CN101288753B - 一种治疗血尿的中药组合物及其制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗血尿的药物组合物及制备方法和质量控制方法。本发明的药物组合物原料药组成为：棕榈子、菝葜、薏苡仁组成，制备方法为：取棕榈子、菝葜，加水煎煮，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩清膏，加入乙醇等量，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；另取薏苡仁，粉碎成细粉，余下的薏苡仁粉碎成粗粉，用乙醇7-9倍量作溶剂，浸渍20-30小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，加入1-3倍的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏，混匀，干燥，粉碎成粗粉，即得。本发明采用高效液相色谱法对原儿茶酸计进行含量测定。本发明药物组合物治疗血尿有很好的疗效。

Description

一种治疗血尿的中药组合物及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，特别是涉及一种治疗血尿的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

正常的尿液含有极少量的红细胞。未经离心的尿液在显微镜下每个高倍视野可有红细胞0～2个，如果超过此数，即为血尿。血尿是泌尿及男性生殖系疾患最常见和最重要的症状。造成血尿的最主要原因是泌尿系及男性生殖系疾患。此外亦可由泌尿系之外的其它疾患所致，如心血管疾患、血液疾病、过敏性疾病等均可发生血尿。对泌尿外科来说，肉眼血尿的临床意义更为重要，应引起高度重视。

血尿的原因还可以从其是否伴有其它症状进行分析。无症状的血尿应首先考虑泌尿系肿瘤的可能性。血尿伴有疼痛，尤其是伴有绞痛应考虑尿路结石，如伴有尿痛及尿流中断，应考虑膀胱结石，如伴有明显膀胱刺激症状，则以尿路感染、泌尿系结核以及膀胱肿瘤等为多见。此外，应结合患者病史、年龄、血尿的色泽、程度等对血尿的原因进行综合判断。

血尿的治疗应根据病因来确定。对于肾性血尿来说，靠止血来治疗是不行也不科学的。目前中、西医常规治疗缺乏特殊的治疗方法和特效的药物，各种药物疗效都不能令人满意，使血尿长期不能消除或反复发作。所以提供一种疗效确切，且无副作用的药物制剂是非常有必要的。

发明内容

本发明目的在于提供一种治疗血尿的中药组合物；

本发明目的还在于提供一种治疗血尿的中药组合物制备方法；

本发明目的还在于提供一种治疗血尿的中药组合物的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明所述的治疗血尿的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：

棕榈子50-180重量份    菝葜20-100重量份    薏苡仁20-70重量份；

上述原料优选配比为：

棕榈子120-160重量份   菝葜30-60重量份     薏苡仁30-40重量份；

上述原料优选配比为：

棕榈子150重量份       菝葜50重量份        薏苡仁35重量份；

本发明所述的治疗血尿的中药组合物可由如下重量比的原料药制成的：

棕榈子50-180重量份    菝葜40-160重量份    薏苡仁30-120重量份

石韦30-120重量份      白茅根30-120重量份；

上述原料优选配比为：

棕榈子120-160重量份   菝葜30-60重量份     薏苡仁30-40重量份

石韦80-100重量份      白茅根50-80重量份；

上述原料优选配比为：

棕榈子150重量份       菝葜50重量份        薏苡仁35重量份

石韦90重量份          白茅根70重量份；

上述原料优选配比为：

棕榈子130重量份       菝葜45重量份        薏苡仁38重量份

石韦85重量份          白茅根60重量份；

本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。

本发明所述的中药组合物胶囊制剂的制备方法为：

选取原料药：

棕榈子50-180重量份    菝葜20-100重量份     薏苡仁20-70重量份；

取棕榈子、菝葜，加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(70-85℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置20-30小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；另取薏苡仁12-35重量份，粉碎成细粉，余下的薏苡仁粉碎成粗粉，用乙醇7-9倍量作溶剂，浸渍20-30小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，加入1-3倍的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏，混匀，干燥，粉碎成粗粉，装入胶囊，即得。

