CN101485796A - 治疗失眠的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗失眠的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。本发明药物组合物由珍珠母、首乌藤、女贞子、丹参等原料药组成，其制备方法简便、易行，能够最大限度的保留药物中的有效成份、发挥药物疗效，质量控制方法包括对丹参、五味子、熟地、女贞子、合欢皮的薄层鉴别，乙醇浸出物的含量检查，对本发明药物中有效成分丹参酮IIA的含量测定，可以有效控制药品质量，保证药物疗效的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，尤其涉及一种治疗失眠的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。属于中药技术领域。
背景技术
现在由于工作生活压力的增大，失眠经常困扰着很多人，使他们正常的工作学习生活无法进行，很多人长期服用西药帮助睡眠，但西药长期服用容易养成习惯，甚至成瘾，可使记忆力和智力减退，还会使很多脏器功能紊乱、失调。
中医认为人的正常睡眠由心神所主，其机理是阴阳之气自然而有规律转化的结果。正如林琴《类证治裁·不寐证治》中说：“阳气自动而之静则寐，阴气自静而之动则寤。”不寐的病机核心为阴阳转化失衡，而寐本于阴，神其主也，神安则寐，神不安则不寐；从脏腑学说分析，心主火，肾主水，心火下降，肾水上升，水火既济，心肾交通，睡眠才能正常。《清代名医医案精华·陈良夫医案》对此早有论述：“心火欲其下降，肾水欲其上升，斯寤寐如常矣。”《素问·五脏生成论》谓：“故人卧，血归于肝，肝受血而能视，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能摄。”王冰注曰：“肝藏血，心行之，人动则血运于诸经，人静则血归于肝脏。”如果因五志过激，劳逸起居失度等各种原因，导致肝之疏泄和藏血功能失调，这种节律性就会被打破，人动则血不能归于肝脏，人就不能按时睡眠。发挥中医治疗失眠的特点，提供一种能够有效治疗失眠的中药组合物，不仅可以避免西药对人体带来的危害而且可以有效帮助调节人体脏腑机能，达到标本兼治的目的。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗失眠的中药组合物。
本法明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供该中药组合物的质量控制方法。
本法明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明所述治疗失眠的中药组合物由以下重量份原药材组成：
珍珠母(煅)1000-1300重量份 首乌藤100-150重量份 女贞子(制)200-250重量份
丹参150-200重量份 龙眼肉50-100重量份 旱莲草60-110重量份
合欢皮50-100重量份 生地黄40-60重量份 石菖蒲50-100重量份
五味子100-150重量份。
上述治疗失眠的中药组合物还包括以下重量份原药材：酸枣仁50-100重量份、茯苓80-120重量份。
上述治疗失眠的中药组合物原料药材中龙眼肉可以替换为熟地黄。
上述治疗失眠的中药组合物还可优选以下重量份原药材组成：
珍珠母(煅)1100-1200重量份 首乌藤 120-140重量份 女贞子(制) 210-230重量份
丹参170-190重量份 熟地黄70-90重量份 旱莲草80-100重量份
合欢皮60-80重量份 生地黄40-50重量份 石菖蒲60-85重量份
五味子110-130重量份 酸枣仁70-80重量份 茯苓90-100重量份。
本发明药物组合物的制备方法为：
以上十二味，丹参粉碎至100～150目，其余女贞子等十一味加水煎煮2-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15-1.30(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，再用不同方法制成不同的制剂：片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、微囊、微丸、丸剂、口服液体制剂或糖浆剂。
本发明药物组合物优选的片剂制备方法为：
称取原料药材：
珍珠母(煅)1150重量份 首乌藤130重量份 女贞子(制)220重量份
丹参180重量份 熟地黄80重量份 旱莲草90重量份
合欢皮70重量份 生地黄45重量份 石菖蒲75重量份
五味子120重量份 酸枣仁75重量份 茯苓95重量份
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
本发明药物组合物的质量控制方法，包括以下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种或几种：
(1)丹参酮IIA的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加甲醇加热回流，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液。
取丹参酮IIA对照品，制成对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。
(2)五味子甲素的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加氯仿加热回流，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿使溶解，作为供试品溶液。
另取五味子甲素对照品，制成对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑。
(3)5—羟甲基糠醛的定性检测
取本发明药物制剂内容物，加乙醇浸泡，滤过，滤液作为供试品溶液。
取5—羟甲基糠醛对照品，制成对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)齐墩果酸的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加甲醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-氯仿混合液使溶解，作为供试品溶液。
取齐墩果酸对照品，制成对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)合欢皮的的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为供试品溶液。
另取合欢皮对照药材，制成对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)乙醇浸出物的定量检测：
取本发明药物制剂内容物，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇，密塞，称定重量，静置，加热回流。放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥，置干燥器中冷却，迅速精密称定重量。计算，即得。
(7)丹参酮IIA的定量检测：
精密称定丹参酮IIA对照品适量，制成丹参酮IIA对照品溶液，即得。
