CN101829224A - 一种中药组合物制剂及制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗骨质增生的中药组合物制剂，该组合物由熟地黄、鹿衔草、骨碎补、鸡血藤、肉苁蓉、淫羊藿等原料药制成，该组合物制剂对颈椎病、腰椎病、膝关节病、肩周炎风湿、类风湿性关节炎、肩周炎、风湿、类风湿性关节炎腰椎间盘突出、跟骨刺、股骨头坏死等患者具有显著疗效。

Description

一种中药组合物制剂及制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物制剂及质量控制方法，特别涉及一种补肾、活血、止痛的中药组合物制剂质量控制方法。

背景技术

颈椎病、腰椎病、膝关节病、肩周炎风湿、类风湿性关节炎、肩周炎、风湿、类风湿性关节炎腰椎间盘突出、跟骨刺、股骨头坏死等症已成为困扰人们生活的一种疑难杂症。本发明组合物选用中药为原料，经科学方法提练精制而成。祖国医学认为：肝肾亏损，气血不调，筋骨失骨，瘀血凝聚乃成骨质病变。本发明根据中医理论，以补腰健肾。滋骨精髓，强壮筋骨，活血利气为治则，标本兼顾，以达到治疗骨质病变之目的。从而达到补肾，活血，止痛之功效。

发明内容

本发明目的在于提供一种补肾，活血，止痛的治疗骨质增生中药组合物制剂；本发明的目的还在于提供该中药组合物制剂的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种补肾，活血，止痛治疗骨质增生的中药组合物，其原料组成为：

熟地黄150-250重量份、鹿衔草80-180重量份、骨碎补(烫)80-180重量份、鸡血藤80-180重量份、肉苁蓉80-180重量份、淫羊藿80-180重量份、莱菔子(炒)40-120重量份。

本发明一种补肾，活血，止痛治疗骨质增生的中药组合物制剂的原料组成优选为：

熟地黄204重量份、鹿衔草136重量份、骨碎补(烫)136重量份、鸡血藤136重量份、肉苁蓉136重量份、淫羊藿、136重量份、莱菔子(炒)86重量份。

本发明提供一种补肾，活血，止痛的中药组合物制剂的制备方法，该方法为：

取1/5-2/3的鸡血藤粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮1-4次，每次0.5-5小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂、注射制剂或外用制剂。

本发明一种补肾，活血，止痛的中药组合物片剂的制备方法优选为：取鸡血藤68重量份粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，制粒，干燥，包糖衣，即得。

本发明一种补肾，活血，止痛的中药组合物颗粒剂的制备方法优选为：以上七味，取鸡血藤68重量份粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，制粒，干燥，即得。

本发明一种补肾，活血，止痛的中药组合物胶囊剂的制备方法优选为：以上七味，取鸡血藤68重量份粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，制粒，干燥，装胶囊，即得。

本发明还提供上述中药组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定和/或正丁醇浸出物检查和/或鉴别中的一种或两种或三种：

A、含量测定：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以5-15∶50-150比例的乙腈-水溶液为流动相；检测波长为230-300nm；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含10-100μg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备取本发明组合物片剂称取0.2-2g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇5-50mL，称定重量，超声处理15-60分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-20μl，注入液相色谱仪，测定；

B、鉴别：取本发明组合物片剂5-50片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，作为供试品溶液；另取鸡血藤对照药材0.1-5g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，制成对照药材溶液；吸取上述溶液各2-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10-20∶1-3∶1比例的苯-乙酸乙酯-甲酸混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C、鉴别：取本发明组合物片剂5-50片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，作为供试品溶液；另取骨碎补对照药材0.1-5g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，制成对照药材溶液；吸取上述溶液各2-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8-20∶0.1比例的氯仿-乙酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

E、正丁醇浸出物检查

称取取本发明组合物片剂，除去糖衣，研细，取粉未0.2-5g，精密称定，加入甲醇5-100mL，称定重量，置水浴上加热回流0.5-3小时，放冷，用甲醇补足减去的重量，滤过，取续滤液5-50mL，置干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水5-50mL，使溶解，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次5-50mL，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥1-5小时，移置干燥器中，放置5-60分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

本发明中药组合物制剂的质量检测方法，该方法优选包括如下含量测定和/或正丁醇浸出物检查和/或鉴别中的一种或两种或三种：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(27∶73)为流动相；检测波长为270nm；对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取本发明组合物片剂15片，除去包衣，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；

