CN103285283A - 一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片及其制备和质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片。该中药分散片是由适宜比例的当归、葛根、菟丝子、王不留行、麦芽、昆布、延胡索、通草等中药原料以及药用辅料按照适当的制剂流程制成的固体制剂，具有良好的抗乳腺增生、抗炎、镇痛、活血化瘀作用，而且毒性低，安全性高。本发明还公开了该分散片的质量检测方法，包括鉴别、检查和含量测定三部分。本发明公开的质量检测方法提高了该分散片的质量控制标准，可充分地保证其临床疗效。

Description

一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片及其制备和质量检测方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，特别是涉及一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片及其制备和质量检测方法。

背景技术

乳腺增生是女性常见的乳房疾病，可发生于青春期以后的任何年龄，多见于25～45岁女性，发病率为70%～80%，位居各类乳腺疾病的首位。该病本质上是一种生理增生与复旧不全造成的乳腺正常结构的紊乱，临床以乳房肿块和乳房疼痛为主要特征，症状一般常于经前期加重、行经后减轻。近年来该病发病率呈逐年上升趋势，并具有低龄化倾向。本病恶变的危险性较正常妇女增加2～4倍，临床症状和体征有时易与乳腺癌相混。该病发作时，患者因乳房肿块疼痛而焦虑不安，工作和生活受到严重影响，故积极地对该病给予早期治疗，无论在治疗疾病本身，还是在防治癌变方面，均具有非常重要的意义。

现代医学对该病的病因和发病机理目前尚不十分明了，多数学者认为该病与内分泌功能失调和精神因素有关，黄体酮分泌减少和雌激素相对增多是该病发生的重要原因。药物治疗以激素类（如甲基睾丸素、安宫黄体酮和三氧苯胺等）制剂为主，虽然近期效果好，可明显缓解症状，但疗效不稳定，停药后易复发，长期应用可干扰人体激素间的平衡，引起月经紊乱、第二性征改变等副作用，并有增加癌变的风险，故一般不宜作为常规用药，仅在症状严重时考虑应用。手术疗法适用于重度增生有恶变倾向的患者，但易造成形体损伤，且极易复发。内服药物疗效也多不理想。目前尚无治疗该病的特效药物。

祖国医学认为该病属于中医“乳廦”、“乳痞”、“乳中结核”范畴，其发病与情志、劳累、饮食、体质等多方面因素有关，病机关键在于气滞血瘀、痰湿凝结，同时与肝脾肾等脏腑及冲任二脉关系密切。中医通过辩证施治治疗本病由来已久，临床积累的治疗方法和治疗手段较多，除乳廦消片、乳疾灵颗粒、乳块消片等系列中成药外，还有大量的单方、验方、针灸、按摩、火罐、磁药护胸等。实践证明，中医疗法效果显著，副作用少，与西药合用还可减毒增效、降低复发率。

目前治疗该病的药物中，西药副作用堪忧，中药较为常用，但能有效缓解疼痛的中成药品种极少，疗效不甚理想。鉴于该病治疗药物的市场需求很大，极有必要开发新的疗效确切的中成药制剂，为临床医生提供更多的用药选择。与普通片剂相比，分散片遇水可迅速崩解形成均匀的粘性混悬液，兼有固体制剂和液体制剂的优点，属速效制剂，具有分散状态佳、崩解时间短、药物溶出迅速、吸收快、生物利用度高、服用携带方便、生产成本低等优点，可吞服、咀嚼、含吮或用水分散后服用，尤其适合老年和吞服困难的患者口服。与液体制剂相比，分散片具有药物稳定性好，包装运输及储存方便的优点，生产工艺与设备无特殊要求。因此，本专利申请选择分散片作为研发剂型，以方便患者服用，达到快速起效的作用，更好地满足患者用药的需要。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新的治疗乳腺增生疾病的中药分散片。该中药分散片属于中药复方制剂，具有良好的抗乳腺增生、抗炎、镇痛、活血化瘀作用，而且毒性低，安全性高，还能达到使用安全、质量可控、生物利用度高、服用剂量小、携带方便、起效快的要求。

本发明的再一目的是提供所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片的制备方法。

本发明的还一目的是提供所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片的质量检测方法。

为实现上述目的，本发明采取如下措施：

本发明是基于祖国医学对乳腺增生疾病的认识及治疗原则，结合女性的生理病理特点，参考临床用药经验和现代药理学研究成果，筛选出具有滋血养肝、益肾健脾、化瘀散结和理气止痛功效的中药，按中医理论组方，采用现代药学技术方法和手段对方中药物进行提取纯化，制成现代中药制剂，建立质量检测方法。

本发明所述的中药分散片是将适当比例的原料药和药用辅料，按照一定的工艺流程制成的。其中，原料药是指当归、葛根、菟丝子、王不留行、麦芽、昆布、延胡索和通草等8味中药，符合《中国药典》2010年版一部标准。其中当归补血养血，活血散瘀，调经止痛，协调冲任，舒肝敛阴，为君药；葛根清热去湿，除烦止渴，化瘀散结，菟丝子补肝肾，益精髓，走冲任，固胞官，二药皆有雌激素样作用，可以促进乳腺增生物吸收，改善乳腺萎缩状态，共为臣药；王不留行活血通络，下乳消肿，散结止痛，可载药上行，疏散乳房血分，疏通乳房经络，麦芽健脾，和胃，通乳，昆布软坚散结，延胡可治全身气滞血瘀之痛，为行气止痛、活血祛瘀之良药，四药合用，可凑散结、消肿、止痛之效，促使增生的乳房肿块变软、消散，共为佐药；通草通气下乳，泻热通利，淡渗清降，滑利通导，疏通经络，可引诸药入经络达病所，为使药。辅料为药用级别，符合国家标准。在此基础上，拟定该中药分散片的质量检测方法。

