CN102139008B - 小儿导赤片的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种小儿导赤片的质量控制方法，步骤是：采用薄层色谱法，鉴别小儿导赤片处方中是否含大黄、木通、甘草、栀子成分，再高效液相色谱法测定大黄含量的测定。本发明对小儿导赤片质量标准进行了提高、完善，因原鉴别项中只有一项薄层鉴别，不能很好的控制产品质量，所以本发明在原标准基础上对处方中几味主药均进行了薄层鉴别试验，筛选出重现性好、专属性强、斑点显色清晰、结果易判断的方法纳入标准中，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确，质量更加容易控制。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种小儿导赤片的质量控制方法。
背景技术
小儿导赤片的主要成分和含量如下：大黄110.6g、滑石29.5g、地黄59g、栀子88.5g、甘草29.5g、木通29.5g、茯苓29.5g，制备方法为：以上七味，大黄、滑石分别粉碎成细粉，过筛，备用。地黄、栀子、甘草，木通，茯苓水煎煮二次，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至适量。将浓缩液继续浓缩成稠膏，加入大黄等粉末及辅料混匀，制成颗粒，干燥；或将浓缩液喷雾干燥成干膏粉，加入大黄等粉末及辅料适量，混匀，制成颗粒，压制成1000片，即得，每片重0.3g。
功能与主治：清热利便。用于胃肠积热，口舌生疮，咽喉肿痛，牙根出血，腮颊肿痛，暴发火眼，大便不利，小便赤黄。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能够定性检测药物成分的小儿导赤片的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果更加准确的特点。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种小儿导赤片的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)以大黄为对照药材，薄层色谱鉴别小儿导赤片中是否含有大黄成分；
(2)以齐墩果酸为对照品，薄层色谱法鉴别小儿导赤片中是否含有木通成分；
(3)以甘草为对照药材，薄层色谱法鉴小儿导赤片中是否含有甘草成分；
(4)以栀子苷为对照药材，薄层色谱法鉴别小儿导赤片中是否含有栀子成分；
(5)高效液相色谱法测定大黄含量的测定。
而且，所述薄层色谱鉴别大黄成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取小儿导赤片样品，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，加水溶解，加盐酸，水浴上加热，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml溶解，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备：取大黄对照药材0.5g，加甲醇同法制成对照药材溶液；
③薄层条件及结果：吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝6∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上是否显相同颜色的五个橙黄色斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色，确定供试品中是否含有大黄成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别木通成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取小儿导赤片样品，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并提取液蒸干，残渣加甲醇20ml，盐酸2ml，加热回流4小时，放冷，加水10ml，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层条件及结果：吸取上述供试品溶液和阴性样品溶液各4μl，对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸＝6∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，检视供试品色谱中小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有木通成分。
而且，所述薄层色谱鉴别处方中的甘草成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取小儿导赤片样品，研细，加乙醇回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯提取液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备：取甘草对照药材，加水，微沸煎煮20分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
③薄层条件及结果：吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝10∶2.5∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，检视供试品色谱中小儿导赤片在与对照药材色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有干草成分。
而且，所述薄层色谱鉴别处方中的栀子成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取小儿导赤片样品，研细，各称取1.0g，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③薄层条件及结果：吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶氨水＝5∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，检视供试品色谱中，小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定确定供试品中是否含有栀子成分。
而且，所述高效液相色谱法测定大黄含量的测定的方法为：
①色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.1％磷酸溶液＝82∶18为流动相；检测波长为254nm；柱温40℃，理论塔板数按大黄素计算，应不低于4000；
②对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含大黄素10μg和大黄酚20μg的混合溶液，作为对照品溶液；
③供试品溶液的制备：取小儿导赤片样品，精密称定，研细，置25ml量瓶中，加入甲醇20ml，超声处理，放冷至室温，加甲醇至刻度，混匀，滤过，取续滤液即得；
④测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，经计算本品每片含大黄以大黄素和大黄酚总量计，不得少于0.40mg。
本发明的优点和积极效果是：
本发明对小儿导赤片质量标准进行了提高、完善，因原鉴别项中只有一项薄层鉴别，不能很好的控制产品质量，所以本发明在原标准基础上对处方中几味主药均进行了薄层鉴别试验，筛选出重现性好、专属性强、斑点显色清晰、结果易判断的方法纳入标准中，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确，质量更加容易控制。
