CN102727790A - 肾炎康复片质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由中药材西洋参、人参、生地黄、杜仲、山药、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹参、泽泻、白茅根、桔梗制成的一种中药复方制剂肾炎康复片的质量控制方法，其特征是利用薄层色谱法鉴别该中药复方制剂的中药材丹参，以及利用高效液相色谱法对肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A进行含量测定。该方法能够有效控制肾炎康复片的产品质量，可作为该药质量控制和考察工艺可靠性的指标。

Description

肾炎康复片质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种治疗慢性肾炎中药的质量控制方法，属于制药领域。

技术背景

肾炎康复片执行国家标准，具有补脾益肾、活血化瘀、利尿消肿及清解余毒作用，主治慢性肾炎，对症见神疲乏力、腰酸腿软、面浮肢肿、头晕及蛋白尿等有极好的效果。该药由中药材西洋参、人参、生地黄、杜仲、山药、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹参、泽泻、白茅根、桔梗制成；其中丹参是主要药味，具有活血化瘀作用。由国家颁布的现有肾炎康复片质量控制方法中，虽有对丹参的薄层鉴别方法，以及对丹参中丹参酮的含量测定；但现有方法对丹参的薄层鉴别中使用乙醚和氯仿作为提取和溶解溶媒，鉴别效果尚欠理想；特别是两者属于国家第二类易制毒化学品，所以，乙醚与氯仿对人体的危害较大，不利于操作者的劳动保护，国家已经明确要求在实验室减少氯仿的使用，并以相对安全的溶媒替代；现有方法对丹参中丹参酮的含量测定使用高效液相色谱法的标准曲线法，该方法操作非常繁琐，由此也会增加产生误差的机会，因此影响含量检测的准确度。可见，现有技术在肾炎康复片质量控制方法上存在局限性。本发明克服现有技术的不足，旨在完善肾炎康复片的质量控制方法，通过大量的试验研究，改变了薄层鉴别所使用溶媒，简化了含量测定操作步骤，不但使质量控制方法准确度提高，而且有利于环境以及操作者的劳动保护。

发明内容

本发明目的是克服现有技术不足，针对肾炎康复片质量控制方法中丹参薄层色谱法鉴别，以及丹参中丹参酮II_A利用高效液相色谱法含量测定加以完善，提高肾炎康复片质量控制方法的准确度，并改善操作方法对于环境以及操作者健康产生的不良影响；通过本发明能够有效控制肾炎康复片产品质量。

本发明通过下述技术方案得以实现：

1.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法鉴别：

a.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.8-1.2mg的溶液，作为对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：取肾炎康复片16-25片小片或10-15片大片薄膜衣片，除去包衣，研细，加甲醇35-45ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；

c.薄层色谱法试验：吸取上述对照品溶液和供试品溶液各4-6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，二组份的配比为10∶1，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行含量测定：

a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水为流动相，三组份的配比为50∶25∶25，检测波长为270nm，理论板数按丹参酮II_A峰计算应不低于5000；

b.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含8-12μg的溶液，作为对照品溶液；

c.供试品溶液的制备：取肾炎康复片16-25片，除去包衣，精密称定，研细，取约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流25-35分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

d.测定法：分别精密吸取上述对照品溶液5-10μl和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

肾炎康复片每片含丹参以丹参酮II_A计，糖衣片不得少于50μg，薄膜衣片不得少于80μg。

本发明可通过下述最佳技术方案得以实现：

1.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法鉴别：

a.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20片小片或13片大片薄膜衣片，除去包衣，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

c.薄层色谱法试验：吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，二组份的配比为10∶1，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行含量测定：

a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水为流动相，三组份的配比为50∶25∶25，检测波长为270nm，理论板数按丹参酮II_A峰计算应不低于5000；

b.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液；

c.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

d.测定法：分别精密吸取上述对照品溶液5-10μl和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

肾炎康复片每片含丹参以丹参酮II_A计，糖衣片不得少于50μg，薄膜衣片不得少于80μg。

本发明所述肾炎康复片国家标准为国家药典委员会‘药典业发(1999)字第378号’发文所附标准，其中，糖衣片素片片重即小片0.30克，薄膜衣片每片即大片重0.48克。