本发明所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片由以下重量份数比的原料药和药用辅料制成：

优选地，所述包合剂选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、甲基-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精或一氯三嗪-β-环糊精；所述填充剂选自乳糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、预胶化淀粉、微晶纤维素或糊精；所述崩解剂选自羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、羟甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、羟丙基淀粉或微粉硅胶；所述润滑剂选自硬脂酸镁、微粉硅胶或滑石粉；所述矫味剂选自蔗糖、阿司巴甜、甜菊苷、安赛蜜或甜蜜素。

本发明所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片的片重为400～1000mg。

本发明所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片的制备方法，包括如下步骤：

（1）取当归粗粉，加水浸泡4～12h，加热提取，收集挥发油，收集药渣得药渣I，将药渣I与水溶液另器留存；

（2）取步骤（1）所得的药渣I，加6～10倍量水，煎煮1～2小时，过滤，收集滤液得滤液I，取滤液I与步骤（1）所得的水溶液合并，得合并液；

（3）取葛根、菟丝子、王不留行粗粉，加6～10倍量70%～75%乙醇回流提取2次，每次1～1.5小时，过滤，取药渣合并得药渣II，取滤液合并得滤液II，将滤液II减压回收乙醇至尽；

（4）取麦芽、通草、昆布和延胡索粗粉，与步骤（3）所得的药渣II混匀，加10～12倍量水，煎煮2次，每次1～2小时，过滤，取滤液合并得滤液III，将滤液III与步骤（2）所得的合并液混匀，减压浓缩至相对密度为1.02～1.04（50℃～60℃）时，每100mL药液中加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂B组分2.5～3.5mL，再加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂A组分4.5～5.5mL，搅匀，60℃～70℃水浴保温1～1.5小时，2～4℃条件下，静置20～24小时，过滤，收集滤液得滤液IV；将步骤（3）所得的滤液II加入滤液IV中，浓缩，干燥，粉碎，过40目筛，得药物浸膏粉；

（5）取步骤（1）所得的挥发油，加1～3倍量的95%乙醇，于35℃下充分搅拌，使其溶解，得挥发油乙醇溶液；

（6）取包合剂，加入20～80倍量蒸馏水，充分混匀，置胶体磨中，研磨5～15min，缓慢连续加入步骤（5）所得的挥发油乙醇溶液，40℃保温研磨10～30min，包合2～4次，冷藏12～24h，抽滤，取沉淀用适量乙醇洗涤2次，40℃真空干燥，粉碎，过40～60目筛，得药物包合物；

（7）取步骤（4）所得的药物浸膏粉和步骤（6）所得的药物包合物，加入填充剂、崩解剂和矫味剂，粉碎，混匀，过60～200目筛，用水或20～80%乙醇制软材，20～30目筛制粒，60～70℃减压干燥60～120min，颗粒水分控制在5%以下，20～30目筛整粒，加入润滑剂压片，质检，包装，即得治疗乳腺增生疾病的中药分散片。

本发明所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片的质量检测方法，包括以下步骤：

（1）鉴别

a、当归薄层鉴别：取本品2～5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加乙醚20～50ml，超声10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.7g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4︰1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b、葛根薄层鉴别：取本品1～4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇10～40ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成1mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶H薄层板上，使成条状，以体积比为7︰2.5︰0.25的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

c、菟丝子薄层鉴别：取本品1～3片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇30～90ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10︰5︰4的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

d、王不留行薄层鉴别：取本品3～6片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇30～60ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取王不留行对照药材0.8g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15︰7︰2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

e、麦芽薄层鉴别：取本品10～20片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加无水乙醇60～100ml，超声20～40分钟，滤过，滤液加50％氢氧化钾溶液2ml，加热回流15分钟，冰浴冷却5分钟，移置分液漏斗中，用水20ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，石油醚于30～60℃下振摇提取3次，每次10ml，合并石油醚层，45℃水浴挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液，另取麦芽对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为1︰1的苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含15％硝酸的50％乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

f、延胡索薄层鉴别：取本品4～10片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇50～100ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，加浓氨试液调至碱性，乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶液溶解，作为供试品溶液，另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成0.5mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为9︰2的甲苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（2）检查

本品应符合中国药典2010年版一部附录ⅠD制剂通则片剂项下的各项规定；除此之外，还包括以下项目的检查：

a、硬度取本品1片，径向固定在片剂四用测定仪的两横杆之间，其中的柱杆借助弹簧沿水平方向对片剂径向加压，当片剂破碎时，活动柱杆的弹簧停止加压，仪器刻度盘所指示的压力即为片剂的硬度，测定6片，取平均值；

b、分散均匀性取本品2片，置20±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

c、溶出度参照《中国药典》2010年版二部附录X C溶出度测定法第三法进行；取脱气处理的蒸馏水200ml，注入每个操作容器内，保持溶剂温度为37±0.5℃，取本品6片，分别投入6个操作容器中，立即启动旋转并开始计时，其中转速为100rpm，在规定时间内取样2ml，同时随行补充等量等温介质，0.45μm微孔滤膜滤过，自取样至滤过在30秒内完成，取续滤液10μl进样，测定阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量，计算累计溶出百分率，以溶出限度大于等于70%的取样时间为溶出度数据，其中n=6；

（3）含量测定

a、阿魏酸和藁本内酯照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温25℃，乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，其中梯度洗脱的方法为10%～25%A0～10min，25%～75%A10～30min，75%～10%A30～40min，流速为1ml/min，检测波长为325nm；

对照品溶液的制备取阿魏酸1.25mg，藁本内酯6.25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至100ml，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备取本品2～5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50～100ml，密塞，称重，超声20～40分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含阿魏酸应为0.1～1.2mg，含藁本内酯应为0.5～3mg；

b、葛根素照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃，体积比为25︰75的甲醇-水为流动相，流速为1ml/min，检测波长为250nm，理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备取葛根素对照品2mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备取本品1～4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇100～200ml，密塞，称重，超声30分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含葛根素应为5～36mg。

本发明所述的治疗乳腺增生疾病的中药分散片的用法用量主要取决于患者的年龄、体质及病情轻重等因素，具体情况谨遵医嘱。其用法用量为：口服给药，每次4片，每天3次，中病即止。

