CN101564465A - 一种用于养血益气、调经温寒的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于养血益气、调经温寒的中药组合物的制备方法，该中药组合物是由鹿胎、鹿角胶、熟地黄、人参、当归、川芎、白芍、白术、茯苓、甘草制备而成的胶囊剂；该药具有极好的养血益气，调经温寒之功效，与现有技术相比，本发明在治疗方面较原有制剂有更显著的效果，生产工艺精制，起效迅速，为临床增加了新的可选择剂型，克服了现有制剂的不良嗅味，提高了患者的顺应性。

Description

一种用于养血益气、调经温寒的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于养血益气、调经温寒的中药组合物及其制备方法，属于中药制药技术领域。

技术背景

由肾虚，气血两亏，经血不调，经期腹痛引起的功能性子宫出血、内分泌性不孕及痛经等妇科疾病，是严重危害妇女健康的常见病和多发病，该病有多种致病病因，病程长，易复发，目前尚无很好的根治性药物。部颁标准《中药成方制剂》第11册WS₃-B-2076-96项下“八珍鹿胎膏”是一种纯中药制剂，该药经多年临床应用，在治疗肾虚，气血两亏，经血不调，经期腹痛引起的功能性子宫出血、内分泌性不孕及痛经等妇科疾病方面有一定效果，但是由于膏剂的分计量不准确，其不良嗅味患者难以接受，且易受污染，疗效不稳定，此制剂已经被淘汰；八珍鹿胎颗粒《地标升国标》妇科WS-11089(ZD-1089)-2002提供的工艺比较粗，有效成分的提取率低，得到的产品疗效尚不够理想，药物稳定性差，且其不良嗅味患者难以接受。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺合理，生物利用度高，服用方便，疗效更好的治疗肾虚，气血两亏，经血不调，经期腹痛引起的功能性子宫出血、内分泌性不孕及痛经等妇科疾病的中药组合物及其制备方法，以解决现有技术存在的缺陷。

本发明是这样实现的：按照重量组分计算，本发明中药组合物主要是由如下重量配比的原料加工制成的胶囊剂，其中：鹿胎450份、鹿角胶150份、熟地黄303份、人参38份、当归38份、川芎38份、白芍38份、白术38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗净，切成小块，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩成清膏，减压干燥，冷冻粉碎，过成80目细粉，备用。鹿角胶冷冻粉碎，过80目细粉，取处方量细粉备用。将茯苓粉碎，过成100目筛，取1/3处方量细粉，⁶⁰Co辐照，备用。取人参粗粉、当归、川芎、白术用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍、4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。合并两次滤液(药渣另器保存)，减压回收乙醇，溶液浓缩成清膏。取熟地黄、白芍、2/3茯苓、甘草与上渣混合，加水煎煮3次，加水量分别为9倍、9倍、8倍，煎煮时间依次为1.5h、1.5h、1h。合并三次滤液(药渣弃)，减压浓缩，放凉，加入乙醇，使含醇量达60％，冷藏24h，过滤，滤液回收乙醇，所得溶液减压浓缩，再与茯苓细粉、醇提清膏混匀，减压干燥(60℃)，粉碎并过成100目细粉，与鹿胎粉、鹿角胶粉混匀后用乙醇制软材，20目筛制粒，50℃以下干燥，14目整粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。

本发明胶囊剂最佳的制备方法为：取原料鹿胎450份、鹿角胶150份、熟地黄303份、人参38份、当归38份、川芎38份、白芍38份、白术38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗净，切成小块，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.32～1.35(60℃)的清膏，减压干燥，冷冻粉碎，过成80目细粉，备用。鹿角胶冷冻粉碎，过80目细粉，取处方量细粉备用。将茯苓粉碎，过成100目筛，取1/3处方量细粉，⁶⁰Co辐照，备用。取人参粗粉、当归、川芎、白术用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍、4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。合并两次滤液(药渣另器保存)，减压回收乙醇，溶液浓缩至相对密度为1.32～1.35(60℃)的清膏。取熟地黄、白芍、2/3茯苓、甘草与上渣混合，加水煎煮3次，加水量分别为9倍、9倍、8倍，煎煮时间依次为1.5h、1.5h、1h。合并三次滤液(药渣弃)，减压浓缩至相对密度1.15(60℃)，放凉，加入乙醇，使含醇量达60％，冷藏24h，过滤，滤液回收乙醇，所得溶液减压浓缩至相对密度1.32～1.35(60℃)，再与茯苓细粉、醇提清膏混匀，减压干燥(60℃)，粉碎并过成100目细粉，与鹿胎粉、鹿角胶粉混匀后用乙醇制软材，20目筛制粒，50℃以下干燥，14目整粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。

