CN101837105B - 一种中药组合物制剂及制备方法和检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂,该组合物由防己100-200重量份、通草50-150重量份、桂枝25-125重量份、姜黄50-150重量份、石膏200-400重量份、薏苡仁100-300重量份、木瓜100-200重量份、海桐皮50-105重量份、忍冬藤100-300重量份、黄柏100-200重量份、滑石粉100-200重量份、连翘100-300重量份制成,该组合物制剂对急、慢性风湿性关节炎,慢性风湿性关节炎活动期有很好的疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物制剂及检测方法,特别涉及一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂检测方法。
背景技术
风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性自身免疫性疾病。滑膜炎持久反复发作,可导致关节内软骨和骨的破坏,关节功能障碍,甚至残废。血管炎病变累及全身各个器官,故本病又称为类风湿病,已成为困扰人们生活的一种疑难杂症。本发明根据中医理论,以清热利湿,活血通络为治则,标本兼顾,以达到治疗风湿性关节炎之目的。
发明内容
本发明第一个目的在于提供一种清热利湿,活血通络的中药组合物;本发明的第二个目的在于提供该中药组合物制剂的制备方法;本发明的第三个目的在于提供该中药组合物制剂的质量检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的:
本发明一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂的原料组成为:
防己100-200重量份、通草50-150重量份、桂枝25-125重量份、姜黄50-150重量份、石膏200-400重量份、薏苡仁100-300重量份、木瓜100-200重量份、海桐皮50-105重量份、忍冬藤100-300重量份、黄柏100-200重量份、滑石粉100-200重量份、连翘100-300重量份。
本发明一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂的原料组成优选为:防己150重量份、通草100重量份、桂枝75重量份、姜黄100重量份、石膏300重量份、薏苡仁200重量份、木瓜150重量份、海桐皮100重量份、忍冬藤200重量份、黄柏150重量份、滑石粉150重量份、连翘200重量份。
本发明一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂的制备方法为:
取滑石粉80-120重量份与其余防己等十一味加水煎煮1-5次,每次0.5-5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床或药学上可接受的剂型,包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或口服液体制剂。
本发明一种清热利湿,活血通络的中药组合物胶囊剂的制备方法优选为:以上十二味,取滑石粉100重量份与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,即得。
本发明一种清热利湿,活血通络的中药组合物颗粒剂的制备方法优选为:以上十二味,取滑石粉100g与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉及辅料适量,混匀,制粒,干燥,即得。
本发明一种清热利湿,活血通络的中药组合物片剂的制备方法优选为:以上十二味,取滑石粉100g与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉及适量辅料,混匀,制粒,干燥,压片,即得。
本发明提供一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂的质量检测方法,该方法包括如下含量测定和/或鉴别中的一种或几种:
A、含量测定:色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;25-75∶75-25比例的乙腈-(0.01-0.5%)磷酸(每100ml加十二烷基磺酸钠0.05-0.2g)为流动相;检测波长为230-300nm。对照品溶液的制备:取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含5-50μg的溶液,即得。供试品溶液的制备:取该组合物制剂0.5-5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液5-50ml,密塞,称定重量,超声处理5-60分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用0.2-0.45μm微孔滤膜滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;0.2-0.5g组合物制剂含盐酸小檗碱(C20H18CLNO4),不得少于0.066mg。