取本发明药物制剂内容物，精密称定，精密加入甲醇，称定重量，加热回流，放冷，补足减失的重量，即得。
分别精密吸取以上对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，测定即得。
本发明药物组合物的质量控制方法，优选以下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种或几种：
(1)丹参酮IIA的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材17.1g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯1ml使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液；
取丹参酮IIA对照品加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以19：1比例的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点；
(2)五味子甲素的定性检测：
取本发明药物制剂内容物适量，称取4g，加氯仿40ml加热回流30分钟，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；
取五味子甲素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以13:5:1比例的石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑；(3)5—羟甲基糠醛的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材6.8g，加乙醇15ml，浸泡24小时，滤过，滤液作为供试品溶液；
取5—羟甲基糠醛对照品，加乙醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以1:1比例的石油醚(60～90℃)—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(4)齐墩果酸的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材6.8g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-氯仿(3:2)混合液1ml使溶解，作为供试品溶液；
取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液3～5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5:2:1比例的环已烷-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)合欢皮的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材5.2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
取合欢皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以6：0.5：0.1比例的三氯甲烷-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)乙醇浸出物的定量检测：
取本发明药物制剂内容物适量，取约2g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，加热回流1小时。放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量；计算，即得。本品含乙醇浸出物不得少于10.0％；
(7)丹参酮IIA的定量检测：
照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以15∶5比例的甲醇-水为流动相；检测波长270nm；
精密称定丹参酮IIA对照品适量，制成每1ml含有丹参酮IIA对照品6μg，即得；
取本品，去除糖衣，研细，混匀，取样品3g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，补足减失的重量；
测定方法以上溶液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
本发明药物制剂相当于原料药材1.7g含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.01mg。
本发明药物组合物以生地、丹参、合欢皮、珍珠母、石菖蒲、酸枣仁宁心安神，清热除烦；旱莲草、女贞子、五味子、首乌藤、熟地、茯苓滋阴壮水。诸药合用，可使水火相济，心神得安，达到标本同治之目的。
本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速。含量测定方法中通过对供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制。该质量控制方法不仅保证了药品的安全性和有效性，提高了产品质量，而且便于药品的标准化、现代化生产。
具体实施方式
以下试验例及实施例用于进一步说明但不限于本发明
试验例1 工艺研究试验
通过对本发明药物组合物各原料药有效成分的分析，丹参采用全粉碎入药，不仅可以有效减少丹参中有效成分的损失，而且减少了药物中辅料的用量，药物的抗湿性还得到了保证。其他原药材采用水提取则可以有效保证整个制剂的疗效。以下是部分工艺研究试验的结果：
1、水提工艺条件的优选：
以出膏量为考察指标，采用正交试验对水煎工艺中煎煮时间、加水量、煎煮次数进行探讨。具体方法如下：
分别称取生地黄45g、女贞子(制)220g、熟地黄105g、旱莲草90g、珍珠母(煅)1150g、石菖蒲75g、首乌藤130g、合欢皮70g、五味子120g、酸枣仁75g、茯苓95g，共9份。按正交试验安排，进行正交试验，对9个样品分别进行水提、滤过、浓缩至相同密度(90℃)，测定出膏率，进行方差分析，结果见表1、表2、表3。
表1.水煎工艺因素水平表
表2.水煎工艺筛选正交试验数据表
表3.方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00
以浸膏得率为考察指标，由表6中极差R值大小显示，因素作用主次为A>C>B，其中A3>A2>A1、B3>B2>B1、C3>C2>C1，直观分析以A3B3C3为最佳工艺；但从方差分析结果表明：A、B、C因素的影响无显著性意义，所以从生产实际出发选择，为了节省能源，提高工作效率，选择加水煎煮2次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时。发明人又以浸膏得率和五味子醇甲含量为指标，对以上所选工艺与最佳工艺进行了对比，结果如下表：
表4 验证试验结果
从上表可以看出，本发明药物组合物所用制备方法能够将药物有效成分充分提取，与最佳工艺比较无差异，而且节省能源。
2、片剂辅料的选择
称取按照上述优选工艺提取原料药材，提取液浓缩后，将丹参药材粉碎至100目加入，混匀，干燥，粉碎至80目，制粒，干燥，整粒，再加入适量的硬脂酸镁，压片，即得。通过比较压片的难易、片剂外观，选择合适的辅料及辅料用量比例，结果见下表5：
