CN106950289A

CN106950289A - 一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法

Info

Publication number: CN106950289A
Application number: CN201610005020.7A
Authority: CN
Inventors: 刘峰; 李晔; 杨东花; 王春柳; 龙凯花; 黄壮壮; 张红
Original assignee: SHAANXI BUCHANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHAANXI BUCHANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2016-01-07
Filing date: 2016-01-07
Publication date: 2017-07-14
Anticipated expiration: 2036-01-07
Also published as: CN106950289B

Abstract

本发明提供一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以甲醇为流动相A相，以0.4％甲酸水溶液为流动相B相；其体积配比为流动相A相：流动相B相为：3-90：97-10，进行线性梯度洗脱；检测波长280nm；柱温35℃，进样量5μL；该含量检测方法可以同时测定冠心疏通胶囊中没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量，该检测方法具有简便、准确、高效、重现性、稳定性良好的特点。

Description

一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法

技术领域

本发明涉及属于中成药化学分析检测领域，尤其涉及一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法。

背景技术

冠心舒通胶囊是由陕西步长制药有限公司独家生产，现今执行的国家药品标准编号为WS3-155(Z-025)-2005(Z),其在治疗冠心病方面具有突出的疗效，该制剂是以蒙医理论为依据研制而成的一种新药，由广枣、丹参、丁香、冰片、天竺黄等5味药制备而成，具有活血化瘀、通经活络、行气止痛的功能，用于胸痹心血瘀阻导致的冠心病、心绞痛等疾病的治疗。

为了保证复方制剂的安全性与有效性，中药复方制剂质量控制的方法与手段成为中药现代化的最重要研究之一。按照传统中医药学的“整体观”，中药药效是药品中多个药效成分的综合效应的结果，而中药制剂的多中心多靶点特点使得单一成分或指标难以表达中药的质量，由王智民等人提出的“一测多评法”，利用中药有效成分内在的函数关系和比例关系，通过只测定一个易得的成分，来实现其他等多个成分的同步测定，该方法已逐渐应用于中成药的质量检测领域。由于冠心舒通胶囊有良好的临床效果且市场销售前景广阔，而目前质量标准中仅对丹酚酸B和丹参酮IIA含量进行控制。为了保证该药品的临床疗效，用多成分含量测定方法可以有效地监控冠心舒通胶囊成分含量，以保证制剂质量，但该方法(外标法)存在对照品消耗量大，对照品种类多，操作复杂繁琐的缺陷，而且部分对照品制备方法复杂，供应短缺，限制了该方法在科研、实际生产和市场监督中的应用。因此，迫切需要一种简便、高效、准确、成本低的质量检测方法能同时定性和定量测定冠心舒通胶囊中多个有效组分。

发明内容

本发明的目的是提供一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法，该检测方法可以同时测定没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量，该方法具有简便、准确、高效、重现性、稳定性良好的特点。

本发明所述的冠心舒通胶囊，均是指由陕西步长制药有限公司生产，其具体的处方配比组成及制备方法为：是由广枣480g、丹参240g、丁香60g、冰片30g、天竺黄30g制备而成。

本发明提供的一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法，所述含量检测方法包括如下的步骤：

该方法包括如下的步骤：

(a)供试品溶液的制备：称取冠心舒通胶囊内容物，加入料液比(g/ml)为1:15～20倍量甲醇溶剂，进行超声提取时间为20～40min，放置至室温，用甲醇补足损失重量，摇匀，过滤，续滤液即为供试品溶液；

(b)对照品标准液的制备：精密称重，没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的对照品适量，加甲醇溶解，配制为混合对照品溶液；

(c)色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以甲醇为流动相A相，以0.4％甲酸水溶液为流动相B相；其体积配比为流动相A相：流动相B相为：3-90：97-10，进行线性梯度洗脱；检测波长275～285nm，柱温30～40℃，进样量3～10μL；

(d)色谱峰测定：将上述步骤(a)所制得的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照上述步骤(c)的色谱条件和步骤(d)质谱条件，测定供试液溶液，得到冠心舒通胶囊中各自特征峰的保留时间，即得。

