CN102166264B - 一种肾石通的检验方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肾石通的检验方法。该检验方法建立了以金钱草药材为对照，木香药材为对照、丹参素钠为对照鉴别肾石通制剂中金钱草、木香、丹参的薄层色谱法，同时改良了延胡索的薄层色谱条件。新建了以芦丁为对照，在紫外273±2nm测定总黄酮的含量测定方法。本发明在原有标准的基础上，增加了金钱草、木香、丹参和延胡索的薄层鉴别方法，可以准确、快速地进行定性鉴别，专属性强，重现性好；通过总黄酮的含量测定方法，可以全面、准确地反映制剂的质量；从而可以有效地控制肾石通产品的质量，防止假冒伪劣产品；能对肾石通制剂进行有效的检验，包括中间品肾石通浸膏以及由该配方制成的片剂、胶囊、微丸、滴丸等。
Description
技术领域
本发明涉及一种中成药的检验方法，特别是涉及一种肾石通的检验方法，更具体地涉及一种肾石通浸膏或肾石通制剂的检验方法。
背景技术
肾石通颗粒收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第2册中。处方是由金钱草100g、王不留行(炒)100g、
蓄60g、瞿麦50g、海金沙40g、丹参40g、鸡内金(烫)40g、延胡索(醋制)30g、牛膝30g、木香20g组成。制备工艺为：以上十味，海金沙、王不留行装入布袋内，与其余金钱草等八味加水煎煮二次，第一次2.5小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，减压浓缩至相对密度为1.20～1.25(75～80℃)的清膏；取清膏1份，加糖粉2份，糊精1份混匀，制成颗粒，在80℃以下干燥。规格：每袋装15克。功能主治：具有清热利湿、活血止痛、化石排石的功效，用于肾结石、肾盂结石、膀胱结石、输尿管结石。目前市售肾石通制剂还有肾石通无糖型颗粒，肾石通丸(每袋生药量均为7.65g)等。
肾石通颗粒现执行的部颁标准中只有性状、颗粒剂检查项，无鉴别项目和含量测定项目，制剂质量可控性差。
有文献报道肾石通的质量标准。定性鉴别方面，曾有过金钱草、王不留行、蓄、丹参、延胡索和牛膝的薄层色谱研究，已有文献报道大多采用单个化学成分对照品为对照，开展薄层鉴别。如以槲皮素、齐墩果酸、延胡索乙素为对照，进行金钱草、牛膝、延胡索的鉴别(江西中医学院学报，2001)；以槲皮素、齐墩果酸为对照，进行
蓄、牛膝的鉴别(西北药学杂志，2005)；以齐墩果酸、王不留行药材，原儿茶醛为对照，进行牛膝、王不留行、丹参的鉴别(时珍国医国药，2008)等。上述鉴别存在特征性不强，效果不佳的缺点：槲皮素在金钱草、
蓄中都有，以此为对照品进行鉴别缺乏特异性，王不留行和
蓄的鉴别效果很差；牛膝的鉴别重复性不好，分离效果也较差；金钱草、丹参、延胡索的鉴别方法也不理想。
也有一些文献研究肾石通颗粒的定量控制。如于兰等采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法，以芦丁为对照品，以510nm为测定波长测定肾石通颗粒中总黄酮含量(西北药学杂志，2005)。然而如图1所示，肾石通颗粒样品在400～600nm波长范围内吸收曲线平坦，没有明显的最大吸收波长。郭亚健等研究报道：以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色剂，于400～600nm进行总黄酮含量测定的方法专属性不强，准确性较差(《关于NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定总黄酮方法的探讨》，药物分析杂志，2005年)，也进一步说明文献中的510nm比色法测定肾石通总黄酮不够理想。
最近有一些采用高效液相色谱法(HPLC)对肾石通颗粒制剂的定量控制研究报道，如HPLC法测定肾石通颗粒中槲皮素的含量(安徽医药，2006)，测定山萘素的含量(大理学院学报，2010)，测定中槲皮素与山萘素的含量(中国药业，2010)；另有HPLC测定肾石通颗粒中丹参酚酸类成分的含量，如测定丹参素的含量(曹兆军等，中国药品标准，2007)，测定原儿茶醛(时珍国医国药，2008)的报道。上述文献中一般测定的都是某一药材中单个成分的含量，很难全面反映10味药材的复方的整体质量情况。
肾石通制剂处方中金钱草为方中主药(君药)，用量约占整个处方的1/5，其主要成分为黄酮类物质。另外蓄、瞿麦、王不留行和海金沙等多味药材也都富含黄酮类成分，几种含黄酮药材用量共占整个处方总量的2/3。由于多种药材中含有黄酮类成分，同时黄酮类成分和药效关系密切，可以将其作为控制质量的指标来评价肾石通内在质量，并可用作衡量中间品或成品质量是否达到要求是否稳定的标准。目前尚未有一种能准确测定肾石通制剂中总黄酮含量的方法。亟需一种准确、有效和便捷的总黄酮的含量测定方法，来评价肾石通中间品及成品的总黄酮含量及其稳定性。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种准确、有效、便捷的肾石通制剂的检验方法。
为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：
一种肾石通制剂的检验方法，包括以下步骤：
(1)采用薄层色谱法，以金钱草对照药材为对照，体积比为1～3∶1的冰醋酸-水为展开剂，鉴别肾石通中的金钱草；