选取原料药：

棕榈子50-180重量份        菝葜40-160重量份       薏苡仁30-120重量份

石韦30-120重量份          白茅根30-120重量份；

取棕榈子、菝葜，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，冷至室温度，加入等重量95％乙醇，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；另取薏苡仁16g，粉碎成能通过80目筛细粉，余下的薏苡仁粉碎成能通过24目筛粗粉，将粉碎成粗粉的薏苡仁加6-8倍量的95％乙醇，密闭浸泡24小时后，放入渗漉器内渗漉，当收集的渗漉液为薏苡仁粗粉的85％时作为初漉液，另器收集其续漉液，然后将续漉液在60℃以下干燥成稠膏后与初漉液合并，静置，回收乙醇后，加入1.6倍重量份的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏，混匀，干燥，真空干燥压力≥0.06MPa，温度≤60℃，粉碎成粗粉，装入胶囊，制成70粒，即得。

本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取制剂相当于原药材20-25g的本发明组合物，加25ml乙醚，超声处理35-50分钟，过滤，滤液挥至1.5ml作为供试品，另取薏苡仁药材4-7g同法制成对照药材溶液，吸取上述两种溶液各25μl点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯(2-5∶0.8-1.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4-6％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取制剂相当于原药材7-15g的本发明组合物，加水30ml，置水浴上稍加热，用脱脂棉过滤，滤液用饱和的正丁醇提取2-4次，用量为15-35ml，合并提取液，蒸干，加甲醇2ml作为供试品；另取棕榈子对照粉末1g，加水40-60ml煎煮0.8-1.8小时，放冷，用脱脂棉过滤，滤液浓缩至15-25ml，加入等量的无水乙醇15-25ml，摇匀，静置，过滤，蒸干，用甲醇2ml溶解作为对照品；吸取样品溶液15ul，对照品溶液20ul点与同一硅胶GF254板上，以氯仿-甲醇-醋酸(8-12∶4-6∶0.4-0.8)为展开剂，展开缸充分饱和后展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸(10-16∶80-90∶1-3)为流动相；检测波长为260nm；

对照品溶液的制备：精密称取在原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取本发明药物制剂内容物1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-酸水(8-10∶0.8-1.8)50ml，密塞，称定重量，超声处理50-70分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取制剂相当于原药材22g的本发明组合物，加25ml乙醚，超声处理40分钟，过滤，滤液挥至1.5ml作为供试品，另取薏苡仁药材5g同法制成对照药材溶液，吸取上述两种溶液各25μl点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取制剂相当于原药材10g的本发明组合物，加水30ml，置水浴上稍加热，用脱脂棉过滤，滤液用饱和的正丁醇提取三次，用量分别为30ml，20ml，20ml，合并提取液，蒸干，加甲醇2ml作为供试品；另取棕榈子对照粉末1g，加水50ml煎煮1小时，放冷，用脱脂棉过滤，滤液浓缩至20ml，加入等量的无水乙醇20ml，摇匀，静置，过滤，蒸干，用甲醇2ml溶解作为对照品；吸取样品溶液15ul，对照品溶液20ul点与同一硅胶GF254板上，以氯仿-甲醇-醋酸(10∶5∶0.5)为展开剂，展开缸充分饱和后展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸(13∶85∶2)为流动相；检测波长为260nm；对照品溶液的制备：精密称取在原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取本发明药物内容物1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-酸水(9∶1)(取浓盐酸1ml稀释于1000ml水中，即得)50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)60分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明组合物具有很好的药效，相比现有制剂表现出很好的药效；本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1药理试验

按照以下本发明药物组各组组方制备成胶囊剂，比较本发明药物组不同组方与阳性对照药物间清热利湿、凉血止血的功效，部分试验结果见表1和2。

本发明药物组Ⅰ棕榈子150g  菝葜50g  薏苡仁35g；

本发明药物组Ⅱ棕榈子130g  菝葜45g  薏苡仁38g   石韦85g

白茅根60g；

本发明药物组Ⅲ棕榈子150g  菝葜50g  薏苡仁35g    石韦90g

白茅根70g

本发明药物组Ⅳ棕榈子100g    菝葜70g  薏苡仁50g

阳性药物对照组市售血尿安胶囊

1)清热作用：

对细菌内毒素所致家兔发热体温的影响取体重在2.0～3.0kg的大耳白家兔，雌雄兼有，实验前一天，选取体温在38.0～39.4℃，当日体温变化不超过0.4℃的家兔作为实验用兔。当日，测定造模前基础体温，自家兔耳静脉注射细菌内毒素生理盐水溶液，剂量为7.5g，观察体温变化，每0.5小时记录一次，选取注射1h后体温上升超过0.5℃的家兔，随机分成6组，每组8只：本发明药物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及阳性药物对照组、阴性对照组。给家兔灌胃给药后，持续观察家兔体温变化，每1.0小时记录一次，连续记录5h，以每1.0h的动物体温与基础体温的差值为观察指标，数据进行t检验。结果见下表：

