CN103055191B - 一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法及质量检测方法 - Google Patents

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一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法:备中药原料药，肾茶、小蓟、白茅根、黄柏;制备黄柏粉，将稠膏与黄柏粉混合均匀，为制剂原料，将制剂原料按常规方法加入辅料制为颗粒剂、胶囊剂、片剂或丸剂。一种治疗肾炎引起血尿的中药的质量检测方法：照薄层色谱法试验，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；分离度大于1.5；测定每袋4克中含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4·HCl计，不得少于9mg。本发明的制备工艺设计合理，工艺先进，可有效改善现有血尿安药物性寒的特点，提高黄柏有效果成分溶出量，使得提取率提高，产品有效成分保存完全。也有效改善了药物中黄柏的有效成分不稳定和不可控的问题。本发明的质量检测方法可保证血尿安药物质量稳定可控。

Description

一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法及质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药制剂的制备方法及质量检测方法，具体是一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法及质量检测方法。
背景技术
黄柏为芸香科植物黄檗、黄皮树的干燥树皮，昧苦性寒，归肾、膀胱、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒、退虚热之功能，临床上广泛应用于湿热痢疾、泄泻、黄疸、梦遗、淋浊、带下、骨蒸劳热、皮肤湿疹等病证的治疗。现代药理研究表明，黄柏具有多方面药理作用，主要包括抗菌、抗真菌、镇咳、降压、抗滴虫、抗肝炎、抗溃疡以及免疫抑制作用等。黄柏作为一味具有很好清热泻火作用的药材，黄柏是用于治疗由肾脏疾病引起血尿的中成药血尿安的主要成分。黄柏含有多种生物碱，主要有效成分为盐酸小檗碱，提取总生物碱的得率直接影响到黄柏的药效，本发明就黄柏总生物碱的水及醇提取工艺进行了研究比较，以期找出一种更合理、更可行的生产工艺。
黄柏是中成药血尿安的主要成份，由于品种、产地和采收季节的不同，药品中的有效成分含量也就不同，导致直接采用原料药生产的血尿安药物产品中的有效成分不稳定，有效成分不可控。由于黄柏性味苦寒，有的体弱患者服用现有技术生产的血尿安后出现腹泻，严重的甚至出现脱水。
发明内容
本发明的目的在于改善现有的中成药血尿安药性寒的特点，也为改善药物中黄柏的有效成分提取不完全，有效成分不稳定，有效成分不可控的问题，提供一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法及质量检测方法的技术方案。
本发明的技术方案为：一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法,具体步骤如下:
（1）按重量份备中药原料药
肾茶 360-440,小蓟540-660, 白茅根720-880, 黄柏108-132;  
（2）制备黄柏粉
黄柏粉碎至80—100目，用浓度20％的乙醇浸没，加温至55-65℃，保温40-48小时，用浓度70-85％的乙醇8-10倍量(w/v)提取3次，每次l小时，提取温度80—85℃，过滤合并提取液，浓缩为黄柏浸膏,干燥，粉碎至120—140目为黄柏粉；
（3）制备稠膏
将肾茶,小蓟,白茅根3味中药粉碎至80—100目,加水煎煮二次，第一次按药材量：水=1：5(w/v)，煮2小时；第二次按药材量∶水=1∶3(w/v)，煮2小时，合并滤液，过滤，滤液60℃浓缩至相对密度为1.31～1.35的稠膏；
（4）制剂
将步骤（3）制备的稠膏与步骤（2）制备的黄柏粉混合均匀，为制剂原料，将制剂原料按常规方法加入辅料制为颗粒剂、胶囊剂、片剂或丸剂。
如步骤（4）所述的制备颗粒剂的赋形剂为糊精,糊精为制剂原料重量的8-10%，校味剂为甜菊素15-25g。
一种治疗肾炎引起血尿的中药的质量检测方法，具体步骤如下：
