CN102139039A - 清胃黄连片的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种清胃黄连片的质量控制方法，步骤是：采用薄层色谱法，鉴别清胃黄连片处方中是否含黄连、知母、栀子苷和黄芩苷成分，采用高效液相色谱法测定清胃黄连片中的盐酸小檗碱含量。由于原质量标准中没有相应的控制标准，本发明中进行了黄连和知母进行了薄层鉴别试验，筛选出重现性好、专属性强、斑点显色清晰、结果易判断的方法纳入标准中，并且进行了栀子和黄芩的薄层色谱检测的复核，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确，质量更加容易控制。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种清胃黄连片的质量控制方法。
背景技术
清胃黄连片的主要成分和含量如下：
黄连 62.5g 石膏 62.5g 桔梗 62.5g
甘草 31.25g 知母 62.5g 玄参 62.5g
地黄 62.5g 牡丹皮 62.5g 天花粉 62.5g
连翘 62.5g 栀子 156.25g 黄柏 156.25g
黄芩 156.25g 赤芍 62.5g
制备方法：以上十四味，石膏31.25g粉碎成细粉，过筛，备用。黄芩提取黄芩素，备用。其余石膏等十二味加水煎煮二次，每次2小时，合并以上煎液，浓缩至适量，将浓缩液继续浓缩成稠膏，加入石膏、黄芩素细粉及辅料适量，混匀，制成颗粒，干燥；或将浓缩液喷雾干燥成干膏粉，加入石膏、黄芩素细粉及辅料适量，混匀，制成颗粒。压制成1000片，包衣，即得，其中：糖衣片：基片每片重0.32g，薄膜衣片：每片重0.33g。
功能与主治：清胃泻火，解毒消肿。用于口舌生疮，齿龈、咽喉肿痛。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能够定性检测药物成分的清胃黄连片的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果更加准确的特点。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种清胃黄连片的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)以盐酸小檗碱为对品，采用薄层色谱法鉴别清胃黄连片中的黄连成分；
(2)以菝葜皂苷元为对照品，采用薄层色谱法鉴别清胃黄连片中的知母成分；
(3)采用高效液相色谱法测定清胃黄连片中的盐酸小檗碱含量。
而且，还包括栀子苷的薄层色谱鉴别和黄芩苷的薄层色谱鉴别。
而且，所述黄连的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，去包衣，研细，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，甲醇定容，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成0.5mg/ml的溶液，即得；对照药材溶液的制备取黄连对照药材50mg，按上述供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取上述三种溶液各1μl分别点于同一硅胶G板上，以正丁醇∶乙酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，检视供试品色谱中在与对照品、对照药材色谱相应位置上是否显相同颜色的荧光斑点，确定供试品中是否含有黄连成分。
而且，所述知母的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，去包衣，研细，加乙醚，加热回流，滤过，弃去滤液，残渣挥尽乙醚，加乙醇，加热回流，放冷，滤过，滤液加盐酸2ml，继续回流1小时，再置水浴上浓缩至5ml，加水，用甲苯振摇提取，分取甲苯层，用1％氢氧化钠溶液10ml洗涤一次，再用水洗涤3次，每次10ml，分取甲苯层，蒸干，残渣加甲苯1ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取菝葜皂苷元对照品，加甲苯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取对照品溶液、供试品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯∶丙酮＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有知母成分。
而且，所述盐酸小檗碱的含量测定的方法为：
①色谱条件：以0.05mol/L，磷酸二氢钠∶乙腈＝70∶30为流动相，检测波长为345nm，柱温：30℃；
②对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加50％乙醇溶解，制成1ml中含30μg的溶液，即得；
③供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.4g，置具塞锥形瓶中，加50％乙醇，密塞，超声处理，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
④检测及结果：分别精密吸取对照品、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，检测其色谱图，经过分析，本品含盐酸小檗碱每片不得少于1.2mg/片，其中每片重0.32g。
而且，所述栀子苷的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，去包衣，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试品溶液、阴性样品溶液各4μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有栀子苷成分。
而且，所述黄芩苷的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：同栀子鉴别项下供试品的制备方法；
②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试液，阴性样品溶液各4μl，及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有黄芩苷成分。
本发明的优点和积极效果是：