B、鉴别:取该组合物制剂粉末0.5-10g,加乙醇5-50ml,回流0.25-3小时,滤过,滤液蒸干,加0.1-10%盐酸5-50ml溶解,加浓氨水调节pH值至8-11,用氯仿提取1-5次,每次5-25ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇0.5-5ml使溶解,作为供试品溶液。取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含0.1-5mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液。分别吸取上述两种溶液0.5-5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以40-60∶8-12∶0.5比例的氯仿-甲醇-浓氨试液混合溶剂为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干。供试品色谱 中,在与粉防己碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点。
C、鉴别:取该组合物制剂的粉末0.5-10g,加甲醇10-100ml,振摇提取0.5-3小时,滤过,滤液蒸至0.5-5ml,作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5-5g,加乙醇5-50ml,超声处理1-30分钟,过滤,滤液浓缩至0.1-5ml,作为对照药材溶液。分别吸取上述两种溶液5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以8-12∶3-7∶0.2比例的石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸混合溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。
上述质量控制方法优选包括如下含量测定:色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;1∶1的乙腈-0.1%磷酸(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相;检测波长为265nm。对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得。供试品溶液的制备取本品粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
上述质量控制方法中优选包括如下鉴别法:
防己及黄柏薄层鉴别:鉴别:取本品的内容物3g,加乙醇20ml,回流1小时,滤过,滤液蒸干,加1%盐酸15ml溶解,加浓氨水调节pH值至9,用氯仿提取两次,每次10ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以50∶10∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干。供试品色谱中,在与粉防已碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点。
连翘薄层鉴别:取本品内容物2g,加甲醇40ml,振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液。另取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,过滤,滤液浓缩至1ml,作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10∶4∶0.2的石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。
上述质量控制方法中药组合物制剂优选原料组成为防己150重量份、通草100重量份、 桂枝75重量份、姜黄100重量份、石膏300重量份、薏苡仁200重量份、木瓜150重量份、海桐皮100重量份、忍冬藤200重量份、黄柏150重量份、滑石粉150重量份、连翘200重量份的胶囊剂,并通过如下方法制备:以上十二味,取滑石粉100重量份与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,即得胶囊剂。
本发明中药组合物制剂具备很好的清热利湿,活血通络的作用,用于急、慢性风湿性关节炎,慢性风湿性关节炎活动期有很好的疗效。对盐酸小檗碱含量测定和防己、黄柏及连翘的薄层检测,经实验证明:本发明含量测定方法检测专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高,更加适合工业化的生产,真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。
下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
本发明所有实验例所选用的制剂均为根据本发明实施例1制得的本发明胶囊剂,但是本发明实验结果并不仅限于该胶囊剂。
实验例1:药效学实验
本发明组合物对抗炎功能的影响。
1、试验试剂及试验动物
药品:本制剂组合物(按实施例1的方法制备)。实验前用蒸馏水稀释:大鼠给药浓度为33.2%,16.6%,8.3%(g生药·100ml-1),灌胃(ig)体积为1ml·100g-1体重;小鼠给药浓度为16.6%,8.3%,4.15%(g生药·100ml-1),灌胃(ig)体积为0.2ml·10g-1体重。地塞米松磷酸钠注射液;硫酸庆大霉素注射液;角叉菜胶,以生理盐水配制成浓度为1%的溶液;伊文思蓝。
动物:小鼠(昆明种,雄性,体重(20±2)g);大鼠(SD,雄性,体重150~180g)。
2、试验方法与结果:
