CN102353733B - 如意珍宝制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种关于如意珍宝制剂的质量检测方法，该方法包括木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸的定性鉴别方法，还包括红花中红花黄色素A、荜茇中胡椒碱、牛黄中胆酸的含量测定方法。经过试验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，方法简便可行，特征性强。用本发明所述的含量测定方法测定如意珍宝制剂中的羟基红花黄色素A、胡椒碱、胆酸的含量，结果表明，方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制如意珍宝制剂的质量。
Description
技术领域
本发明属于药物的检测方法，尤其涉及如意珍宝制剂的质量检测方法。
背景技术
如意珍宝制剂为藏族传统经验方，处方源自第司·桑结嘉措著的《藏医医诀补遗》，是藏医用来治疗各种神经疾病的首选药物。如意珍宝丸记载于中成药地方标准上升国家药品标准部分，标准编号：WS3-BC-0314-95。原料药组成为：珍珠母100g、红花100g、肉豆蔻40g、香旱芹40g、荜茇30g、肉桂50g、水牛角40g、人工麝香2g、沉香100g、螃蟹50g、豆蔻40g、檀香80g、诃子130g、乳香60g、黄葵子50g、牛黄2g、石灰华100g、丁香40g、余甘子130g、黑种草子40g、高良姜80g、木香80g、短穗兔耳草150g、金礞石30g、毛诃子（去核）100g、草果30g、降香330g、甘草膏40g、决明子60g、藏木香80g三十味，具有清热，醒脑开窍，舒筋通络，干黄水作用。主要用于瘟热、陈旧热症、白脉病，四肢麻木，瘫痪，口眼歪斜，神志不清，痹症，痛风，肢体强直，关节不利。对白脉病有良效。属独家品种、医保品种、国家中药保护品种。
如意珍宝丸原标准（标准号:WS3-BC-0314-95）质量检测方法只有显微鉴别，无药材的鉴别及含量测定项，不能全面的反映药物的质量，并且技术含量低，不能有效的控制产品质量。
发明内容
本发明的目的在于为克服现有技术的不足，提供一种如意珍宝制剂的质量检测方法，可增强该药的有效性、质量可控性及稳定性。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：如意珍宝制剂的质量检测方法，通过测定制剂中红花、荜茇、牛黄含量的方法，控制如意珍宝制剂的质量。
本发明的如意珍宝制剂可以为胶囊剂、颗料剂或片剂等剂型，都适用于本发明的检测方法。
本发明的如意珍宝制剂的成分为：珍珠母100g、沉香100g、石灰华100g、金礞石30g、红花100g、螃蟹50g、丁香40g、毛诃子(去核) 100g、肉豆蔻40g、豆蔻40g、余甘子130g、草果30g、香旱芹40g、檀香80g、黑种草子40g、降香330g、荜茇30g、诃子130g、高良姜80g、甘草膏40g、肉桂50g、乳香60g、木香80g、决明子60g、水牛角40g、黄葵子50g、短穗兔耳草150g、藏木香80g、麝香2g、牛黄2g。
采用高效液相色谱法，测定红花中羟基红花黄色素A的含量确定红花的含量，荜茇中胡椒碱的含量确定荜茇的含量，测定牛黄中胆酸的含量确定牛黄的含量。
测定红花中羟基红花黄色素A的检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，甲醇-1%冰醋酸水溶液的体积比为20-30:80-70；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加水制成每1ml含0.08-0.20mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品或本品内容物研细后，取粉末3-5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
HPLC法测定如意珍宝丸中羟基红花黄色素A的含量
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立检测器L-2400检测器；岛津AuW220D电子天平
对照品：羟基红花黄色素A对照品，批号：111637-200905。
样品：如意珍宝丸（青海金诃藏药药业股份有限公司），批号：090501、090502、090503。
流动相选择
研究发现，以甲醇-体积百分比1%冰醋酸体系适宜比例为流动相，均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-1%冰醋酸体积比24:76为流动相为最优，相对保留时间13min左右。
3.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中羟基红花黄色素A与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见图1-a、1-b、1-c。
4.对照品制备
取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。
5.供试品制备
有关文献RP—HPLC测定如意珍宝丸中红花黄色素A的含量中供试品处理方法为水浸泡一小时后离心，本法采用加水后，超声提取的方法更加简便，准确，节省时间。具体方法如下：
本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取方法选择表
| 超声 | 浸泡 | |
| 羟基红花黄色素A含量(mg/丸) | 0.214 | 0.210 |
结果表明：超声较浸泡提取更加充分，故选择超声为供试品处理方法
提取溶剂选择表
| 水 | 20%甲醇 | |
| 羟基红花黄色素A含量(mg/丸) | 0.214 | 0.213 |
结果表明：水与20%甲醇提取效果基本一致，考虑安全性及简便性，选择水为提取溶剂。
提取时间选择表
| 超声时间(min) | 20 | 30 | 40 |
| 羟基红花黄色素A含量(mg/丸) | 0.213 | 0.214 | 0.214 |
结果表明：羟基红花黄色素A在20min时已经基本提取完毕，为了保证供试品提取完全选择30min为提取时间。
[0017] 6.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取羟基红花黄色素A对照品贮备液溶液（0.271mg/ml）1ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A = 5176.4C + 15072，相关系数：R=0.9999。结果表明：在27.1μg/ml~271μg/ml范围内，羟基红花黄色素A的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。
回归方程：A = 5176.4C + 15072
相关系数：R=0.9999,见图2。
7.精密度试验
分别精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD=1.00%。结果表明，仪器精密度良好。
8.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD=0.42%。结果表明：供试品中羟基红花黄色素A在6小时内测定结果稳定。
9.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中羟基红花黄色素A的含量，RSD=0.81%。表明分析方法重复性良好。