本发明胶囊剂为中药复方制剂，本方系以四君子汤(人参、白术、茯苓、甘草)四物汤(当归、川芎、白芍、熟地黄)合为八珍汤又加鹿胎、鹿角胶二味药材而成，以人参、白术、茯苓、甘草益气健脾，当归、白芍、川芎、熟地黄补血养血，而为气血双补之良方。鹿胎甘咸、性温，能益肾壮阳、补虚生精，治虚损劳瘀、精血不足、妇女虚寒，崩漏带下。鹿角胶亦擅温肾填精，合而用之，共奏气血双补、温养肝肾、养血益气，调经湿寒之功；用于肾虚，气血两亏，经血不调，经期腹痛。有文献报道用其治疗不孕症及再生障碍性贫血均有较好疗效，其毒副作用小，适于长期用药。

人参、当归、川芎、白术中的人参皂苷、内酯、生物碱等成分醇溶性好，用70％乙醇回流提取，其渣与其余药材共煎，使水溶性成分被提出，这些成分具有调节免疫、镇痛、调经、强壮机体等作用，使其药物有效成分得到充分发挥。熟地黄、白芍、茯苓、甘草中的梓醇、多糖、氨基酸、苷类、有机酸等水溶性好，采用水煎煮法提取，但一些水溶性非活性成分，如粗蛋白、淀粉、粘液质等被煎出，为减少服用量用醇沉法除去；药物的粘度降低，所得制剂不易吸潮，稳定性好。本发明将现有技术通过提取有效成分，除去其中大量非活性成分，其临床效果显著提高，药物稳定性更高，安全性更好，由于鹿胎和鹿角胶药材存在腥味大，口感差问题，特别是鹿胎经煎煮后，其不良嗅味患者难以接受。本发明采用胶囊剂，掩盖了药物的不良嗅味，患者易于接受；胶囊剂的内容物为干燥粉粒，不但增加了药物的稳定性，同时在制备过程中不受粘合剂与压力影响，崩解释药迅速，生物利用度高，胶囊剂服用、携带方便，可为临床用药增添一个新剂型、新品种。

在本发明中，我们对原有工艺进行了较大改进，最大限度的保留了其有效成份，我们对工艺做了大量的实验研究：

一、鹿胎提取与粉碎

①取鹿胎洗净，剃除膜与脂肪，切成小块，分成两份。方法1：采用原八珍鹿胎膏制法(加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各7倍量水煎1h)；方法2：加水煎煮二次，每次8倍量水煎2h。各次煎煮液趁热过滤，合并滤液，浓缩成稠膏，减压干燥，测定，结果见表1。

表1鹿胎提取结果比较

结果表明，鹿胎水煎3次的干膏量及氨基酸含量均高于水煎2次，因此可以采用原制法提取鹿胎。

②出粉率考察：称取干膏100g，共3份，分别粉碎并过成80目细粉，称重，计算出粉率，结果见表2。

表2鹿胎干膏出粉结果

鹿胎干膏平均出粉率为92.7％，制剂中以净粉投料。

二、乙醇回流提取人参等药材

按处方比例称取人参12.5g、当归12.5g、川芎12.5g、白术12.5g(共50g)，9份，以加溶剂倍数、乙醇浓度、回流时间、回流次数的不同，设计为4因素3水平，并以干膏量及人参皂甙Rg₁+Re为指标，采用L9(3⁴)正交表进行试验，结果见表3，表4，表5。

表3因素水平表

表4正交试验结果[L₉(3⁴)]

表5方差分析表(SAS)

项目	Soure	DF	AnovaSS	Mean Square	F Value	Pr＞F
							干膏量	ABCD	2222	4.77557.74229.842233.3355	2.38783.87114.921116.6678	0.490.791.273.39	0.67370.55970.44030.1885
人参皂苷含量	ABCD	2222	2754.1365638.8163770.23444639.6309	1377.0682319.4081385.11722319.8154	4.310.831.217.26	0.18830.54660.45340.1210

结果分析：由表4，表5看出，影响干膏量多少的主次因素排序为：回流次数＞回流时间＞乙醇浓度＞溶剂倍数，搭配为A₂B₂C₃D₃；影响人参皂苷含量高低的主次因素排序为：回流次数＞溶剂倍数＞回流时间＞乙醇浓度，搭配为A₃B₂C₃D₂，二者BC一致，考虑含量的重要性，并结合试验号4及生产实际，选择最佳搭配为A₃B₂C₃D₂，即药材用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍，4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。

验证试验：在正交试验结果中，干膏量与人参皂苷搭配组合不完全一致，经参照试验号4并结合生产实际确定了以上最佳搭配，此搭配究竟是否为最优提取条件，需要进一步验证，方法：按处方量比例称取人参12.5g、当归12.5g、川芎12.5g、白术12.5g，共3份，用上述最优条件进行提取，滤液经浓缩，干燥，测定，结果见表6。