2.1本制剂组合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响取健康雄性小鼠50只,按体重随机分为5组。分别灌胃蒸馏水作为空白对照组,本制剂组合物1.66,0.833,0.415g·kg-1作为给药组、腹腔注射0.005g·kg-1地塞米松作为阳性对照组。每天给药1次,连续3d。末次给药30min后,将20μl二甲苯涂于小鼠左耳廓两面致炎,右耳不涂为对照,致炎1h后处死动物,用直径8mm的打孔器在两耳对称位置取下左右耳片称重。
耳廓肿胀度(mg)=左耳片重量-右耳片重量。结果见表1。
表1 本制剂组合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(X±s)
与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01(n=10)
结果表明,本制剂组合物组能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀。
2.2本制剂组合物对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响分组及给药同“2.1”项,末次给药30min后,尾静脉注射1%伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml·10g-1,随即腹腔注射0.6%醋酸0.1ml·10g-1。20min后将小鼠脱颈处死,剪开腹腔,用6ml生理盐水冲洗腹腔,合并冲洗液离心(2000rpm)10min后取上清液,在紫外-可见分光光度计590nm处测吸收值(OD)。结果见表2。
表2 本制剂组合物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(X±s)
与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001(n=10)
试验结果表明,本制剂组合物能显著抑制醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高。
2.3本制剂组合物对蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响取雄性大鼠50只,按体重随机分为5组。分别灌胃蒸馏水作为空白对照组,本制剂组合物作为给药组,腹腔注射0.005g·kg-1地塞米松作为阳性对照组。每天给药1次,连续给药3d。致炎前各鼠右后足踝关节处作标记,按足容积法测定各鼠右后足容积两次,取平均值作为各鼠致炎前正常足容积。末次给药后30min,每只大鼠右后足跖皮下进针至踝关节附近皮下,注射10%新鲜鸡蛋清溶液0.1ml/只致炎,分别于致炎后30,60,120,240min,按容积法测定各鼠右后足容积,观察致炎后 大鼠足容积的变化值,计算肿胀度。
肿胀度(ml)=致炎后足容积-致炎前足容积。结果见表3。
2.4本制剂组合物对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响分组及给药同“2.3”项,每天给药1次,连续3d。实验前在各鼠右后足踝关节处作标记,按足容积法测定各鼠足容积两次,取平均值作为各鼠致炎前正常足容积。末次给药后30min,每只大鼠右后足跖皮下进针至踝关节附近皮下,注射1%角叉菜胶0.1ml致炎,同时灌胃生理盐水4ml/100g行水负荷,分别于致炎后60,120,240,300,360min,同法测定各鼠右后足容积,观察致炎前后大鼠足容积的变化值,计算肿胀度。
肿胀度(ml)=致炎后足容积-致炎前足容积。结果见表4。
2.5本制剂组合物对小鼠棉球肉芽肿的影响取健康雄性小鼠50只,将左侧腹股沟皮肤消毒后,用眼科剪剪开一小口,以眼科镊将高压灭菌棉球(10±0.5)mg,庆大霉素浸润,植入小鼠左侧腋窝皮下。分组及给药同“2.1”项。给药1次·d-1,连续7d。末次给药24h后,将棉球连同周围结缔组织一起取出,剔除脂肪,60℃烘箱中烘干、称重,将称得的重量减去棉球的原重量即得肉芽肿重量,并计算其肉芽指数(mg·10g-1)=肉芽重/体重×10。结果见表5。
表5 本制剂组合物对小鼠棉球肉芽肿的影响(X±s)
与空白对照组比较,*P<0.05.
试验结果表明,本制剂组合物1.66,0.83g·kg-1能明显抑制小鼠棉球肉芽肿的形成。本制剂组合物能明显减轻二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀,减轻蛋清、角叉菜胶所致大鼠足肿胀,显著抑制醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高,说明对炎症早期血管通透性增高和水肿有明显的抑制作用,对小鼠棉球肉芽肿亚急性炎症也具有抑制作用。实验结果表明本制剂组合物具有清热利湿,活血通络的功效。
实验例3:盐酸小檗碱含量测定方法优选
本发明组合物由黄柏、防己、通草、桂枝、姜黄、石膏、薏苡仁、木瓜、海桐皮、忍冬藤、滑石粉、连翘等11味中药组成。盐酸小檗碱为黄柏的主要有效成份。测定本发明组合物中盐酸小檗碱的含量有助于控制本中成药制剂的质量,确保临床用药的安全、有效。
1、测定方法的选择:
根据文献报道,黄柏的含量测定方法有薄层色谱-紫外分光光度法,薄层色谱扫描法,高效液相色谱法等。本实验采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量,分析速度快,灵敏度高,专属性强,应用范围广,重现性与准确性均优于薄层色谱-紫外分光光度法、薄层色谱扫描法。
2、HPLC实验条件的选择:
通过文献查找及资料查询选择以下文献曾报道过的中药复方制剂中的盐酸小檗碱的HPLC实验条件进行测定:
供试品溶液、对照品溶液、缺黄柏阴性样品溶液制备方法:
供试品溶液的制备取本发明组合物粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。
对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得。
阴性对照样品溶液的制备:按本发明组合物制备工艺制备缺黄柏的空白样品,并按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品液。
色谱柱:Diamonsil C18(5μm,250mm×4.6mm)
液相条件1:
流动相:乙腈:0.033mol/L磷酸二氢钾溶液(28∶72);检测波长345nm;流速1.0ml/min;柱温30℃;
液相条件2:
流动相:乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值=3)(28∶72);检测波长270nm;流速1.0ml/min;柱温40℃;
液相条件3:
流动相:乙腈:0.4%磷酸溶液(28∶72);检测波长265nm;流速1.0ml/min;柱温25℃;
利用以上中药复方中盐酸小檗碱HPLC含量测定方法测定本发明组合物中盐酸小檗碱的含量实验效果均不好,选择药典中黄柏药材项下盐酸小檗碱含量测定方法测定,效果良好,盐酸小檗碱与周围其他成分分离良好,峰形对称,阴性无干扰。所以选择以下液相条件:
流动相:乙腈-0.1%磷酸(1∶1)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g);检测波长265nm;
流速1.0ml/min;柱温25℃。
3、色谱柱考察:
为了保证色谱条件的广泛适用性,考察不同品牌色谱柱对盐酸小檗碱的分离,试验结果表明:Diamonsil C18(5μm,250mm×4.6mm)、Agilent ZORBAX Extend-C18(5μm,250mm×4.6mm)、Agilent ZORBAX Eclipse XDB(5μm,250mm×4.6mm)均对盐酸小檗碱有良好的分离。
4、本发明组合物中盐酸小檗碱提取条件的考察:
为了确保测定结果真实、准确,本发明通过一系列考察,确保制备供试品溶液时将本发明组合物中的盐酸小檗碱提取完全。
选择正交试验设计优选影响制剂中成分提取率的3个因素进行考察,分别为:提取溶剂、提取溶剂量、超声提取时间,每个因素设置3个水平。
试验设计如下:表6
按正交表L9(34)安排实验。实验方法如下:表7
各组样品用微孔滤膜(0.45μm)滤过后,进液相分析,记录峰面积(对于提取溶剂量为12.5ml组,吸取5μl样品进样;25ml组,吸取10μl样品进样;50ml组,吸取20μl样品进样),通过统计分析,以峰面积/取样量比值大为优,确定最终供试品制备方法如下: 取本发明组合物粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。
综上试验最后确定本发明组合物片剂中盐酸小檗碱含量测定的色谱条件及对照品和供试品制备方法为:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸(1∶1)(每100ml流动相加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相;检测波长为265nm。
对照品溶液的制备:盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。
实验例4:盐酸小檗碱含量测定方法验证实验
检测仪器:岛津公司SPD-10Avp型高效液相色谱仪
色谱柱:迪玛公司(Zorbax C184.6×250mm,5μm)
流动相:乙腈-0.1%磷酸(1∶1)(每100ml流动相加十二烷基磺酸钠0.1g)
流速:0.8ml/min 进样量:10μl
检测波长:265nm
对照品来源:盐酸小檗碱(购于中国药品生物制品检定所,批号:713-200208)
样品批号:05020401、05020502、05020603
供试品溶液制备方法:取本发明组合物粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。
阴性对照样品溶液的制备:按本发明组合物制备工艺制备缺黄柏的空白样品,并按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品液。
用微孔滤膜(0.45μm),分别精密吸取阴性对照液、对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
1.含量测定方法考察:
1.1线性关系考察:取对照品溶液(30μg/ml)摇匀,分别精密吸取2、5、10、15、18μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积,结果见表11,并绘制标准曲线,表明盐酸小檗碱在 0.06μg~0.54μg间呈线性关系,其回归方程为:
Area=4638664.419×Amt-3487.72584(r=0.9999)
表8 线性关系考察
1.2稳定性试验:对照品溶液(30μg/ml),分别于配制后0、2、4、6、12、24小时,依法测定,结果表明,其在24小时内基本稳定,结果见表9:
表9 稳定性考察
1.3精密度试验:精密吸取供试品溶液,(批号:05020401)10μl,重复进样5次,求得相对标准偏差<2%,结果见表10:
表10 精密度考察
1.4重现性试验:按正文方法,取同一批号(批号:05020501)制备5份样品进行测定,求得相对标准偏差<2%,结果见表11:
表11 重现性考察