本发明所述的治疗乳腺增生疾病的中药分散片同普通片剂相比具有如下优势：

（1）吸收更快：该中药分散片服用后，遇水可迅速崩解形成均匀的粘性混悬液，崩解时间短、分散状态佳，故药物活性成分溶出迅速、吸收快。

（2）药效更强：该中药分散片服用后药物活性成分可快速溶出、吸收，故起效快、生物利用度高、作用强、顺应性好；该中药分散片具有良好的抗乳腺增生、抗炎、镇痛、活血化瘀作用，而且毒性低，安全性高，与现有市售制剂相比，具有原料来源广泛，药效作用多靶点、多层次，安全系数大。

（3）适用范围更广：该中药分散片可吞服、咀嚼、含吮或用水分散后服用，尤其适合老年和吞服困难的患者用药；亦可制成有利于糖尿病人服用的无糖类型。

质量检测方法与制剂处方的组成密切相关，本发明所述的质量检测方法设计科学合理，提高了所述中药分散片的质量控制标准，可充分保证其临床疗效。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的发明内容作进一步的详细描述。应理解，本发明的实施例只用于说明本发明而非限制本发明，在不脱离本发明技术思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出的各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。

实施例1

将上述重量的原料药和药用辅料共制成1000片中药分散片，每片重500mg。

【制法】

（1）取当归粗粉，加水浸泡6h，加热提取，收集挥发油，收集药渣得药渣I，将药渣I与水溶液另器留存；

（2）取步骤（1）所得的药渣I，加7倍量水，煎煮1小时，过滤，收集滤液得滤液I，取滤液I与步骤（1）所得的水溶液合并，得合并液；

（3）取葛根、菟丝子、王不留行粗粉，加7倍量70%乙醇回流提取2次，每次1小时，过滤，取药渣合并得药渣II，取滤液合并得滤液II，将滤液II减压回收乙醇至尽；

（4）取麦芽、通草、昆布和延胡索粗粉，与步骤（3）所得的药渣II混匀，加10倍量水，煎煮2次，每次1小时，过滤，取滤液合并得滤液III，将滤液III与步骤（2）所得的合并液混匀，减压浓缩至相对密度为1.02（50℃）时，每100mL药液中加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂B组分3mL，再加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂A组分4.5mL，搅匀，60℃水浴保温1小时，2℃条件下，静置21小时，过滤，收集滤液得滤液IV；将步骤（3）所得的滤液II加入滤液IV中，浓缩，干燥，粉碎，过40目筛，得药物浸膏粉；

（5）取步骤（1）所得的挥发油，加1倍量的95%乙醇，于35℃下充分搅拌，使其溶解，得挥发油乙醇溶液；

（6）取包合剂，加入30倍量蒸馏水，充分混匀，置胶体磨中，研磨5min，缓慢连续加入步骤（5）所得的挥发油乙醇溶液，40℃保温研磨10min，包合3次，冷藏15h，抽滤，取沉淀用适量乙醇洗涤2次，40℃真空干燥，粉碎，过40目筛，得药物包合物；

（7）取步骤（4）所得的药物浸膏粉和步骤（6）所得的药物包合物，加入填充剂、崩解剂和矫味剂，粉碎，混匀，过60目筛，用水或30%乙醇制软材，20目筛制粒，60℃减压干燥80min，颗粒水分控制在5%以下，20目筛整粒，加入润滑剂压片，质检，包装，即得治疗乳腺增生疾病的中药分散片。

【鉴别】

（1）当归薄层鉴别：取本品2片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加乙醚20ml，超声15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.7g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4︰1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（2）葛根薄层鉴别：取本品1片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成1mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶H薄层板上，使成条状，以体积比为7︰2.5︰0.25的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。

（3）菟丝子薄层鉴别：取本品1片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10︰5︰4的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（4）王不留行薄层鉴别：取本品3片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取王不留行对照药材0.8g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15︰7︰2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。

（5）麦芽薄层鉴别：取本品10片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加无水乙醇60ml，超声20分钟，滤过，滤液加50％氢氧化钾溶液2ml，加热回流15分钟，冰浴冷却5分钟，移置分液漏斗中，用水20ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，石油醚于30～60℃下振摇提取3次，每次10ml，合并石油醚层，45℃水浴挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液，另取麦芽对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为1︰1的苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含15％硝酸的50％乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（6）延胡索薄层鉴别：取本品4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇50ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，加浓氨试液调至碱性，乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶液溶解，作为供试品溶液，另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成0.5mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为9︰2的甲苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】

本品应符合中国药典2010年版一部附录ⅠD制剂通则片剂项下的各项规定；除此之外，还包括以下项目的检查：

（1）硬度取本品1片，径向固定在片剂四用测定仪的两横杆之间，其中的柱杆借助弹簧沿水平方向对片剂径向加压，当片剂破碎时，活动柱杆的弹簧停止加压，仪器刻度盘所指示的压力即为片剂的硬度，测定6片，取平均值。

（2）分散均匀性取本品2片，置20±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛。

（3）溶出度参照《中国药典》2010年版二部附录X C溶出度测定法第三法进行；取脱气处理的蒸馏水200ml，注入每个操作容器内，保持溶剂温度为37±0.5℃，取本品6片，分别投入6个操作容器中，立即启动旋转并开始计时，其中转速为100rpm，在规定时间内取样2ml，同时随行补充等量等温介质，0.45μm微孔滤膜滤过，自取样至滤过在30秒内完成，取续滤液10μl进样，按本实施例【含量测定】方法测定阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量，计算累计溶出百分率，以溶出限度大于等于70%的取样时间为溶出度数据，其中n=6。

【含量测定】

（1）阿魏酸和藁本内酯照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定。

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温25℃，乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，其中梯度洗脱的方法为10%A2min，25%A10min，75%A30min，流速为1ml/min，检测波长为325nm。

对照品溶液的制备取阿魏酸1.25mg，藁本内酯6.25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至100ml，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