(2)采用薄层色谱法，以木香对照药材为对照，体积比为6～10∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，5％香草醛硫酸溶液为显色剂，鉴别肾石通中的木香；
(3)采用薄层色谱法，以丹参素钠对照品为对照，体积比为2～4∶1∶0.4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，鉴别肾石通中的丹参；
(4)采用薄层色谱法，以延胡索乙素对照品为对照，体积比为4～5∶1的甲苯-丙酮为展开剂，鉴别肾石通中的延胡索；
(5)采用比色法，以三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系为显色剂，芦丁为对照品，273±2nm为测定波长，测定肾石通中总黄酮的含量。
其中：采用薄层色谱法，用金钱草药材为阳性对照鉴别金钱草包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取肾石通加乙醇浓度为0～95％的乙醇-水混合溶剂超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙醚振摇提取数次，弃乙醚液，再用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加95％乙醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备：取金钱草药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；c.薄层条件：点样于聚酰胺薄膜上，以体积比为2∶1的冰乙酸-水为展开剂，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
采用薄层色谱法，用木香药材为阳性对照鉴别木香包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取肾石通加水超声提取，离心，上清液浓缩至1/5体积，加乙醇使含醇量达80％，搅拌，离心，取上清液浓缩至干，残渣加水溶解，用60-90℃的石油醚提取3次，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备：取木香药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；c.薄层条件：点样于硅胶G薄层板上，以体积比为8∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，喷以5％香草醛硫酸溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
采用薄层色谱法，用丹参素钠为阳性对照鉴别丹参包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取肾石通加水振摇，超声提取，离心，取上清液，加盐酸调节pH至2，用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，制成对照品溶液；c.薄层条件：点样于硅胶G薄层板上，以体积比为25∶10∶4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，置氨蒸气中熏10分钟，在空气中挥尽板上吸附的氨后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
采用薄层色谱法，用延胡索乙素为阳性对照鉴别延胡索包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取肾石通加浓氨试液[氨(NH3)浓度25.0％～28.0％(g/g)]湿润20分钟后，加乙醚振摇提取30分钟后，静置过夜，分取上清液，用30％醋酸提取4次，合并提取液，用浓氨试液调pH值至10～11，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，用水洗至中性，无水硫酸钠脱水后，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备：取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制成对照品溶液；c.薄层条件：点样于硅胶G薄层板上，以体积比为9∶2的甲苯-丙酮为展开剂，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
采用比色法，以芦丁为对照，紫外273nm测定肾石通制剂中的总黄酮含量包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取肾石通加醇浓度为0～100％的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂超声提取，补足重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；b.对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，加醇浓度为0～100％的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂制成每1ml中含芦丁0.8～1.2mg的溶液，作为对照品溶液；c.测定方法：分别量取对照品溶液和供试品溶液，各加入pH5.5，浓度为0.1mol/L的显色剂三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系；放置30分钟后，在273nm波长下，测定吸光值，计算总黄酮含量(以芦丁计)。