表5 辅料选择试验结果
从上表可以看出，制备片剂时不用加入辅料，即可以达到片剂制备的要求，所以在制备片剂时不选择加入辅料。
3、片剂制粒时润湿剂的考察
按照上述优选工艺，提取原料药材，提取液浓缩后，将丹参药材粉碎至100目加入，混匀，干燥，粉碎至80目，沸腾制粒，比较使用不同润湿剂制粒时的难易程度，结果见下表：
表6 润湿剂考察
结果表明：采用50％乙醇为润湿剂进行制粒，药粉黏性适当，制粒容易，颗粒松软，色泽均匀，故选用50％乙醇为润湿剂制粒。
试验例2 质量标准试验研究
1、丹参的薄层鉴别
1)供试品的制备：取按照实施例1制备的本发明药物片剂10片共四份，除去糖衣，研细，分别加甲醇20ml，加热回流不同时间，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯1ml使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液。另取丹参酮IIA对照品加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干。比较不同提取时间下，供试品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表：
表7 供试品提取时间考察
| 回流提取时间 | 10min | 30min | 60min | 90min |
| 展开效果 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置无斑点显色。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色不清晰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰。 |
从上表可以看出，供试品溶液制备时加甲醇回流提取1小时所得供试品溶液在薄层板上的显色效果已经能够满足试验要求。
2)展开剂的选择
取按照上述优选方法制备供试品溶液、阴性对照品溶液及对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以不同展开剂，展开，取出，晾干。比较供试品溶液与对照品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表：
表8 展开剂的选择
| 展开剂 | 甲苯-醋酸乙酯(19∶1) | 氯仿-醋酸乙酯(9∶1) | 甲苯-甲醇(9∶1) |
| 展开效果 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰，阴性无干扰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰，但阴性无干扰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰，但阴性无干扰。 |
从上表可以看出，选择甲苯-醋酸乙酯(19：1)为展开剂，供试品与对照品均展开效果好，且阴性无干扰，符合试验要求。
2、五味子的鉴别
取按照实施例1制备的本发明药物片剂适量，去糖衣，研细，称取4g，加氯仿40ml加热回流30分钟，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；按照实施例1制备缺五味子的阴性对照品，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液；另取五味子甲素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以不同展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。比较供试品溶液与对照品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表：
表9 展开剂的选择
| 展开剂 | 石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸(13∶5∶1)的上层溶液 | 石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液 | 甲苯醋酸乙酯(6∶4) |
| 展开效果 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰，阴性无干扰。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点分离不清晰，有拖尾现象。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点分离不清晰，阴性有干扰。 |
从上表可以看出，展开剂选择石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸(13∶5∶1)的上层溶液，供试品与对照品溶液各斑点显色清晰，分离效果好，且阴性无干扰。
3、熟地的薄层鉴别
方法1：取按照实施例1制备的本发明药物片剂4片，去糖衣，研细，加乙醇15ml，浸泡24小时，滤过，滤液作为供试品溶液。
方法2：取按照实施例1制备的本发明药物片剂4片，去糖衣，研细，加乙醇15ml，超声处理1小时，滤过，滤液作为供试品溶液。
方法3：取按照实施例1制备的本发明药物片剂4片，去糖衣，研细，加乙醇15ml，回流提取2小时，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取5—羟甲基糠醛对照品，加乙醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G F 254薄层板上，以石油醚(60～90℃)—醋酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。比较供试品溶液与对照品溶液在薄层板上的展开效果，结果见下表：
表10 供试品制备方法比较
| 供试品溶液 | 方法1 | 方法2 | 方法3 |
| 展开效果 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰，分离效果好。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置无显色斑点。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置无显色斑点。 |
从上表可以看出，供试品溶液的制备方法选择方法1，不仅斑点显色清晰，而且分离效果好，阴性对照也无干扰。
4、女贞子的薄层鉴别
方法1：取按照实施例1制备的本发明药物片剂4片，去糖衣，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-氯仿(3:2)混合液1ml使溶解，作为供试品溶液；按照实施例1制备缺女贞子的阴性对照样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各3～5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-丙酮-醋酸乙酯(5:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