供试品溶液的制备取本品2片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，密塞，称重，超声20分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果：本品阿魏酸和藁本内酯含量分别为0.247mg/片和0.618mg/片。

（2）葛根素照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃，体积比为25︰75的甲醇-水为流动相，流速为1ml/min，检测波长为250nm，理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备取葛根素对照品2mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

供试品溶液的制备取本品1片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇100ml，密塞，称重，超声30分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果本品葛根素含量为8.337mg/片。

实施例2

将上述重量的原料药和药用辅料共制成1000片中药分散片，每片重612mg。

【制法】

（1）取当归粗粉，加水浸泡10h，加热提取，收集挥发油，收集药渣得药渣I，将药渣I与水溶液另器留存；

（2）取步骤（1）所得的药渣I，加10倍量水，煎煮2小时，过滤，收集滤液得滤液I，取滤液I与步骤（1）所得的水溶液合并，得合并液；

（3）取葛根、菟丝子、王不留行粗粉，加8倍量75%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，过滤，取药渣合并得药渣II，取滤液合并得滤液II，将滤液II减压回收乙醇至尽；

（4）取麦芽、通草、昆布和延胡索粗粉，与步骤（3）所得的药渣II混匀，加12倍量水，煎煮2次，每次2小时，过滤，取滤液合并得滤液III，将滤液III与步骤（2）所得的合并液混匀，减压浓缩至相对密度为1.04（55℃）时，每100mL药液中加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂B组分3.5mL，再加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂A组分5.5mL，搅匀，70℃水浴保温1.5小时，4℃条件下，静置20小时，过滤，收集滤液得滤液IV；将步骤（3）所得的滤液II加入滤液IV中，浓缩，干燥，粉碎，过40目筛，得药物浸膏粉；

（5）取步骤（1）所得的挥发油，加3倍量的95%乙醇，于35℃下充分搅拌，使其溶解，得挥发油乙醇溶液；

（6）取包合剂，加入60倍量蒸馏水，充分混匀，置胶体磨中，研磨12min，缓慢连续加入步骤（5）所得的挥发油乙醇溶液，40℃保温研磨25min，包合4次，冷藏24h，抽滤，取沉淀用适量乙醇洗涤2次，40℃真空干燥，粉碎，过60目筛，得药物包合物；

（7）取步骤（4）所得的药物浸膏粉和步骤（6）所得的药物包合物，加入填充剂、崩解剂和矫味剂，粉碎，混匀，过120目筛，用水或60%乙醇制软材，30目筛制粒，70℃减压干燥120min，颗粒水分控制在5%以下，30目筛整粒，加入润滑剂压片，质检，包装，即得治疗乳腺增生疾病的中药分散片。

【鉴别】

（1）当归薄层鉴别：取本品4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加乙醚30ml，超声10分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（1）项下相应内容；

（2）葛根薄层鉴别：取本品3片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇20ml，超声处理10分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（2）项下相应内容；

（3）菟丝子薄层鉴别：取本品2片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇50ml，超声处理10分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（3）项下相应内容；

（4）王不留行薄层鉴别：取本品4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇40ml，超声处理10分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（4）项下相应内容；

（5）麦芽薄层鉴别：取本品15片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加无水乙醇80ml，超声30分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（5）项下相应内容；

（6）延胡索薄层鉴别：取本品8片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇90ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，加浓氨试液调至碱性，乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶液溶解，作为供试品溶液，另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成0.5mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3μl，余下步骤同实施例1【鉴别】（6）项下相应内容；

【检查】同实施例1【检查】项下相应内容。

【含量测定】

（1）阿魏酸和藁本内酯照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温25℃，乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，其中梯度洗脱的方法为20%A5min，40%A15min，30%A40min，流速为1ml/min，检测波长为325nm；

对照品溶液的制备同实施例1【含量测定】（1）项下相应内容。

供试品溶液的制备取本品4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇80ml，密塞，称重，超声30分钟，余下步骤同实施例1【含量测定】（1）项下相应内容。

测定法同实施例1【含量测定】（1）项下相应内容。

（2）葛根素方法依据、色谱条件、系统适用性试验及对照品溶液的制备同实施例1【含量测定】（2）项下相应内容。

供试品溶液的制备取本品3片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇160ml，余下步骤同实施例1【含量测定】（2）项下相应内容。

测定法同实施例1【含量测定】（2）项下相应内容。

结果：本品阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量分别为0.280mg/片、0.700mg/片和8.751mg/片。

实施例3

将上述重量的原料药和药用辅料共制成1000片中药分散片，每片重700mg。

【制法】

（1）取当归粗粉，加水浸泡4h，加热提取，收集挥发油，收集药渣得药渣I，将药渣I与水溶液另器留存；

（2）取步骤（1）所得的药渣I，加6倍量水，煎煮1小时，过滤，收集滤液得滤液I，取滤液I与步骤（1）所得的水溶液合并，得合并液；

（3）取葛根、菟丝子、王不留行粗粉，加10倍量75%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，过滤，取药渣合并得药渣II，取滤液合并得滤液II，将滤液II减压回收乙醇至尽；

（4）取麦芽、通草、昆布和延胡索粗粉，与步骤（3）所得的药渣II混匀，加8倍量水，煎煮2次，每次2小时，过滤，取滤液合并得滤液III，将滤液III与步骤（2）所得的合并液混匀，减压浓缩至相对密度为1.04（60℃）时，每100mL药液中加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂B组分2.5mL，再加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂A组分5.5mL，搅匀，70℃水浴保温1.5小时，3℃条件下，静置20小时，过滤，收集滤液得滤液IV；将步骤（3）所得的滤液II加入滤液IV中，浓缩，干燥，粉碎，过40目筛，得药物浸膏粉；

（5）取步骤（1）所得的挥发油，加2倍量的95%乙醇，于35℃下充分搅拌，使其溶解，得挥发油乙醇溶液；

（6）取包合剂，加入80倍量蒸馏水，充分混匀，置胶体磨中，研磨15min，缓慢连续加入步骤（5）所得的挥发油乙醇溶液，40℃保温研磨30min，包合2次，冷藏12h，抽滤，取沉淀用适量乙醇洗涤2次，40℃真空干燥，粉碎，过60目筛，得药物包合物；