表6验证试验结果

人参皂苷含量测定方法：照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％磷酸溶液(99∶400)为流动相，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg₁对照品12.5mg、人参皂苷Re对照品10mg，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.4mg、人参皂苷Re0.25mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)2g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加热回流3小时，弃去氯仿液，药渣挥去氯仿，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250w，频率50KHz)30分钟，滤过，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各10μl与供试品溶液10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

验证结果表明，3批样品中人参皂苷含量相当于或略高于正交表中最高含量，可以认为由试验所确定的最佳提取条件可行。

三、熟地黄、白芍等药材水煎醇沉试验

(1)水煎药材：按处方比例称取熟地黄20g，白芍2.5g，茯苓5g，甘草2.5g与醇提药渣(人参2.5g，当归2.5g，川芎2.5g，白术2.5g)混合，共40g，9份。以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数的不同，设计为3因素3水平，采用L9(3⁴)正交表进行试验，以干膏量和芍药苷含量为指标，结果见表7，表8，表9。

表7因素水平表

表8正交试验结果[L₉(3⁴)]

表9差分析表(SAS)

结果分析：由表8表9出，影响干膏量多少的主次因素排序为：煎煮次数＞煎煮时间＞加水倍数，搭配为E₃F₃G₃；影响芍药苷含量的主次因素排序为：煎煮次数＞加水倍数＞煎煮时间，搭配为E₂F₂G₃。考虑到含量的重要性，并结合5号结果，确定最佳搭配为E₂F₂G₃，即药材加水煎煮3次，加水量分别为9倍，9倍，8倍，煎煮时间依次为1.5h，1.5h，1h。

验证试验：称取人参2.5g，当归2.5g，川芎2.5g，白术2.5g，2份，按2.3.4最优条件提取后，药渣备用；另取熟地黄20g，白芍2.5g，茯苓5g，甘草2.5g，分别与上渣混合，按三(1)最优条件提取，浓缩，干燥，检测，结果见表10

表10验证试验结果

编号	药材量(g)	干膏量(g)	干膏中芍药苷含量(mg·g-1)	芍药苷含量(mg/100g药材)
					123	404040	14.314.614.2	1.09511.09121.1017	0.6180.6380.626

结果分析：按所确定的最佳水煎条件制备三批样品，其中芍药苷含量比正交表中最高含量略高或相当，表明此最佳条件可行。

(2)醇沉试验：

药材水煎过程中，除可以浸出其中活性水溶性成分外，同时也使大量非活性成分，如粗蛋白、淀粉、粘液质等浸出，必然增大服用剂量。因此，在保证有效成分提取的前提下，应对水煎溶液进行醇沉。方法：按处方比例称取人参22.5g，当归22.5g，川芎22.5g，白术22.5g，按2.3.4最优条件提取后，药渣备用。另取熟地黄180g，白芍22.5g，茯苓45g，甘草22.5g，与上渣混合(药材为360g)，以三(1)最优条件提取，合并滤液，浓缩约360ml，等分为3份。第1份浓缩至相对密度1.15(60℃)，第2份浓缩至相对密度1.20(60℃)，第3份浓缩至相对密度1.25(60℃)，再分别等分后(每份药材为40g)，各加入乙醇使含醇量达一定浓度，冷藏，滤过，回收乙醇，浓缩，干燥，测定。因素水平表及结果见表11，表12，表13。

表11因素水平表

表12正交试验结果[L₉(3⁴)]

表13方差分析表(SAS)

项目	Soure	DF	AnovaSS	Mean Square	FValue	Pr＞F
							干膏量	HIJ	222	52.84224.53550.9689	26.42112.26780.4844	29.872.560.55	0.03240.28060.6461
芍药苷含量	HIJ	222	0.00250.00880.0001	0.00120.00440.0000	45.09160.451.78	0.02170.00620.3601

芍药苷含量测定法：照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L，磷酸二氢甲-36％醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品5mg，置25ml容量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得(每ml中含芍药苷0.04mg)。

供试品溶液的制备取供试品，研细，混匀，取1.0g，精密称定，加入甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，药渣加甲醇洗涤3次，每次3ml，合并洗涤液，水浴蒸干，残渣加50％甲醇溶解并移入50ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。

结果分析：有表12，表13看出，影响出膏量的主次因素为相对密度＞醇沉浓度＞冷藏时间，搭配为H₃I₃J₃(以干膏量少为好)，影响芍药苷含量的主次因素为醇沉浓度＞相对密度＞冷藏时间，搭配为H₁I₁J₂。干膏量与含量之间无一致之处，参照试验号5，4，并结合生产实际，选择最优搭配为H₁I₁J₂，即药液浓缩至相对密度为1.15(60℃)，含醇达60％，冷藏24h。

