CN102139048B - 明目上清片的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种明目上清片的质量控制方法，步骤是：采用薄层色谱法，鉴别明目上清片处方中是否含赤芍、栀子、黄芩、黄连成分，以盐酸小檗碱为对照品，采用高效液相色谱法测定明目上清片中黄连的含量。在原标准中无薄层鉴别项，不能很好的控制产品质量，本发明对处方中的栀子、黄芩、黄连、赤芍、甘草、蒺藜进行了薄层鉴别试验，因甘草、蒺藜鉴别结果不理想，故未列入标准，筛选出重现性好、专属性强、结果易判断的栀子、黄芩、黄连、赤芍纳入标准中，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种明目上清片的质量控制方法。
背景技术
明目上清片的主要成分和含量如下：
桔梗 69.9g 熟大黄 69.9g 天花粉 43.7g
石膏 43.7g 麦冬 43.7g 玄参 69.9g
栀子 43.7g 蒺藜 43.7g 蝉蜕 43.7g
甘草 43.7g 陈皮 69.9g 菊花 69.9g
车前子 43.7g 当归 43.7g 黄芩 69.9g
赤芍 43.7g 黄连 69.9g 枳壳 69.9g
薄荷脑 0.248g 连翘 43.7g 荆芥油0.1092ml
制备方法：以上二十一味，桔梗、熟大黄、天花粉、石膏分别粉碎成细粉，过筛；陈皮提取挥发油，将陈皮油与荆芥油、薄荷脑混匀后用乙醇适量溶解备用；提取挥发油后的陈皮再加水煎煮1小时，滤过；玄参、麦冬、连翘、蒺藜、栀子、甘草、菊花、蝉蜕加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量；当归第一次用乙醇回流提取6小时，第二次用60％乙醇回流提取4小时，第三次用60％乙醇回流提取2小时；车前子、赤芍、黄芩、枳壳、黄连用60％乙醇回流提取3次，第一次6小时，第二次4小时，第三次2小时，合并以上醇提液，回收乙醇，浓缩至适量。合并上述水、醇浓缩液，继续浓缩成稠膏，加入桔梗等粉末及辅料适量，混匀，制成颗粒，干燥；或将合并后的浓缩液喷雾干燥成干膏粉，加入桔梗等粉末及辅料适量，混匀，制成颗粒，兑入荆芥油、薄荷脑，陈皮油乙醇溶液，混匀，压制成1000片，每片1g，即得。
功能与主治：清热散风，明目止痛。用于暴发火眼，红肿作痛，头晕目眩，眼边刺痒，大便燥结，小便赤黄。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能够定性检测药物成分的明目上清片的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果更加准确的特点。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种明目上清片的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)以芍药苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的赤芍成分；
(2)以栀子苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的栀子成分；
(3)以黄芩苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄芩成分；
(4)以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄连成分；
(5)以盐酸小檗碱为对照品，采用高效液相色谱法测定明目上清片中黄连的含量。
而且，所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的赤芍成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取明目上清片样品，研细，加乙醇，浸渍，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇提，正丁醇提取液，水液蒸干备用，用水洗，弃去水液，正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取上述两种溶液各2-5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，10℃以下，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶1下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有赤芍成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的栀子成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取赤芍鉴别中蒸干备用的残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取上述两种溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，10℃以下，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶1下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有栀子成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄芩成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取明目上清片样品，研细，加甲醇，加热回流，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试品溶液及上述对照品溶液各2-6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有黄芩成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄连成分的方法为：
①供试品溶液的制备：方法同黄芩鉴别中供试品溶液制备方法；
②对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试品溶液及上述对照品溶液各2-6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的荧光斑点，确定供试品溶液中是否含有黄连成分。
而且，所述高效液相色谱测定黄连含量的方法是：
①色谱条件：以0.05mol/L磷酸二氢钠∶乙腈＝72∶28为流动相，检测波长为277nm，柱温：35℃；
②对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中25μg的溶液，即得；
③供试品溶液的制备：取明目上清片样品，研细，精密称取，置索氏提取器中，精密盐酸甲醇溶液，加热回流至无色，将提取液转移至量瓶中，加盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
④检测与结果：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定色谱图，根据峰面积计算，本品含黄连以盐酸小檗碱计，重量为1g的每片中盐酸小檗碱含量不得少于1.5mg。
本发明的优点和积极效果是：
在原标准中无薄层鉴别项，不能很好的控制产品质量，本发明对处方中的栀子、黄芩、黄连、赤芍、甘草、蒺藜进行了薄层鉴别试验，因甘草、蒺藜鉴别结果不理想，故未列入标准，筛选出重现性好、专属性强、结果易判断的栀子、黄芩、黄连、赤芍纳入标准中，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确。
附图说明
图1为本发明赤芍薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为：1、明目上清片样品(批号为0603151)，2、明目上清片样品(批号为0506148)，3、明目上清片样品(批号为0506149)，4、芍药苷对照品，5、阴性样品溶液；
图2为本发明栀子薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为：1、明目上清片样品(批号为0603151)，2、明目上清片样品(批号为0506148)，3、明目上清片样品(批号为0506149)，4、栀子苷对照品，5、阴性样品溶液；
图3为本发明黄芩薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为：1、黄芩苷对照品，2、明目上清片样品(批号为0603151)，3、明目上清片样品(批号为0506148)，4、明目上清片样品(批号为0506149)，5、阴性样品溶液；
图4为本发明黄连薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为：1、盐酸小檗碱对照品，2、明目上清片样品(批号为0603151)，3、明目上清片样品(批号为0506148)，4、明目上清片样品(批号为0506149)，5、阴性样品溶液；
图5为本发明对照品溶液高效液相色谱图；
图6为本发明黄连供试品溶液高效液相色谱图；
图7为本发明黄连阴性样品对照品溶液高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
一种明目上清片的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的赤芍成分