鸡血藤薄层鉴别：取本发明组合物片剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液；另取鸡血藤对照药材1g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，制成对照药材溶液；吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

骨碎补薄层鉴别：取本发明组合物片剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液；另取骨碎补对照药材1g，加氯仿30mL，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为对照药材溶液；吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯(10∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

正丁醇浸出物：称取本发明组合物片剂，除去糖衣，研细，取粉未2g，精密称定，加入甲醇50mL，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减去的重量，滤过，取续滤液25mL，置干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25mL，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25mL，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

上述质量检测方法中药组合物制剂优选原料组成为熟地黄204g、鹿衔草136g、骨碎补(烫)136g、鸡血藤136g、肉苁蓉136g、淫羊藿、136g、莱菔子(炒)86g的片剂，并通过如下方法制备：以上七味，取鸡血藤68g粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。

本发明组合物制剂对颈椎病、腰椎病、膝关节病、肩周炎风湿、类风湿性关节炎、肩周炎、风湿、类风湿性关节炎腰椎间盘突出、跟骨刺、股骨头坏死等患者具有显著疗效，质量安全可靠。本发明本发明含量测定方法检测专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。

下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

本发明所有实验例所选用的制剂均为根据本发明实施例1制得的本发明片剂，但是本发明实验结果并不仅限于该片剂。

实验例1：药效学实验

本发明组合物对免疫功能低下小鼠模型特异性免疫功能的影响

1实验动物昆明种健康小鼠，体重18～25g，雌雄各半；豚鼠，雌雄不限。

2试剂和器材分光光度计(岛津UV-265)；阿氏液：葡萄糖2.02g，氯化钠0.42g，枸椽酸钠0.8g，蒸馏水加至1000mL，8磅10min灭菌；都氏试剂：碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，蒸馏水加至1000mL；补体：在3只豚鼠的新鲜血清中加入1/10压积致敏红细胞(sensitization red blood cell，SRBC)，于4℃振荡30min，2000rpm离心10min，取上清液-20℃保存；鸡红细胞(chicken red blood cell，CRBC)：无菌条件下割颈动脉取鸡血，置于有玻璃珠的三角烧瓶中轻摇10min去除纤维蛋白，加入2倍量阿氏液，置于4℃保存。临用前用生理盐水洗涤3次，2000rpm离心10min得压积鸡红细胞，再按所需浓度稀释；1％二硝基氯苯(dini2trochlorobenzene，DNCB)溶液：每次致敏或攻击前新鲜配制1％DNCB丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油为1∶1)5mL倒入小瓶内，盖好并用胶布封口，摇匀后用250mL注射器通过瓶盖取用。

3实验方法：

3.1特异性体液免疫功能试验小鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、阳性药物对照组(多抗甲素5mg/kg)、本发明组合物高剂量组(800mg/kg)、中剂量组(400mg/kg)、低剂量组(100mg/kg)，每组10只。除前两组外，每组每日分别灌胃给药喂服本发明组合物1次，连续11d。后五组动物均于第4天皮下注射环磷酰胺80mg/kg，制造免疫功能低下模型；并给所有小鼠静推5％CRBC生理盐水悬液0.2mL，于第12天摘取眼球取血，分离血清，将血清用生理盐水稀释100倍。试管置冰水浴中，依次加入稀释的血清1.0mL、5％CRBC 0.5mL、10％补体1.0mL，37℃恒温水浴保存保温31min，移至冰浴中终止反应。另设不加CRBC生理盐水的空白对照组。1500rpm离心5min，取上清液110mL加蒸馏水3.0mL，摇匀放置10min，540nm波长下以空白对照管调零测吸光度，计算CRBC半数溶血吸光度值(HC₅₀)。

处死动物取脾脏，匀浆器匀浆，调脾细胞浓度为5×106个/mL，取脾细胞混悬液0.5mL加0.2％鸡红细胞混悬液和1∶10小鼠血清各015mL，混匀，37℃温育1h，离心，取上清液以不加CRBC生理盐水为空白对照管调零，于413nm处用分光光度计测溶血空斑光密度值(OD₄₁₃)。

3.2特异性细胞免疫功能试验小鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、阳性药物(多抗甲素5mg/kg)对照组、本发明组合物高剂量组(800mg/kg)、中剂量组(400mg/kg)、低剂量组(100mg/kg)，每组10只。除前两组外，每组每日分别灌胃给药喂服本发明组合物溶液1次，连续9d。后五组动物均于第4天皮下注射环磷酰胺80mg/kg，制造免疫功能低下模型，同时给所有小鼠腹部去毛，范围3cm×3cm大小，并将1％DNCB溶液50μl均匀涂于去毛处致敏，次日再强化1次。致敏后第4天，将1％DNCB溶液10μl均匀涂于小鼠右耳(前面)进行攻击，攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器于左右耳相同部位取直径8mm耳片，称重。以左右耳片重量之差为肿胀度，观察各组间差异。