附图说明
图1为本发明大黄薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为：1小儿导赤片(批号0510054)，2小儿导赤片(批号0602055)，3小儿导赤片(批号0602056)，4大黄对照药材，5小儿导赤片大黄阴性样品；
图2为本发明木通薄层色谱鉴别的紫外光灯(365nm)下检视色谱图，从左至右依次为：1小儿导赤片(批号0510054)，2小儿导赤片(批号0602055)，3小儿导赤片(批号0602056)，4齐墩果酸对照品，5小儿导赤片木通阴性样品；
图3为本发明甘草薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为：1小儿导赤片(批号0510054)，2小儿导赤片(批号0602055)，3小儿导赤片(批号0602056)，4甘草对照药材，5小儿导赤片甘草阴性样品；
图4为本发明栀子薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为：1小儿导赤片栀子阴性样品，2小儿导赤片(批号0510053)，3小儿导赤片(批号0510054)，4小儿导赤片(批号0602055)，5小儿导赤片(批号0602056)，6栀子对照品；
图5为本发明甘草在栀子检测条件下的薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为：1小儿导赤片栀子阴性样品，2小儿导赤片(批号0510053)，3小儿导赤片(批号0510054)，4儿导赤片(批号0602055)，5小儿导赤片(批号0602056)，6栀子对照品，7甘草对照药材，8小儿导赤片甘草阴性样品；
图6本发明大黄素、大黄酚对照品混合溶液的色谱图；
图7本发明小儿导赤片样品0504052溶液色谱图；
图8本发明小儿导赤片样品0504052溶液色谱图；
图9本发明小儿导赤片样品0602055溶液色谱图；
图10本发明大黄素、大黄酚阴性样品溶液色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
一种小儿导赤片的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)以大黄为对照药材，薄层色谱鉴别处方中的大黄成分。
①供试品溶液的制备：取三批样品各10片，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，加水10ml溶解，加1ml盐酸，水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备：取大黄对照药材0.5g，加甲醇同法制成对照药材溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除大黄外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层条件及结果：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录IVB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)∶乙酸乙酯∶甲酸＝6∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的五个橙黄色斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色，且阴性无干扰。该方法为原质量标准中大黄的检测方法，经操作该方法得出薄层图谱斑点清晰，见图1。
(2)以齐墩果酸为对照品，薄层色谱处方中的木通。
①供试品溶液的制备：取三批样品各10片，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并提取液蒸干，残渣加甲醇20ml，盐酸2ml，加热回流4小时，放冷，加水10ml，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备；按处方配比，取除木通外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层条件及结果：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录IVB)试验，吸取上述供试品溶液和阴性样品溶液各4μl，对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸＝6∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚。供试品色谱中，小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，见图2。
(3)以甘草为对照药材，薄层色谱处方中的甘草。
①供试品溶液的制备：取三批样品各10片，研细，加乙醇25ml回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯提取液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备：取甘草对照药材0.3g，加水40ml，微沸煎煮20分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
③阴性样品溶液的制备；按处方配比，取除甘草外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层条件及结果：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝10∶2.5∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚。供试品色谱中，小儿导赤片在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰，检测结果见图3。
(4)以栀子苷为对照药材，薄层色谱处方中的栀子。
①供试品溶液的制备：取三批样品各10片，研细，各称取1.0g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备；按处方配比，取除栀子外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层条件及结果：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶氨水＝5∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚。供试品色谱中，小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰见图4。
将甘草鉴别项下的3种溶液及栀子苷对照品溶液和栀子阴性溶液分别吸取4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝10∶2.5∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚。供试品色谱中，小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上，也显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。为使操作简化，甘草与栀子的薄层色谱可采用同一处理方法，使用同一硅胶薄层板及同一展开条件，检测结果见图5。
(5)高效液相色谱法测定大黄含量的测定
①色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.1％磷酸溶液＝82∶18为流动相；检测波长为254nm；柱温40℃，理论塔板数按大黄素计算，应不低于4000。