（7）取步骤（4）所得的药物浸膏粉和步骤（6）所得的药物包合物，加入填充剂、崩解剂和矫味剂，粉碎，混匀，过80目筛，用水或80%乙醇制软材，30目筛制粒，70℃减压干燥60min，颗粒水分控制在5%以下，20目筛整粒，加入润滑剂压片，质检，包装，即得治疗乳腺增生疾病的中药分散片。

【鉴别】

（1）当归薄层鉴别：取本品5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加乙醚50ml，超声30分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（1）项下相应内容；

（2）葛根薄层鉴别：取本品4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇40ml，超声处理30分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（2）项下相应内容；

（3）菟丝子薄层鉴别：取本品3片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇90ml，超声处理30分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（3）项下相应内容；

（4）王不留行薄层鉴别：取本品5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇60ml，超声处理30分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（4）项下相应内容；

（5）麦芽薄层鉴别：取本品20片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加无水乙醇100ml，超声40分钟，余下步骤同实施例1【鉴别】（5）项下相应内容；

（6）延胡索薄层鉴别：取本品10片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇80ml，余下步骤同实施例1【鉴别】（6）项下相应内容；

【检查】同实施例1【检查】项下相应内容。

【含量测定】

（1）阿魏酸和藁本内酯照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温25℃，乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，其中梯度洗脱的方法为15%A10min，70%A25min，60%A30min，流速为1ml/min，检测波长为325nm；

对照品溶液的制备同实施例1【含量测定】（1）项下相应内容。

供试品溶液的制备取本品5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇100ml，密塞，称重，超声40分钟，余下步骤同实施例1【含量测定】（1）项下相应内容。

测定法同实施例1【含量测定】（1）项下相应内容。

（2）葛根素方法依据、色谱条件、系统适用性试验及对照品溶液的制备同实施例1【含量测定】（2）项下相应内容。

供试品溶液的制备取本品4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇200ml，余下步骤同实施例1【含量测定】（2）项下相应内容。

测定法同实施例1【含量测定】（2）项下相应内容。

结果：本品阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量分别为0.219mg/片、0.549mg/片和6.585mg/片。

实施例4

将上述重量的原料药和药用辅料共制成1000片中药分散片，每片重803mg。

【制法】同实施例1【制法】项下相应内容。

【鉴别】同实施例1【鉴别】项下相应内容。

【检查】同实施例1【检查】项下相应内容。

【含量测定】同实施例1【含量测定】项下相应内容。

结果：本品阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量分别为0.359mg/片、0.898mg/片和10.773mg/片。

实施例5

将上述重量的原料药和药用辅料共制成1000片中药分散片，每片重450mg。

【制法】同实施例1【制法】项下相应内容。

【鉴别】同实施例2【鉴别】项下相应内容。

【检查】同实施例2【检查】项下相应内容。

【含量测定】同实施例2【含量测定】项下相应内容。

结果：本品阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量分别为0.221mg/片、0.553mg/片和7.470mg/片。

本发明所述的包合剂是适用于制备中药分散片的一大类药用辅料。在本发明给出的上述实施例中，所采用的包合剂为α-环糊精、β-环糊精、羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精，但实施例中所采用的包合剂并不限制本发明所述包合剂的保护范围，本领域普通技术人员可根据实际情况，选择合适的包合剂。例如，还可以选择γ-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、羧甲基-β-环糊精或一氯三嗪-β-环糊精作为本发明的包合剂。同样应该理解，本发明所述的填充剂也并非限制于本发明的实施例，而仅被附加的权利要求所限定。

实施例6本发明中药分散片的药效学研究

试验材料：

（1）药品：本发明实施例1制备的中药分散片，每片重0.5g，相当于2.5g生药；乳癖消颗粒，哈尔滨泰华药业股份有限公司；苯甲酸雌二醇注射液，天津金耀氨基酸有限公司；黄体酮注射液，武汉远大制药集团有限公司；阿司匹林肠溶片，山西威奇达药业有限公司；醋酸地塞米松注射液，上海通用药业股份有限公司；复方丹参颗粒，天津华津制药厂；盐酸肾上腺素注射液，武汉远大制药集团有限公司。

（2）动物：昆明种小白鼠，体重20±2g；SD大鼠，体重170±10g；雌雄不拘，重庆市中药研究院实验动物中心。

（3）试剂：雌二醇（E₂）放免试剂盒、孕酮（P）放免试剂盒，天津九鼎医学生物工程有限公司；高分子右旋糖酐(Dextran500kD)，Sigma公司；冰醋酸，分析纯，重庆化学试剂厂；角叉菜胶，上海恒远生物科技有限公司；琼脂，青岛玉洲化工有限公司。

试验方法与结果：分别按照以下描述的内容进行试验，量反应数据以平均值±标准差表示，采用t检验进行统计学处理。

（1）抗乳腺增生作用

①对乳腺增生模型大鼠的影响取大鼠60只，随机分为6组，每组10只。除正常对照组外，其余各组皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.6mg/kg，每日一次，连续25天，正常对照组皮下注射等体积生理盐水；第26日开始改为肌注黄体酮4mg/kg，连续5天，复制大鼠乳腺增生模型。第31天开始，各组按表1灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，每日一次，连续30天。造模及给药期间每周称重一次，根据体重调整激素用量及给药量。末次给药后24小时，称重后摘眼球取血，3000rpm离心，分离血清，放免法测定血清中雌二醇（E₂）和孕酮（P）水平。处死大鼠，取子宫、卵巢、胸腺及脾脏，称重并计算脏器系数；取第二对乳房用10%甲醛溶液固定后，常规取材，石蜡制片，HE染色，树胶封固，光镜下观察乳腺的病理形态学变化。结果详见表1～5。