在该发明中，肾石通为肾石通浸膏或肾石通制剂，肾石通制剂的剂型为颗粒、片剂、胶囊、微丸或滴丸。
本发明发明人通过大量试验摸索，对肾石通制剂方中十味药材均进行了鉴别研究，首次建立了以金钱草药材为对照，木香药材为对照、丹参素钠为对照鉴别肾石通制剂中金钱草、木香、丹参的薄层色谱法，同时改良了延胡索的薄层色谱条件。新建了以芦丁为对照，在紫外273nm测定总黄酮的含量测定方法。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1.本发明在原有标准的基础上，增加了金钱草、木香、丹参和延胡索的薄层鉴别方法，操作简便，安全，可以准确、快速地进行定性鉴别，专属性强，重现性好；通过新建的总黄酮的含量测定方法，可以全面、准确地反映制剂的质量；从而可以实现对肾石通药品的定性和定量检测，可以有效地控制肾石通产品的质量，防止假冒伪劣产品；
2.本发明的检验方法能对肾石通制剂进行有效的检验，包括中间品肾石通浸膏以及由该配方制成的片剂、胶囊、微丸、滴丸等。
附图说明
图1为采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定肾石通颗粒中的总黄酮时，待测液在400～600nm范围内的紫外-可见分光光谱图；
图2为本发明中芦丁标准溶液与待测液在200～600nm范围内的紫外-可见分光光谱图；a为芦丁标准溶液；b为待测液；
图3为本发明实施例2-4中测定总黄酮时的标准曲线。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例详细说明本发明。
实施例1本发明检验方法的方法学验证
(1)准确度试验
如图2所示，测定肾石通浸膏或肾石通制剂中的总黄酮含量时，芦丁标准溶液与待测液在273nm波长处有共同吸收峰，说明此方法适用于测定肾石通中总黄酮含量，经准确度试验表明，该方法加样回收率可达100.1％，测定结果可靠，见表1。
表1准确度试验结果
(2)精密度试验
经精密度试验表明，该方法精密度良好，见表2。
表2精密度试验结果
(3)稳定性试验
经time-coursre试验表明，其吸光值180分钟内无变化，见表3。
表3稳定性试验结果
(4)重复性试验
结果表明，重复性好。对于同一样品(批号为080601肾石通颗粒)，每次检测结果相对偏差不超过1.0％，见表4。
表4六次测定总黄酮含量的结果比较表
实施例2肾石通浸膏的检验方法
包括成分鉴别和总黄酮含量测定步骤。
A、成分鉴别：
(1)取本品4g，蒸干，加65％乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取5次，每次10ml，弃乙醚液，再用乙酸乙酯10ml振摇提取，挥干乙酸乙酯提取液，残渣加95％乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以冰乙酸-水(2∶1)为展开剂，展开15cm，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品15g，加水100ml，超声处理30分钟，离心，上清液浓缩至20ml，加无水乙醇80ml，搅拌，离心，取上清液浓缩至干，残渣加25ml水使溶解，用石油醚(60-90℃)提取3次，每次25ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品10g，加水50ml，振摇，超声处理30分钟，离心，取上清液，加盐酸调节pH至2，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参素钠对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(25∶10∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟，在空气中挥尽板上吸附的氨后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品4g，蒸干，加入适量的浓氨试液湿润20分钟后，加乙醚50ml，不断振摇提取30分钟后，静置过夜，分取上清液，用30％醋酸分次萃取(4×20ml)，合并萃取液，用浓氨试液调pH值至10～11后，以氯仿分次萃取(4×20ml)，合并氯仿液，蒸馏水洗至中性，无水硫酸钠脱水后，水浴蒸去氯仿，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B、总黄酮含量测定：
(1)将待测样品置水蒸气上蒸干，转置105℃以上干燥箱干燥4小时，然后于干燥器冷却后，研细，准确称取0.012g，置具塞锥形瓶中，加65％乙醇10ml，在25℃超声提取30分钟，补足重量，摇匀，滤过，滤液作为待测液。
(2)取芦丁对照品(由中国药品生物制品检定所提供)适量，精密称定，加65％乙醇制成每1ml含芦丁0.1144mg的对照品溶液。
(3)分别准确吸取对照品溶液0、0.5、1、2、3、4、5ml，分别置25ml量瓶中，各加入0.1mol/L三氯化铝溶液3ml、醋酸-醋酸钾缓冲液(pH5.5)3ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，其浓度分别为0、0.002288、0.004576、0.009152、0.013728、0.018304、0.02288mg/ml。