4统计学处理数据以均值±标准差

表示，组间比较采用t检验，差异显著水平以P＜0.05为标准。

5实验结果：

5.1特异性体液免疫功能血清溶血素及溶血空斑测定结果显示，模型小鼠的体液免疫功能有明显降低，阳性对照组和高、中、低剂量本发明组合物组该项免疫功能均明显增强，本发明组合物的作用强度呈剂量依赖性，高剂量组的作用略强于阳性对照组。见表1。

表1本发明组合物对模型小鼠血清溶血素和溶血空斑形成的影响(

n＝10)

注：与模型组比较，^*P＜0101；与阳性对照组比较，^ΔP＜0.01。

5.2特异性细胞免疫功能DNCB  引发的迟发型超敏反应(delayedtypehypersensitivity，DTH)结果显示，模型小鼠细胞免疫功能有明显下降，而阳性对照和高、中剂量本发明组合物均有明显增强该项免疫功能的作用，且作用强度呈剂量依赖性，高剂量组的作用略强于阳性对照组，见表2。

表2本发明组合物对模型小鼠迟发型超敏反应的影响(

n＝10)

注与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与阳性对照组比较，^ΔP＜0.05。

本实验结果显示：(1)本发明组合物可明显促进溶血素和溶血空斑的形成，显著提高模型小鼠的体液免疫功能，且其作用呈剂量依赖性；(2)本发明组合物能有效拮抗环磷酰胺所致的免疫功能低下，显著恢复免疫功能低下模型小鼠的迟发型超敏反应，使小鼠的耳肿胀度达到正常水平。本发明组合物既有细胞免疫活性，又有体液免疫功能，且其作用呈剂量依赖性，可能是一种良好的免疫调节剂。

实验例2：淫羊藿苷含量测定方法实验

1、测定方法的选择：

含量测定方法有薄层色谱-紫外分光光度法，薄层色谱扫描法，高效液相色谱法等。本实验采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷含量，分析速度快，灵敏度高，专属性强，应用范围广，重现性与准确性均优于薄层色谱-紫外分光光度法、薄层色谱扫描法。

2、检测波长的选择：

通过淫羊藿苷、本发明组合物颗粒剂、淫羊藿药材、缺淫羊藿阴性对照溶液的全波长扫描光谱比较可以看出：淫羊藿苷在270nm处有紫外最大吸收，且在270m下淫羊藿苷峰形对称，淫羊藿阴性对照溶液无干扰。故选择该波长为检测波长。

3、流动相的优选：

本发明曾以乙腈-水，甲醇-水、甲醇-磷酸水等系统作为流动相作了系列比较。结果表明，采用乙腈-水(27∶73)作为流动相，在该色谱条件下，淫羊藿苷峰形及分离度较好，淫羊藿苷峰与之相邻峰的分离度不低于2.0。淫羊藿苷的保留时间约为14.7min，淫羊藿苷与供试溶液中其它组分达到基线分离，阴性对照液溶液图谱在淫羊藿苷峰位置无吸收峰，阴性对照无干扰。

4、色谱柱考察：

为了保证色谱条件的广泛适用性，考察不同品牌色谱柱对淫羊藿苷的分离，试验结果表明：Diamonsil C₁₈(5μm，250mm×4.6mm)、Agilent ZORBAX Extend-C₁₈(5μm，250mm×4.6mm)、Agilent ZORBAX Eclipse XDB(5μm，250mm×4.6mm)均对淫羊藿苷有良好的分离。

5、本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷提取条件的考察：

为了确保测定结果真实、准确，本发明通过一系列考察，确保制备供试品溶液时将本发明组合物颗粒剂中的淫羊藿苷提取完全。

5.1提取溶剂的选择：

根据淫羊藿苷的理化性质，选择甲醇、乙醇、稀乙醇进行考察，确定提取本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷的最优溶剂。

取本发明组合物颗粒剂适量，研细，取约1.0g样品三份，精密称定，分别精密加甲醇、乙醇、50％甲醇20mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷后用相应提取溶剂补足减失的重量，摇匀，0.45μm的滤膜过滤，取续滤液，即得。精密吸取上述3种供试品溶液10μL注入液相色谱仪，结果见表3。