作为本发明的优选，所述步骤(a)供试品溶液制备方法中，加入料液比1：20的甲醇溶剂，超声提取时间为30min。

作为本发明的优选，所述步骤(b)对照品标准液的制备中，所述没食子酸浓度为3.03～18.18μg/mL、丹参素钠浓度为35.6～213.6μg/mL、原儿茶酸浓度为6.96～41.76μg/mL、原儿茶醛浓度为1.16～6.96μg/mL、香草醛浓度为0.86832～5.20992μg/mL迷迭香酸浓度为29.5256～177.1536μg/mL、丹酚酸B浓度为438.4～2630.4μg/mL、丁香酚浓度为133.2～799.2μg/mL、隐丹参酮浓度为8.56～51.36μg/mL、丹参酮ⅡA浓度为46～276μg/mL的混合对照品溶液，即得。

作为本发明的优选，所述步骤(c)的色谱条件中，所述流动相A相为甲醇，流动相B为0.4％甲酸水溶液，其流动相所采用的线性梯度洗脱条件为：

0～15min，流动相A相所占的体积比为：3→28，流动相B相所占的体积比为：97→72；

15～17min，流动相A相所占的体积比为：28→36％，流动相B相所占的体积比为：72→64％；

17～40min，流动相A相所占的体积比为：36→38，流动相B相所占的体积比为：64→62；

40～60min，流动相A相所占的体积比为：38→57％，流动相B相所占的体积比为：62→52％；

60～80min，流动相A相所占的体积比为：57→75％，流动相B相所占的体积比为：43→25。

80～90min，流动相A相所占的体积比为：75→90，流动相B相所占的体积比为：25→10；

90～100min，流动相A相所占的体积比为：90→100％，流动相B相所占的体积比为：10→0％。

作为本发明的优选，所述步骤(c)的色谱条件中，所述检测波长280nm；柱温35℃，进样量5μL。

作为本发明的优选，所述步骤(c)色谱条件中色谱柱的型号为Kromasil、Diamonsil或Agilent Extend。

作为本发明的优选，所述步骤(c)色谱条件中色谱柱的型号优选为AgilentExtend。

本发明高效液相色谱条件优化

①提取溶剂的选择

分别考察乙酸乙酯、50％甲醇、无水甲醇、50％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、水等不同溶剂作为提取溶剂时的峰面积的个数、峰面积的大小。试验结果表明，以峰面积的个数、峰面积的大小为考察指标，选择最佳提取溶剂为甲醇。

②甲醇提取体积倍数的选择

分别考察了0.5g-25ml、1g-25ml、1.5g-25ml、0.5g-10ml不同甲醇提取体积倍数。

试验结果表明，色谱峰的个数及峰分离情况差距不大，故选择0.5g冠心舒通胶囊内容物于10ml的甲醇中进行提取。

③检测波长的选择

在前期进行冠心舒通胶囊特征图谱研究时，将冠心疏通胶囊中没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA分进行全波长扫描，得到紫外吸收曲线，检测结果见表。

表1 各指标成分的最佳波长

实验结果，发现检测波长≤250nm时，冠心舒通胶囊色谱峰基线不稳定，色谱峰太多，使得主要成分很难分离；260-280nm处色谱峰较多，且干扰较少，基线平坦，能综合全面的反映冠心舒通胶囊内在质量，而且确定的待测成分中，在260-290nm附近有最大吸收；≥290nm时，色谱峰较单一，无法综合全面的反映冠心舒通胶囊制剂的整体情况。因此，结合各成分紫外吸收曲线图及260-290nm处波长―峰面积曲线图，确定“一测多评法”测定冠心舒通胶囊含量的检测波长。

④流动相选择

分别考察流动相系统为甲醇-0.4％醋酸、甲醇-0.4％甲酸时不同的流动相梯度洗脱条件，以色谱峰数目、色谱峰分离情况、色谱峰峰面积等为考察指标，优选色谱条件。最终确定的色谱条件为：Aglient C₁₈(ZORBAX Extend-RP C₁₈，4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相：甲醇(A)－0.4％甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(见表3)，流速1.0mL·min^-1；检测波长280nm；柱温35℃，进样量5μL。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

⑴、本发明针对中药多成分发挥疗效的特点，对冠心疏通胶囊建立科学、全面多指标质量评价控制方法。该方法结合高效液相色谱指纹图谱分析方法，采用一测多评法同时鉴定及测定没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA含量10种有效成分的含量，可以全面表征冠心疏通胶囊内在质量，保证其质量的稳定性、均一性、可控性。本发明建立的检测方法，具有精密度(RSD≤1.807％)、稳定性(RSD≤1.601％)、重复性(RSD≤3.0％)、回收率(95％～105％)良好，可操作性强等优点。