(4)于273nm波长下分别测吸光值为：0、0.108、0.207、0.424、0.635、0.846、1.069。
(5)以吸光值为纵坐标，浓度为横坐标，建立标准曲线，见图3。
(6)准确吸取待测液3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入0.1mol/L三氯化铝溶液3ml”起，测定吸光值为0.293，从标准曲线上读出待测液浓度为0.053mg/ml。
(7)由计算公式A＝C*V/m×100％(其中，A为吸光度值；C为供试品溶液中的总黄酮浓度；V为供试品溶液的体积；m为样品的质量)，计算，得肾石通浸膏(按干燥品计算)中总黄酮含量为3.7％。
实施例3肾石通颗粒(规格：每袋15克，含生药量7.65克)的检验方法包括成分鉴别和总黄酮含量测定步骤。
A、成分鉴别：
(1)取本品20g，研细，加65％乙醇50ml，超声处理(功率250W，频率33KHz)30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚振摇提取5次，每次30ml，弃乙醚液，再用乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加95％乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以冰乙酸-水(2∶1)为展开剂，展开15cm，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品50g，研细，加水100ml，超声处理(功率250W，频率33KHz)30分钟，离心，上清液浓缩至20ml，加乙醇80ml，搅拌，离心，取上清液浓缩至干，残渣加25ml水使溶解，用石油醚(60-90℃)提取3次，每次25ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品45g，研细，加水90ml，振摇，超声处理(功率250W，频率33KHz)30分钟，离心，取上清液，加盐酸调节pH至2，用乙酸乙酯提取2次，每次60ml，合并乙酸乙酯液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参素钠对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(25∶10∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏10分钟，在空气中挥尽板上吸附的氨后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品20g，研细，加入适量的浓氨试液湿润20分钟后，加乙醚50ml，不断振摇提取30分钟后，静置过夜，分取上清液，用30％醋酸分次萃取(4×20ml)，合并萃取液，用浓氨试液调pH值至10～11后，以氯仿分次萃取(4×20ml)，合并氯仿液，蒸馏水洗至中性，无水硫酸钠脱水后，水浴蒸去氯仿，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B、总黄酮含量测定：
(1)准确称取肾石通颗粒0.4克，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加65％乙醇10ml，在25℃超声提取30分钟，补足重量，摇匀，滤过，得待测液。
(2)标准曲线制作同实施例1。
(3)精密量取待测液2.0ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入0.1mol/L三氯化铝溶液3ml”起，测定吸光值为0.421，由标准曲线可得其浓度为0.11mg/ml，由计算公式，可得肾石通颗粒中总黄酮含量为0.284％。
实施例4肾石通微丸(规格：每袋2克，含生药量7.65克)的检验方法
包括成分鉴别和总黄酮含量测定步骤。
A、成分鉴别：同实施例3。
B、总黄酮含量测定：
(1)称取肾石通微丸适量，研细，精密称定0.1g，置具塞锥形瓶中，加65％乙醇10ml，在25℃超声提取30分钟，补足重量，摇匀，滤过，得待测液。
(2)标准曲线制作同实施例1。
(3)精密量取待测液1.5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入0.1mol/L三氯化铝溶液3ml”起，测定吸光值为0.584，由标准曲线可得其浓度为0.21mg/ml，由计算公式，可得肾石通微丸中总黄酮含量为2.1％
Claims (3)
1.一种肾石通的检验方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用薄层色谱法，以金钱草对照药材为对照，体积比为1～3∶1的冰醋酸-水为展开剂，鉴别肾石通中的金钱草；
(2)采用薄层色谱法，以木香对照药材为对照，体积比为6～10∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，5％香草醛硫酸溶液为显色剂，鉴别肾石通中的木香；
(3)采用薄层色谱法，以丹参素钠对照品为对照，体积比为2～4∶1∶0.4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，鉴别肾石通中的丹参；