方法2：取按照实施例1制备的本发明药物片剂4片，去糖衣，研细，加乙醚30ml，回流提取40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液；按照实施例1制备缺女贞子的阴性对照样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液；另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇(40:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但重现性不好。
比较以上两种方法，确定以方法1为本发明药物质量控制方法中女贞子的薄层鉴别方法，该方法重现性好，且阴性无干扰。
5、合欢皮的薄层鉴别
供试品溶液的制备：取按照实施例1制备的本发明药物片剂3片，去糖衣，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：取合欢皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
阴性对照品溶液的制备：按照实施例1制备缺合欢皮的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6：0.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰。比较供试品溶液和对照药材溶液在薄层板上的展开效果，结果见表：
表11 展开剂的选择
| 展开剂 | 三氯甲烷-甲醇-甲酸(6：0.5：0.1) | 甲苯-甲醇-甲酸(5∶0.5：0.2) | 乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6：0.4：0.2) |
| 展开效果 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色清晰，分离效果好。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点显色不清晰，有拖尾现象。 | 供试品溶液在与对照品溶液相应位置斑点分离不清晰，阴性有干扰。 |
从上表可以看出，合欢皮的薄层鉴别方法中，选择三氯甲烷-甲醇-甲酸(6：0.5：0.1)为展开剂，展开效果好，符合试验要求，且阴性无干扰。
6、乙醇浸出物测定方法
在质量控制方法中，依据本发明药物组合物所含有效成份的特点，发明人在检查项增加了乙醇浸出物的检查方法，具体方法如下：
取按照实施例1制备的本发明药物片剂适量，去糖衣，研细，取约2g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，加热回流1小时。放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。计算，即得。
以下是按照上述方法测定的3批样品的乙醇浸出物含量：
表12 乙醇浸出物的测定结果
| 批号 | 01 | 02 | 03 |
| 乙醇浸出物 | 25.3％ | 25.9％ | 26.7％ |
从上表可以看出，对本发明药物组合物乙醇浸出物含量的测定，可以稳定、有效控制本发明药物质量。
7、丹参酮IIA的含量测定
检测仪器(室温检测)：Agilent 1100型高效液相色谱仪
色谱柱：(Zorbax C18 4.6×150mm，5μm)厂家：Agilent Techologies安捷伦科技有限公司(中国)
1)供试品溶液的制备：
取按照实施例1制备的本发明药物片剂，去除糖衣，研细，混匀，取样品3g共3份，分别精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流不同时间，放冷，补足减失的重量。比较回流不同时间所得供试品溶液中丹参酮IIA的含量，结果见下表：
表13 甲醇回流时间考察
| 回流时间 | 0.5h | 1h | 1.5h |
| 丹参酮IIA含量(mg/g) | 0.077 | 0.095 | 0.094 |
从上表可以看出，用甲醇加热回流1h，即可以将药物中的有效成分丹参酮IIA提取完全。
2)流动相的选择：以不同的流动相进行供试品溶夜的含量测定，通过比较高效液相色普图中，各峰的分离效果，来确定优选的流动相，结果如下：
表14 流动相的选择
| 流动相试剂选择 | 甲醇-水(15∶5) | 甲醇-乙腈-水-氯仿(40∶40∶20∶1) | 甲醇-水(5∶25) |
| 色谱图中各峰分离效果 | 与其它峰分离效果好，无干扰。 | 与其它峰分离效果差，干扰大。 | 与其它峰分离效果差，干扰大。 |
从上表可以看出，甲醇-水(15∶5)为流动相各峰分离效果好，符合试验要求。其中检测波长为270nm，流速为1.0ml/min，柱温为室温。
3)含量测定方法学考察：
对照品来源：丹参酮IIA购于中国药品生物制品检定所批号：0757-9804对照品溶液的制备精密称定丹参酮IIA对照品适量，加甲醇制成每1ml含有丹参酮IIA对照品6μg，即得。
供试品溶液的制备取按照实施例1制备的本发明药物片剂，去除糖衣，研细，混匀，取样品3g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，补足减失的重量。测定方法：取供试品溶液；并按照实施例1制备缺丹参的空白样品，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照液。用微孔滤膜(0.45μm)滤过。分别精密吸取阴性对照液，对照品液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(1)线性关系考察取对照品溶液(5.82ug/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线，表明丹参酮IIA在0.01164μg-0.06984μg间呈线性关系，其回归方程为：
Area＝5729.6639*Amt-0.7265(r＝0.9999)
表15 线性关系考察结果
(2)稳定性试验对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表：
表16 稳定性考察结果
(3)精密度试验 精密吸取供试品溶液，(按照实施例1制备的同一批样品)10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：
表17 线性关系考察结果
(4)重现性试验 按正文方法，按照实施例1制备的同一批样品五份，对每份进行测定，求得相对标准偏差<2％，结果见下表：
表18 重现性考察结果
(5)回收率试验精密称取已知含量的按照实施例1制备的同一批样品1.5g，再分别精密称取丹参酮IIA对照品溶液(5.82ug/ml)25ml，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定A结果见下表：
表19 回收率考察结果
3)按照上述含量测定方法，对按照实施例1制备的三批样品进行了含量测定，结果如下：
表20 样品含量测定结果
从以上数据可以看出，本发明药物的含量测定方法稳定、重现性好，能够有效控制药品中丹参酮IIA的含量，保证药品质量和疗效的稳定性。
试验例3 药效学试验研究
1、材料与试药
动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄兼用，由滨州医学院动物室提供，合格证号：鲁动质字200023001.