②对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含大黄素10μg和大黄酚20μg的混合溶液，作为对照品溶液。
③供试品溶液的制备：取本品10片，精密称定，研细，取0.3g，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声处理30分钟，放冷至室温，加甲醇至刻度，混匀，滤过，取续滤液即得。
④阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除大黄外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。
⑤测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)总量计，不得少于0.40mg。其中各步骤检测的色谱图分别见图6、图7、图8、图9、图10。
Claims (1)
1.一种小儿导赤片的检测方法，其特征在于：其方法的步骤是：
(1)以大黄为对照药材，薄层色谱鉴别小儿导赤片中是否含有大黄成分；
(2)以齐墩果酸为对照品，薄层色谱法鉴别小儿导赤片中是否含有木通成分；
(3)以甘草为对照药材，薄层色谱法鉴小儿导赤片中是否含有甘草成分；
(4)以栀子苷为对照品，薄层色谱法鉴别小儿导赤片中是否含有栀子成分；
(5)高效液相色谱法测定大黄中大黄素和大黄酚的含量；
所述薄层色谱鉴别大黄成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取样品，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，加水溶解，加盐酸，水浴上加热，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml溶解，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备：取大黄对照药材0.5g，加甲醇同法制成对照药材溶液；
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除大黄外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；
④薄层条件及结果：吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸＝6∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上是否显相同颜色的五个橙黄色斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色，确定供试品中是否含有大黄成分；
所述薄层色谱法鉴别木通成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取样品，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并提取液蒸干，残渣加甲醇20ml，盐酸2ml，加热回流4小时，放冷，加水10ml，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除木通外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；
④薄层条件及结果：吸取上述供试品溶液和阴性样品溶液各4μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸＝6∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，检视供试品色谱中小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有木通成分；
所述薄层色谱鉴别处方中的甘草成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取样品，研细，加乙醇回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯提取液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备：取甘草对照药材0.3g，加水40ml，微沸煎煮20分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除甘草外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；
④薄层条件及结果：吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝10∶2.5∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，检视供试品色谱中小儿导赤片在与对照药材色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有甘草成分；
所述薄层色谱鉴别处方中的栀子成分的方法为：
①供试品溶液的制备：取样品，研细，称取1.0g，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除栀子外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；
④薄层条件及结果：吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶氨水＝5∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，检视供试品色谱中，小儿导赤片在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有栀子成分；
所述高效液相色谱法测定大黄中大黄素和大黄酚含量的测定的方法为：
①色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.1％磷酸溶液＝82∶18为流动相；检测波长为254nm；柱温40℃，理论塔板数按大黄素计算，应不低于4000；
②对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含大黄素10μg和大黄酚20μg的混合溶液，作为对照品溶液；
③供试品溶液的制备：取本品，精密称定，研细，取0.3g，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇约20ml，超声处理，放冷至室温，加甲醇至刻度，混匀，滤过，取续滤液即得；
④阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除大黄外的其他药材，按原药制备工艺制成片剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液；
⑤测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，经计算本品每片含大黄以大黄素和大黄酚总量计，不得少于0.40mg；
小儿导赤片的成分和含量如下：大黄110.6g、滑石29.5g、地黄59g、栀子88.5g、甘草29.5g、木通29.5g、茯苓29.5g；制备方法为：以上七味，大黄、滑石分别粉碎成细粉，过筛，备用；地黄、栀子、甘草，木通，茯苓水煎煮二次，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至适量；将浓缩液继续浓缩成稠膏，加入大黄等粉末及辅料混匀，制成颗粒，干燥；或将浓缩液喷雾干燥成干膏粉，加入大黄等粉末及辅料适量，混匀，制成颗粒，压制成1000片，即得，每片重0.3g。
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