对细菌内毒素所致家兔发热体温的影响

与阴性对照组比较*P＜0.05

结果表明：本发明药物胶囊剂对细菌内毒素所致家兔发热有明显抑制作用，具有清热的功效。本发明药物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的清热功效优于本发明药物组Ⅳ。

2)利尿作用

取大鼠60只，雌雄兼用，200±20g，随机分为6组，每组10只，分别灌胃。每组给药剂量0.6g/kg，灌胃2W，灌胃第14d时，常水组大鼠给予水负荷4ml/100g，药液按正常剂量稀释至4ml/100g，灌胃后将大鼠放入代谢笼内，分别收集并记录大鼠灌胃后5h的排尿量，并对结果进行t检验。结果见下表：

表2对给予水负荷大鼠尿量的影响(n＝10，

)

分组	给予水负荷后5h的尿量(ml)
		常水组	5.6±1.7
本发明药物组Ⅰ	8.9±2.2**
		本发明药物组Ⅱ	9.1±1.7**△
本发明药物组Ⅲ	9.0±2.0**△
		本发明药物组Ⅳ	8.4±1.7*
阳性对照组	7.9±1.5*

与阴性对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，与阳性对照组比较△P＜0.05。

从上表可以看出，本发明药物胶囊剂对水负荷大鼠尿量有显著性的影响，与阳性对照组比较具有显著性差异。本发明药物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的影响更强于本发明药物组Ⅳ。

3)凉血止血

对小鼠凝血时间的影响昆明种小鼠，2级，体重18～20g，雌雄兼用，购进小鼠后置于实验室中检疫3天，按体重随机分作6组，每组15只，本发明药物各组灌胃本发明药物0.3g/kg，阳性药对照组予血尿安胶囊0.3g/kg，空白对照组予等量饮用水，每天给药1次，连续3天。实验步骤：于末次给药后1小时小鼠摘眼球取血，于玻片两端各滴1直径约5mm的血滴，并立即计时，每隔30秒用清洁针头自血滴边缘向里轻轻挑动1次，观察有无血丝挑起，自采血开始至挑起血丝止，所历时间即为凝血时间，另1滴血供最后复验。结果见下表：

血尿胶囊对小鼠凝血时间的影响

组别	动物数(n)	剂量(g/kg)	凝血时间(s)
				饮用水组	15		114.00±30.98
阳性对照组	15	0.3	82±20.98**
				本发明药物组Ⅰ	15	0.3	64.50±26.52**△
本发明药物组Ⅱ	15	0.3	67.00±31.78**△
				本发明药物组Ⅲ	15	0.3	66.50±26.52**△
本发明药物组Ⅳ	15	0.3	70.50±26.52**△

与饮用水组对照组比较**P＜0.01，与阳性对照组比较△P＜0.05。

结果表明：本发明药物与阳性对照药物对小鼠凝血时间较饮用水对照组明显缩短，有显著性差异。本发明药物的凉血止血作用较阳性对照组有显著性提高。本发明药物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用更强于本发明药物组Ⅳ。

实验例2鉴别筛选实验

1)薏苡仁的薄层鉴别

①供试品溶液的制备

取本发明药物胶囊剂7粒共4份，倾出内容物，加25ml乙醚，超声处理20、40、60、90分钟，过滤，滤液挥至1.5ml作为供试品，另取薏苡仁药材5g同法制成对照药材溶液，吸取上述两种溶液各25μl点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。比较供试品溶液和对照药材溶液不同提取时间各斑点在薄层版上的显色效果，结果见下表：

超声时间	20分钟	40分钟	60分钟	90分钟
					显色效果	显色浅	显色清晰	显色清晰	显色清晰

从上表可以看出，超声提取40分钟所制备的供试品溶液与对照品溶液，各主斑点在薄层板上显色清晰，已经符合实验要求。

②展开剂的选择

吸取供试品溶液和对照品溶液各25μl点于硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯为展开剂，配比分别为2∶1、3∶1、3∶2、4∶1，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。比较应用不同配比展开剂，

