相；检测波长为205nm。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：精密称取盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱对照品适量，加流动相溶液制成每1ml含盐酸吐根碱10μg 、氢溴酸吐根酚碱20μg、盐酸麻黄碱160μg的溶液，即得；
供试品溶液制备：取本品细粉，约5g，精密称定，精密加入氨试液2ml与氯仿50ml，称定重量，超声处理（功率260w，频率40KHz）60分钟，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，加入1％盐酸无水乙醇溶液2.5ml，摇匀，水浴蒸干，残渣加水超声使溶解完全，定容至5ml，过微孔滤膜，即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋（每袋5g）含吐根以盐酸吐根碱（C29H40N2O4·2HCl·XH2O）和氢溴酸吐根酚碱（C28H384N2O4·HBr）的总量计，应为0.23～0.32mg。、盐酸麻黄碱（C10H15NO·HCl）应为1.6～2.2mg。
Claims (3)
1.一种小儿化痰止咳颗粒的检测方法，包括如下步骤：
小儿化痰止咳颗粒由桔梗、吐根酊、盐酸麻黄碱、桑白皮四味药组成，其检测包括盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱的含量测定以及桑白皮、盐酸麻黄碱、吐根的薄层鉴别；
（1）色谱条件与系统适用性实验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈:0.01mol/l磷酸二氢钾溶液:三乙胺:磷酸＝11:89:0.4:0.2为流动相；检测波长为205nm，理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5000；
（2）对照品溶液的制备：精密称取盐酸吐根碱、氢溴酸吐根酚碱、盐酸麻黄碱对照品适量，加流动相溶液制成每1ml含盐酸吐根碱10μg 、氢溴酸吐根酚碱20μg、盐酸麻黄碱160μg的溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品细粉5g，精密称定，精密加入氨试液2ml与氯仿50ml，称定重量，功率260w、频率40KHz超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，加入1％盐酸无水乙醇溶液2.5ml，摇匀，水浴蒸干，残渣加水超声使溶解完全，定容至5ml，过微孔滤膜，即得；
（4）分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的小儿化痰止咳颗粒的检测方法，其中桑白皮的鉴别方法为：称取本品细粉5g，加乙酸乙酯20ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，过滤，滤液挥干，加0.5ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取桑白皮对照药材0.3g，加乙酸乙酯2ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，静置，上层液为对照药材溶液；分别取以上溶液各15-20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-丙酮-甲酸=4：2：2：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
3.如权利要求1所述的小儿化痰止咳颗粒的检测方法，其中盐酸麻黄碱和吐根的薄层鉴别方法为：称取本品细粉2g于试管中，加水2ml，使溶解，加氨水0.2ml，摇匀，加乙酸乙酯0.5ml，充分振摇，静置，分层，上清液为供试品溶液；另取吐根对照药材0.2g，加10：0.1的乙醇-氨水1ml，50-60℃水浴搅拌1分钟，静置，上清液作为对照药材溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加10：0.1的乙醇-氨水制成每1ml含1mg 的溶液，作为对照品溶液；分别取以上溶液各15-20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-丙酮：氨水=2：2：2：1：0.3为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与吐根对照药材相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再喷茚三酮试液，105℃加热显色；在与盐酸麻黄碱对照品相应的位置，显相同颜色斑点。
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