CN101574387B

CN101574387B - 垂盆草制剂的检测方法

Info

Publication number: CN101574387B
Application number: CN2008101061505A
Authority: CN
Inventors: 付立家; 付建家
Original assignee: Beijing Asia East Bio Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Asia East Bio Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2008-05-09
Filing date: 2008-05-09
Publication date: 2012-07-11
Anticipated expiration: 2028-05-09
Also published as: CN101574387A

Abstract

本发明涉及一种垂盆草制剂的质量控制方法，本质量控制方法通过对垂盆草制剂的薄层鉴别和无水乙醇浸出物的限量检测，对药品质量进行了有效的控制，具有稳定、快速、灵敏、可靠的特点，能够全面反映药品的疗效。

Description

垂盆草制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种垂盆草制剂的质量控制方法，属于中药技术领域。

背景技术

垂盆草为景天科多年生草本植物，民间用来治疗肝炎，咽喉肿痛、虫蛇咬伤。临床研究表明，垂盆草制剂能显著降低患者血清谷丙转氨酶。国家标准《中药成方制剂》第6册114页，公布了垂盆草冲剂的质量标准，但该标准缺少该制剂的质量控制方法；“垂盆草苷的含量测定与药理研究”(《中医药学刊》2003年8月第21卷第8期)公开了垂盆草苷的含量测定方法，但垂盆草苷不稳定，易分解，不宜作为该制剂质量控制的指标；而且垂盆草中还含有三萜类等成分亦具有保肝活性，因此单纯以垂盆草苷的含量为质量控制指标不能科学反映垂盆草制剂的疗效。因此，该制剂需要建立快速、灵敏、可靠的质量控制方法，以确保临床疗效的稳定、安全。

发明内容

本发明目的在于提供一种垂盆草制剂的质量控制方法。

为实现以上发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种垂盆草制剂的质量控制方法，该制剂按如下方法制备：取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至相对密度1.24(60～65℃)的清膏。加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置8～12小时。吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.36～1.38的浸膏。取浸膏加入辅料，制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂；其特征在于，该制剂的质量控制方法包括以下两种检测：

a.取本制剂，粉碎，加乙醚超声处理，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。另取垂盆草，加水煎煮，放凉，滤过，滤液浓缩，放凉后加95％乙醇，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

b.取本制剂，粉碎，精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇，密塞，称定重量，静置1小时后，水浴回流，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥，移置干燥器中，冷却，迅速精密称定重量，计算，即得。

该颗粒剂的质量控制方法还可以包含下述两种检测：

a.取本制剂，粉碎，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5～10μl点于同一硅胶G薄层板上，以8∶3比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

b.取本制剂，粉碎，取4克，精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，水浴回流1小时，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

上述检测方法，既能通过a步骤定性检测制剂中多种有效成分，又能通过b步骤控制黄酮类、三萜类及垂盆草苷类这些具有保肝护肝作用的总有效成分的含量，具有稳定、快速、灵敏、可靠的特点，能够全面反映药品质量。

具体实施方式

下述实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。

实验例1定性检测实验

1.供试品溶液制备方法的确定

方法a.取实施例2所得颗粒剂，粉碎，称取5克，加甲醇20毫升，振摇1h，过滤，滤液浓缩至2毫升作为供试品溶液。

方法b.取实施例2所得颗粒剂，粉碎，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。

方法c.取实施例2所得颗粒剂，粉碎，称取5克，加20ml 85％乙醇超声提取两次，过滤，滤液合并，挥干溶剂，用水饱和的正丁醇萃取2次，合并正丁醇液，低温挥干，加入甲醇1毫升作为供试品溶液。

另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。

吸取上述溶液各5μl点于同一硅胶G薄层板上，以8∶3比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，结果见下表。

表1.供试品溶液制备方法的确定

组别

a

b

c

展开效果

斑点分离不好，有干扰

斑点较清晰，分离较好

斑点不清晰，颜色较浅

由上述结果可以看出，选择方法b作为该供试品溶液的制备方法。

2.本检测方法中展开剂用量配比的优选：

取上述供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以下述比例的展开剂展开：氯仿-甲醇(8∶3)、正己烷-乙酸乙酯(8∶3)、正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)、乙酸乙酯-甲醇-水(8∶1∶1)，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热，观察供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上斑点显色情况。结果见表2

表2展开剂优选实验结果

展开剂配比	氯仿-甲醇 (8∶3)	正己烷-乙酸乙酯 (8∶3)	正丁醇-冰醋酸- 水(4∶1∶5)	乙酸乙酯-甲醇- 水(8∶1∶1)
					展开效果	分离不好，有托尾现象	斑点清晰，分离较好	斑点显色较浅	斑点显色较浅

从表2可以看出展开剂配比为正己烷-乙酸乙酯(8∶3)时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。