表3不同提取溶剂的淫羊藿苷提取率比较

通过选用不同溶剂提取本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷的含量，试验结果表明稀乙醇较乙醇、甲醇提取率均高，所以最终选择稀乙醇作为提取溶剂。

5.2提取方法的选择：

中药制剂常用的提取方法有超声波提取法、回流提取法、冷浸法。通过试验优选提取本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷的最佳提取方法。

方法一：回流法提取：取本发明组合物颗粒剂适量，研细，取约1.0g样品，精密称定，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，回流处理30分钟，放冷后用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm的滤膜过滤，取续滤液，即得。

方法二：超声法提取：按方法一进行实验，将回流法改为超声提取。

方法三：冷浸法提取：按方法一进行实验，将回流法改为冷浸过夜。

精密吸取上述3种供试品溶液10μL注入液相色谱仪，结果见表4。

表4不同方法提取法提取淫羊藿苷提取率的比较

通过三种不同提取方法的比较发现超声法、回流法提取淫羊藿苷的效率较冷浸高。超声法较回流法操作简单，所以选择超声法提取本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷。

5.3提取溶剂量考察：

溶剂量是影响提取效率的一个很重要的影响因素，溶剂量越大，提取效率越高，但是溶剂量增加到一定量以后，提取效率增加不大。所以我们对提取的溶剂量加以考察：

取本发明组合物颗粒剂适量，研细，取约1.0g样品三份，精密称定，分别精密加稀乙醇10mL、20mL、40mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷后用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm的滤膜过滤，取续滤液，即得。

分别精密吸取上述3个供试品溶液5μL、10μL、20μL注入液相色谱仪，结果见表5。

表5不同提取溶剂量提取淫羊藿苷提取率的比较

试验结果表明，25mL稀乙醇即可将本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷基本提取完全。

5.4提取时间的考察：

提取时间对提取效率影响较大，提取时间短，提取效率不高，延长提取时间可以增加提取效率，但过长时间的提取耗时，而且对提高提取效率增加作用不大。所以我们对提取时间加以考察：

取本发明组合物颗粒剂适量，研细，取约1.0g样品三份，精密称定，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，分别超声处理15、30、45分钟，放冷后用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm的滤膜过滤，取续滤液，即得。

精密吸取上述3个供试品溶液10μL注入液相色谱仪，结果见表6：

表6：不同提取时间提取淫羊藿苷提取率的比较

由试验结果可以看出：15min提取时间较短所以提取不完全，30min、45min提取率相差不大，表明30min即可将制剂中淫羊藿苷提取完全，所以确定提取本发明组合物颗粒剂中淫羊藿苷的时间为30min。

综上试验最后确定本发明组合物片剂中淫羊藿苷含量测定的色谱条件及对照品和供试品制备方法为：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-乙腈(73∶27)为流动相；检测波长为270nm。

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本发明组合物15片，除去包衣，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

实验例3：淫羊藿苷含量测定方法验证实验

检测仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪

色谱柱：安捷伦(C₁₈ 4.6×150mm，5μm)

流动相：乙腈-水(27∶73)

流速：1.0mL/min    进样量：10μl

检测波长：270nm

对照品来源：淫羊藿苷购于中国药品生物制品检定所

样品批号：04061001、04061102、04061203

供试品溶液制备方法：取本发明组合物除去包衣，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照样品溶液的制备：按本发明组合物制备工艺制备缺淫羊藿的空白样品，并按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品液。

1.含量测定方法考察：

1.1线性关系考察取对照品溶液(64.2μg/mL)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl注入高效液相色谱仪，实验结果见表7，并绘制标准曲线，表明淫羊藿苷在0.1284μg-0.7704μg间呈线性关系，其回归方程为：

Area＝2408.0487*Amt+26.4754(r＝0.9999)

表7淫羊藿苷标准曲线

1.2精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见表8：

表8精密度实验

1.3稳定性试验取对照品溶液(64.2μg/mL)，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见表9：

表9稳定性实验

1.4重现性试验取同一批号样品5份，对每份进行测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见表10：

表10重现性实验

1.5回收率试验精密称取已知含量的同一批号的样品0.5g再分别精密加入淫羊霍苷对照品(62.4μg/mL)5mL，按供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见表11：