供试品溶液和对照药材溶液各斑点在薄层板上的展开效果，结果见下表：

展开剂配比	2∶1	3∶1	3∶2	4∶1
					主斑点展开效果	分离不好，有干扰	分离效果好，无干扰	分离不好，干扰大	分离不好，有扰大

从上表可以看出展开剂配比为3∶1时，在薄层板上展开效果好，适合试验要求。

③供试品溶液点样量的选择

分别吸取供试品溶液10μl、15μl、20μl、25μl、30μl，对照品溶液各25μl，点于硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。比较供试品溶液各斑点的显色效果，结果见下表：

点样量	10μl	15μl	20μl	25μl	30μl
						显色效果	供试品在相应对照品位置无斑点	供试品在相应对照品位置斑点颜色很浅	供试品在相应对照品位置斑点颜色浅	供试品在相应对照品位置斑点显色效果好	点样点过大，薄层板展开效果较差。

从上表可以看出供试品点样量在25μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

④阴性对照试验

取缺薏苡仁的阴性样品，照上述鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

2)棕榈子的薄层鉴别

①薄层板的选择

取对照品溶液10μl，分别点于硅胶G和硅胶H板上，比较对照品在不同薄层板上的展开效果，结果见下表：

薄层板	硅胶G板	硅胶H板
			展开效果	展开效果不好，分离度差。	展开效果好，分离度好。

从上表可以看出，薄层板选择硅胶H板展开效果好，分离度好。

②供试品溶液的制备

取本发明药物胶囊剂内容物1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇-醋酸(10∶1)混合液50ml，回流提取2、4、6、8小时，滤过，滤液浓缩至适量，定量转移至2ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取原儿茶酸对照品，加无水乙醇制成每1ml中含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-醋酸(7∶2∶1.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁溶液，晾干或用热风小心吹干，比较供试品提取不同时间主斑点在薄层版上的显色效果，结果见下表：

回流时间	2h	4h	6h	8h
					显色效果	几乎无显色斑点	显色很浅	显色清晰	与提取6小时显色效果基本相同

从上表可以看出，回流提取6小时所制备的供试品溶液与对照品溶液，各主斑点在薄层板上显色清晰，已经符合实验要求。

③展开剂的比较

吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-醋酸为展开剂，配比分别为5∶2∶1.5∶0.5、6∶2∶1.0∶0.5、7∶2∶1.5∶0.5、7∶2∶2.0∶1.0展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁溶液，晾干或用热风小心吹干，比较供试品溶液和对照品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表：

展开剂配比	5∶2∶1.5∶0.5	6∶2∶1.0∶0.5	7∶2∶1.5∶0.5	7∶2∶2.0∶1.0
					展开效果	分离度差，有干扰。	分离度差，有干扰。	展效果好，无干扰。	分离度差，有干扰。

从上表可以看出，展开剂配比为7∶2∶1.5∶0.5时，供试品溶液和对照品溶液展开效果好，无干扰，符合实验要求。

④供试品点样量的选择

吸取供试品溶液5μl、10μl、15μl、20μl，对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-醋酸(7∶2∶1.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁溶液，晾干或用热风小心吹干，比较

供试品溶液和对照品溶液在薄层板上的显色效果，结果见下表：

点样量	5μl	10μl	15μl	20μl
					显色效果	供试品在相应对照品位置斑点颜色很浅	供试品在相应对照品位置斑点显色效果好	供试品在相应对照品位置斑点显色效果好	点样点过大，展开效果不好。

从上表可以看出，供试品点样量在10μl、15μl时，在薄层板上显色清晰，均适合试验要求，所以从实际操作角度，选择供试品溶液点样量为10μl。

⑤阴性对照试验

取缺棕榈子的阴性样品，照上述鉴别方法中供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的鉴别实验专属性强。