主要药效学实验

实验目的：通过对本发明胶囊剂、八珍鹿胎膏及八珍鹿胎颗粒的补血作用，对子宫平滑肌收缩作用，镇痛作用以及活血化瘀作用等药理实验研究，将本发明胶囊剂、八珍鹿胎膏及八珍鹿胎颗粒进行对比，观察其药理作用的强弱，为临床用药提供实验依据。

试验方法：本发明胶囊剂、八珍鹿胎膏(按部颁标准《中药成方制剂》第11册WS₃-B-2076-96项下“八珍鹿胎膏”处方工艺制备)及八珍鹿胎颗粒(市场购买)对失血性血虚小鼠的补血作用；对大鼠正常子宫以及使用催产素后子宫平滑肌收缩功能的影响；对冰醋酸致小鼠扭体的镇痛作用；对血瘀证大鼠血液流变学的影响。

实验结果：本发明胶囊剂、八珍鹿胎膏及八珍鹿胎颗粒能明显增加失血小鼠血中红细胞(RBC)数目和血红蛋白(Hb)含量；能抑制大鼠正常子宫收缩频率、幅度和活动力；亦能明显降低催产素对子宫的兴奋作用；对冰醋酸致小鼠疼痛有明显的对抗作用；能明显改善血瘀证大鼠血液流变性，有活血化瘀作用。

结论：本发明胶囊剂与八珍鹿胎膏及八珍鹿胎颗粒相比，在相同生药剂量(3.0g原生药/kg)下的补血作用，对子宫平滑肌收缩作用，镇痛作用以及活血化瘀作用等药理实验显示出较强的趋势。

一、对失血性血虚小鼠的补血作用

实验材料

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。

2、药物：八珍鹿胎膏1g药膏相当于0.74g原生药；八珍鹿胎颗粒1g药粉相当于0.295g原生药；本发明胶囊剂大、中、小三个剂量组1g药粉相当于原生药3.11g。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

昆明小鼠72只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成6组，每组12只。实验第1d，各组小鼠眼眶取血0.5ml，并检测红细胞(RBC)和血红蛋白(Hb)。失血24h后再取血测RBC和Hb，并随即灌胃给药，对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明胶囊剂组分别灌胃给药3.0、1.5、0.75g生药/kg；八珍鹿胎膏组灌胃给药3.0g生药/kg；八珍鹿胎颗粒组灌胃给药3.0g生药/kg。连续给药5d，每天一次，末次给药后1h采血测定RBC和Hb。

实验结果：见表1、2

表1本发明胶囊剂对失血性血虚小鼠RBC的影响(X±s)

与失血前比较：**P＜0.01，与给药前比较：^##P＜0.01，^#P＜0.05

与对照组比较：⁺⁺P＜0.01，⁺P＜0.05；与八珍鹿胎膏剂、颗粒剂比较：^△P＜0.05

表2本发明胶囊剂对失血性血虚小鼠Hb的影响(X±s)

与失血前比较：**P＜0.01；与给药前比较：^##P＜0.01，^#P＜0.05

与对照组比较：⁺⁺P＜0.01；与八珍鹿胎膏剂、颗粒剂比较：^△P＜0.05

结果表明：小鼠失血后RBC和Hb均显著降低，同失血前比较均P＜0.01，说明模型制造成功。给药5d后，各组RBC和Hb均明显增加，但给药各组的增加显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01)。给药各组在相同生药剂量下，本发明胶囊剂组对RBC和Hb有较大的增强，统汁学上有显著性意义(P＜0.05)。说明本发明胶囊剂有明显的抗小鼠血虚作用，其作用较膏剂和颗粒剂强(P＜0.05)。

二、本发明胶囊剂对离体子宫平滑肌的作用

实验材料

1、动物：SD雌性未孕大白鼠，体重250～300g。

2、药物：八珍鹿胎膏1g药膏相当于0.74g原生药；八珍鹿胎颗粒1g药粉相当于0.295g原生药；本发明胶囊剂大、小两个剂量组1g药粉相当于原生药3.11g。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

SD雌性未孕大白鼠40只，体重250～300g，随机分成5组，每组8只。即对照组；本发明胶囊剂大、小剂量组；八珍鹿胎膏组和八珍鹿胎颗粒组。动物于实验前48h灌胃给于0.4mg/100g己烯雌酚。实验时颈椎脱臼处死动物，剖腹，取出子宫，放入盛有乐氏液的玻璃皿中修理，小心清除残留的脂肪组织，剪取2cm长，用针线结扎两端，一端固定于麦氏管浴槽的通气管的小钩上，另一端固定和换能器相连，用平衡记录仪记录子宫收缩曲线。恒温水浴保持温度37±0.5℃，麦氏管内盛50ml乐氏液，充氧(70～90个气泡/min)。调节仪器，定标(负荷1g)。标本稳定30min后，记录正常收缩曲线并将不同浓度受试药物(15％、7.5％本发明胶囊剂组；15％八珍鹿胎膏组和15％八珍鹿胎颗粒组)水溶液(静置12h)的上清液调pH值后，取0.5ml滴入麦氏管内，观察给药前后子宫收缩的频率、幅度和子宫活动力(频率×幅度)的变化。