表11回收率实验

2.样品含量测定：

表12样品的含量测定

根据以上数据，将含量限度定为：本发明组合物每片含淫羊霍按淫羊霍苷(C₃₃H₄₀0₁₅)计，不得少于0.8mg。

实验例4：鸡血藤薄层鉴别试验

鸡血藤中主要含有异黄酮、二氢黄酮类化合物，为鸡血藤的有效成分。黄酮类化合物主要含有芒柄花素等异。这类成分为脂溶性成分，成分，极性低，易溶于低级性有机溶剂，如：石油醚、氯仿、醋酸乙酯等。本处方药味较多，成分复杂，本发明中利用薄层色谱检测鸡血藤中的黄酮类成分，以此鉴定制剂中含有鸡血藤药材。

1、薄层色谱方法的选择：

常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析、聚酰胺薄层层析等。硅胶薄层适用于低极性成分，纸层析适用于大极性成分如多糖类成分，聚酰胺层析适用于含有羟基较多的成分，鸡血藤中成分多为黄酮类成分，极性较小，所以选择硅胶层析进行试验。

2、供试品的制备：

对照药材溶液制备方法：取鸡血藤对照药材1g，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为对照药材溶液。

吸取供试品、对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

2.1鸡血藤有效成分的富集、纯化：

本处方中药味较多，成份复杂，制剂中含的鸡血藤中低极性类成分在处方中所占比例较少，所以需要对制剂中的鸡血藤低极性成分进行富集、纯化。常用低极性有机溶液萃取的方法提取低极性类成分。实验方法见表13：

表13鸡血藤有效成分的富集、纯化方法比较

供试品溶液1中所含成分复杂，溶液非常粘稠、混浊，点样量最大只能为5μl，未在鸡血藤对照药材相对应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且杂质很多。供试品溶液2、3溶液清澈，无混浊，供试品溶液2色谱中，在鸡血藤对照药材相对应的位置有其他斑点，对鉴别有干扰。供试品溶液3色谱中，在鸡血藤对照药材相对应的位置上显相同颜色的荧光斑点，斑点位置确定，显色清晰。确定使用氯仿提取中药组合制剂中的鸡血藤成分。

2.2提取溶剂量的考察：

为了更真实地反应中药的质量，本实验通过试验选择提取中药组合物制剂中鸡血藤化学成分的最优提取溶剂量、最佳提取时间。

取中药组合物制剂20片三份，分别除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿25、50、100mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液1、2、3。

吸取上述三种供试品溶液各15μl，按上述方法点样、展开、检识。

供试品1、2、3在鸡血藤对照药材相对应的位置上均显相同颜色的斑点，供试品2、3斑点较供试品1更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明50mL氯斑点较供试品1更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明50mL氯仿可将制剂中的鸡血藤成分基本萃取完全。所以确定提取中药组合物制剂中鸡血藤化学成分的最优提取溶剂量为50mL氯仿。

2.3提取时间的考察

取中药组合物制剂20片三份，分别除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理15、30、60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液1、2、3。

吸取上述三种供试品溶液各15μl，按上述方法点样、展开、检识。

供试品1、2、3在鸡血藤对照药材相对应的位置上均显相同颜色的斑点，供试品2、3色谱中较供试品1色谱中的斑点更清晰、明显，但供试品2、3的斑点颜色基本相似，无差别，表明超声提取30分钟可将制剂中的鸡血藤成分基本萃取完全。因此确定提取中药组合物制剂中鸡血藤化学成分的最优提取时间为30分钟。

2.4供试品点样量的考察

薄层色谱的点样量有一定要求，点样量太小，斑点不清晰；点样量太大，增加点样困难，容易造成薄层过载，斑点拖尾，降低分离度，增加分离的难度，所以需要对供试品溶液的点样量进行考察。

取中药组合物制剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液。

分别吸取供试品溶液5、15、25μl，及鸡血藤对照药材溶液15μl点于同一硅胶G板上，展开、检识。

点样量为5μl的供试品在鸡血藤对照药材相对应的位置上荧光斑点强度较低，不宜观察；点样量为15μl的供试品在骨碎补对照药材相对应的位置上荧光斑点明显，斑点大小适中，无拖尾，前后无干扰；点样量为25μl的供试品在鸡血藤对照药材相对应的位置上荧光斑点较大，明显拖尾，斑点与前后荧光斑点相连，而且点样时由于点样次数较多，破坏了硅胶薄层的表面。因次确定供试品的最佳点样量为15μl。