表1  对乳腺增生模型大鼠脏器系数的影响

n＝10)

注：与正常对照组比较：^△p<0.05，^△△p<0.01；与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表1可以看出，模型组大鼠子宫、卵巢、胸腺及脾脏系数明显增大，与正常对照组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，1、2g/kg剂量对模型大鼠的子宫、卵巢和胸腺系数的逆转作用明显，与模型组比较，有显著性差异（p<0.05）。

表2  对乳腺增生模型大鼠血清性激素水平的影响

n＝10)

注：与正常对照组比较：^△p<0.05，^△△p<0.01；与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表2可以看出，模型组大鼠的雌二醇、孕酮水平明显升高，与正常对照组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，1、2g/kg剂量对模型大鼠雌二醇水平的降低作用较为明显，与模型组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）。

表3  对乳腺增生模型大鼠乳腺组织导管的影响

n＝10)

注：与正常对照组比较：^△p<0.05，^△△p<0.01；与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表3可以看出，模型组大鼠乳腺组织导管的面积、周长、最小直径均明显变大，与正常对照组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，2g/kg剂量的逆转作用明显，与模型组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）。

表4  对乳腺增生模型大鼠乳腺组织腺泡的影响

n＝10)

注：与正常对照组比较：^△△p<0.01；与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表4可以看出，模型组大鼠乳腺组织腺泡的面积、周长、最小直径均明显变大，与正常对照组比较，有极显著性差异（p<0.01）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，1、2g/kg剂量的逆转作用明显，与模型组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）。

从表5可以看出，模型组大鼠乳腺组织腺泡数、导管数均明显增加，与正常对照组比较，有显著性差异（p<0.05）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，2g/kg剂量可明显降低模型大鼠腺组织的腺泡数量，与模型组比较，有显著性差异（p<0.05）。

表5  对乳腺增生模型大鼠乳腺组织腺泡数、导管数的影响n＝10)

注：与正常对照组比较：^△p<0.05；与模型组比较：^*p<0.05。

②小结表1～5结果表明：a.雌二醇致大鼠乳腺增生模型复制成功，且其与人类乳腺增生疾病病变基本一致；b.本发明分散片对雌激素引起的乳腺增生疾病有较好的治疗作用。

（2）镇痛作用

①对热刺激致疼痛小鼠的影响（热板法）以恒温水浴（55±0.5℃）加热后的金属圆筒底盘作为热板，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间（秒）作为痛阈值。实验时选用雌性小鼠。给药前测定每只小鼠的痛阈值2次，以不超过30秒者为合格，取平均值作为给药前痛阈值。取痛阈值合格的小鼠50只，随机分为5组。各给药组按表6所示剂量灌胃给药，每天1次，连续3天，模型组灌胃等体积蒸馏水，末次给药后1h、2h分别测定每只小鼠的痛阈值，计算痛阈提高百分率。结果详见表6。

表6  对疼痛模型小鼠的影响（热板法）n＝10)

注：与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表6可以看出，本发明分散片三个剂量均能不同程度地提高热刺激小鼠的痛阈值，与模型组比较，有显著性差异（p<0.05），尤以给药后1h的作用较为明显。

②对醋酸致疼痛小鼠的影响（扭体法）选用50只小鼠，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。按表7所示剂量灌胃给药，每天1次，连续3天，模型组灌胃等体积蒸馏水。末次给药后60分钟，腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.01ml/g。记录20分钟内各鼠出现扭体反应的潜伏期和扭体次数。结果详见表7。

表7  对疼痛模型小鼠的影响（扭体法）

n＝10)

注：与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表7可以看出，本发明分散片三个剂量均能不同程度地延长注射冰醋酸后小鼠扭体反应的潜伏期，并能减少扭体次数，其中，0.9、1.8g/kg剂量的作用明显，与模型组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）。

③小结表6～7结果表明，本发明分散片对热刺激和化学物质刺激引起的疼痛均有较强的抑制作用。

（3）抗炎作用

①对角叉菜胶致足肿胀大鼠的影响取大鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只。各给药组按表8所示的剂量灌胃给药，每天1次，连续5天，模型组灌胃等体积蒸馏水。末次给药后30分钟，在大鼠右后足垫部皮下注射1%角叉菜胶0.05ml/只致炎。分别测定致炎前和致炎后1、3、6、8小时的大鼠右后足容积，计算足肿胀率[=（致炎后足容积-致炎前足容积）/致炎前足容积×100%）。结果详见表8。

表8  对炎症模型大鼠足肿胀的影响（角叉菜胶法）

n＝10)

注：与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01，^***p<0.001。

从表8可以看出，本发明分散片三个剂量均能不同程度地降低注射角叉菜胶后3h、6h的大鼠足肿胀率，其中，1、2g/kg剂量的作用明显，与模型组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）。

②对琼脂致慢性炎症性肉芽肿大鼠的影响（琼脂法）取大鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只。乙醚浅麻醉下，背部中线处取2.0cm×2.0cm面积去毛、消毒，皮下注射2%琼脂（55℃水浴保温）2mL，注射后立即凸起球状包块即成大鼠肉芽肿模型。次日，各给药组按表9所示的剂量灌胃给药，每天1次，连续10天，模型组灌胃等体积蒸馏水。末次给药1h后脱颈椎处死大鼠，剪开肉芽部位皮肤，剥离肉芽肿琼脂块并称重，计算肉芽肿抑制率。结果详见表9。

表9  对炎症模型大鼠肉芽肿的影响（琼脂法）n＝10)