1.对正常状态下离体子宫平滑肌的作用

由表2、表3、表4可见，对照组子宫收缩频率在30min内变化无明显差异，八珍鹿胎膏、八珍鹿胎颗粒均可减慢子宫收缩频率、降低其幅度和活动力，20min内作用明显(p＜0.05)。本发明胶囊剂大、小剂量组均可显著减慢频率、降低幅度和活动力，同八珍鹿胎膏、八珍鹿胎颗粒组比较无明显差异，但从其变化趋势可见，在相同的生药剂量下，以本发明胶囊剂对子宫收缩幅度和活动力影响比八珍鹿胎膏、八珍鹿胎颗粒的作用强。

表2对正常状态下离体子宫平滑肌收缩频率的作用(X±s，n＝8)

与正常对照组比较：*P＜P0.05，**P＜0.01

表3对正常状态下离体子宫平滑肌收缩幅度的影响(X±s，n＝8)

与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表4对正常状态下离体子宫平滑肌收缩活力的影响(X±s，n＝8)

与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

2.对催产素作用下离体子宫平滑肌的作用

另取大鼠40只，按上述方法分组及制备离体子宫标本。标本稳定后，记录正常收缩曲线(为药前)，然后加入催产素(浴槽浓度为2×10^-2单位/ml)，作用10min后再分别加入八珍鹿胎膏、颗粒、胶囊等受试药的上清液，记录给约后10、20min子宫收缩。

实验结果：见表5、表6、表7

表5对正常状态下离体子宫平滑肌收缩活力的影响(X±s，n＝8)

与药前比较：**P＜0.01，与催产素组比较^##P＜0.01，^#P＜0.05

表6对催产素作用下离体子宫半滑肌收缩幅度的作用(X±s，n＝8)

与药前比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与催产素组比较^##P＜0.01

表7对催产素作用下离体子宫平滑肌收缩活力的作用(X±s，n＝8)

与药前比较：^**P＜0.01，与催产素组比较^##P＜0.01

结果表明：催产素能明显增大大鼠子宫平滑肌收缩频率、幅度和活动力，八珍鹿胎膏剂、颗粒剂和胶囊剂各剂量组均可对抗催产素对大鼠子宫平滑肌的兴奋作用，且在相同生药剂量下，胶囊剂作用有强于其他各剂型的趋势。说明本发明胶囊剂比八珍鹿胎膏、八珍鹿胎颗粒对催产素作用下离体子宫平滑肌的作用强。

三、止痛试验(扭体法)

实验材料

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。

2、药物：八珍鹿胎膏1g药膏相当于0.74g原生药；八珍鹿胎颗粒1g药粉相当于0.295g原生药；本发明胶囊剂大、中、小两个剂量组1g药粉相当于原生药3.11g。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

昆明小鼠60只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成6组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明胶囊剂组分别灌胃给药3.0、1.5、0.75g生药/kg；八珍鹿胎膏组灌胃给药3.0g生药/kg；八珍鹿胎颗粒组灌胃给药3.0g生药/kg。每天一次，连续给药3d，给药量0.2ml/10g，末次给药后1h，各鼠分别腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，注射后立即记录15min内小鼠扭体数，比较给药组和对照组扭体数的差异。

实验结果：见表8。

表8本发明胶囊剂的镇痛作用(X±s，n＝10)

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01

与八珍鹿胎膏组和八珍鹿胎颗粒组比较：^#P＜0.05

结果表明：本发明胶囊剂大、中剂量组以及八珍鹿胎膏组和八珍鹿胎颗粒组均能显著的降低冰醋酸致小鼠扭体次数(p＜0.05或p＜0.01)，在相同生药剂量(3.0g原生药/kg)下，以胶囊组作用为优。本发明胶囊剂组比八珍鹿胎膏组和八珍鹿胎颗粒组的镇痛作用强。

四、本发明胶囊剂对血瘀证大鼠血液流变学的影响

实验材料

1、动物：SD大白鼠，雌雄兼有，体重250～300g。

2、药物：八珍鹿胎膏1g药膏相当于0.74g原生药；八珍鹿胎颗粒1g药粉相当于0.295g原生药；本发明胶囊剂大、中、小三个剂量组1g药粉相当于原生药3.11g。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