仪器：YSD-5型药理、生理实验多用仪(蚌埠医学院无线电二厂)；XZC-4A型小动物自主活动仪(山东医学科学院)。
材料：戊巴比妥钠(CP)，佛山市化工实验厂，批号：860901)；
本发明药物I，按照实施例1制备的制剂；
本发明药物II，按照实施例2制备的制剂；
本发明药物III，按照实施例3制备的制剂；
阳性对照药物，市售益气安神片。
2 方法和结果
2.1 药物对小鼠自发活动的影响
取合格小鼠50只，随机分为5组，每组10只。生理盐水对照组(对照组)：予生理盐水0.2ml/kg灌胃，每日1次，共3d。阳性对照药物组：取制备好的益气安神片样品溶液0.2ml/10g灌胃(相当于人用量的10倍)，每日1次，共3d。本发明药物组I～III：取制备好的本发明药物I～III样品液0.2ml/10g灌胃(相当于人用量的10倍)，每日1次，共3d。各组于最末次灌胃后1h，将小鼠放入自发活动仪中适应3min后，开始测定自发活动次数。结果见表1。
2.2 对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响
分组及给药方法同2.1。于末次给药后1h，腹腔注射戊巴比妥钠45mg/kg，观察小鼠翻正反射消失和恢复时间，记录睡眠持续时间，共观察2h，睡眠时间超过2h者以2h计算。结果见表21：
表21 安神作用比较结果
| 分组 | 剂量(g/kg) | 自发活动次数 | 睡眠时间(min) |
| 对照组(n＝10) | 169.7±63.1 | 40.0±15.5 | |
| 阳性对照药物组(n＝10) | 0.45 | 117.4±59.2* | 73.2±23.5* |
| 本发明药物I(n＝10) | 0.5 | 86.3±41.6*# | 103.4±31.5*# |
| 本发明药物II(n＝10) | 0.5 | 97.6±48.7* | 89.7±27.5* |
| 本发明药物III(n＝10) | 0.5 | 102.6±57.7* | 77.8±25.0* |
注：与对照组比较，*P<0.01.与阳性药物对照组比较#<0.05
从上表可以看出，本发明药物I～III及阳性对照药物均能显著降低小鼠自发活动次数，延长戊巴比妥纳诱导小鼠睡眠的时间。其中本发明药物的安神作用高于阳性对照药物，尤其本发明药物I的作用显著高于阳性对照药物，说明本发明药物组合物具有较好的安神助眠作用。
2.3 对小鼠失血性血虚证的影响
取雄性小鼠60只，随机分成5组，每组12只。除正常对照组外，对其余各鼠均于失血前由眼眶静脉丛取血，测定红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、网织红细胞(Ret)。在取血的同时，对每鼠放血0.5mI，于24h后再次取血测定RBC，Hb和Ret，以证实血虚证模型建立是否成功。当日开始灌胃；模型对照组给相应体积的蒸馏水，阳性对照药物组给益气安神片0.45g/kg，本发明药物I～III组的给药剂量为0.5g/kg。给药容积均为0.2mL/10g体重，1次/d，连续9d。于给药后第4，9天分别取血检测RBC，Hb及Ret。结果见表22：
表22 对小鼠失血性血虚证的影响
注：与失血前比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05。
可见各组小鼠失血24h后RBC，Hb明显减少，说明血虚证模型建成；给药4d后本发明药物组及阳性对照药物组的RBC，Hb即有明显升高，与模型组比较差异显著，给药9d后的作用更加明显。本发明药物与阳性对照药物比较在治疗失血性血虚证的效果上更显著。
试验例4、临床试验研究
1 诊断标准 所有病例均系近两年心理咨询门诊病人，符合《中国精神病分类及诊断标准第二版》中失眠症诊断标准和《中医病证诊断疗效标准》中不寐证诊断标准。临床选择符合上述中西医诊断标准的阳不交阴、阴虚火旺症患者作为观察对象。其辨证标准是：心烦不寐或多梦易醒，头晕耳鸣，口干咽燥，五心烦热，心悸汗出，健忘，腰膝酸软，男子遗精，女子月经不调，舌红少津，脉象沉细或细数。
2 一般资料
表23 临床病例情况
通过比较，两组患者在性别、年龄、病程、病情轻重等方面均无明显差异(P>0.05)，具有可比性。
3 治疗方法
治疗组口服按照实施例1制备的本发明药物，3次/d，每次6片。对照组口服益气安神片，3次/d，每次25mg；谷维素片，3次/d，每次20mg。治疗期间禁用安眠药。同时进行心理治疗，和患者共同剖析失眠原因，引导患者认识本病的性质、特点，树立战胜疾病的信心。帮助患者消除紧张刺激因素，指导患者逐步纠正某些不良的习惯。两组均以30天为1个疗程，疗程结束后进行疗效判定。
4 治疗效果
4.1 疗效标准根据卫生部《中药新药治疗失眠的临床研究指导原则》拟定。临床治愈：睡眠时间恢复正常或夜间睡眠时间在6h以上，睡眠深沉，醒后精神充沛；显效：睡眠明显好转，睡眠时间增加3h以上，睡眠深度增加；有效：症状减轻，睡眠时间较前增加不足3h；无效：治疗后失眠无明显改善或加重者。
4.2 治疗结果见下表。
表24 两组疗效比较
| 组别n | 治愈例(％) | 显效例(％) | 有效例(％) | 无效例(％) | 总有效例(％) |
| 治疗组300 | 106(35.33) | 117(39.00) | 56(18.61) | 21(7.00) | 279(93.00) |
| 对照组100 | 9(9.00) | 21(21.00) | 48(48.00) | 22(22.00) | 78(78.00) |
从上表结果可以看出，治疗组总有效率为93％，对照组总有效率为78％，两组疗效比较有显著性差异(P<0.01)，本发明药物在临床上治疗失眠的效果显著好于阳性对照药物。
具体实施例
实施例1
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 熟地黄 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g 酸枣仁 75g 茯苓 95g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例2
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 龙眼肉 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g 酸枣仁 75g 茯苓 95g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例3
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 龙眼肉 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g