以上薏苡仁、棕榈子的部分薄层鉴别筛选试验，经验证可以从定性检测方面有效控制本发明药物组合物制剂的质量，使本发明药物组合物制剂的质量得到提高。

实验例3含量测定实验

采用高效液相色普法测定本发明药物中的橙皮苷的含量，以完善本发明的质量检测方法，部分试验结果见下：

①供试品溶液的制备

参考了薄层鉴别试验中棕榈子供试品溶液的制备方法，在对本发明药物中原儿茶酸的含量测定中采用了如下制备方法：

精密称取本发明药物胶囊剂内容物1g共四份，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-酸水(9∶1)(取浓盐酸1ml稀释于1000ml水中，即得)50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。比较了不同超声时间，供试品溶液中原儿茶酸的含量，结果见下表：

超声时间	10分钟	30分钟	60分钟	90分钟
					原儿茶酸含量(mg/g)	0.98	1.57	2.14	2.13

从上表可以看出，超声提取60分钟已经可以将本发明药物中的原儿茶酸提取完全，所以供试品溶液的制备选择超声提取60分钟即可。

②流动相的选择

比较了以甲醇-水-醋酸不同配比的流动相，配比分别为10∶80∶1、13∶80∶1、13∶85∶2、16∶90∶3，供试品溶液色谱图中各峰的分离效果，结果见下表：

流动相配比	10∶80∶1	13∶80∶1	13∶85∶2	16∶90∶3
					色谱峰分离效果	分离效果差，有干扰	分离效果差，有干扰	分离效果好，无干扰	分离效果差，有干扰

从上表可以看出，流动相配比为13∶85∶2时供试品色谱图中各峰的分离效果好，主峰没有出现干扰。

③含量检测的方法学考察

对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体方法及结果如下：

检测仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪；十八烷基硅烷键合硅胶(Zobax C₁₈，4.6mm×25cm，5μm)

厂家：Agilent Technologies安捷伦科技有限公司(中国)

流动相：甲醇-水-醋酸(13∶85∶2)；流速：1mL·min^-1；检测波长260nm；柱温：20℃。

对照品来源：原儿茶酸购于中国药品生物制品检定所批号：0809-9201

(1)线性关系考察取对照品溶液(0.0143mg/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线图，表明原儿茶酸在0.0286μg～0.1716μg之间呈现良好得线性关系，其回归方程为：

Area＝3446.6974×Amt+6.5677(r＝0.9999)

线性关系考察

进样量(μg	0.0286	0.0572	0.0858	0.1144	0.1430	0.1716
							峰面积	103.5703	206.3634	300.7596	401.4460	500.1838	597.1696

(2)稳定性试验取对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：

稳定性试验

(3)精密度试验精密吸取供试品溶液10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：

精密度试验

(4)重现性试验按以上供试品溶液制备方法，取同一批本发明药物胶囊剂样品5份，分别进行测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表：

重现性试验

(5)回收率试验精密称取已知含量得同一批本发明药物胶囊剂样品0.5g，置于50ml量瓶中，分别精密加入原儿茶酸对照品溶液(0.1192mg/ml)3ml，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：

加样回收试验

从以上试验结果可以看出，对本发明药物制剂中的有效成份原儿茶酸进行含量检测控制，方法稳定、科学，可以有效保证药物质量和疗效，这也是本发明药物疗效与同类产品比较更显著的原因。

下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果

具体实施方式

实施例1：颗粒剂

棕榈子150g    菝葜50g    薏苡仁35g；

以上三味，取棕榈子、菝葜，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；取薏苡仁粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇8倍量作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇后，与上述清膏、适宜辅料混匀，制粒，干燥，即得。

实施例2：软胶囊

棕榈子145g    菝葜35g    薏苡仁36g；

以上三味，取棕榈子、菝葜，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏，真空干燥，粉碎至120～150目，备用；取薏苡仁粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇8倍量作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，低温挥干水分，与上述细粉搅匀，按一定比例加入植物油及适量助悬剂蜂蜡混合均匀，压制成软胶囊，即得。软胶囊囊壳以明胶、甘油、水按按一定配比制备。

实施例3：泡腾剂

棕榈子90g    菝葜80g    薏苡仁60g；

以上三味，取棕榈子、菝葜，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；取薏苡仁粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇8倍量作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，与上述清膏、适量辅料混匀，真空干燥，粉碎，将药物等分成两份，一份加拘缘酸或富马酸或苹果酸，用乙醇制粒，另一份加碳酸氢钠，用乙醇制粒，分别干燥、整粒，然后混匀，压片，即得。