2.5对照药材点样量的确定：

对照药材制备方法应与供试品制备方法相同，现对对照药材溶液点样量进行考察。

分别吸取鸡血藤对照药材溶液5、15、25μl点于同一硅胶G板上，展开、检识。

鸡血藤对照药材溶液点样量为5μl时，荧光斑点强度较低，不宜观察；鸡血藤对照药材溶液点样量为15μl时，鸡血藤对照药材薄层上荧光斑点清晰，大小适中，无拖尾，前后无干扰；鸡血藤对照药材溶液点样量为25μl时，鸡血藤对照药材薄层上荧光斑点较大，与前后荧光斑点相连，且明显拖尾，另外，由于点样大，点样次数较多，易对硅胶薄层表面造成破坏。因此，确定鸡血藤对照药材溶液的最佳点样量为15μl。

2.6展开剂溶剂及比例的选择：

薄层层析展开剂溶剂的选择，应根据化合物的性质及“相似相溶”的原则选择合适的展开溶剂。鸡血藤成分极性较小，因此选择甲苯和极性稍大的醋酸乙酯为展开剂，加入加酸调节酸性，通过实验选择合适的比例，使所需成分得到分离。

按上述方法制备供试品溶液和对照药材溶液。

取缺确鸡血藤的鸡血藤阴性制剂按供试品制备方法制备缺鸡血藤阴性对照溶液。

取5块硅胶G薄层板，每块薄层均点样供试品、鸡血藤对照药材、缺鸡血藤阴性对照溶液备15μl，分别以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(45∶2∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(30∶2∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)、乙酸乙酯-甲酸(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光(365nm)下进行观察。

结果如下：薄层板1以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(45∶2∶1)为展开剂，由于展开剂极性太低，供试品、对照药材中鸡血藤成分均未展开；薄层板2以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(30∶2∶1)为展开剂，极性较低，展开不充分，供试品中鸡血藤成分未与其他斑点分离；薄层板3以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，极性适中，对照药材品中目标斑点Rf值为0.45，且与其他成分分离良好，供试品中在鸡血藤对照药材相对应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且该鸡血藤成分-目标斑点与其他成分斑点分离良好，阴性无干扰；薄层板4、5分别以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)、乙酸乙酯-甲酸(2∶1为展开剂，由于展开剂极性太大，供试品、对照药材中鸡血藤成分Rf值较大，与其他成分斑点重叠，分离失败。所以确定分离中药组合物制剂中鸡血藤成分的最优薄层展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)。

2.7显色条件的选择：

鸡血藤中的成分日光下没有颜色，但在紫外下却显荧光，因此，考虑直接置紫外光灯(365nm)下观察荧光或使用通用型显色剂显色后观察。常用的通用型显色剂为10％的硫酸乙醇溶液。

按上拾方法制备供试品溶液、对照药材溶液。取两块硅胶薄层分别点样、展开、晾干。

方法一：薄层1喷以10％的硫酸乙醇溶液；

方法二：薄层2置紫外灯(365nm)下检视；

方法一薄层在日光下观察，供试品溶液与对照药材溶液色谱均没有观察到明显颜色的斑点，且在紫外(365nm)下均无荧光。方法二薄层在紫外(365nm)下在鸡血藤对照药材相对应的位置上，供试品溶液有明显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，前后无干扰。因此确定分离中药组合物制剂中鸡血藤成分的最佳显色条件为置紫外光(365nm)下观察荧光。

综上试验最后确定中药组合物制剂中鸡血藤的薄层色谱鉴别条件为：

取中药组合物制剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液。另取鸡血藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实验例5：骨碎补薄层鉴别试验

骨碎补中主要含有黄酮类化合物，为骨碎补的有效成分。黄酮类化合物主要含有橙皮苷、柚皮苷等。这类成分为脂溶性成分，成分，极性低，易溶于低级性有机溶剂，如：石油醚、氯仿、醋酸乙酯等。本处方药味较多，成分复杂，本发明中利用薄层色谱检测骨碎补中的黄酮类成分，以此鉴定制剂中含有骨碎补药材。

1、薄层色谱方法的选择：

常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析、聚酰胺薄层层析等。硅胶薄层适用于低极性成分，纸层析适用于大极性成分如多糖类成分，聚酰胺层析适用于含有羟基较多的成分，骨碎补中成分多为黄酮类成分，极性较小，所以选择硅胶层析进行试验。