以上十味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等九味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎叶，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例4
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 熟地黄 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g
以上十味，丹参粉碎至150目，其余女贞子等九味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加8倍量水煎煮3小时，第三次加8倍量水煎煮3小时，合并煎叶，滤过，滤液在真空度为0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例5
珍珠母(煅) 1100g 首乌藤 120g 女贞子(制) 230g
丹参 190g 熟地黄 90g 旱莲草 80g
合欢皮 60g 生地黄 50g 石菖蒲 60g
五味子 110g 酸枣仁 70g 茯苓 100g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例6
珍珠母(煅) 1200g 首乌藤 140g 女贞子(制) 210g
丹参 170g 熟地黄 70g 旱莲草 100g
合欢皮 80g 生地黄 40g 石菖蒲 85g
五味子 130g 酸枣仁 80g 茯苓 90g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例7
珍珠母(煅) 1000g 首乌藤 100g 女贞子(制) 200g
丹参 150g 龙眼肉 50g 旱莲草 60g
合欢皮 50g 生地黄 40g 石菖蒲 50g
五味子 100g 酸枣仁 50g 茯苓 80g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，干燥，整粒，加入0.5％硬脂酸镁，装入1000粒胶囊，即得。
实施例8
珍珠母(煅) 1300g 首乌藤 150g 女贞子(制)250g
丹参 200g 龙眼肉 100g 旱莲草 110g
合欢皮 100g 生地黄 60g 石菖蒲 100g
五味子 150g 酸枣仁 100g 茯苓 120g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入上述丹参细粉、蔗糖350g、糊精100g，混匀，制粒，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，制成颗粒800g，即得。
实施例9
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 熟地黄 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g 酸枣仁 75g 茯苓 95g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎成100目，与植物油按照1:2比例混合均匀，加入35g熔融的蜂蜡，压制成软胶囊，即得。
实施例10
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 熟地黄 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g 酸枣仁 75g 茯苓 95g
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎成100目，与熔融的聚乙二醇4000按照1:3比例混合均匀，制成滴丸，即得。
实施例11
珍珠母(煅) 1150g 首乌藤 130g 女贞子(制) 220g
丹参 180g 熟地黄 80g 旱莲草 90g
合欢皮 70g 生地黄 45g 石菖蒲 75g
五味子 120g
以上十味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等九味加水煎煮，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎成80目，用水泛丸，真空干燥，即得。
实施例11 按照实施例1～6制备的片剂的质量控制方法：
【性状】本品为糖衣片，除去糖衣后，显棕褐色；味微酸而涩。
【鉴别】(1)取本品10片，除去糖衣，研细，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯1ml使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液。另取丹参酮IIA对照品加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，照品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。
(2)取本品适量，去糖衣，研细，称取4g，加氯仿40ml加热回流30分钟，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子甲素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸(13:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑。
【检查】应符片剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录ID)。
乙醇浸出物：取本品适量，去糖衣，研细，取约2g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，加热回流1小时。放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。计算，即得。
本品含乙醇浸出物不得少于10.0％。
【含量测定】照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15∶5)为流动相；检测波长270nm。
对照品溶液的制备精密称定丹参酮IIA对照品适量，制成每1ml含有丹参酮IIA对照品6μg，即得。
供试品溶液的制备 取本品，去除糖衣，研细，混匀，取样品3g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，补重。
测定方法 以上溶液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。
本品每片含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.01mg。
实施例12 按照实施例1～11制备的本发明药物的质量控制方法：