SD大白鼠70只，雌雄各半，体重250～300g，随机分成7组，每组10只。对照组、血瘀模型组、八珍鹿胎膏组、八珍鹿胎颗粒组、本发明胶囊剂大、中、小剂量组。分别灌胃同体积的生理盐水；本发明胶囊剂组分别灌胃给药3.0、1.5、0.75g生药/kg；八珍鹿胎膏组灌胃给药3.0g生药/kg；八珍鹿胎颗粒组灌胃给药3.0g生药/kg。每天一次，连续给药14d，末次给药后1h，除对照组外，其余7组均复制血瘀模型：即大鼠皮下注射盐酸肾上腺素(Ad)2次，剂量均为8μg/kg，2次间隔4h，在第1次注射Ad 2h后，将大鼠放入冰水内5min，处置后并开始禁食。

上述各组动物均于次日眼眶采血，取2ml注入肝素抗凝管(抗凝剂量为31.25单位/ml，肝素用NS配置)，摇匀备用。取1.5ml注入枸橼酸钠抗凝管(抗凝剂量：枸橼酸钠用NS配成38％的溶液，取150μl加入硅化试管中)，摇匀备用。取1ml肝素抗凝血加入粘度计转筒中，样品温度在恒温水浴中保持37±0.5℃转换高、低切开关，记录高、低切粘度标度值(高切：200/s，低切：40/s)，将其输入计算机，得出全血粘度值，结果见表9。

取底端平整的毛细离心管，插入刚混匀的肝素抗凝血中，待血进入毛细管内2/3处，封住上端口，下端插入橡皮泥中，垂直竖立，并记时。1h后，用血沉压积板读出血沉值，结果见表9。

将测定完血沉的毛细离心管，用3F-3型高速微量离心机离心5min，转速12000rpm，再用血沉压积板读出红细胞压积值，结果见表10。

再将测定压积的毛细管在温度为56±0.5℃的水浴箱中水浴5min后，用同样离心机离心5min，转速12000rpm，取出后用读数显微镜测定毛细管内血浆长度和纤维蛋白原长度，按下式计算纤维蛋白原含量，结果见表10。

纤维蛋白原含量(g/L)＝纤维蛋白原长度×100/血浆长度

将做完全血粘度的血吸回抗凝管，用80-2型离心机离心血浆，转速3000rpm，时间15min。取1ml血浆，按测定全血粘度的方法测定血浆粘度，结果见表9。

用加样器吸取1ml枸橼酸钠抗凝血加入容量为5ml的长颈圆球形玻璃瓶中，将其放在血小板粘附仪转盘上，以5rpm的转速旋转15min后取下，取30μl旋转前和旋转后的抗凝血放入1％的草酸铵稀释剂中，测定旋转前后血中的血小板数，然后按下式计算血小板粘附率，结果见表10。

血小板粘附率(％)＝(旋转前血小板数-旋转后血小板数)×100/旋转前血小板数

表9本发明胶囊剂对血瘀证大鼠血液流变学的影响(X±s)

与正常对照组比较：^**P＜0.01；与模型对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01

表10本发明胶囊剂对血瘀证大鼠血液流变学的影响(X±s)

与正常对照组比较：^**P＜0.01；与模型对照组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01

与八珍鹿胎膏组、八珍鹿胎颗粒组比较：⁺P＜0.05

结果表明：(1)模型组与正常对照组比较，全血高、低切粘度、血浆粘度、还原粘度、血沉、纤维蛋白原、血小板粘附率均显著升高(P＜0.01)，说明模型复制成功。(2)与模型组比较，八珍鹿胎膏组、八珍鹿胎颗粒组以及本发明胶囊剂组均可使上述指标明显降低(P＜0.01或P＜0.05)，并有一定的剂量依赖性。(3)与八珍鹿胎膏组、八珍鹿胎颗粒组比较，本发明胶囊剂在相同的剂量下，降低上述指标的作用更明显。说明本发明胶囊剂组比八珍鹿胎膏组、八珍鹿胎颗粒组的活血化瘀作用强。

毒理实验：

急性毒性实验结果表明：将本发明胶囊剂最大浓度、最大容积对昆明种小白鼠灌胃给药，在24h内连续给药3次，每次间隔4h，累积药物总量达75g生药/kg，折合233.25g生药/kg/日，相当于临床拟用量的1250倍。给药后7d内，小鼠活动、进食、排泄均正常，生长良好，毛色光亮，其平均体重均随试验时间的延长而增加。第8d处死后解剖每只小鼠肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、子宫、胃、肠等均未发现颜色及形态异常，未能测出LD₅₀。表明本胶囊无急性毒性反应。

