CN102608249A - 一种藤黄健骨丸的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种藤黄健骨丸的检测方法，属于药品检测领域。包括熟地黄、淫羊藿、鹿衔草、肉丛蓉和烫骨碎补的鉴别方法，并且用高效液相色谱法测定所述药物的肉丛蓉和淫羊藿的含量；所述藤黄健骨丸是由熟地黄750g、肉苁蓉500g、淫羊藿500g、鹿衔草500g、烫骨碎补500g、鸡血藤500g、炒莱菔子250g七味药物制成的丸剂。本发明的优点无论是薄层色谱定性鉴别还是高效液相色谱含量限定，都具有较强的专属性，同时为工业化生产产品质量监控提供了一种科学、准确的检测方法。

Description

一种藤黄健骨丸的检测方法

技术领域

本发明涉及药品检测技术领域，具体涉及一种抗骨质增生中药制剂藤黄健骨丸的检测方法。

背景技术

藤黄健骨丸是由熟地黄750g、肉苁蓉500g、淫羊藿500g、鹿衔草500g、烫骨碎补500g、鸡血藤500g、炒莱菔子250g七味药物组成，其主要功效为补肾、活血、止痛。主要用于肥大性脊椎炎、颈椎病、跟骨刺、增生性关节炎、大骨节病，临床疗效显著。方中重用熟地取其补肾中之阳，为君药；配以淫羊藿兴肾中之阳，肉苁蓉的入肾充髓，骨碎补、鹿衔草的补骨镇痛，四味药均为臣药；佐以鸡血藤在补肾益精填髓的基础上，再通畅经路，行气活血，不仅可增强健骨舒筋的作用，而且可收到“通则不痛”的功效，本方中还用菜菔子健骨消食理气，以防补而滋赋之憋。配伍严密合理，以补肾为本，治肾为标，标本兼治。其制备工艺为将鹿衔草、淫羊藿粉碎成细粉，其余熟地黄等五味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，与上述粉末混匀，干燥，粉碎，过筛，每100g粉末加炼蜜80～100g制成浓缩蜜丸，即得。          

藤黄健骨丸现行检测方法收载于部颁标准中药成方制剂第二十册，标准中仅对熟地黄、淫羊藿及鹿衔草作了定性鉴别，不能充分体现该产品的内在质量。

发明内容

本发明提供一种藤黄健骨丸的检测方法，根据本制剂的组分特点，增加了肉丛蓉、骨碎补的薄层色谱鉴别，同时对原熟地黄、淫羊藿以及鹿衔草薄层色谱鉴别进行了方法的改进，又增加了主药淫羊藿及贵重药材肉丛蓉有效成分的检测方法，以达到快速、准确、全面适应于工业化生产的藤黄健骨丸检测方法。

本发明采取的技术方案包括：

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流30～60分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 1∶1或石油醚60～90℃-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

（2）淫羊藿的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理30～60分钟，3000转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水5～8∶2～3∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105℃烘8~10分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）鹿衔草的薄层鉴别：取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷40ml，回流提取30～60分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5∶2～4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；

（4）骨碎补的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水6～10∶4∶0.1或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水7：3：1：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）肉苁蓉的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取30～60分钟，离心10分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各1～2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水3～5：0.5：8～4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2）含量测定

（1）肉丛蓉的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1%醋酸8～10:10～8:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000；

照品溶液的制备  取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml,弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、15ml,合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

（2）淫羊藿的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸25～30:75～70为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明的优点在于专属性强，无论是薄层色谱定性鉴别还是高效液相色谱含量限定，都具有较强的专属性，熟地黄与淫羊藿的薄层鉴别分别在原检测方法的基础上，对其鉴别方法进行了改进.，经方法学验证，具备专属性特性，鹿衔草原有的色谱鉴别由于对照药材出现的斑点多且杂乱不清，不能正确判定结果。所以对该项鉴别进行了全面改进，改进后的薄层色谱鉴别，斑点清晰，易于结果判断，且经方法学验证具备其专属性。肉丛蓉、骨碎补为新增薄层鉴别，经方法学验证，都具备其独有的专属性。新增两项含量测定方法均采用高效液相色谱法，此方法精密度和准确度高于重量法、紫外分光光法和比色法，经含量方法学验证，专属性较强，同时为工业化生产产品质量监控提供了一种科学、准确的检测方法。

 

具体实施方式：

实施例1  藤黄健骨丸制备

   将熟地黄 750g、鹿衔草500g、烫骨碎补500g、肉苁蓉500g、 淫羊藿500g、鸡血藤500g、炒莱菔子250g七味药材，鹿衔草、淫羊藿粉碎成细粉，其余熟地黄等五味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，与上述粉末混匀，干燥，粉碎，过筛，每100g粉末加炼蜜80～100g制成大蜜丸，即得，每丸重3.5g。

实施例2  

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流30分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

（2）淫羊藿的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理30分钟，3000转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水5∶3∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105℃烘8分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）鹿衔草的薄层鉴别：取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷40ml，回流提取30分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；

（4）骨碎补的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水6∶4∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）肉苁蓉的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取30分钟，离心10分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水3：0.5：8为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2）含量测定

（1）肉丛蓉的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1%醋酸8:10:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000；

照品溶液的制备  取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml,弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、15ml,合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每丸含肉丛蓉以松果菊苷（C₃₅H₄₆O₂₀）计，不得少于1.0mg；

（2）淫羊藿的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸25:75为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每丸含淫羊藿以淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计，不得少于2.0mg。

实施例3

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流45分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

（2）淫羊藿的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理45分钟，3000转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各3.5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水7∶2.5∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105℃烘9分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）鹿衔草的薄层鉴别：取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷40ml，回流提取30分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各3.5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5∶3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；

（4）骨碎补的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各3.5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水8∶4∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）肉苁蓉的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取45分钟，离心10分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各1.5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水4：0.5：6为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2）含量测定

（1）肉丛蓉的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1%醋酸9:9:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000；

照品溶液的制备  取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml,弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、15ml,合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每丸含肉丛蓉以松果菊苷（C₃₅H₄₆O₂₀）计，不得少于1.0mg；

（2）淫羊藿的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸27:73为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每丸含淫羊藿以淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计，不得少于2.0mg。

实施例4

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流60分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

（2）淫羊藿的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理60分钟，3000转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水8∶2∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105℃烘10分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）鹿衔草的薄层鉴别：取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷40ml，回流提取60分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5∶4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；

（4）骨碎补的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水10∶4∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）肉苁蓉的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取60分钟，离心10分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水5：0.5：4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2）含量测定

（1）肉丛蓉的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1%醋酸10: 8:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000；

照品溶液的制备  取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml,弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、15ml,合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每丸含肉丛蓉以松果菊苷（C₃₅H₄₆O₂₀）计，不得少于1.0mg；

（2）淫羊藿的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸30: 70为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每丸含淫羊藿以淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计，不得少于2.0mg。

实施例5

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流30分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚60℃-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

其余同实施例1。

实施例6

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流45分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚75℃-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

其余同实施例2。

实施例7

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流60分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚90℃-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

其余同实施例3。

实施例8

骨碎补的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水7：3：1：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

其余同实施例1。

Claims (1)

1.一种藤黄健骨丸的检测方法，其中所述的药物配方是由：熟地黄750g、鹿衔草500g、骨碎补（烫）500g、肉苁蓉500g、 淫羊藿500g、鸡血藤500g、莱菔子（炒）250g，制成的浓缩蜜丸，其特征在于包括下列步骤：

1）鉴别

（1）熟地黄的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加水20ml，再加乙酸乙酯30ml,加热回流30～60分钟，用脱脂棉滤置分液漏斗中，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 1∶1或石油醚60～90℃-乙酸乙酯 1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；

（2）淫羊藿的薄层鉴别：取本品1丸，剪碎，加沸水30ml，超声处理30～60分钟，3000转/分、离心10分钟，取上清液加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙脂30ml振摇提取，取乙酸乙脂液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水5～8∶2～3∶0.25为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇试液，于105℃烘8~10分钟，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）鹿衔草的薄层鉴别：取本品2丸，剪碎，加水30ml，超声处理30分钟，再加三氯甲烷40ml，回流提取30～60分钟，放冷，滤过，分取三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取鹿衔草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸5∶2～4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同的蓝紫色斑点；

（4）骨碎补的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加50%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水液加乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VIB，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-水-醋水6～10∶4∶0.1或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水7：3：1：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）肉苁蓉的薄层鉴别：取本品3丸，剪碎，加水50mL，超声提取30～60分钟，离心10分钟，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，弃去乙醚液，水液用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取松果菊苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验、中国药典2010年版一部附录VI B，吸取上述二种溶液各1～2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条形，以甲醇-醋酸-水3～5：0.5：8～4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

2）含量测定

（1）肉丛蓉的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-1%醋酸8～10:10～8:82为流动相；检测波长为334nm，理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于3000；

照品溶液的制备  取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，浸泡30分钟，超声处理40分钟，功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次30ml,弃去乙醚液，然后再用水饱和正丁醇洗4次30、20、20、15ml,合并正丁醇液，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移到10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

（2）淫羊藿的含量测定

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸25～30:75～70为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，剪碎，取2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率250W，频率33kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。