(1)取本发明药物制剂内容物相当于原料药材17.1g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯1ml使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。
(2)取本发明药物制剂内容物适量，称取4g，加氯仿40ml加热回流30分钟，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取五味子甲素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸(13:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑。
(3)取本发明药物制剂内容物相当于原料药材6.8g，加乙醇15ml，浸泡24小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取5—羟甲基糠醛对照品，加乙醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)—醋酸乙酯(1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本发明药物制剂内容物相当于原料药材6.8g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-氯仿(3:2)混合液1ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液3～5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本发明药物制剂内容物相当于原料药材5.2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取合欢皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6：0.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)乙醇浸出物：
取本发明药物制剂内容物适量，取约2g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，加热回流1小时；放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。计算，即得。本品含乙醇浸出物不得少于10.0％。
(7)含量测定：
照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15∶5)为流动相；检测波长270nm。
对照品溶液的制备 精密称定丹参酮IIA对照品适量，制成每1ml含有丹参酮IIA对照品6μg，即得。
供试品溶液的制备 取本品，去除糖衣，研细，混匀，取样品3g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，补重。
测定方法 以上溶液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定即得。
本发明药物制剂相当于原料药材1.7g含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.01mg。
Claims (8)
1、一种治疗失眠的中药组合物，其特征在于该中药组合物由以下重量份原药材组成：
珍珠母(煅) 1000-1300重量份 首乌藤 100-150重量份 女贞子(制) 200-250重量份
丹参 150-200重量份 龙眼肉 50-100重量份 旱莲草 60-110重量份
合欢皮 50-100重量份 生地黄 40-60重量份 石菖蒲 50-100重量份
五味子 100-150重量份。
2、如权利要求1所述中药组合物，其特征在于该中药组合物还包括以下重量份原药材：酸枣仁50-100重量份、茯苓80-120重量份。
3、如权利要求1所述中药组合物，其特征在于该中药组合物原料药材中龙眼肉可以替换为熟地黄。
4、如权利要求1所述中药组合物，其特征在于该中药组合物还可以为以下重量份原料药组成：
珍珠母(煅)1100-1200重量份 首乌藤 120-140重量份 女贞子(制) 210-230重量份
丹参 170-190重量份 熟地黄 70-90重量份 旱莲草 80-100重量份
合欢皮 60-80重量份 生地黄 40-50重量份 石菖蒲 60-85重量份
五味子 110-130重量份 酸枣仁 70-80重量份 茯苓 90-100重量份。
5、如权利要求4所述中药组合物，其特征在于该中药组合物的制备方法为：
以上十二味，丹参粉碎至100～150目，其余女贞子等十一味加水煎煮2-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15-1.30(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，再用不同方法制成不同的制剂：片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、微囊、微丸、丸剂、口服液体制剂或糖浆剂。
6、如权利要求5所述中药组合物，其特征在于该中药组合物的片剂制备方法为：
称取原料药材：
珍珠母(煅)1150重量份 首乌藤 130重量份 女贞子(制)220重量份
丹参 180重量份 熟地黄 80重量份 旱莲草 90重量份
合欢皮 70重量份 生地黄 45重量份 石菖蒲 75重量份
五味子 120重量份 酸枣仁 75重量份 茯苓 95重量份，
以上十二味，丹参粉碎至100目，其余女贞子等十一味加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液在真空度为-0.06～-0.08MPa，温度为60～75℃的减压条件下浓缩至相对密度为1.25(90℃)的清膏，加入丹参细粉，混匀，在压力为-0.06MPa，温度60℃以下真空干燥，粉碎至80目，以50％乙醇为润湿剂，沸腾制粒，压制成1000片，包糖衣，即得。
7、如权利要求1-4任一项所述中药组合物，其特征在于该中药组合物的质量控制方法包括以下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种或几种：
(1)丹参酮IIA的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加甲醇加热回流，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液；
取丹参酮IIA对照品，制成对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点；
