CN102335402A - 一种中药制剂补中益气合剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药制剂补中益气合剂的检测方法，所述合剂由黄芪280g、党参84g、甘草140g、白术84g、当归84g、升麻84g、柴胡84g、陈皮84g、生姜28g和大枣56g加工制成，所述检测方法包括以下步骤：对合剂中的甘草、当归和陈皮进行鉴别；测定合剂中黄芪甲苷成分的含量。

Description

一种中药制剂补中益气合剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体的说，本发明涉及中成药补中益气合剂的检测方法。

背景技术

补中益气合剂是由黄芪(蜜炙)、党参、甘草(蜜炙)、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮、生姜、大枣等十味中药组成，国内有多种剂型上市。但经我们研究发现，现有的补中益气合剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。现有质量控制方法中并没有对甘草、当归和陈皮进行鉴别，或对黄芪甲苷成分进行含量测定。故现有质量控制方法不能有效控制补中益气合剂的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。

为有效控制产品质量，我们建立了补中益气合剂的新的质量控制方法，该方法采用薄层色谱法对甘草、当归和陈皮进行鉴别，采用高效液相色谱法对黄芪甲苷进行含量测定。该质量控制方法专属性、稳定性、准确性均较好，能确保产品质量的安全稳定、有效可控。

发明内容

本发明的目的在于提供一种补中益气合剂的检测方法。

本发明所述的补中益气合剂是由如下重量份的中药原料药制成的：

黄芪(蜜炙)280g、党参84g、甘草(蜜炙)140g、白术84g、当归84g、升麻84g、柴胡84g、陈皮84g、生姜28g、大枣56g

以上组成制成的药物制剂为液体制剂1000ml，以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少。

本发明补中益气合剂的制备方法可以采用以下方法：

白术、陈皮、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣和生姜照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用50％乙醇作溶剂，渐渍24小时，进行渗漉，漉液回收乙醇；黄芪、党参、甘草、升麻、柴胡、大枣等六味加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至1000ml，与上述水溶液、漉液合并，静置，滤过，浓缩至约1000ml，加入苯甲酸钠3g，放冷，加入上述挥发油，调整总量至1000ml，搅匀，即得。

本发明提供的是针对以上补中益气合剂的检测方法，为控制补中益气合剂的质量，我们提供了如下检测方法：

本发明所述检测方法包括以下主要步骤：

(1)对本发明药物制剂中的甘草、当归和陈皮进行鉴别；

(2)测定本发明药物制剂中黄芪甲苷成分的含量。

本发明的鉴别方法是以下方法的一种或几种：

1)取本品30ml，加盐酸1ml，用氯仿振摇提取3次，每次10ml，氯仿液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2)取本品30ml，加等量的石油醚(30～60℃)，振摇提取，分取石油醚提取液，自然挥散至约1ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，置具塞试管中，加石油醚(30～60℃)2ml，振摇，浸渍2小时，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3)取本品30ml，用石油醚(30～60℃)振摇提取2次，每次25ml，石油醚液备用；水溶液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(32∶17∶5)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明的含量测定方法为以下的方法：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(35∶65)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取本品20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

本品每1ml含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.05mg。

本发明提供了甘草、当归和陈皮的薄层色谱鉴别，选择了君药黄芪中有效成分黄芪甲苷作为含量测定指标，建立了补中益气合剂的含量测定方法；经过多次重复试验，确认方法简便、重复性良好，可以作为补中益气合剂的质量控制指标。

具体实施方式

通过下面的实施例对本发明作更加详细的说明，但不作为限制作用。

实施例1：取白术84g、陈皮84g、当归84g提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣和生姜28g照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用50％乙醇作溶剂，渐渍24小时，进行渗漉，漉液回收乙醇；取黄芪(蜜炙)280g、党参84g、甘草(蜜炙)140g、升麻84g、柴胡84g、大枣56g等六味加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至1000ml，与上述水溶液、漉液合并，静置，滤过，浓缩至约1000ml，加入苯甲酸钠3g，放冷，加入上述挥发油，调整总量至1000ml，搅匀，即得。

同法分批制备，共制得药物共计十个批次，分别为080901、080902、080903、080904、081001、081002、081003、081004、081101和081102。

以上十批药物的检测方法包括以下方法：

1)取本品30ml，加盐酸1ml，用氯仿振摇提取3次，每次10ml，氯仿液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2)取本品30ml，加等量的石油醚(30～60℃)，振摇提取，分取石油醚提取液，自然挥散至约1ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，置具塞试管中，加石油醚(30～60℃)2ml，振摇，浸渍2小时，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3)取本品30ml，用石油醚(30～60℃)振摇提取2次，每次25ml，石油醚液备用；水溶液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(32∶17∶5)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(35∶65)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取本品20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

本品每1ml含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.05mg。药物检测结果为：

表1  十批生产药物样品检测结果

Claims (7)

1.一种补中益气合剂的检测方法，所述合剂由黄芪280g、党参84g、甘草140g、白术84g、当归84g、升麻84g、柴胡84g、陈皮84g、生姜28g和大枣56g加工制成，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)对合剂中的甘草、当归和陈皮进行鉴别；

(2)测定合剂中黄芪甲苷成分的含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，合剂中的甘草鉴别过程：

取合剂30ml，加盐酸1ml，用氯仿振摇提取3次，每次10ml，氯仿液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，30～60℃以体积比为10∶20∶7∶0.5石油醚-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求1所棕的检测方法，其特征在于，合剂中的当归鉴别过程：

取合剂30ml，30～60℃加等量的石油醚，振摇提取，分取石油醚提取液，自然挥散至约1ml，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5g，置具塞试管中，30～60℃加石油醚2ml，振摇，浸渍2小时，取上清液作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比3∶1环己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，合剂中的陈皮鉴别过程：

取合剂30ml，用30～60℃石油醚振摇提取2次，每次25ml，石油醚液备用；水溶液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比32∶17∶5三氯 甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含量测定方法包括以下步骤：

照中国药典2005年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比35∶65乙腈-水为流动相；蒸发光散射检测器检测，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  精密量取本品20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；

本品每1ml含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.05mg。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述合剂的制备方法为：

白术、陈皮、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣和生姜照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用50％乙醇作溶剂，渐渍24小时，进行渗漉，漉液回收乙醇；黄芪、党参、甘草、升麻、柴胡、大枣等六味加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至1000ml，与上述水溶液、漉液合并，静置，滤过，浓缩至约1000ml，加入苯甲酸钠3g，放冷，加入上述挥发油，调整总量至1000ml，搅匀，即得。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

取合剂30ml，加盐酸1ml，用氯仿振摇提取3次，每次10ml，氯仿液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘草次酸对照品，加乙醇 制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，30～60℃以体积比为10∶20∶7∶0.5石油醚-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

取合剂30ml，30～60℃加等量的石油醚，振摇提取，分取石油醚提取液，自然挥散至约1ml，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5g，置具塞试管中，30～60℃加石油醚2ml，振摇，浸渍2小时，取上清液作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以体积比3∶1环己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

取合剂30ml，用30～60℃石油醚振摇提取2次，每次25ml，石油醚液备用；水溶液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比32∶17∶5三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

所述含量测定方法包括以下步骤：

照中国药典2005年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比35∶65乙腈-水为流动相；蒸发光散射检测器检测，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  精密量取本品20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，正丁醇提取液 回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；

本品每1ml含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.05mg。