由于原质量标准中没有相应的控制标准，本发明中进行了黄连和知母进行了薄层鉴别试验，筛选出重现性好、专属性强、斑点显色清晰、结果易判断的方法纳入标准中，并且进行了栀子和黄芩的薄层色谱检测的复核，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，使药品的定性和定量检测更加准确，质量更加容易控制。
附图说明
图1为本发明黄连薄层色谱鉴别的色谱图，从左至右依次为：1盐酸小檗碱对照品，2黄连对照药材，3清胃黄连片样品(批号为0511491)，4清胃黄连片样品(批号为0512514)，5清胃黄连片样品(批号为0601522)，6清胃黄连片黄连阴性样品；
图2为本发明栀子薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为：1栀子苷对照品，2清胃黄连片样品(批号为0511491)，3清胃黄连片样品(批号为0512514)，4清胃黄连片样品(批号为0601522)，5清胃黄连片栀子阴性样品；
图3为本发明黄芩薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为：1黄芩苷对照品，2清胃黄连片样品(批号为0511491)，3清胃黄连片样品(批号为0512514)，4清胃黄连片样品(批号为0601522)，5清胃黄连片黄芩阴性样品；
图4为本发明知母薄层色谱鉴别色谱图，从左至右依次为：1菝葜皂苷元对照品，2清胃黄连片样品(批号为0511491)，3清胃黄连片样品(批号为0512514)，4清胃黄连片样品(批号为0601522)，5清胃黄连片知母阴性样品；
图5为本发明盐酸小檗碱阴性样品色谱图；
图6为本发明盐酸小檗碱对照品溶液色谱图；
图7为本发明盐酸小檗碱检测中样品色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
一种清胃黄连片的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)黄连的薄层色谱鉴别
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品5片，去包衣，研细，加20ml甲醇，加热回流15分钟，滤过，滤液蒸干，甲醇定容至5ml，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成0.5mg/ml的溶液，即得；对照药材溶液的制备取黄连对照药材50mg，按上述供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去黄连、黄柏的其他味药材，按原药制备工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。(因黄柏药材中也含有盐酸小檗碱，故阴性样品中未加入黄柏，以免有干扰)；
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述四种溶液各1μl分别点于同一硅胶G板上，以正丁醇∶乙酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰，见图1。
(2)栀子苷的薄层色谱鉴别(复核原方法)
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品5片，去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去栀子的其他味药材，按原药制备工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各4μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰，见图2
(3)黄芩苷的薄层色谱鉴别(复核原方法)
①供试品溶液的制备：同栀子鉴别项下供试品的制备方法。
②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去黄芩的其他味药材，按原药制备工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取供试液，阴性样品溶液各4μl，及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，见图3。
(4)知母的薄层色谱鉴别
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品10片，去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流15分钟，滤过，弃去滤液，残渣挥尽乙醚，加乙醇40ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液加盐酸2m1，继续回流1小时，再置水浴上浓缩至5ml，加水10ml，用甲苯20ml振摇提取，分取甲苯层，用1％氢氧化钠溶液10ml洗涤一次，再用水洗涤3次，每次10ml，分取甲苯层，蒸干，残渣加甲苯1ml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取菝葜皂苷元对照品，加甲苯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去知母的其他味药材，按原药制备工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯∶丙酮＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，结果见图4。(因试剂苯的毒性较大，本方法将苯均改为甲苯)
(5)黄连、黄柏中盐酸小檗碱的含量测定
①色谱条件和色谱柱：YMC-Pack ODS-A C18柱(150×4.6mm，5μm)，以0.05mol/L
磷酸二氢钠(pH＝3)∶乙腈＝70∶30为流动相，检测波长为345nm，柱温：30℃，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。
②对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加50％乙醇溶解，制成1ml中含30μg的溶液，即得，结果见图7。
③供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品20片(除去包衣)，精密称定，研细，精密称取0.4g，置具塞锥形瓶中，加50％乙醇50ml，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，结果见图7。
④阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去黄连、黄柏的其他味药材，按原药制备工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液，结果见图5。
⑤检测及结果：分别精密吸取对照品、阴性样品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，检测其色谱图，经过10批样品的分析，得到每片样品中盐酸小檗碱的含量在1.41-1.92mg之间，10批样品中的盐酸小檗碱的含量平均值为1.76mg/片，其含量限度定为1.76×70％＝1.2mg/片，即：本品每片(每片重0.32g)含黄连、黄柏以盐酸小檗碱的含量计，不得少于1.2mg。本品含盐酸小檗碱每片(每片重0.32g)不得少于1.2mg/片。
Claims (7)
1.一种清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：其方法的步骤是：
(1)以盐酸小檗碱为对品，采用薄层色谱法鉴别清胃黄连片中的黄连成分；
(2)以菝葜皂苷元为对照品，采用薄层色谱法鉴别清胃黄连片中的知母成分；
(3)采用高效液相色谱法测定清胃黄连片中的盐酸小檗碱含量。
2.根据权利要求1所述的清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：还包括栀子苷的薄层色谱鉴别和黄芩苷的薄层色谱鉴别。
3.根据权利要求1所述的清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：所述黄连的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，去包衣，研细，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，甲醇定容，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成0.5mg/ml的溶液，即得；对照药材溶液的制备取黄连对照药材50mg，按上述供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取上述三种溶液各1μl分别点于同一硅胶G板上，以正丁醇∶乙酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，检视供试品色谱中在与对照品、对照药材色谱相应位置上是否显相同颜色的荧光斑点，确定供试品中是否含有黄连成分。
4.根据权利要求1所述的清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：所述知母的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，去包衣，研细，加乙醚，加热回流，滤过，弃去滤液，残渣挥尽乙醚，加乙醇，加热回流，放冷，滤过，滤液加盐酸2ml，继续回流1小时，再置水浴上浓缩至5ml，加水，用甲苯振摇提取，分取甲苯层，用1％氢氧化钠溶液10ml洗涤一次，再用水洗涤3次，每次10ml，分取甲苯层，蒸干，残渣加甲苯1ml使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取菝葜皂苷元对照品，加甲苯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取对照品溶液、供试品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯∶丙酮＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有知母成分。
5.根据权利要求1所述的清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：所述盐酸小檗碱的含量测定的方法为：
①色谱条件：以0.05mol/L，磷酸二氢钠∶乙腈＝70∶30为流动相，检测波长为345nm，柱温：30℃；
②对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加50％乙醇溶解，制成1ml中含30μg的溶液，即得；
③供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.4g，置具塞锥形瓶中，加50％乙醇，密塞，超声处理，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
④检测及结果：分别精密吸取对照品、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，检测其色谱图，经过分析，本品含盐酸小檗碱每片不得少于1.2mg/片，其中每片重0.32g。
6.根据权利要求2所述的清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：所述栀子苷的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：取清胃黄连片样品，去包衣，研细，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩至近干，加甲醇使溶解，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备：取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试品溶液、阴性样品溶液各4μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有栀子苷成分。
7.根据权利要求2所述的清胃黄连片的质量控制方法，其特征在于：所述黄芩苷的薄层色谱鉴别的方法为：
①供试品溶液的制备：同栀子鉴别项下供试品的制备方法；
②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
③薄层色谱条件及结果：吸取供试液，阴性样品溶液各4μl，及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，检视供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点，确定供试品中是否含有黄芩苷成分。
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