长期毒性实验结果表明：本发明胶囊剂分别对SD大白鼠进行了两种性别三个剂量周期3个月灌胃给药的长期毒性试验，最大剂量为9.0g/kg/日(折合生药27.99g/kg/日)，约相当于临床人每日拟用量的150倍。给药后逐日观察动物的一般状况，每周称体重1次，并按体重调整给药容量。于给药3个月后每组处死12只动物，另8只动物做停药二周的恢复期试验。试验结果，在给药3个月及二周恢复期后，本发明胶囊剂对动物一般状况、血液学、血液生化学、尿液常规及心电图等均无明显影响，系统解剖、脏器系数及组织病理学检查也未发现异常改变。故在大白鼠3个月灌胃给药的长期毒性试验中，未发现明显毒性反应和延迟性毒性反应。可见，本发明胶囊剂无毒性反应，长期用药安全可靠。

临床观察及疗效

在本发明所述中药组合物的研制过程中，为客观评价该药治疗肾虚，气血两亏，经血不调，经期腹痛的临床疗效及其对人体的安全性，申请人根据2002年的《中药新药临床研究指导原则》进行了临床试验(临床批件号为：2004L04970)，期间共临床治疗并观察病例240例。

一、病例的选择：纳入试验病例者均为符合西医月经稀少诊断标准和中医气血两亏、肾虚辨证标准，患者年龄在18～45岁。

二、服药方式：口服该中药胶囊剂，每日3次，每次3粒，连续服用3个月，每个月服用24天，疗程中停用其它治疗该病症的药物及方法。

三、观察指标：

1、安全性观测：

a)可能出现的不良反应症状。

b)一般体检项目：包括体温、脉搏、呼吸、血压等。

c)血、尿、便常规，心电图，肝功能(ALT、AST)、肾功能(BUN、Cr)。

2、疗效性观测：

a)中医症状、舌、脉的变化观察。

b)月经稀少量的检查。

c)盆腔超声波检查。

d)阴道细胞学检查。

四、疗效评定标准：主要是根据经血不调、经期腹痛、中医证候的改善情况，参照1989年《妇产科疾病诊断与鉴别诊断》及2002年《全国高等中医药院校规划教材·中医妇科学》制定。

1、疾病(经血不调)疗效判定标准

(1)痊愈：治疗后月经周期、经量、经期恢复正常。

(2)显效：治疗后月经周期较前缩短或经量较前增加，1项以上积分值降低两个等级。

(3)有效：治疗后月经周期较前缩短或经量较前增加，1项以上积分值降低一个等级。

(4)无效：治疗后月经周期较前缩短或经量较前增加，积分值未降低。

2、经期腹痛疗效判定标准

(1)痊愈：治疗后经期腹痛消失。

(2)显效：治疗后经期腹痛时间缩短，疼痛减轻，1项以上积分值降低两个等级。

(3)有效：治疗后经期腹痛时间缩短，疼痛减轻，1项以上积分值降低一个等级。

(4)无效：治疗后经期腹痛无改善，积分值未降低。

3、中医证候疗效评定标准

(1)痊愈：治疗后各症状消失，证候积分值减少≥95％。

(2)显效：治疗后各症状明显减轻，证候积分值减少≥70％，＜95％。

(3)有效：治疗后各症状有所减轻，证候积分值减少≥30％，＜70％。

(4)无效：治疗后各症状无改善或有加重，证候积分值减少＜30％。

4、安全性评价标准

一级：安全，无任何不良反应。

二级：比较安全，如有不良反应，不需做任何处理，可继续给药。

三级：有安全性问题，有中等程度不良反应，做处理后可继续给药。

四级：因不良反应中止试验。

五、治疗结果：以上试验组(本发明组)120例，剔除7例；试验组113例经临床治疗后，用于经血不调观察愈显率为48.25％，总有效率为83.33％；用于经期腹痛观察愈显率为61.4％，总有效率为85.96％；用于中医证候疗效观察的愈显率为45.62％，总有效率为90.35％，观察过程中未发现明显不良反应。

本发明具体实施方式：

实施例1、

取原料鹿胎450份、鹿角胶150份、熟地黄303份、人参38份、当归38份、川芎38份、白芍38份、白术38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗净，切成小块，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩成清膏，减压干燥，冷冻粉碎，过成80目细粉，备用。鹿角胶冷冻粉碎，过80目细粉，取处方量细粉备用。将茯苓粉碎，过成100目筛，取1/3处方量细粉，⁶⁰Co辐照，备用。取人参粗粉、当归、川芎、白术用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍、4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。合并两次滤液(药渣另器保存)，减压回收乙醇，溶液浓缩成清膏。取熟地黄、白芍、2/3茯苓、甘草与上渣混合，加水煎煮3次，加水量分别为9倍、9倍、8倍，煎煮时间依次为1.5h、1.5h、1h。合并三次滤液(药渣弃)，减压浓缩，放凉，加入乙醇，使含醇量达60％，冷藏24h，过滤，滤液回收乙醇，所得溶液减压浓缩，再与茯苓细粉、醇提清膏混匀，减压干燥(60℃)，粉碎并过成100目细粉，与鹿胎粉、鹿角胶粉混匀后用乙醇制软材，20目筛制粒，50℃以下干燥，14目整粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。