注：与模型组比较：^**p<0.01。

从表9可以看出，本发明分散片三个剂量均能不同程度地降低注射琼脂后的大鼠肉芽肿湿重，与模型组比较，均有极显著性差异（p<0.01）。

③小结表8～9结果表明，本发明分散片对化学物质刺激所致的大鼠急性、慢性炎症均有明显的抑制作用。

（4）活血化瘀作用

①对肾上腺素致血瘀模型大鼠的影响取大鼠60只，按体重随机分成6组，每组10只。各给药组按表10所示的剂量灌胃给药，每天1次，连续10天，正常对照组、模型组灌胃等体积蒸馏水。末次给药后1小时，除正常对照组外，其余各组大鼠均按0.08mL/100g皮下注射0.1%的肾上腺素，2h后将动物于4℃冰水中浸泡5分钟，与首次注射后4h再次注射同等剂量的肾上腺素，禁食不禁水18小时。次日戊巴比妥钠45mg/kg麻醉后腹主动脉取血，0.5mL注入EDTA（乙二胺四乙酸）采血管中抗凝后测定红细胞比容，4mL注入肝素抗凝管中，测定全血粘度，离心后，测定血浆粘度，计算聚集指数、刚性指数和变形指数等。结果详见表10～11。

表10  对血瘀模型大鼠血液粘度的影响

n＝10)

注：与正常对照组比较：^△p<0.05，^△△p<0.01，^△△△p<0.001；与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01，^***p<0.001。

从表10可以看出，模型组大鼠全血切变率（高切、低切）、血浆粘度、红细胞比容均明显升高，与正常对照组比较，有显著性、极显著性或非常显著性差异（p<0.05或p<0.01或p<0.001）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，1、2g/kg剂量的逆转作用明显，与模型组比较，有显著性或极显著性差异（p<0.05或p<0.01）。

表11  对血瘀模型大鼠红细胞指数的影响

n＝10)

注：与正常对照组比较：^△△△p<0.001；与模型组比较：^*p<0.05，^**p<0.01。

从表11可以看出，模型组大鼠红细胞聚集指数、刚性指数和变形指数显著升高，与正常对照组比较，有非常显著性差异（p<0.001）；本发明分散片三个剂量对模型大鼠的这些不良改变均有一定的逆转作用，其中，2g/kg剂量的逆转作用明显，与模型组比较，有极显著性差异（p<0.01）。

②对高分子右旋糖酐致微循环障碍模型小鼠耳廓微血管口径的影响取小鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只。各给药组按表12所示的剂量灌胃给药，每天1次，连续10天，正常对照组灌胃等体积蒸馏水。第9天，用8%硫化钠脱耳廓毛，温水清洗。次日，将小鼠麻醉侧卧位固定，置耳廓于水平位置，末次给药前10分钟，尾静脉注射10%高分子右旋糖酐10mL/kg，制备全身微循环障碍模型。微循环显微镜下观察末次给药后5、20、30分钟微血管口径的变化。结果详见表12。

表12  对微循环障碍模型小鼠耳廓微血管口径的影响n＝10)

注：与模型组比较：^*p<0.05。

从表12可以看出，本发明分散片三个剂量，给药后5、20、30min可增大注射高分子右旋糖酐后的小鼠耳廓微动脉口径，给药后20、30min可增大小鼠耳廓微静脉口径，其中，0.9g/kg剂量给药后30min的作用明显，与模型组比较，有显著性差异（p<0.05）。

③小结表10～12结果表明，本发明分散片对急性血瘀模型大鼠有明显的治疗作用，可扩张微血管，促进血液循环。

（5）安全性评价

①急性毒性试验LD ₅₀ 测定本发明分散片50%浓度，按40mL/kg给小鼠一次性灌胃给药，药后观察动物的一般状况，连续7天。结果：观察期间，小鼠饮食正常，活动自如，动物未出现明显异常表现，无一例死亡。提示：本发明分散片单次给药无法测出LD₅₀。

MTD测定  本发明分散片50%浓度，按40mL/kg给小鼠灌胃给药，1日内给药2次，药后连续观察7天，第8天处死小鼠，进行剖检。结果：未见一例死亡，也未见脏器组织有明显异常改变。提示：本发明分散片MTD为200g生药/kg，相当于临床等效剂量的400倍。

②长期毒性试验健康SD大鼠按体重随机分为高、中、低剂量三个给药组（灌胃给药剂量分别相当于临床等效剂量的100、50、25倍）和一个正常对照组（灌胃等体积蒸馏水），每日给药一次，连续用药6个月，药后观察动物的一般状态，定期记录体重、食量，给药3个月、6个月及停药后15天，各组处死10只动物，进行血液学、血液生化学和主要脏器病理组织学检查。结果:各组动物活动、毛色、行为、尿液、大便、进食量、体重增加量无明显异常变化；血液学（RBC、Hb、WBC、DC、BPC及CT）及血液生化学（GPT、SGOT、ALP、TP、T-BIL、BUN、CREE、CLU及T-CHO）等各项指标均在正常值范围内；主要脏器重量指数无明显差异，肉眼观察主要脏器无炎症及浊肿、变性、坏死等病理改变，病理组织学检查未发现细胞形态及组织结构异常变化。提示：本发明分散片连续重复给药未见明显毒性反应。

③小结实验结果表明，本发明分散片毒性较低，在有效剂量、有效疗程内用药安全。

药理试验证实，本发明实施例1所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片具有良好的抗乳腺增生、抗炎、镇痛、活血化瘀作用，而且毒性低，安全性高，连续重复给药未见明显毒性反应。

采用实施例6所述的试验方法考察实施例2～5制备的其他治疗乳腺增生疾病的中药分散片的药物效果，其试验结果表明所述中药分散片同样具有良好的抗乳腺增生、抗炎、镇痛、活血化瘀作用，而且毒性低，安全性高，连续重复给药未见明显毒性反应。

亦即是说，本发明所述治疗乳腺增生疾病的中药分散片可有效治疗乳腺增生疾病；与现有市售制剂相比，具有原料来源广泛、制剂技术先进，药效作用多靶点、多层次，安全系数大，服用剂量小，剂型符合临床需要。

Claims (5)

1.一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片，其特征在于，所述中药分散片由以下重量份数比的原料药和药用辅料制成：