1.5回收率试验:精密称取已知含量的同一批号(批号:05020501)的样品0.5g,精密加入10ml盐酸小檗碱对照品溶液(30μg/ml),再精密加入15ml流动相,按正文供试品溶液的制备方法操作,测定其含量,并计算其回收率,测定结果见表12:
表12 回收率考察
2.本制剂组合物测定结果见表13:
表13 含量测定
根据以上数据,将含量限度定为本制剂组合物中含黄柏以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计,每g不得少于0.22mg。
实验例5:连翘薄层鉴别试验
连翘中主要含有木脂素类化合物,为连翘的有效成分。木脂素类化合物主要含有连翘苷、连翘素等。这类成分为脂溶性成分,成分,极性低,易溶于低级性有机溶剂,如:石油醚、氯仿、醋酸乙酯等。本处方药味较多,成分复杂,本发明中利用薄层色谱检测连翘中的木脂素类成分,以此鉴定制剂中含有连翘药材。
1、薄层色谱方法的选择:
常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析、聚酰胺薄层层析等。选择硅胶层析进行试验。
2、提取溶剂及提取方法的选择:
通过实验优选供试品及对照药材最优的提取溶剂,溶剂比较甲醇和乙醇,提取方法比较振摇提取和超声提取。实验方法如下:
供试品溶液制备方法:
中药组合物制剂内容物2g,加甲醇40ml(20倍量),振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液1。
中药组合物制剂内容物2g,加乙醇40ml(20倍量),振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液2。
中药组合物制剂内容物2g,加甲醇40ml,超声处理10分钟,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液3。
中药组合物制剂内容物2g,加乙醇40ml,超声处理10分钟,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液4。
对照药材溶液制备方法:
取连翘对照药材1g,加甲醇20ml(20倍量),振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至1ml,作为对照药材溶液1。
取连翘对照药材1g,加乙醇20ml(20倍量),振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至1ml,作为对照药材溶液2。
取连翘对照药材1g,加甲醇20ml,超声处理10分钟,滤液浓缩至1ml作为对照药材溶液3。
取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,滤液浓缩至1ml作为对照药材溶液4。
分别吸取上述八种溶液各15μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
在供试品溶液1、2、3、4及连翘对照药材1、2、3、3溶液色谱中,在相应位置上,均有相同颜色的荧光斑点。进一步比较供试品溶液色谱及对照药材溶液色谱的匹配性,供试品溶液1色谱中与对照药材溶液4色谱中,斑点清楚鲜明,颜色最为统一。因此,确定供试品溶液和对照药材溶液得制备方法为:
中药组合物制剂内容物2g,加甲醇40ml,振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液。
取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,过滤,滤液浓缩至1ml,作为对照药材溶液。
3、供试品及对照药材溶液点样量的选择:
按照上述放方法制备供试品溶液及对照药材溶液,并对其点样量进行优选:
分别吸取连翘对照药材溶液5、15、25μl点于同一硅胶G板上,以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。试验结果如下:
供试品及对照药材溶液点样量为5μl时,连翘对照药材荧光斑点强度较低,不宜观察;
供试品及对照药材溶液点样量为15μl时,连翘对照药材薄层上荧光斑点清晰,大小适中, 无拖尾,前后无干扰,供试品溶液色谱中与对照药材溶液色谱斑点相对应的位置上荧光斑点也清晰,无拖尾;
供试品及对照药材溶液点样量为25μl时,对照药材及供试品溶液色谱薄层上荧光斑点均较大,明显拖尾,与前后荧光斑点相连,由于点样大,点样次数多,对硅胶薄层表面造成了破坏。
因此,确定供试品及对照药材溶液的最佳点样量为15μl。
4、展开剂溶剂及比例的选择:
按上述方法制备供试品溶液和对照药材溶液。
取缺连翘的连翘阴性制剂按供试品制备方法制备缺连翘阴性对照溶液。
取5块硅胶G薄层板,每块薄层均点样供试品、连翘对照药材、缺连翘阴性对照溶液各15μl,分别以以下不同展开剂展开,取出,晾干,置紫外光(365nm)下进行观察。
试验结果如下:
薄层板1以石油醚(30-60℃)-乙酸(10∶0.2)为展开剂,展开剂极性太低,供试品、对照药材中连翘成分均未展开;
薄层板2以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶1∶0.2)为展开剂,极性较低,展开不充分,供试品中连翘成分未与其他斑点分离;
薄层板3以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)为展开剂,极性适中,对照药材品中目标斑点Rf值为0.45,与前后斑点分离良好,斑点圆整,无拖尾。供试品溶液色谱中在与对照药材相对应的斑点位置上显相同颜色的荧光斑点,其与其他成分斑点分离良好,阴性无干扰;