实施例4：颗粒剂

棕榈子130g    菝葜45g    薏苡仁38g

石韦85g       白茅根60g；

以上五味，取棕榈子、菝葜、石韦、白茅根，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；取薏苡仁粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇8倍量作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液，回收乙醇后，与上述清膏、适宜辅料混匀，制粒，干燥，即得。

实施例5：片剂

棕榈子130g    菝葜45g  薏苡仁38g

石韦85g    白茅根60g；

以上五味，取棕榈子、菝葜、石韦、白茅根，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；另取薏苡仁16g，粉碎成细粉，余下的薏苡仁粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇8倍量作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，加入1.6倍的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏与适量淀粉，混匀，制粒，干燥，整粒，压片，即得。

实施例6：胶囊剂

棕榈子150g    菝葜50g    薏苡仁35g

石韦90g    白茅根70g；

以上五味，取棕榈子、菝葜、石韦、白茅根，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；另取薏苡仁16g，粉碎成细粉，余下的薏苡仁粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇8倍量作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，加入1.6倍的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏，混匀，干燥，粉碎成粗粉，装入胶囊，即得。

质量控制方法：

鉴别：取样品5g，加水30ml，置水浴上稍加热，用脱脂棉过滤，滤液用饱和的正丁醇提取三次，用量分别为30ml，20ml，20ml，合并提取液，蒸干，加甲醇2ml作为供试品。另取棕榈子对照粉末1g，加水50ml煎煮1小时，放冷，用脱脂棉过滤，滤液浓缩至20ml，加入等量的无水乙醇20ml，摇匀，静置，过滤，蒸干，用甲醇2ml溶解作为对照品。吸取样品溶液15ul，对照品溶液20ul点与同一硅胶GF254板上，以氯仿-甲醇-醋酸(10∶5∶0.5)为展开剂，展开缸充分饱和后展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

含量测定：照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸(13∶85∶2)为流动相；检测波长为260nm。对照品溶液的制备：精密称取在原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取本品内容物1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-酸水(9∶1)(取浓盐酸1ml稀释于1000ml水中，即得)50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)60分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例7：

棕榈子100g    菝葜70g    薏苡仁50g

制法：取棕榈子、菝葜，加水煎煮二次，每次3小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15(80℃)的清膏，待冷，加入95％乙醇等量，摇匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35(50～55℃)的清膏；另取薏苡仁16g，粉碎成能通过80目筛细粉，余下的薏苡仁粉碎成能通过24目筛粗粉，将粉碎成粗粉的薏苡仁加6-8倍量的95％乙醇，密闭浸泡24小时后，放入渗漉器内渗漉，当收集的渗漉液近薏苡仁粗粉的85％时作为初漉液，另器收集其续漉液，然后将续漉液在60℃以下干燥成稠膏后与初漉液合并，静置，回收乙醇后，加入1.6倍的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏，混匀，干燥，粉碎成粗粉，装入胶囊，制成70粒，即得。

鉴别：

(1)取本品7粒内容物，加25ml乙醚，超声处理40分钟，过滤，滤液挥至1.5ml作为供试品，另取薏苡仁药材5g同法制成对照药材溶液，吸取上述两种溶液各25μl点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取样品5g，加水30ml，置水浴上稍加热，用脱脂棉过滤，滤液用饱和的正丁醇提取三次，用量分别为30ml，20ml，20ml，合并提取液，蒸干，加甲醇2ml作为供试品。另取棕榈子对照粉末1g，加水50ml煎煮1小时，放冷，用脱脂棉过滤，滤液浓缩至20ml，加入等量的无水乙醇20ml，摇匀，静置，过滤，蒸干，用甲醇2ml溶解作为对照品。吸取样品溶液15ul，对照品溶液20ul点与同一硅胶GF254板上，以氯仿-甲醇-醋酸(10∶5∶0.5)为展开剂，展开缸充分饱和后展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

含量测定：照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸(13∶85∶2)为流动相；检测波长为260nm。对照品溶液的制备：精密称取在原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取本品内容物1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-酸水(9∶1)(取浓盐酸1ml稀释于1000ml水中，即得)50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)60分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品胶囊内容物每克含棕榈子按原儿茶酸计，不得少于0.4mg。