10.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入羟基红花黄色素A对照品，测定其含量，计算回收率，胡椒碱平均回收率为98.8%，RSD=1.10%。表明该测定方法测定结果准确。
11.样品测定
取如意珍宝丸3批，测定并计算羟基红花黄色素A含量，结果如下。
本法通过控制如意珍宝丸中主药红花的羟基红花黄色素A的含量从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究并确定了以甲醇-体积百分比1%冰醋酸为流动相的检测方法。
荜茇中胡椒碱的含量检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70:30）为流动相，甲醇：水的体积份数比为80-60:20-40；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含10-30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品或本品内容物研细后，取粉末2-4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
法测定如意珍宝丸中胡椒碱的含量
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立检测器L-2400检测器；岛津AμW220D电子天平。
对照品：胡椒碱对照品（中国药品生物制品检定所）批号：0775-200203。
样品：如意珍宝丸（青海金诃藏药药业股份有限公司），批号：090501、090502、090503。
2、流动相选择
文献报道中胡椒碱多以甲醇-水体系、乙腈-盐体系、四氢呋喃-盐体系分离胡椒碱，其中甲醇-水体系最为简单。经过研究发现以流动相甲醇-水（体积比为80:20）（相对保留时间6min）至甲醇-水（体积比为60:40）（相对保留时间30min）均能达到含量检测要求，其中甲醇-水（体积为70:30）主峰相对保留时间为10min左右，且分离度最好，最适合含量测定。见图3-a、3-b。
3.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中胡椒碱与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见图4-a、4-b、4-c。
3.对照品制备
取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
4.供试品制备
4.1超声时间选择
本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取时间考察试验结果
| 超声时间(min) | 20 | 30 | 40 | 50 |
| 胡椒碱含量(mg/丸) | 0.157 | 0.165 | 0.165 | 0.164 |
结果表明：按药典中荜茇的含量测定超声时间为30min，无法保证如意珍宝丸制剂中胡椒碱充分溶出，故选择40min，超声提取。
提取溶剂选择
本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇、80%乙醇、甲醇各50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取溶剂选择
| 超声时间(min) | 甲醇 | 80%乙醇 | 无水乙醇 |
| 胡椒碱含量(mg/丸) | 0.162 | 0.165 | 0.165 |
以上结果表明：甲醇、乙醇、80%乙醇三种溶剂所测定含量基本相当，但用无水乙醇提取的供试品溶剂，杂质峰最少，故采用无水乙醇为样品供试液的提取溶剂。
提取方法选择
本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，以不同方法提取40min，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
提取溶剂选择
| 超声时间(min) | 超声 | 回流 | 震摇 |
| 胡椒碱含量(mg/丸) | 0.164 | 0.162 | 0.152 |
以上结果表明：超声、回流所测定含量基本相当，同时超声简便，故确定提取方法为超声提取。
5.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取胡椒碱对照品贮备液溶液（40.15μg/ml）1ml、2 ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A = 44933C - 12366，相关系数：R=0.9997。结果表明：在4.02μg/ml~40.15μg/ml范围内，胡椒碱的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。
回归方程：A = 44933C - 12366
相关系数：R=0.9997，见图5。
7.精密度试验
分别精密吸取胡椒碱对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD=1.54%。结果表明，仪器精密度良好。
8.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD=0.49%。结果表明：供试品中胡椒碱在6小时内测定结果稳定。
9.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中胡椒碱的含量，RSD=0.99%。表明分析方法重复性良好。
10.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入胡椒碱对照品，测定其含量，计算回收率，胡椒碱平均回收率为98.8%，RSD=1.45%。表明该测定方法测定结果准确。
11.样品测定
取如意珍宝丸3批，测定并计算胡椒碱含量，结果如下。
本法将荜茇中胡椒碱的测定方法用于如意珍宝丸的质量控制。对如意珍宝丸中胡椒碱的供试品的处理方法做了一系列研究工作，比较了各种提取方法、比较了各种溶剂、比较了提取时间，最后确定了甲醇超声40min的提取方法为最优。并对流动相进行了研究，最后确定了以甲醇-水（70:30）为最优流动相。
如意珍宝丸牛黄中胆酸的含量的检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，以甲醇-1%冰醋酸的体积比为90-60:10-40；用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1-0.4mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末10-20g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，去续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；
HPLC法测定如意珍宝丸中的胆酸的含量
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-7110泵，Alltech 2000ES蒸发光散射检测器；岛津AμW220D电子天平
对照品：胆酸对照品（中国药品生物制品检点所）批号：100078-200414。
样品：如意珍宝丸（青海金诃藏药药业股份有限公司）批号：090501、090502、090503。
2.流动相选择