(4)采用薄层色谱法，以延胡索乙素对照品为对照，体积比为4～5∶1的甲苯-丙酮为展开剂，鉴别肾石通中的延胡索；
(5)采用比色法，以三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系为显色剂，芦丁为对照品，273±2nm为测定波长，测定肾石通中总黄酮的含量；
所述步骤(1)包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备
取肾石通加乙醇浓度为0～95％的乙醇-水混合溶剂超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙醚振摇提取数次，弃乙醚液，再用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加95％乙醇溶解，作为供试品溶液；
b.对照品溶液的制备
取金钱草药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；
c.薄层条件
点样于聚酰胺薄膜上，以体积比为2∶1的冰乙酸-水为展开剂，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述步骤(2)包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备
取肾石通加水超声提取，离心，上清液浓缩至1/5体积，加乙醇使含醇量达80％，搅拌，离心，取上清液浓缩至干，残渣加水溶解，用60-90℃的石油醚提取3次，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；
b.对照品溶液的制备
取木香药材，按供试品溶液的制备方法制成对照品溶液；
c.薄层条件
点样于硅胶G薄层板上，以体积比为8∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，喷以5％香草醛硫酸溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述步骤(3)包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备
取肾石通加水振摇，超声提取，离心，取上清液，加盐酸调节pH至2，用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；
b对照品溶液的制备
取丹参素钠对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，制成对照品溶液；
c.薄层条件
点样于硅胶G薄层板上，以体积比为25∶10∶4的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，置氨蒸气中熏10分钟后，挥尽板上吸附的氨后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述步骤(4)包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备
取肾石通加氨质量浓度为25.0％～28.0％的浓氨试液湿润20分钟后，加乙醚振摇提取30分钟后，静置过夜，分取上清液，用30％醋酸提取4次，合并提取液，用浓氨试液调pH值至10～11，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，用水洗至中性，无水硫酸钠脱水后，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；
b.对照品溶液的制备
取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制成对照品溶液；
c.薄层条件
点样于硅胶G薄层板上，以体积比为9∶2的甲苯-丙酮为展开剂，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述步骤(5)包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备
取肾石通加醇浓度为0～100％的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂超声提取，补足重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
b.对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品适量，加醇浓度为0～100％的乙醇-水混合溶剂或甲醇-水混合溶剂制成每1ml中含芦丁0.8～1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
c.测定方法
分别量取对照品溶液和供试品溶液，各加入pH5.5，浓度为0.1mol/L的显色剂三氯化铝-醋酸-醋酸盐缓冲液体系；放置30分钟后，在273±2nm波长下，测定吸光值，计算总黄酮含量。
2.如权利要求1所述的一种肾石通的检验方法，其特征在于，所述肾石通为肾石通浸膏或肾石通制剂。
3.如权利要求2所述的一种肾石通的检验方法，其特征在于，所述肾石通制剂的剂型为颗粒、片剂、胶囊、微丸或滴丸。
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