薄层板4、5分别以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶8∶0.2)、乙醇-乙酸(8∶0.2)为展开剂,展开剂极性太大,使得供试品、对照药材中连翘成分Rf值较大,与其他成分斑点重叠,分离失败。
最终确定以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)作为分离中药组合物制剂中连翘成分的最优薄层展开剂。
5、显色条件的选择:
连翘中的化学成分日光下没有颜色,因此,考虑使用通用型显色剂-10%的硫酸乙醇溶液显色或紫外光灯(365nm)下观察。
按上述方法制备供试品溶液、对照药材溶液。取两块硅胶薄层分别点样、展开、晾干。
薄层1喷以10%的硫酸乙醇溶液,105℃加热15min后,日光下观察;
薄层2直接置紫外灯(365nm)下检视;
试验结果如下:
薄层1在日光下观察,供试品溶液与对照药材溶液色谱中斑点丰富均没有观察到明显斑点;薄层2在紫外(365nm)下在连翘对照药材相对应的位置上,供试品溶液有明显相同颜色的荧光斑点,斑点清晰,前后无干扰。
确定检视中药组合物制剂中连翘成分的最佳方法为:紫外光(365nm)下观察荧光。
具体实施方式
实施例1
防己 150g 通草 100g 桂枝 75g
姜黄 100g 石膏 300g 薏苡仁 200g
木瓜 150g 海桐皮 100g 忍冬藤 200g
黄柏 150g 滑石粉 150g 连翘 200g
以上十二味,取滑石粉100g与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,制成600粒,即得。
鉴别A.取本品的内容物3g,加乙醇20ml,回流1小时,滤过,滤液蒸干,加1%盐酸15ml溶解,加浓氨水调节pH值至9,用氯仿提取两次,每次10ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液(50∶10∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干。供试品色谱中,在与粉防己碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点。
鉴别B.取本品内容物2g,加甲醇40ml,振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液。另取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,过滤,滤液浓缩至1ml,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。
含量测定:照高效液相色谱法,色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸(1∶1)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相;检测波长为265nm。对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本品每克含黄柏以盐酸小檗碱(C20H18CLNO4)计,不得少于0.22mg。
功能与主治:清热利湿,活血通络。用于急、慢性风湿性关节炎,慢性风湿性关节炎活动期。
用法与用量:口服,一次3~5粒,一日3次。
规格:每粒装0.3g。
实施例2
防己 150g 通草 100g 桂枝 75g
姜黄 100g 石膏 300g 薏苡仁 200g
木瓜 150g 海桐皮 100g 忍冬藤 200g
黄柏 150g 滑石粉 150g 连翘 200g
以上十二味,取滑石粉100g与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,制成600粒,即得。
鉴别A.取本品的内容物3g,加乙醇20ml,回流1小时,滤过,滤液蒸干,加1%盐酸15ml溶解,加浓氨水调节pH值至9,用氯仿提取两次,每次10ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液(50∶10∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干。供试品色谱中,在与粉防己碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点。
鉴别B.取本品内容物2g,加甲醇40ml,振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液。另取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处10分钟,过滤,滤液浓缩至1ml,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例3
防己 150g 通草 100g 桂枝 75g
姜黄 100g 石膏 300g 薏苡仁 200g
木瓜 150g 海桐皮 100g 忍冬藤 200g
黄柏 150g 滑石粉 150g 连翘 200g
以上十二味,取滑石粉100g与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,制成600粒,即得。
含量测定:照高效液相色谱法,色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸(1∶1)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相;检测波长为265nm。对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本品每克含黄柏以盐酸小檗碱(C20H18CLNO4)计,不得少于0.22mg。