（1）取本发明的制剂原料6g，加氨试剂3 ml，二氯甲烷15 ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml溶解，作为供试品溶液；另取合格的黄柏为对照药材0.1g，加浓氨试液1ml，二氯甲烷5 ml，同法制成对照药材溶液；按处方量即每次服用的生药量为肾茶1.6g, 小蓟2.4g，白茅根3.2g，黄柏0.48g制备不含黄柏药材的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法进行配制，作为阴性对照溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：浓氨试液=6:3:1.5:1.5:0.5为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（2）取本发明的制剂原料3g，置具塞锥形瓶中，加乙酸乙酯20ml，超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白茅根对照药材0.5g，加乙酸乙酯10ml，超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为对照品溶液；按处方量即每次服用的生药量为肾茶1.6g, 小蓟2.4g，白茅根3.2g，黄柏0.48g制备不含白茅根药材的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法进行配制，作为阴性对照溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇=9:1为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（3）检查
粒度≤15%；水分≤6%；溶化性：取本发明的制剂原料为供试品4克，加热水200ml，搅拌5min,立即观察，应全部溶化或呈混悬状；装量差异：±7%；
（4）含量测定
用高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：0.0.5 mol/LKH2PO4（0.2%三乙胺，0.1%庚烷磺酸钠，用用磷酸调节pH值至3.0）/ 乙晴=（60:40）；柱温38℃；检测波长为348 nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；分离度大于1.5；
（5）对照品溶液的制备  
取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加热水溶解，放冷至室温，加水制成每1ml 含100ug的溶液；
（6）供试品溶液的制备
   取本发明的制剂原料，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸：甲醇=0.1:100溶液25 ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷用盐酸溶液：甲醇=0.1:100溶液补足减失的重量，摇匀，0.45um滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
（7）测定法
 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；
本发明的制剂原料每袋4克中含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4·HCl计，不得少于9mg；
（8）稳定性
将本发明的制剂原料药在温度为40℃±2℃，湿度为75%±5%的超常条件下放置6个月，外观及内质量亦无变化：在温度25±2℃，相对湿度60±10%实际的贮存条件下放置12个月，外观及内在质量亦无变化。
所述的步骤（2）中照薄层色谱法试验，是按照2010版药典附录Ⅵ B试验；步骤（8）所述稳定性是按照中国药典2010年版二部附录XIX C“药物稳定性试验指导原则”、国家现行标准的“药品注册管理办法”进行测定。
由于黄柏是血尿安的主要成分，对于血尿安的药效有着重大的影响，本发明重点改进了黄柏的制备方法，主要是对黄柏的制备加强了改性步骤，具体是将黄柏醇提，在醇提黄柏前增加了用低浓度乙醇浸泡，中温保温40-48小时，该步骤可改善黄柏性寒的性质，还可使黄柏中的盐酸小檗碱类有效成分溶出量增大，使得提取率提高，产品有效成分保存完全。黄柏的主要有效成分中有醇溶性物质，也还含有水溶性成分，采用单一的水提法，将使多醇溶性成分流失，而这些醇溶性物质对提高免疫能力有非常好的效果。本发明在醇提前采用低浓度乙醇浸泡，使黄柏中的水溶性物质溶出，使黄柏中的有效物质提取更完全，可更加完全保留黄柏的有效成分。本发明对原料药用低浓度乙醇浸泡，中温保温，使原料中的有效成分活化，这也是提高提取率的重要措施。本发明在血尿安颗粒剂中选择了不参与胰岛素代谢的甜菊素作为血尿安颗粒的甜味剂，使糖尿病患者也可放心使用。为保证血尿安药物产品中的有效成分稳定可控，本发明提出了科学的质量检测方法。本发明的制备工艺设计合理，工艺先进，可有效改善现有血尿安药物性寒的特点，提高黄柏参有效果成分溶出量，使得提取率提高，产品有效成分保存完全。也有效改善了药物中黄柏的有效成分不稳定，有效成分不可控的问题。本发明的质量检测方法可保证血尿安药物质量稳定可控。