经过研究发现以流动相甲醇-体积百分比1%冰醋酸水溶液体积比从90:10至60:40均能达到含量检查要求，其中甲醇-体积百分比1%冰醋酸水溶液（75:25）（相对保留时间15min左右）为优。
3.对照品制备
取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
4.供试品制备
本品研细后，取粉末16g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，去续滤液，即得。
5.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中胆酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。见图6-a、6-b、6-c。
线性试验
精密量取胆酸对照品贮备液溶液（260ug/ml）1ml、3 ml、5 ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积的对数(A)对对照品浓度的对数（C）进行线性回归。
得回归方程：A = 1.2577C + 4.2609，相关系数：R=0.9994。结果表明：在26ug/ml-260ug/ml范围内，胆酸的峰面积(A)的对数与浓度(C)的对数线性关系良好。见图7。
7.精密度试验
分别精密吸取胆酸对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD=0.66%。结果表明，仪器精密度良好。
8.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD=0.923%。结果表明：供试品中胆酸在8小时内测定结果稳定。
9.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中胆酸的含量，RSD=2.39%。表明分析方法重复性良好。
10.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入胆酸对照品，测定其含量，计算回收率，结果如下。胆酸平均回收率为98.22%，RSD=1.36%。表明该测定方法测定结果准确。
11.样品测定
取如意珍宝丸3批，测定并计算胆酸含量，结果如下。
药典及部分文献显示人工牛黄药材中胆酸使用紫外可见光分光光度法测定其含量，研究表明该法不适合本制剂的含量测定。有文献报道胆酸使用高效液相色谱法，紫外检测器检测波长为190nm左右进行测定，研究发现，该法不易操作，其干扰较多，不适合本制剂含量测定。本法采用高效液相-蒸发光散射检测器检测如意珍宝丸中贵重药材人工牛黄的胆酸含量，具有专属性高，简便等方法。可用于如意珍宝丸的质量控制。
如意珍宝制剂的质量检测方法，包括下列一种或几种鉴别方法：
木香的鉴别：取本品粉末1.0～2.0g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取木香对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液及对照品溶液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷为展开剂，二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷的体积比为5～15：0.5～1.5：0.5～1.5，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
降香的鉴别：取本品粉末1.5～2.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取降香对照药材1g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，三氯甲烷-甲醇的体积比为15～30：0.5～1.5，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
丁香的鉴别：取本品粉末2.0～3.0g，加二氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取丁香对照药材0.1g，加二氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液，另取丁香酚对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含5μl的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述 3种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-沸程60-90℃石油醚为展开剂，醋酸乙酯-沸程60-90℃石油醚的体积比为0.5～1.5 : 8～10，展开，取出，晾干，喷以体积百分百分比为1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
红花的鉴别：取本品粉末2.0～3.0g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加体积份数比80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.4g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加体积份数比80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照药材溶液5μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇上层溶液为展开剂，醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇的体积比为10～14：2：2～4：0.2～0.5，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
荜茇的鉴别：取本品粉末2.0～3.0g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液；另取荜茇对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液；另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述 3 种溶液各8μL，点于同一硅胶 G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯为展开剂，环己烷-醋酸乙酯的体积比为6～9：3～6，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
决明子的鉴别：取本品粉末3～6g，加甲醇25ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加1ml盐酸，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以沸程为60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，沸程为60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为12～18:4～6:0.8～1.2，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