实施例4
防己 150g 通草 100g 桂枝 75g
姜黄 100g 石膏 300g 薏苡仁 200g
木瓜 150g 海桐皮 100g 忍冬藤 200g
黄柏 150g 滑石粉 150g 连翘 200g
以上十二味,取滑石粉100g与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉及辅料适量, 混匀,制粒,干燥,即得。
鉴别A.取本品3g,加乙醇20ml,回流1小时,滤过,滤液蒸干,加1%盐酸15ml溶解,加浓氨水调节pH值至9,用氯仿提取两次,每次10ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液(50∶10∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干。供试品色谱中,在与粉防己碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点。
鉴别B.取本品2g,加甲醇40ml,振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液。另取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,过滤,滤液浓缩至1ml,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30-60℃)-乙醇-乙酸(10∶4∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。
含量测定:照高效液相色谱法,色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸(1∶1)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相;检测波长为265nm。对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本品每克含黄柏以盐酸小檗碱(C20H18CLNO4)计,不得少于0.22mg。
Claims (7)
1.一种清热利湿,活血通络的中药组合物制剂的检测方法,其特征在于该方法包括如下含量测定和鉴别:
所述药物组合物的原料药组成为:
防己100-200重量份、通草50-150重量份、桂枝25-125重量份、姜黄50-150重量份、石膏200-400重量份、薏苡仁100-300重量份、木瓜100-200重量份、海桐皮50-105重量份、忍冬藤100-300重量份、黄柏100-200重量份、滑石粉100-200重量份、连翘100-300重量份;
所述含量测定和鉴别方法为:
A、含量测定:色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;25-75∶75-25比例的乙腈-0.01-0.5%磷酸为流动相;检测波长为230-300nm;对照品溶液的制备:取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含5-50μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:取该组合物制剂0.5-5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液5-50ml,密塞,称定重量,超声处理5-60分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用0.2-0.45μm微孔滤膜滤过,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;0.2-0.5g组合物制剂含盐酸小檗碱C20H18CLNO4,不得少于0.066mg;
B、鉴别:取该组合物制剂粉末0.5-10g,加乙醇5-50ml,回流0.25-3小时,滤过,滤液蒸干,加0.1-10%盐酸550ml溶解,加浓氨水调节pH值至8-11,用氯仿提取1-5次,每次5-25ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇0.5-5ml使溶解,作为供试品溶液;取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含0.1-5mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液;分别吸取上述两种溶液0.5-5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以40-60∶8-12∶0.5比例的氯仿-甲醇-浓氨试液混合溶剂为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干;供试品色谱中,在与粉防己碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点;C、鉴别:取该组合物制剂的粉末0.5-10g,加甲醇10-100ml,振摇提取0.5-3 小时,滤过,滤液蒸至0.5-5ml,作为供试品溶液;另取连翘对照药材0.5-5g,加乙醇5-50ml,超声处理1-30分钟,过滤,滤液浓缩至0.1-5ml,作为对照药材溶液;分别吸取上述两种溶液5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以8-12∶3-7∶0.2比例的石油醚-乙醇-乙酸混合溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点;所述展开剂中的石油醚沸程为30-60℃。