⑵、本发明试验考察了3个不同型号Kromasil C₁₈、Diamonsil C₁₈、AgilentExtend-C₁₈色谱柱的相对保留时间和保留时间的重现性。结果表明，保留时间差与相对保留值的RSD＜5.0％。且还测定以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA内参物色谱峰的相对保留值，实验结果表明，以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

⑶、将本发明优选的一测多评法与外标法测定结果的比较，本发明建立的一测多评法以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮IIA分别为内参物，实验结果表明，本发明一测多评法各成分含量测定结果与外标法结果无显著差异(相对偏差≤5.0％)。表明本发明方法含量测定的准确性。

⑷、本发明采用一测多评法对冠心舒通胶囊进行质量控制，可以实现对10个成分的含量同步测定。本发明选择以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮IIA为内参物，上述成分现代药理药效学实验表明，可以抑制血小板聚集，且能明显改善脑缺血再灌损伤大鼠的神经功能缺陷，其具有抗血栓的作用，这与本发明中药制剂的具有活血化瘀的功能相类似，该方法可以全面有效控制冠心舒通胶囊内在质量。与外标法相比较，该方法操作简便，很大程度上实现了节约成本的目的。

综上所述，本发明检测方法简便、准确、高效、重现性、稳定性良好的特点，在工艺化大生产应用中有广阔的前景。

附图说明

图1-冠心舒通胶囊供试品溶液液相色谱图，其中图1中1-没食子酸，2-丹参素钠，3-原儿茶酸，4-原儿茶醛，5-香草醛，6-迷迭香酸，7-丹酚酸B，8-丁香酚，9-隐丹参酮，10-丹参酮ⅡA；

图2-混合对照品色谱图，其中图2中1-没食子酸，2-丹参素钠，3-原儿茶酸，4-原儿茶醛，5-香草醛，6-迷迭香酸，7-丹酚酸B，8-丁香酚，9-隐丹参酮，10-丹参酮ⅡA。

具体实施方式

为了更加充分理解本发明的实施，下面通过典型的实施例对本发明做进一步的说明。

除非另作定义，本发明专利申请说明书以及权利要求书中使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本发明专利申请说明书以及权利要求书中所述的“冠心舒通胶囊”均指的是由陕西步长制药有限公司生产，其处方配比和制备方法在以上的发明内容部分有确切的含义。

实施例1：本发明所建立一测多评法测定冠心舒通胶囊液相色谱方法

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260(四元泵G1311B；自动进样器G1329B；柱温箱G1316A；二极管阵列检测器G4212B；LAB open色谱数据工作站)；电子分析天平(型号BP211D，d＝0.01mg，德国赛多利斯天平有限公司)；超声波清洗器(型号：KQ-250DE型，昆山市超声仪器有限公司)；Agilent ZORBAX Extend-C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)。

1.2 试药

24批冠心疏通胶囊均由陕西步长制药有限公司生产，批号见表2。甲醇为色谱纯(美国Fisher试剂公司)，水为哇哈哈水(杭州娃哈哈集团有限公司)，其他试剂均为分析纯。

对照品原儿茶醛(批号：110810-201007)、迷迭香酸(批号：111871-201203)、原儿茶酸(批号：110809-201205)、丁香酚(批号：110725-201213)、丹参素钠(批号：110855-201311)、丹参酮IIA(批号：110766-200416)、没食子酸(批号：110831-200302)、香草醛(批号：100491-200901)、隐丹参酮(批号：110852-200806)，均购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用。

表2 冠心疏通胶囊样品表

2 实验方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 混合对照品溶液的制备

精密称取没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的对照品适量，加甲醇溶液制成每1mL分别含没食子酸7.575μg、丹参素钠89.000μg、原儿茶酸17.400μg、原儿茶醛2.900μg、香草醛2.1708μg、迷迭香酸73.814μg、丹酚酸B1.096mg、丁香酚333.000μg、隐丹参酮21.400μg、丹参酮ⅡA115.000μg的溶液作为混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取装量差异项下的内容物，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