实施例2、

取原料鹿胎450份、鹿角胶150份、熟地黄303份、人参38份、当归38份、川芎38份、白芍38份、白术38份、茯苓114份、甘草38份；鹿胎洗净，切成小块，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.32～1.35(60℃)的清膏，减压干燥，冷冻粉碎，过成80目细粉，备用。鹿角胶冷冻粉碎，过80目细粉，取处方量细粉备用。将茯苓粉碎，过成100目筛，取1/3处方量细粉，⁶⁰Co辐照，备用。取人参粗粉、当归、川芎、白术用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍、4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。合并两次滤液(药渣另器保存)，减压回收乙醇，溶液浓缩至相对密度为1.32～1.35(60℃)的清膏。取熟地黄、白芍、2/3茯苓、甘草与上渣混合，加水煎煮3次，加水量分别为9倍、9倍、8倍，煎煮时间依次为1.5h、1.5h、1h。合并三次滤液(药渣弃)，减压浓缩至相对密度1.15(60℃)，放凉，加入乙醇，使含醇量达60％，冷藏24h，过滤，滤液回收乙醇，所得溶液减压浓缩至相对密度1.32～1.35(60℃)，再与茯苓细粉、醇提清膏混匀，减压干燥(60℃)，粉碎并过成100目细粉，与鹿胎粉、鹿角胶粉混匀后用乙醇制软材，20目筛制粒，50℃以下干燥，14目整粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。

Claims (2)

1、一种用于养血益气、调经温寒的中药组合物，其特征在于它是通过以下方法制成的胶囊剂：称取原料鹿胎450g、鹿角胶150g、熟地黄303g、人参38g、当归38g、川芎38g、白芍38g、白术38g、茯苓114g、甘草38g；鹿胎洗净，切成小块，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩成清膏，减压干燥，冷冻粉碎，过成80目细粉，备用。鹿角胶冷冻粉碎，过80目细粉，取处方量细粉备用。将茯苓粉碎，过成100目筛，取1/3处方量细粉，⁶⁰Co辐照，备用。取人参粗粉、当归、川芎、白术用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍、4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。合并两次滤液(药渣另器保存)，减压回收乙醇，溶液浓缩成清膏。取熟地黄、白芍、2/3茯苓、甘草与上渣混合，加水煎煮3次，加水量分别为9倍、9倍、8倍，煎煮时间依次为1.5h、1.5h、1h。合并三次滤液(药渣弃)，减压浓缩，放凉，加入乙醇，使含醇量达60％，冷藏24h，过滤，滤液回收乙醇，所得溶液减压浓缩，再与茯苓细粉、醇提清膏混匀，减压干燥(60℃)，粉碎并过成100目细粉，与鹿胎粉、鹿角胶粉混匀后用乙醇制软材，20目筛制粒，50℃以下干燥，14目整粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。

2、根据权利要求1所述的一种用于养血益气、调经温寒的中药组合物的制备方法，其特征在于：称取原料鹿胎450g、鹿角胶150g、熟地黄303g、人参38g、当归38g、川芎38g、白芍38g、白术38g、茯苓114g、甘草38g；鹿胎洗净，切成小块，加水煎煮3次，第一次加8倍量水煎2h，第二、三次各加7倍量水煎1h，趁热过滤，合并滤液，浓缩至相对密度为1.32～1.35(60℃)的清膏，减压干燥，冷冻粉碎，过成80目细粉，备用。鹿角胶冷冻粉碎，过80目细粉，取处方量细粉备用。将茯苓粉碎，过成100目筛，取1/3处方量细粉，⁶⁰Co辐照，备用。取人参粗粉、当归、川芎、白术用70％乙醇回流提取2次，加溶剂倍数分别为5倍、4倍，回流时间依次为1.5h，1.5h。合并两次滤液(药渣另器保存)，减压回收乙醇，溶液浓缩至相对密度为1.32～1.35(60℃)的清膏。取熟地黄、白芍、2/3茯苓、甘草与上渣混合，加水煎煮3次，加水量分别为9倍、9倍、8倍，煎煮时间依次为1.5h、1.5h、1h。合并三次滤液(药渣弃)，减压浓缩至相对密度1.15(60℃)，放凉，加入乙醇，使含醇量达60％，冷藏24h，过滤，滤液回收乙醇，所得溶液减压浓缩至相对密度1.32～1.35(60℃)，再与茯苓细粉、醇提清膏混匀，减压干燥(60℃)，粉碎并过成100目细粉，与鹿胎粉、鹿角胶粉混匀后用乙醇制软材，20目筛制粒，50℃以下干燥，14目整粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。