本发明所提供肾炎康复片质量控制方法，简便易行，可作为肾炎康复片质量控制指标。

具体实施方式

实施例1：

取组方中山药58.1g、土茯苓58.1g、桔梗58.1g粉碎成细粉，将组方中丹参29.1g、人参5.8g、西洋参17.4g分别粉碎成细粉；剩余生地黄58.1g、杜仲34.9g、白花蛇舌草29.1g、黑豆58.1g、益母草58.1g、白茅根87.2g、泽泻29.1g用水提取二次，第一次1.5小时，加水8倍量，第二次1小时，加水7倍量，每次提取水温98-102℃，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.30-1.35(60℃热测)的浸膏；浸膏加入山药、土茯苓、桔梗细粉，混匀，真空干燥，干固物粉碎成细粉，混匀，分别加入丹参、人参、西洋参细粉，混合均匀，制粒，压片，基片重0.45g，约制成625片，包薄膜衣；该药物的质量控制方法包括下列步骤：

1.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法鉴别：

a.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：取肾炎康复片13片大片薄膜衣片，除去包衣，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

c.薄层色谱法试验：吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，二组份的配比为10∶1，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行含量测定：

a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水为流动相，三组份的配比为50∶25∶25，检测波长为270nm，理论板数按丹参酮II_A峰计算应不低于5000；

b.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液；

c.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20大片薄膜衣片，除去包衣，精密称定，研细，取约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法：分别精密吸取上述对照品溶液5-10μl和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

肾炎康复片每片含丹参以丹参酮II_A计，薄膜衣片不得少于80μg。

实施例2：

取组方中山药58.1g、土茯苓58.1g、桔梗58.1g粉碎成细粉，将组方中丹参29.1g、人参5.8g、西洋参17.4g分别粉碎成细粉；剩余生地黄58.1g、杜仲34.9g、白花蛇舌草29.1g、黑豆58.1g、益母草58.1g、白茅根87.2g、泽泻29.1g用水提取二次，第一次1.5小时，加水8倍量，第二次1小时，加水7倍量，每次提取水温98-102℃，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.35-1.40(60℃热测)的浸膏；浸膏加入山药、土茯苓、桔梗细粉，混匀，真空干燥，干固物粉碎成细粉，混匀，分别加入丹参、人参、西洋参细粉，混合均匀，制粒，压片，基片重0.30g，约制成1000片，包糖衣；该药物的质量控制方法包括下列步骤：

1.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法鉴别：

a.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20片小片，除去包衣，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

c.薄层色谱法试验：吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，二组份的配比为10∶1，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2.肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行含量测定：

a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水为流动相，三组份的配比为50∶25∶25，检测波长为270nm，理论板数按丹参酮II_A峰计算应不低于5000；

b.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液；

c.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20片小片，除去包衣，精密称定，研细，取约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

d.测定法：分别精密吸取上述对照品溶液5-10μl和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

肾炎康复片每片含丹参以丹参酮II_A计，糖衣片小片不得少于50μg。

Claims (2)

1.肾炎康复片质量控制方法，其中所述药物配方由中药材西洋参17.4g、人参5.8g、生地黄58.1g、杜仲34.9g、山药58.1g、白花蛇舌草29.1g、黑豆58.1g、土茯苓58.1g、益母草58.1g、丹参29.1g、泽泻29.1g、白茅根87.2g、桔梗58.1g组成，上述原料共制成1000片或625片，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法鉴别：

a.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.8-1.2mg的溶液，作为对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：取肾炎康复片16-25片小片或10-15片大片薄膜衣片，除去包衣，研细，加甲醇35-45ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；

c.薄层色谱法试验：吸取上述对照品溶液和供试品溶液各4-6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，二组份的配比为10∶1，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行含量测定：

a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水为流动相，三组份的配比为50∶25∶25，检测波长为270nm，理论板数按丹参酮II_A峰计算应不低于5000；

b.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含8-12μg的溶液，作为对照品溶液；

c.供试品溶液的制备：取肾炎康复片16-25片，除去包衣，精密称定，研细，取约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流25-35分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

d.测定法：分别精密吸取上述对照品溶液5-10μl和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

肾炎康复片每片含丹参以丹参酮II_A计，糖衣片不得少于50μg，薄膜衣片不得少于80μg。

2.根据权利要求1所述肾炎康复片质量控制方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法鉴别：

a.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

b.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20片小片或13片大片薄膜衣片，除去包衣，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

c.薄层色谱法试验：吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，二组份的配比为10∶1，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)肾炎康复片中药材丹参所含丹参酮II_A依照中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行含量测定：

a.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水为流动相，三组份的配比为50∶25∶25，检测波长为270nm，理论板数按丹参酮II_A峰计算应不低于5000；

b.对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液；

c.供试品溶液的制备：取肾炎康复片20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

d.测定法：分别精密吸取上述对照品溶液5-10μl和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

肾炎康复片每片含丹参以丹参酮II_A计，糖衣片不得少于50μg，薄膜衣片不得少于80μg。