照高效液相色谱法(附录VID)测定。

Aglient C₁₈(ZORBAX Extend-RP C₁₈，4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相：甲醇(A)－0.4％甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(见表3)；流速1.0mL·min^-1；检测波长280nm；柱温35℃，进样量5μL。

表3 流动相梯度洗脱条件

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察

混合对照品溶液分别进样2μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL，在上述条件下测定峰面积，以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A进样量(μg/ml)与峰面积(Y)作标准曲线，计算回归方程。各成分线性见表3、4、5、6、7、8、9、10、11，线性结果见表4，各成分标准曲线。

表4 各个化合物指标成分线性结果

试验结果表明，没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A在各自相应的质量浓度范围内均呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液及供试品溶液5μL，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，测得没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A峰面积，见表5、6。

表5 对照品精密度试验

表6 供试品精密度试验

试验结果表明，该方法的精密度较好。

2.3.3 重复性试验

取同一批号供试品(批号120805)0.5g，平行6份，按供试品溶液同法制备。注入液相色谱仪，测定没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A平均含量分别为0.2163mg/g、2.2642mg/g、0.5000mg/g、0.0959mg/g、0.0626mg/g、1.2338mg/g、15.6615mg/g、8.6520mg/g、1.0210mg/g、1.2183mg/g，RSD均小于3.0％。结果见表7。

表7 重复性试验结果

试验结果表明，该方法的重复性较好。

2.3.4 稳定性试验

取批号为120805的样品制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件分别在0，2，4，6，8，12，24h进样5μL进行测定，测得日内稳定性，见表8。

表8 稳定性试验结果

试验结果表明，供试品溶液在24h内稳定。

2.3.5 加样回收试验

精密吸取已知含量的样品(批号120805)6份，精密加入每1mL含有没食子酸0.0606mg、丹参素钠0.587mg、原儿茶酸0.1044mg、原儿茶醛0.0232mg、香草醛0.03015mg、迷迭香酸0.3522mg、丹酚酸B 5.48mg、丁香酚1.7883mg、隐丹参酮0.1841mg、丹参酮II_A0.3036mg的混合对照品溶液，用蒸馏水稀释到刻度。按“2.2”项下色谱条件进样5μL进行测定，计算回收率，结果见表9。

表9 加样回收试验结果(n＝6)

试验结果，10个化学成分的加样回收率均在在95％～105％以内，表明该方法准确度较好。

内参物的选择

由于对照品比较稳定，且在样品溶液中含量明显高于其他成分，故选择没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A为内参物，建立内参物与其他待测成分间的相对校正因子。

以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A分别为内参物时，求得不同进样量时的相对校正因子，相对校正因子RSD值≤3.0％，符合要求。因此初步确定没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A均可作为内参物。

实施例2

相对校正因子和相对保留时间的影响因素考察

分别考察了不同品牌色谱柱等影响因素。分别吸取对照品配制项下的5组对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪进行分析，考察上述因素对校正因子及相对保留时间的影响。

2.1 方法重现性考察

试验考察了相对保留时间和保留时间差在不同色谱柱中的重现性。色谱柱分别为：Kromasil C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)、Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)、Agilent Extend-C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，结果保留时间差与相对保留值的|RSD|＜5.0％。表明本课题组建立的“一测多评”法采用不同色谱柱时具有良好的重现性。

表10 以待测成分没食子酸为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分没食子酸为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，因此采用相对保留值与保留时间差法均可进行成分的定性。

表11 以待测成分丹参素钠为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分丹参素钠为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表12 以待测成分原儿茶酸为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分原儿茶酸为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表13 以待测成分原儿茶醛为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分原儿茶醛为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表14 以待测成分香草醛为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分香草醛为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表15 以待测成分迷迭香酸为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分迷迭香酸为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表16 以待测成分丹酚酸B为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分丹酚酸B为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表17 以待测成分丁香酚为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分丁香酚为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是相对保留时间值的波动较保留时间差的波动小(|RSD|＜3.0％)，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

表18 以待测成分隐丹参酮为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分隐丹参酮为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是保留时间差值的波动较相对保留值的波动小，因此采用保留时间差值法进行成分的定性。

表19 以待测成分丹参酮IIA为内参物色谱峰的相对保留值

试验结果表明，以待测成分丹参酮II_A为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，但是保留时间差值的波动较相对保留值的波动小，因此采用保留时间差值法进行成分的定性。