没食子酸的鉴别：取本品粉末2～3g，加无水乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液，另取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸的体积份数比为5～7：3～5：0.8～1.2，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述方法中所采用的高效液相法的基本操作条件均符合“中国药典2010年版”的规定，其未加注明的具体工艺条件均可参常规技术。
本发明的有益效果是：经过实验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。
用本发明所述的含量测定方法测定珍宝如意制剂中的红花、荜茇和人工牛黄的含量，以及木香、降香、丁香、红花、荜茇和没食子酸的鉴别方法，结果表明，该方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制如意珍宝制剂的质量。
附图说明
附图1为本发明检测红花中羟基红花黄色素A的含量的液相色谱图，其中：
图1-a：羟基红花黄色素A对照
图1-b：如意珍宝丸红花测定样品
图1-c：如意珍宝丸红花测定阴性；
附图2：红花测定标准曲线；
附图3为本发明荜茇中胡椒碱的含量检测方法中流动相选择的液相色谱图，其中：
图3-a 荜茇测定流动相：甲醇-水（80:20）
图3-b 荜茇测定流动相：甲醇-水（60:40）；
附图4为本发明荜茇中胡椒碱的含量检测方法的对照液相色谱图，其中：
图4-a：胡椒碱对照
图4-b：如意珍宝丸荜茇测定样品
图4-c：如意珍宝丸荜茇测定阴性；
附图5：本发明荜茇测定标准曲线；
附图6为本发明牛黄中胆酸的含量的检测方法的液相色谱图，其中：
图6-a：胆酸对照
图6-b：如意珍宝丸牛黄测定样品
图6-c：如意珍宝丸牛黄测定阴性。
附图7：牛黄测定标准曲线。
具体实施方式
以下实施例均以下述配方的原药进行质量检测
如意珍宝制剂（30味）主要成分
珍珠母100g、沉香100g、石灰华100g、金礞石30g、红花100g、螃蟹50g、丁香40g、毛诃子(去核) 100g、肉豆蔻40g、豆蔻40g、余甘子130g、草果30g、香旱芹40g、檀香80g、黑种草子40g、降香330g、荜茇30g、诃子130g、高良姜80g、甘草膏40g、肉桂50g、乳香60g、木香80g、决明子60g、水牛角40g、黄葵子50g、短穗兔耳草150g、藏木香80g、麝香2g、牛黄2g
以下实施例中的含量单位除特殊说明外，均为体积比、体积百分比。
实施例1
如意珍宝制剂的质量检测方法：
鉴别
木香的鉴别：取本品粉末1.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取木香对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液及对照品溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷为展开剂，二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷的体积比为7：1：1，展开，取出，晾干，喷以为1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
降香的鉴别：取本品粉末2g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取降香对照药材1g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，三氯甲烷-甲醇的体积比为8～100：1，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定
红花 照高效液相法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸（24:76）为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加水制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
荜茇中胡椒碱的含量检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇-水的体积比为70:30；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
牛黄中胆酸的含量的检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，以甲醇-1%冰醋酸的体积比为75:25；用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末16g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，去续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；
实施例2
如意珍宝制剂的质量检测方法：
鉴别
红花的鉴别：取本品粉末2g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.4g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μl和对照药材溶液5μl，点于同一硅胶 G薄层板上， 以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇上层溶液为展开剂，醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇的体积比为12：2：3：0.4，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
荜茇的鉴别：取本品粉末2g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液；另取荜茇对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液；另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验 ， 吸取上述 3 种溶液各8μL，点于同一硅胶 G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯为展开剂，环己烷-醋酸乙酯 的体积比为 7：5，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯 (365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
决明子的鉴别：取本品粉末5g，加甲醇25ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加1ml盐酸，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为15:5:1，石油醚沸程为60-90℃，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定
荜茇中胡椒碱的含量检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇-水的体积比为70:30；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