2.如权利要求1所述的药物组合物制剂的质量检测方法,其特征在于该方法包括如下含量测定和鉴别:
含量测定:色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;1∶1的乙腈-0.1%磷酸为流动相;检测波长为265nm;对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1ml含30μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:取该组合物制剂粉末1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用流动相溶液补足减失的重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得;测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
防己及黄柏薄层鉴别:取该组合物制剂3g,加乙醇20ml,回流1小时,滤过,滤液蒸干,加1%盐酸15ml溶解,加浓氨水调节pH值至9,用氯仿提取两次,每次10ml,合并氯仿液,滤过,滤液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取粉防己碱对照品和盐酸小檗碱对照品,分别用乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为粉防己碱对照品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液;吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以50∶10∶0.5的氯仿-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上显相同的亮黄色荧光斑点,再喷以稀碘化铋钾试液、吹干;供试品色谱中,在与粉防己碱对照品色谱相应的位置上,显相同的桔红色斑点;
连翘薄层鉴别:取该组合物制剂2g,加甲醇40ml,振摇提取1小时,滤过,滤液蒸至2ml,作为供试品溶液;另取连翘对照药材1g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,过滤,滤液浓缩至1ml,作为对照药材溶液;吸取上述两种溶液各 15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10∶4∶0.2的石油醚-乙醇-乙酸为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点;所述展开剂中的石油醚沸程为30-60℃。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物的检测方法,其特征在于该药物组合物的原料药组成为:
防己150重量份、通草100重量份、桂枝75重量份、姜黄100重量份、石膏300重量份、薏苡仁200重量份、木瓜150重量份、海桐皮100重量份、忍冬藤200重量份、黄柏150重量份、滑石粉150重量份、连翘200重量份。
4.如权利要求1或2所述的中药组合物的检测方法,其特征在于该药物组合物的制备方法为:
取滑石粉80-120重量份与其余防己等十一味加水煎煮1-5次,每次0.5-5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床或药学上可接受的剂型,包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或口服液体制剂。
5.如权利要求3所述的药物组合物的检测方法,其特征在于该药物组合物的制备方法为:
取滑石粉80-120重量份与其余防己等十一味加水煎煮15次,每次0.5-5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床或药学上可接受的剂型,包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂或口服液体制剂。
6.如权利要求4所述的药物组合物的检测方法,其特征在于该药物组合物的胶囊剂制备方法为:
取滑石粉100重量份与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,即得。
7.如权利要求5所述的药物组合物的检测方法,其特征在于该药物组合物 的胶囊剂制备方法为:
取滑石粉100重量份与其余防己等十一味加水煎煮三次,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入剩余的滑石粉,混合,干燥,粉碎,过筛,混匀,装入胶囊,即得。
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中华人民共和国卫生部药典委员会.风痛安胶囊.《中华人民共和国卫生部药品标准 中药成方制剂 第四册》.1991,第45页. * |
颜晓航.风痛安胶囊质量标准的研究.《中国现代应用药学杂志》.2007,第24卷(第4期),第320-321页. * |
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