综上所述，分别以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A为内参物色谱峰时，保留时间差与相对保留值的波动均符合要求(|RSD|＜5.0％)，因此，可以采用保留时间差与相对保留值法进行成分的定性。但总体说来，相对保留值的波动较保留时间差的波动小，因此采用相对保留值法进行成分的定性。

在采用保留时间差与相对保留值法定位待测成分的实际应用中，应参考冠心舒通胶囊制剂中每个待测成分的峰面积大小、出峰时间、出峰顺序等因素，与相对保留值与保留时间差相结合，确定各待测成分保留时间。

2.2 一测多评法与外标法测定结果的比较

由于比较以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A分别为内参物时的相对校正因子，均符合要求。故进一步以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A为内参物，比较一测多评法与外标法测定冠心舒通胶囊含量的RSD值。

冠心舒通胶囊样品按“2.1.2”项下方法处理，采用“2.2”项下色谱条件进样5μL进行测定，用外标法对10个待测成分定量测定，与一测多评法测定结果比较，验证一测多评法用于冠心舒通胶囊中10个成分测定的准确性。

建立以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮IIA为内参物一测多评法，试验结果表明，测定没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮IIA的结果与外标法测定结果无显著差异(相对偏差≤5.0％)。

现实中的对照品供需矛盾和多指标质控高昂的检测成本限制了多指标质量控制模式在实际生产、科研、监督中的应用。“一测多评法”是一种既能实现多成分的质量控制，又能克服对照品紧缺和检测成本高的方法。本着“发挥科研为标准服务，标准为生产实际服务”的指导思想，本课题建立的“一测多评法”可以以任意一个已知成分没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A作为“一测多评法”控制冠心舒通胶囊质量的内参物，以其相对校正因子测定其余9个成分的含量。生产企业只要采购没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A其中的任意一个标品，即可完成其余9成分的含量测定，达到控制冠心舒通胶囊质量的目的。

2.3 方法再验证

随机选择另外批次的冠心舒通胶囊，分别以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A为内参物，按“实测法”(外标法)和“一测多评法”(按试验建立的校正因子)计算其他9种待测成分含量，验证一测多评法的科学性和适用性。

实验结果表明，以没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮II_A为内参物，建立的一测多评法，测定没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、香草醛、迷迭香酸、丁香酚、隐丹参酮、丹参酮IIA的结果与外标法测定结果无显著差异(相对偏差≤5.0％)。

最后应说明的是：本发明并不局限于上述的具体实施方案，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下，但凡在本发明的精神和实质范围内，所作的任何改变、等同替换和改进，均在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种冠心舒通胶囊一测多评含量检测方法，其特征在于，所述含量检测方法包括如下的步骤：

(a)供试品溶液的制备：称取冠心舒通胶囊内容物，加入料液比为1:15～25倍量甲醇溶剂，进行超声提取时间为20～40min，放置至室温，用甲醇补足损失重量，摇匀，过滤，续滤液即为供试品溶液；

2.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述步骤(a)供试品溶液制备方法中，加入料液比1：20的甲醇溶剂，超声提取时间为30min。

3.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述步骤(b)对照品标准液的制备中，所述没食子酸浓度为3.03～18.18μg/mL、丹参素钠浓度为35.6～213.6μg/mL、原儿茶酸浓度为6.96～41.76μg/mL、原儿茶醛浓度为1.16～6.96μg/mL、香草醛浓度为0.86832～5.20992μg/mL迷迭香酸浓度为29.5256～177.1536μg/mL、丹酚酸B浓度为438.4～2630.4μg/mL、丁香酚浓度为133.2～799.2μg/mL、隐丹参酮浓度为8.56～51.36μg/mL、丹参酮ⅡA浓度为46～276μg/mL的混合对照品溶液，即得。

4.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述步骤(c)的色谱条件中，所述流动相A相为甲醇，流动相B为0.4％甲酸溶液，其流动相所采用的线性梯度洗脱条件为：

5.根据权利要求1所述含量检测方法，其特征在于，所述步骤(c)的色谱条件中，所述检测波长280nm；柱温35℃，进样量5μL。

6.根据权利要求1所述含量检测方法，所述步骤(c)色谱条件中色谱柱的型号为Kromasil、Diamonsil或Agilent Extend。

7.根据权利要求6所述含量检测方法，所述步骤(c)色谱条件中色谱柱的型号优选为Agilent Extend。