牛黄中胆酸的含量的检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，以甲醇-1%冰醋酸的体积比为75:25；用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末16g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，去续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；
实施例3
如意珍宝制剂的质量检测方法：
鉴别
木香的鉴别：取本品粉末1.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取木香对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液及对照品溶液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷为展开剂，二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷的体积比为15：0.5：0.5，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
降香的鉴别：取本品粉末2g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取降香对照药材1g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，三氯甲烷-甲醇的体积比为8～100：1，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为1%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
丁香的鉴别：取本品粉末2.5g，加二氯甲烷10ml， 超声处理30min， 滤过， 滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取丁香对照药材0.1g，加二氯甲烷10ml， 超声处理30min， 滤过， 滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液，另取丁香酚对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含5μL的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述 3种溶液各15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-石油醚为展开剂，醋酸乙酯-石油醚 的体积比为1 : 9，石油醚为60~90℃，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
荜茇的鉴别：取本品粉末2g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液；另取荜茇对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液；另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取上述 3 种溶液各8μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯为展开剂，环己烷-醋酸乙酯 的体积比为 7：5，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯 (365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
决明子的鉴别：取本品粉末5g，加甲醇25ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加1ml盐酸，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为15:5:1，石油醚为60-90℃，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
质量测定
测定红花中羟基红花黄色素A的检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，甲醇-1%冰醋酸水溶液的体积比为24:76；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加水制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
荜茇中胡椒碱的含量检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇-水的体积比为70:30；检测波长为343nm。理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
牛黄中胆酸的含量的检测方法：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为1%冰醋酸水溶液为流动相，以甲醇-1%冰醋酸的体积比为75:25；用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末16g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，去续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
Claims (1)
1.一种如意珍宝制剂的检测方法，所述如意珍宝制剂成分为：珍珠母100g、沉香100g、石灰华100g、金礞石30g、红花100g、螃蟹50g、丁香40g、去核毛诃子100g、肉豆蔻40g、豆蔻40g、余甘子130g、草果30g、香旱芹40g、檀香80g、黑种草子40g、降香330g、荜茇30g、诃子130g、高良姜80g、甘草膏40g、肉桂50g、乳香60g、木香80g、决明子60g、水牛角40g、黄葵子50g、短穗兔耳草150g、藏木香80g、麝香2g、牛黄2g，其特征在于：
通过定量测定制剂中红花、荜茇、牛黄的含量和定性鉴别木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸的组合方式，构成对如意珍宝制剂的整体检测方法；
所述的定量测定制剂中红花含量的方法是测定制剂中羟基红花黄色素A的含量，具体操作方法如下：
液相色谱条件： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积百分比为24:76的甲醇- 1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备： 取羟基红花花色素A对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加水制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备： 本品研细后，取粉末4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述的定量测定制剂中荜茇含量的方法是测定荜茇中胡椒碱的含量，具体操作方法如下：