2对照药材点样量的确定：

对照药材制备方法应与供试品制备方法相同，现对对照药材溶液点样量进行考察。

分别吸取骨碎补对照药材溶液5、15、25μl点于同一硅胶G板上，展开、检识。

骨碎补对照药材溶液点样量为5μl时，荧光斑点强度较低，不宜观察；骨碎补对照药材溶液点样量为15μl时，骨碎补对照药材薄层上荧光斑点清晰，大小适中，无拖尾，前后无干扰；骨碎补对照药材溶液点样量为25μl时，骨碎补对照药材薄层上荧光斑点较大，与前后荧光斑点相连，且明显拖尾，另外，由于点样大，点样次数较多，易对硅胶薄层表面造成破坏。因此，确定骨碎补对照药材溶液的最佳点样量为15μl。

3展开剂溶剂及比例的选择：

薄层层析展开剂溶剂的选择，应根据化合物的性质及“相似相溶”的原则选择合适的展开溶剂。骨碎补成分极性较小，因此选择氯仿和极性稍大的醋酸乙酯为展开剂，通过实验选择合适的比例，使所需成分得到分离。

按上述方法制备供试品溶液和对照药材溶液。

取缺确骨碎补的骨碎补阴性制剂按供试品制备方法制备缺骨碎补阴性对照溶液。

取5块硅胶G薄层板，每块薄层均点样供试品、骨碎补对照药材、缺骨碎补阴性对照溶液各15μl，分别以氯仿、氯仿-乙酸乙酯(50∶0.1)、氯仿-乙酸乙酯(10∶0.1)、氯仿-乙酸乙酯(5∶0.1)、乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，置紫外光(365nm)下进行观察。

结果如下：薄层板1以氯仿为展开剂，由于展开剂极性太低，供试品、对照药材中骨碎补成分均未展开；薄层板2以氯仿-乙酸乙酯(50∶0.1)为展开剂，极性较低，展开不充分，供试品中骨碎补成分未与其他斑点分离；薄层板3以氯仿-乙酸乙酯(10∶0.1)为展开剂，极性适中，对照药材品中目标斑点Rf值为0.45，且与其他成分分离良好，供试品中在骨碎补对照药材相对应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且该骨碎补成分-目标斑点与其他成分斑点分离良好，阴性无干扰；薄层板4、5分别以氯仿-乙酸乙酯(5∶0.1)、乙酸乙酯为展开剂，由于展开剂极性太大，供试品、对照药材中骨碎补成分Rf值较大，与其他成分斑点重叠，分离失败。所以确定分离中药组合物制剂中骨碎补成分的最优薄层展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)。

4显色条件的选择：

骨碎补中的成分日光下没有颜色，但在紫外下却显荧光，因此，考虑直接置紫外光灯(365nm)下观察荧光或使用通用型显色剂显色后观察。常用的通用型显色剂为10％的硫酸乙醇溶液。

按上拾方法制备供试品溶液、对照药材溶液。取两块硅胶薄层分别点样、展开、晾干。

方法一：薄层1喷以10％的硫酸乙醇溶液；

方法二：薄层2置紫外灯(365nm)下检视；

方法一薄层在日光下观察，供试品溶液与对照药材溶液色谱均没有观察到明显颜色的斑点，且在紫外(365nm)下均无荧光。方法二薄层在紫外(365nm)下在骨碎补对照药材相对应的位置上，供试品溶液有明显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，前后无干扰。因此确定分离中药组合物制剂中骨碎补成分的最佳显色条件为置紫外光(365nm)下观察荧光。

综上试验最后确定中药组合物制剂中骨碎补的薄层色谱鉴别条件为：

取中药组合物制剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液。另取骨碎补对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯(10∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

具体实施方式

实施例1

熟地黄    204g    鹿衔草    136g    骨碎补(烫)    136g    鸡血藤    136g    肉苁蓉    136g    淫羊藿    136g    莱菔子(炒)    86g

制法：以上七味，取鸡血藤68g粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。

【鉴别】

(1)取本品，置显微镜下观察：石细胞圆形、长圆形或类多角形。壁厚，胞腔含橙红色或棕色物。

(2)取本品20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50ml，超声处30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取鸡血藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)另取骨碎补对照药材1g，加氯仿30ml，超声处30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取鉴别(2)项下的供试品溶液15μl，对照药材溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯(10∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】正丁醇浸出物：称取本品，除去糖衣，研细，取粉未2g，精密称定，加入甲醇50ml，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减去的重量，滤过，取续滤液25ml，置干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25ml，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品按干燥品计算，含正丁醇浸出物不得少于2.0％。

【含量测定】照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(27∶73)为流动相；柱温40℃；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品15片，除去包衣，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声处30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40015)计，不得少于0.05mg。