3.本检测方法中样品溶液点样量的优选：

分别取供试品溶液各1μl、3μl、5μl、10μl、15μl，点于同一硅胶G薄层板上，以8∶3比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热，观察供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，斑点显色情况。结果见表3：

表3样品溶液点样量优选实验结果

点样量	1μl	3μl	5μl	10μl	15μl
						效果	供试品在相应对照品位置无斑点	供试品在相应对照品位置斑点显色很浅	供试品在相应对照品位置斑点显色清晰	供试品在相应对照品位置斑点显色清晰	供试品在相应对照品位置斑点分离不好

从表3可以看出供试品点样量在5～10μl时，在薄层板上显色效果较好，适合试验要求。

综上所述，本制剂的定性检测方法为：

取本制剂，粉碎，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5～10μl点于同一硅胶G薄层板上，以8∶3比例的正己烷- 乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

实验例2无水乙醇浸出物检测实验

取实施例2所得颗粒剂，粉碎，取3份，每份约4克，分别精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，分别水浴回流0.5、1、2小时，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

表4.不同提取时间无水乙醇浸出物测定结果：

分组	浸提时间(h)	含量(mg)	相对含量(％)
				1	0.5	134.4	3.36
2	1.0	174.8	4.37
				3	2.0	175.2	4.38

由表4得出，无水乙醇热浸1小时后，浸出物基本恒定，所以确定水浴浸提时间为1h。并且确定本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

实验例3.加速稳定性试验

按实施例2、3、4所述的处方与方法制取3批样品，其中将实施例2所得样品在温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置8个月；将实施例3所得样品在温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置4个月，温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下再放置4个月；将实施例4所得样品在温度40℃±+2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置8个月。对进行完稳定性试验后的该三批样品用上述试验例1和试验例2所得方法进行定性和定量检测，结果见下表：

表5.加速稳定性试验结果

组别	定性检测	定量检测(无水乙醇浸出物相对含量)
			实施例2	供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。	3.86％
实施例3	供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上未显示相同颜色的斑点。	3.43％
			实施例4	供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置未显示相同颜色的斑点。	1.52％

实验例4药效学试验研究

1实验材料

1.1药品

如实验例3所述，经过加速试验及检测后的三批药品；

阳性对照药：茵莲清肝颗粒，北京亚东生物制药有限公司生产，批号：060104

1.2动物 Wistar大鼠，昆明种小鼠，♀♂均用。

2方法与结果

2.1分组：取60只昆明小鼠随机分为6组，每组10只，A组为正常对照组；B组为模型对照组；C组为阳性对照组；D、E、F组为实验例3中经过加速试验后的所得三批药品；

2.2造模方法：采用卡介苗和脂多糖联合的方法建立免疫性肝损伤小鼠模型。各组动物适应性喂养3d后，除正常对照组外，每只小鼠1次尾静脉注射卡介苗5×10⁷个活菌，于注射BCG后第12d静脉注射脂多糖7.5μg/鼠，于16h后处死取材，正常对照组2次都以相同方法注射等量生理盐水。

2.3给药与处理：静脉注射卡介苗的第一天起开始灌胃给药，1次/d。正常对照组与模型对照组：生理盐水灌胃，灌胃量同药物治疗组的用药容量；阳性对照药物治疗组：茵莲清肝颗粒，3.9g/kg剂量给药；本发明药物治疗组，3.9g/kg剂量给药。正常对照组于第12d注射生理盐水后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检；其余组于静脉注射脂多糖后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检。

1.5观察指标及检测方法：①检测谷-丙转氨酶(ALT)：采用化学比色法测定。②内源性一氧化氮(NO)测定：采用放射免疫法，剖取0.5g肝脏制成10％肝组织匀浆，在4℃条件下，3000转/min，离心10min，取上清液。③内皮素(ET)检测：采用放射免法直接测定血浆ET浓度。④病理观察：持续灌胃12d后，全部小鼠眼球采血处死，立即剖取肝组织，大体观察肝脏质地、色泽、有无结节、出血等，并取肝脏组织同一部位作病理切片，用10％的甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肝脏病理形态学变化。结果见下表

表6.各组小鼠病理积分的变化情况

表7各组血清ALT、ET、NO的变化情况比较

*与模型组比较，*P＜0.05、**P＜0.01；Δ与阳性对照组比较，ΔP＜0.05。

从以上结果可以看出，检测合格的本发明药物对肝损伤小鼠血清中ALT、ET、NO含量有显著性改善，与阳性对照药物比较有显著性差异，并且，通过D、E、F组的比较发现，定性和定量检测结果都能反映本发明所述药品的疗效。

2、对慢性肝损伤的保护作用

大鼠皮下注射10％5ml/kg四氯化碳油溶液，每周2次，连续注射3个月，造成四氯化碳慢性肝损伤动物模型，观察本发明药物对损伤肝的保护作用。

正常对照组与模型对照组：生理盐水灌胃，灌胃量同药物治疗组的用药容量；阳性对照药物治疗组：茵莲清肝颗粒，3.9g/kg剂量给药；本发明药物治疗组，3.9g/kg剂量给药。正常对照组于第12d注射生理盐水后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检；其余组于静脉注射脂多糖后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检。