(2)五味子甲素的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加氯仿加热回流，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿使溶解，作为供试品溶液；
另取五味子甲素对照品，制成对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑；
(3)5—羟甲基糠醛的定性检测
取本发明药物制剂内容物，加乙醇浸泡，滤过，滤液作为供试品溶液；
取5—羟甲基糠醛对照品，制成对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)齐墩果酸的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加甲醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-氯仿混合液使溶解，作为供试品溶液；
取齐墩果酸对照品，制成对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)合欢皮的的定性检测：
取本发明药物制剂内容物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；
另取合欢皮对照药材，制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)乙醇浸出物的定量检测：
取本发明药物制剂内容物，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇，密塞，称定重量，静置，加热回流。放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥，置干燥器中冷却，迅速精密称定重量。计算，即得；
(7)丹参酮IIA的定量检测：
精密称定丹参酮IIA对照品适量，制成丹参酮IIA对照品溶液，即得；
取本发明药物制剂内容物，精密称定，精密加入甲醇，称定重量，加热回流，放冷，补足减失的重量，即得；
分别精密吸取以上对照品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即得。
8、如权利要求7所述中药组合物的质量控制方法，其特征在于包括以下定性检测方法和/或定量检测方法中的一种或几种：
(1)丹参酮IIA的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材17.1g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥散至近干，加醋酸乙酯1ml使溶解，分取醋酸乙酯层，静置，取上清夜，作为供试品溶液；
取丹参酮IIA对照品加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以19：1比例的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与丹参酮IIA对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点；
(2)五味子甲素的定性检测：
取本发明药物制剂内容物适量，称取4g，加氯仿40ml加热回流30分钟，滤过，滤液低温挥干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；
取五味子甲素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以13:5:1比例的石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑；
(3)5—羟甲基糠醛的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材6.8g，加乙醇15ml，浸泡24小时，滤过，滤液作为供试品溶液；
取5—羟甲基糠醛对照品，加乙醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G F 254薄层板上，以1:1比例的石油醚(60～90℃)—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)齐墩果酸的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材6.8g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-氯仿(3:2)混合液1ml使溶解，作为供试品溶液；
取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液3～5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5:2:1比例的环已烷-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)合欢皮的定性检测：
取本发明药物制剂内容物相当于原料药材5.2g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
取合欢皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以6:0.5:0.1比例的三氯甲烷-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)乙醇浸出物的定量检测：
取本发明药物制剂内容物适量，取约2g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，加热回流1小时。放置至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量；计算，即得。本品含乙醇浸出物不得少于10.0％；
(7)丹参酮IIA的定量检测：
照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以15:5比例的甲醇-水为流动相；检测波长270nm；
精密称定丹参酮IIA对照品适量，制成每1ml含有丹参酮IIA对照品6μg，即得；
取本品，去除糖衣，研细，混匀，取样品3g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，补足减失的重量；
测定方法以上溶液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定即得；
本发明药物制剂相当于原料药材1.7g含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计，不得少于0.01mg。
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