实施例2

熟地黄    204g    鹿衔草    136g    骨碎补(烫)    136g    鸡血藤    136g  肉苁蓉    136g    淫羊藿    136g    莱菔子(炒)    86g

制法：以上七味，取鸡血藤68g粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。

【鉴别】

(1)取本品20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50ml，超声处30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取鸡血藤对照药材1g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50ml，超声处30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本品20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50ml，超声处30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取骨碎补对照药材1g，加氯仿30ml，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯(10∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(27∶73)为流动相；柱温40℃；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50g的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品15片，除去包衣，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声处30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40015)计，不得少于0.05mg。

实施例3

熟地黄    204g    鹿衔草    136g    骨碎补(烫)    136g    鸡血藤    136g    肉苁蓉    136g    淫羊藿    136g    莱菔子(炒)    86g

制法：取鸡血藤68重量份粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加辅料适量，混匀，干燥，装胶囊，即得1000粒。

含量测定：

照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(27∶73)为流动相；柱温40℃检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备，取本品15粒，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40015)计，不得少于0.05mg。

Claims (5)

1.一种补肾，活血，止痛治疗骨质增生的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

熟地黄150-250重量份、鹿衔草80-180重量份、骨碎补(烫)80-180重量份、鸡血藤80-180重量份、肉苁蓉80-180重量份、淫羊藿80-180重量份、莱菔子(炒)40-120重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

熟地黄204重量份、鹿衔草136重量份、骨碎补(烫)136重量份、鸡血藤136重量份、肉苁蓉136重量份、淫羊藿、136重量份、莱菔子(炒)86重量份。

3.如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

取1/5-2/3的鸡血藤粉碎成细粉，剩余的鸡血藤与其余生地黄等六味加水煎煮1-4次，每次0.5-5小时，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏，加入上述粉末，混合，干燥，粉碎，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、口服液体制剂或外用制剂。

4.如权利要求1或2所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定和/或正丁醇浸出物检查和/或鉴别中的一种或两种或三种：

A、含量测定：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以5-15∶50-150比例的乙腈-水溶液为流动相；检测波长为230-300nm；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含10-100μg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取本发明组合物片剂称取0.2-2g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇5-50mL，称定重量，超声处理15-60分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-20μl，注入液相色谱仪，测定；

B、鉴别：取本发明组合物片剂5-50片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，作为供试品溶液；另取鸡血藤对照药材0.1-5g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，制成对照药材溶液；吸取上述溶液各2-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10-20∶1-3∶1比例的苯-乙酸乙酯-甲酸混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C、鉴别：取本发明组合物片剂5-50片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，作为供试品溶液；另取骨碎补对照药材0.1-5g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿5-100mL，超声处理5-60分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿0.5-5mL使溶解，制成对照药材溶液；吸取上述溶液各2-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8-20∶0.1比例的氯仿-乙酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

D、正丁醇浸出物检查

称取取本发明组合物片剂，除去糖衣，研细，取粉未0.2-5g，精密称定，加入甲醇5-100mL，称定重量，置水浴上加热回流0.5-3小时，放冷，用甲醇补足减去的重量，滤过，取续滤液5-50mL，置干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水5-50mL，使溶解，用水饱和的正丁醇提取1-5次，每次5-50mL，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥1-5小时，移置干燥器中，放置5-60分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

5.如权利要求4所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定和/或正丁醇浸出物检查和/或鉴别中的一种或两种或三种：

含量测定：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；27∶73以乙腈-水为流动相；检测波长为270nm；对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取本发明组合物片剂15片，除去包衣，研细，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；

鸡血藤薄层鉴别：取本发明组合物片剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液；另取鸡血藤对照药材1g，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，制成对照药材溶液；吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶2∶1甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

骨碎补薄层鉴别：取本发明组合物片剂20片，除去糖衣，研碎，粉末置锥形瓶中，加氯仿50mL，超声处理30分钟，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为供试品溶液；另取骨碎补对照药材1g，加氯仿30mL，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加氯仿2mL使溶解，作为对照药材溶液；吸取上述溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10∶0.1氯仿-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

正丁醇浸出物：称取本发明组合物片剂，除去糖衣，研细，取粉未2g，精密称定，加入甲醇50mL，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用甲醇补足减去的重量，滤过，取续滤液25mL，置干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，残渣加水25mL，使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次25mL，合并正丁醇液，置干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；每片含淫羊藿以淫羊藿苷计，不得少于0.05mg。