表8本发明药物对慢性肝损伤大鼠的保护作用(X±SD)

组别	n	剂量	SGPT(卡门氏单位)	SGOT(卡门氏单位)	羟脯氨酸含量
						A	10	\	42.17±20.04	109.12±14.07	1.63±0.25
B	10	\	277.84±99.22	363.14±72.47	2.07±0.28
						C	10	2.7g/kg	48.48±29.15**	118.53±19.18**	1.86±0.62

D	10	2.7g/kg	37.36±14.92**	66.17±16.26**Δ	1.52±0.26
						E	10	2.7g/kg	142.27±23.64*	182.39±33.17	1.78±0.22
F	10	2.7g/kg	223.35±12.16	293.75±32.54	1.97±0.42

从以上结果可以看出，检测合格的本发明药物对肝损伤小鼠血清中ALT、ET、NO含量有显著性改善，并且对慢性肝损伤有明显的的保护作用，与阳性对照药物比较有显著性差异，并且，通过D、E、F组的比较发现，定性和定量检测结果都与本发明所述药品的疗效相关，将两方法联合应用，可以有效控制药品的内在质量，能够保证药品的疗效。

下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果

实施例1.

取鲜垂盆草药材5kg

【制法】取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至相对密度1.24(60~65℃)的清膏。加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置12小时。吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.36的浸膏。低温减压干燥，按浸膏粉1份、聚乙二醇4000 2份的比例滴制成丸，制成5000粒，即得。

【鉴别】取本品，粉碎，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

【无水乙醇浸出物】照浸出物测定法(中国药典2005年版附录X A)测定。

取本品，研细，取约4克，精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，水浴回流1小时，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

实施例2、实施例3、实施例4均按下述方法操作

本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

实施例2、实施例3、实施例4均按下述方法操作

取鲜垂盆草药材5kg

【制法】取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至相对密度1.24(65℃)的清膏。加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置12小时。吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.38的浸膏。按浸膏1份、蔗糖4份、糊精1份的比例制成颗粒3000g，干燥，分装，即得。

【鉴别】取本品，研细，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5μl点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

取本品适量，研细，取约4克，精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，水浴回流1小时，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

实施例5.

取鲜垂盆草药材5kg

【制法】取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至相对密度1.24(65℃)的清膏。加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置8小时。吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.36的浸膏。按浸膏1份、淀粉2份、硬脂酸镁0.1份的比例制成颗粒，压片，制成5000片，即得。

本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

实施例6.

取鲜垂盆草药材5kg

【制法】取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至相对密度1.24(60℃)的清膏。加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置12小时。吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.36的浸膏。按浸膏1份、糊精3份的比例制成颗粒，装胶囊，制成4500粒，即得。

【鉴别】取本品，研细，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液。另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

取本品内容物，研细，取约4克，精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，水浴回流1小时，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。

本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

实施例7.

取鲜垂盆草药材5kg

【制法】取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至相对密度1.24(65℃)的清膏。.加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置8小时。吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.38的浸膏。按浸膏1份、微晶纤维素1份、乳糖1份的比例制成微丸20000粒，即得。

本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。

Claims

1.一种垂盆草制剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

所述制剂按如下方法制备：取鲜垂盆草加水煎煮1小时，滤过，减压浓缩至60～65℃测相对密度1.24的清膏；加一倍量92％的乙醇，搅匀，静置8～12小时；吸取上清液，减压浓缩至相对密度1.36～1.38的浸膏；取浸膏加入辅料，制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂；

所述检测方法包括以下两种检测：

a.取本制剂，粉碎，加乙醚超声处理，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液；另取垂盆草，加水煎煮，放凉，滤过，滤液浓缩，放凉后加95％乙醇，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

2.如权利要求1所述的盆草颗粒剂的检测方法，其特征在于该方法包含下述两种检测：

a.取本制剂，粉碎，称取20克，加乙醚50毫升，超声处理30分钟，用布氏漏斗抽滤，滤液挥干，残渣加氯仿1毫升作为供试品溶液；另取垂盆草5克，加水100毫升煎煮1小时，放凉，滤过，滤液浓缩至约20毫升，放凉后加95％乙醇20毫升，摇匀，用布氏漏斗抽滤，滤液至水浴上蒸去乙醇，残液加乙醚30毫升萃取，醚液挥干，残渣加氯仿1毫升作为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各5～10μl点于同一硅胶G薄层板上，以8∶3比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与垂盆草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

b.取本制剂，粉碎，取4克，精密称定，置250毫升圆底烧瓶中，精密加入无水乙醇100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，水浴回流1小时，放凉，称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升置蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品含无水乙醇浸出物不得低于2.0％。