①供试品溶液的制备：取本品8片，研细，加乙醇20ml，浸渍1小时，时时振摇， 滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液(水液蒸干备用)，用水洗3次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除赤芍外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按步骤①供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2～5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶1下层溶液(10℃以下)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸∶乙醇溶液＝1∶2，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品溶液中无此斑点，结果见下图1。
(2)采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的栀子成分
①供试品溶液的制备：取赤芍鉴别中蒸干备用的残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除栀子外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按本步骤①供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶1下层溶液(10℃以下)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸∶乙醇溶液＝1∶2，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品溶液中无此斑点，结果见下图2。
(3)采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄芩成分
①供试品溶液的制备：取本品5片，研细，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除黄芩外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按本步骤①供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液及上述对照品溶液各2～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品溶液中无此斑点，结果见下图3。
(4)采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄连成分
①供试品溶液的制备：方法同黄芩鉴别中供试品溶液制备方法。
②对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作 为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除黄连外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按黄芩鉴别中供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](3)项下的供试品溶液及上述对照品溶液各2～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品溶液中无此斑点，结果见下图4。
(5)高效液相色谱测定黄连含量
①色谱条件：色谱柱：YMC-Pack ODS-A C18柱(150X4.6mm，5μm)，以0.05mol/L磷酸二氢钠(pH值3)∶乙腈＝72∶28为流动相，检测波长为277nm，柱温：35℃，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。
②对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中25μg的溶液，即得。
③供试品溶液的制备 取本品20片，研细，精密称取0.4g，置索氏提取器中，精密加1％盐酸甲醇溶液50ml，加热回流至无色(约3小时)，将提取液转移至50ml量瓶中，加1％盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
④阴性样品溶液的制备 按处方配比，取除去黄连的其他味药材，按制原药制备工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
⑤检测与结果：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，结果分别见下图5、图6、图7，本品含黄连以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，每片不得少于1.5mg。中国药典2005年版一部规定黄连含盐酸小檗碱不得少于3.6％，按照60％提取率计算，69.9×3.6％×60％＝1.5mg/片，因此本品含量限度暂定为：本品每片黄连以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，不得少于1.5mg。
Claims (1)
1.一种明目上清片的检测方法，其特征在于：其方法的步骤是：
(1)以芍药苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的赤芍成分；
(2)以栀子苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的栀子成分；
(3)以黄芩苷为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄芩成分；
(4)以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄连成分；
(5)以盐酸小檗碱为对照品，采用高效液相色谱法测定明目上清片中黄连的含量；
所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的赤芍成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取明目上清片样品，研细，加乙醇，浸渍，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇提，正丁醇提取液，水液蒸干备用，用水洗，弃去水液，正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取上述两种溶液各2～5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，10℃以下，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶1下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有赤芍成分；
所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的栀子成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取赤芍鉴别中蒸干备用的残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，10℃以下，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶1下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有栀子成分；
所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄芩成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取明目上清片样品，研细，加甲醇，加热回流，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试品溶液及上述对照品溶液各2～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品溶液中是否含有黄芩成分；
所述薄层色谱法鉴别明目上清片中的黄连成分的方法为：
①供试品溶液的制备：方法同黄芩鉴别中供试品溶液制备方法；
②对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试品溶液及上述对照品溶液各2～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的荧光斑点，确定供试品溶液中是否含有黄连成分；
所述高效液相色谱测定黄连含量的方法是：
①色谱条件：以0.05mol/L磷酸二氢钠∶乙腈＝72∶28为流动相，检测波长为277nm，柱温：35℃；
②对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中25μg的溶液，即得；
③供试品溶液的制备：取明目上清片样品，研细，精密称取，置索氏提取器中，精密盐酸甲醇溶液，加热回流至无色，将提取液转移至量瓶中，加盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
④检测与结果：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定色谱图，根据峰面积计算，本品含黄连以盐酸小檗碱计，重量为1g的每片中盐酸小檗碱含量不得少于1.5mg。
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