功能主治：清热利湿，凉血止血。用于急、慢性肾盂肾炎血尿，肾小球肾炎血尿，泌尿结石及肾挫伤引起的血尿及不明原因引起的血尿，亦可作为治疗泌尿系统肿瘤的辅助药物。

用法用量：口服，一次5粒，一日3次，饭后开水吞服或遵医嘱。

规格：每粒相当于生药材3.14g。

Claims (4)

1.一种治疗血尿的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

棕榈子120-160重量份  菝葜30-60重量份  薏苡仁30-40重量份

石韦80-100重量份  白茅根50-80重量份。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物制剂制备方法为：

取棕榈子、菝葜、石韦、白茅根，加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至70-85℃相对密度1.15的清膏，待冷，加入乙醇等量，摇允，静置20-30小时，取上清液，回收乙醇，浓缩至50～55℃相对密度1.35的清膏；另取薏苡仁15-60重量份，粉碎成细粉，余下的薏苡仁粉碎成粗粉，用乙醇7-9倍量作溶剂，浸渍20-30小时后进行渗漉，收集漉液，回收乙醇后，加入1-3倍的碳酸钙，搅匀，再加入上述粉末、浸膏，混匀，干燥，粉碎成粗粉，装入胶囊，即得。

3.如权利要求1-2所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取制剂相当于原药材20-25g，加25ml乙醚，超声处理35-50分钟，过滤，滤液挥至1.5ml作为供试品，另取薏苡仁药材4-7g同法制成对照药材溶液，吸取上述两种溶液各25μl点于同一硅胶G板上，以2-5∶0.8-1.8的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以4-6％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取制剂相当于原药材7-15g，加水30ml，置水浴上稍加热，用脱脂棉过滤，滤液用饱和的正丁醇提取2-4次，用量为15-35ml，合并提取液，蒸干，加甲醇2ml作为供试品；另取棕榈子对照粉末1g，加水40-60ml煎煮0.8-1.8小时，放冷，用脱脂棉过滤，滤液浓缩至15-25ml，加入等量的无水乙醇15-25ml，摇匀，静置，过滤，蒸干，用甲醇2ml溶解作为对照品；吸取样品溶液15ul，对照品溶液20ul点与同一硅胶GF254板上，以8-12∶4-6∶0.4-0.8的氯仿-甲醇-醋酸为展开剂，展开缸充分饱和后展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10-16∶80-90∶1-3的甲醇-水-醋酸为流动相；检测波长为260nm；

对照品溶液的制备：精密称取在原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取制剂内容物相当于原药材7-12g，置具塞锥形瓶中，精密加入8-10∶0.8-1.8的甲醇-酸水50ml，密塞，称定重量，超声处理50-70分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

4.如权利要求3所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

 (1)取制剂相当于原药材22g，加25ml乙醚，超声处理40分钟，过滤，滤液挥至1.5ml作为供试品，另取薏苡仁药材5g同法制成对照药材溶液，吸取上述两种溶液各25μl点于同一硅胶G板上，以3∶1的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

 (2)取制剂相当于原药材10g，加水30ml，置水浴上稍加热，用脱脂棉过滤，滤液用饱和的正丁醇提取三次，用量分别为30ml，20ml，20ml，合并提取液，蒸干，加甲醇2ml作为供试品；另取棕榈子对照粉末1g，加水50ml煎煮1小时，放冷，用脱脂棉过滤，滤液浓缩至20ml，加入等量的无水乙醇20ml，摇匀，静置，过滤，蒸干，用甲醇2ml溶解作为对照品；吸取样品溶液15ul，对照品溶液20ul点与同一硅胶GF254板上，以10∶5∶0.5氯仿-甲醇-醋酸为展开剂，展开缸充分饱和后展开，取出，晾干，喷以5％香草醛浓硫酸试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以13∶85∶2甲醇-水-醋酸为流动相；检测波长为260nm；对照品溶液的制备：精密称取在原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，作为对照品溶液；

 供试品溶液的制备：精密称取本发明药物制剂内容物1g，置具塞锥形瓶中，精密加入9∶1甲醇-酸水50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，功率500W，频率40KHz，取出，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇-酸水溶液补足减失的重量，摇匀，上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。