液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相，甲醇：水的体积比为70:30；检测波长为343nm；理论板数按胡椒碱峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备： 取胡椒碱对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加无水乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备： 本品研细后，取粉末3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述的定量测定制剂中牛黄含量的方法是测定牛黄中胆酸的含量， 具体操作方法如下：
液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸体积比为75:25为流动相；用蒸发光散射检测器，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：本品或本品内容研细后，取粉末10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，40℃以下减压回收，转移至5ml量瓶中，稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；
所述的通过定性鉴别木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸的方法，是采用薄层色谱法分别进行鉴别；
具体操作步骤和条件如下：
（1）木香的鉴别：取本品粉末1.0～2.0g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取木香对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，另取去氢木香内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液及对照品溶液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上, 以二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷为展开剂，二甲苯-醋酸乙酯-二氯甲烷的体积比为5～15：0.5～1.5：0.5～1.5，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（2）降香的鉴别：取本品粉末1.5～2.5g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取降香对照药材1g，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取滤液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，三氯甲烷-甲醇的体积比为15～30：0.5～1.5，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（3）丁香的鉴别：取本品粉末2.0～3.0g，加二氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取丁香对照药材0.1g，加二氯甲烷10ml，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液，另取丁香酚对照品适量，加二氯甲烷制成每1ml含5μl的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述 3种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-沸程60-90℃石油醚为展开剂，醋酸乙酯-沸程60-90℃石油醚的体积比为0.5～1.5 : 8～10，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为1％的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（4）红花的鉴别：取本品粉末2.0～3.0g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加体积份数比80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.4g，加乙醚10ml，密塞，冷浸30min，时时振摇，滤过，药渣加体积份数比80%的丙酮水溶液10ml，超声处理20min，静置，上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl和对照药材溶液5μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇上层溶液为展开剂，醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇的体积比为10～14：2：2～4：0.2～0.5，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（5）荜茇的鉴别：取本品粉末2.0～3.0g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液；另取荜茇对照药材0.5g，加乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液；另取胡椒碱对照品适量，置棕色量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述 3 种溶液各8μL，点于同一硅胶 G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯为展开剂，环己烷-醋酸乙酯的体积比为6～9：3～6，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（6）决明子的鉴别：取本品粉末3～6g，加甲醇25ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加1ml盐酸，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以沸程为60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，沸程为60-90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为12～18:4～6:0.8～1.2，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（7）没食子酸的鉴别：取本品粉末2～3g，加无水乙醇10ml，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液，另取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸的体积份数比为5～7：3～5：0.8～1.2，展开，取出，晾干，喷以重量体积百分比为1％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
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