2.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片，其特征在于：所述包合剂选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、甲基-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精或一氯三嗪-β-环糊精；所述填充剂选自乳糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、预胶化淀粉、微晶纤维素或糊精；所述崩解剂选自羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、羟甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、羟丙基淀粉或微粉硅胶；所述润滑剂选自硬脂酸镁、微粉硅胶或滑石粉；所述矫味剂选自蔗糖、阿司巴甜、甜菊苷、安赛蜜或甜蜜素。

3.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片，其特征在于：所述中药分散片的片重为400～1000mg。

4.一种如权利要求1～3任一项所述的治疗乳腺增生疾病的中药分散片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）取当归粗粉，加水浸泡4～12h，加热提取，收集挥发油，收集药渣得药渣I，将药渣I与水溶液另器留存；

（2）取步骤（1）所得的药渣I，加6～10倍量水，煎煮1～2小时，过滤，收集滤液得滤液I，取滤液I与步骤（1）所得的水溶液合并，得合并液；

（3）取葛根、菟丝子、王不留行粗粉，加6～10倍量70%～75%乙醇回流提取2次，每次1～1.5小时，过滤，取药渣合并得药渣II，取滤液合并得滤液II，将滤液II减压回收乙醇至尽；

（4）取麦芽、通草、昆布和延胡索粗粉，与步骤（3）所得的药渣II混匀，加10～12倍量水，煎煮2次，每次1～2小时，过滤，取滤液合并得滤液III，将滤液III与步骤（2）所得的合并液混匀，减压浓缩至相对密度为1.02～1.04（50℃～60℃）时，每100mL药液中加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂B组分2.5～3.5mL，再加入1%ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂A组分4.5～5.5mL，搅匀，60℃～70℃水浴保温1～1.5小时，2～4℃条件下，静置20～24小时，过滤，收集滤液得滤液IV；将步骤（3）所得的滤液II加入滤液IV中，浓缩，干燥，粉碎，过40目筛，得药物浸膏粉；

（5）取步骤（1）所得的挥发油，加1～3倍量的95%乙醇，于35℃下充分搅拌，使其溶解，得挥发油乙醇溶液；

（6）取包合剂，加入20～80倍量蒸馏水，充分混匀，置胶体磨中，研磨5～15min，缓慢连续加入步骤（5）所得的挥发油乙醇溶液，40℃保温研磨10～30min，包合2～4次，冷藏12～24h，抽滤，取沉淀用适量乙醇洗涤2次，40℃真空干燥，粉碎，过40～60目筛，得药物包合物；

（7）取步骤（4）所得的药物浸膏粉和步骤（6）所得的药物包合物，加入填充剂、崩解剂和矫味剂，粉碎，混匀，过60～200目筛，用水或20～80%乙醇制软材，20～30目筛制粒，60～70℃减压干燥60～120min，颗粒水分控制在5%以下，20～30目筛整粒，加入润滑剂压片，质检，包装，即得治疗乳腺增生疾病的中药分散片。

5.一种如权利要求1～3任一项所述的中药分散片的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）鉴别

a、当归薄层鉴别：取本品2～5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加乙醚20～50ml，超声10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.7g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4︰1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b、葛根薄层鉴别：取本品1～4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇10～40ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成1mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶H薄层板上，使成条状，以体积比为7︰2.5︰0.25的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

c、菟丝子薄层鉴别：取本品1～3片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇30～90ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10︰5︰4的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

d、王不留行薄层鉴别：取本品3～6片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇30～60ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取王不留行对照药材0.8g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15︰7︰2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；

e、麦芽薄层鉴别：取本品10～20片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加无水乙醇60～100ml，超声20～40分钟，滤过，滤液加50％氢氧化钾溶液2ml，加热回流15分钟，冰浴冷却5分钟，移置分液漏斗中，用水20ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，石油醚于30～60℃下振摇提取3次，每次10ml，合并石油醚层，45℃水浴挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml溶解，作为供试品溶液，另取麦芽对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为1︰1的苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含15％硝酸的50％乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

f、延胡索薄层鉴别：取本品4～10片，研成细粉，过三号筛，精密称定，加甲醇50～100ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，加浓氨试液调至碱性，乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶液溶解，作为供试品溶液，另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成0.5mg/ml的对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为9︰2的甲苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，在波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（2）检查

本品应符合中国药典2010年版一部附录ⅠD制剂通则片剂项下的各项规定；除此之外，还包括以下项目的检查：

a、硬度取本品1片，径向固定在片剂四用测定仪的两横杆之间，其中的柱杆借助弹簧沿水平方向对片剂径向加压，当片剂破碎时，活动柱杆的弹簧停止加压，仪器刻度盘所指示的压力即为片剂的硬度，测定6片，取平均值；

b、分散均匀性取本品2片，置20±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

c、溶出度参照《中国药典》2010年版二部附录X C溶出度测定法第三法进行；取脱气处理的蒸馏水200ml，注入每个操作容器内，保持溶剂温度为37±0.5℃，取本品6片，分别投入6个操作容器中，立即启动旋转并开始计时，其中转速为100rpm，在规定时间内取样2ml，同时随行补充等量等温介质，0.45μm微孔滤膜滤过，自取样至滤过在30秒内完成，取续滤液10μl进样，测定阿魏酸、藁本内酯和葛根素含量，计算累计溶出百分率，以溶出限度大于等于70%的取样时间为溶出度数据，其中n=6；

（3）含量测定

a、阿魏酸和藁本内酯照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温25℃，乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，其中梯度洗脱的方法为10%～25%A0～10min，25%～75%A10～30min，75%～10%A30～40min，流速为1ml/min，检测波长为325nm；

对照品溶液的制备取阿魏酸1.25mg，藁本内酯6.25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至100ml，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备取本品2～5片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50～100ml，密塞，称重，超声20～40分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含阿魏酸应为0.1～1.2mg，含藁本内酯应为0.5～3mg；

b、葛根素照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃，体积比为25︰75的甲醇-水为流动相，流速为1ml/min，检测波长为250nm，理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备取葛根素对照品2mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备取本品1～4片，研成细粉，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇100～200ml，密塞，称重，超声30分钟，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含葛根素应为5～36mg。