表1  两种方法提取黄柏的提取物及得率              
得率
试验证明，相同的黄柏原料采用本发明的方法可以比传统工艺得率提高10以上，使生产成本降低。黄柏提取物中的总生物碱和盐酸小檗碱都比传统水提工艺的要高30%左右。
本发明在质量标准的鉴别在含量测定中采用具有含量较高的盐酸小檗碱为有效成分，建立高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，用于评价本发明的产品的质量。本发明所采用的质量检测方法能有效的检测血尿安颗粒中盐酸小檗碱的含量，使药物的有效成分稳定可控。
本发明将传统的中药与现代化的制剂技术有机结合，使产品功效成分稳定可控，产品的安全性、稳定性及卫生学等均符合国家相关要求。本发明采用独特的提取工艺，使提取物的有效成分保留完全，提取率提高，使中药原料的利用率大大提高，降低了生产成本。
本发明的产品与按传统方法生产的血尿安药物相比较，具有副作用减少，效果相同，其生产成本降低10%以上的特点。
     采用按本发明生产的血尿安颗粒观察肾炎引起血尿的人群200例，年龄40-80岁，女性40人，男性160人。原发病为急性肾炎，其中肾小球肾炎54例，慢性肾小球肾炎57例，急性肾盂肾炎41例，慢性肾炎25例，尿路感染16例，隐匿性肾炎5例，紫癜性肾炎2例。200例均有尿血症状，51例尿频，54例尿痛，62例小便黄赤灼热，心烦口渴49例，病程为1个月至17年。尿常规检查均有不同程度的红细胞、蛋白及白细胞。全部病例均做了肾脏B超检查，尿常规检查，红细胞（＋）为９２例，红细胞（＋＋）为７６例，红细胞（＋＋＋）及以上为３２例。全部病例均采用本发明提供的血尿安颗粒治疗，一次服用1袋，每袋4克，一日3次，10天为 1疗程，治疗期间每隔3天检查一次尿常规，疗程结束后将检查结果与治疗前对比。
疗效评定：血尿症状全部消失，其它症状趋于正常，尿常规检查证实主要理化指标基本正常为痊愈；血尿症状明显改善，尿常规检查证实主要理化指标由重转为轻，其它症状由重转为轻并消失为显效；血尿症状有所好转，尿常规检查证实主要理化指标由重转为轻,基本稳定，其它症状由重转为轻为有效; 血尿症状、尿常规检查主要理化指标及其它症状均无改善，反而恶化为无效。
3个疗程后，痊愈的61人，显效的117人，有效的19人，无效3人，其中63例患者年龄为50岁以上，体质虚弱，服用后均未来出现严重腹泻，在跟踪治疗治愈患者中未见明显药物不良反应和毒副作用。
具体实施方式
一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法, 各实施例的参数见表2，具体步骤如下:
（1）按重量份备中药原料药
肾茶 360-440,小蓟540-660, 白茅根720-880, 黄柏108-132；
（2）制备黄柏粉
黄柏粉碎至80—100目，用浓度20％的乙醇浸没，加温至55-65℃，保温40-48小时，用浓度70-85％的乙醇8-10倍量(w/v)提取3次，每次l小时，提取温度80—85℃，过滤合并提取液，浓缩为黄柏浸膏,干燥，粉碎至120—140目为黄柏粉；
（3）制备稠膏
将肾茶,小蓟,白茅根3味中药粉碎至80—100目,加水煎煮二次，第一次按药材量：水=1：5(w/v)，煮2小时；第二次按药材量∶水=1∶3(w/v)，煮2小时，合并滤液，过滤，滤液60℃浓缩至相对密度为1.31～1.35的稠膏；
（4）制剂
将步骤（3）制备的稠膏与步骤（2）制备的黄柏粉混合均匀，为制剂原料，将制剂原料按常规方法加入辅料赋形剂和矫味剂，赋形剂为糊精,糊精为制剂原料重量的8-10%，校味剂为甜菊素，甜菊素15-25g，制为颗粒剂，也可按常规方法制为胶囊剂、片剂或丸剂。
一种治疗肾炎引起血尿的中药的质量检测方法，具体步骤如下：
（1）取本发明的制剂原料6g，加氨试剂3 ml，二氯甲烷15 ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml溶解，作为供试品溶液；另取黄柏对照药材0.1g，加浓氨试液1ml，二氯甲烷5 ml，同法制成对照药材溶液；按处方量制备不含黄柏药材的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法进行配制，作为阴性对照溶液；照2010版药典附录Ⅵ B试验的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：浓氨试液=6:3:1.5:1.5:0.5为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（2）取本发明的制剂原料3g，置具塞锥形瓶中，加乙酸乙酯20ml，超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白茅根对照药材0.5g，加乙酸乙酯10ml，超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为对照品溶液；按处方量制备不含白茅根药材的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法进行配制，作为阴性对照溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇=9:1为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（3）检查
粒度≤15%；水分≤6%；溶化性：取本发明的制剂原料为供试品4克，加热水200ml，搅拌5min,立即观察，应全部溶化或呈混悬状；装量差异：±7%；
（4）含量测定
用高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：将0.2%三乙胺和0.1%庚烷磺酸钠用磷酸调节pH值至3.0， （？）0.5 mol/LKH2PO4： 乙晴=60:40；柱温38℃；检测波长为348 nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；分离度大于1.5；
（5）对照品溶液的制备  
取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加热水溶解，放冷至室温，加水制成每1ml 含100ug的溶液；
（6）供试品溶液的制备
 取本发明的制剂原料装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸：甲醇=0.1:100溶液25 ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷用盐酸溶液：甲醇=0.1:100溶液补足减失的重量，摇匀，0.45um滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
（7）测定法
 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；
本发明的制剂原料每袋4克中含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4·HCl计，不得少于9mg；
（8）稳定性
将本发明的制剂原料药在温度为40℃±2℃，湿度为75%±5%的超常条件下放置6个月，外观及内质量亦无变化：在温度25±2℃，相对湿度60±10%实际的贮存条件下放置12个月，外观及内在质量亦无变化。所述稳定性是按照中国药典2010年版二部附录XIX C“药物稳定性试验指导原则”、国家现行标准的“药品注册管理办法”测定。
表2  实施例1-5的参数表
序号 参  数 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
1 肾茶 250克 200克 225克 300克 275克
2 小蓟 650克 600克 700克 550克 500克
3 白茅根 90克 120克 80克 110克 100克
4 黄柏 200克 180克 150克 225克 250克
5 黄柏浸泡加温 58℃ 55℃ 60℃ 63℃ 65℃
6 黄柏浸泡保温 40小时 44小时 42小时 48小时 45小时
7 黄柏提取温度 80℃ 82℃ 84℃ 81℃ 85℃
8 糊精 107.1克 104.5克 115.5克 94.8克 95.6克
9 甜菊素 25克 15克 20克 23克 17克

Claims (1)

1.一种治疗肾炎引起血尿的中药的制备方法,其特征在于，具体步骤如下:
（1）按重量份备中药原料药
肾茶 360-440,小蓟540-660, 白茅根720-880, 黄柏108-132;
（2）制备黄柏粉
黄柏粉碎至80—100目，用浓度20％的乙醇浸没，加温至55-65℃，保温40-48小时，用浓度70-85％的乙醇8-10倍量(w/v)提取3次，每次l小时，提取温度80—85℃，过滤合并提取液，浓缩为黄柏浸膏,干燥，粉碎至120—140目为黄柏粉；
（3）制备稠膏
将肾茶,小蓟,白茅根3味中药粉碎至80—100目,加水煎煮二次，第一次按药材量：水=1：5(w/v)，煮2小时；第二次按药材量∶水=1∶3(w/v)，煮2小时，合并滤液，过滤，滤液60℃浓缩至相对密度为1.31～1.35的稠膏；
（4）制剂
将步骤（3）制备的稠膏与步骤（2）制备的黄柏粉混合均匀，为制剂原料，将制剂原料按常规方法加入辅料制为颗粒剂、胶囊剂、片剂或丸剂。
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