CN101987124A - 一种治疗消化不良中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗消化不良中药组合物及其制备方法，它是由有效成分和/或药学上可接受的赋形剂制成各种剂型，其中所述的有效成分是以中药材陈皮、枳壳为原料，通过醇回流提取等制备工艺制成的；该药物具有治疗消化不良的药物用途；本发明还公开了该药物的制备方法和检测方法。

Description

一种治疗消化不良中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体而言，本发明涉及一种消化不良中药组合物及其制备方法。本发明还涉及该药物的制备方法和检测方法。

背景技术

功能性消化不良是内科消化系统的常见病和多发病，在中医临床中经常表现为肝胃郁热、肝胃气滞、胃失和降和证候，常由消化道动力不良引起。该病涉及的范围广泛，发病人群基数大，在各地发病率并明显的地哉差异和时间差异，由于人们生活节奏加快，精神情志因素影响，以及饮食习惯的改变等多种原因，使本病的发病率有逐年渐高的趋势，严重地影响了广大患者的身心健康；目前国内外治疗该疾病常用药如吗丁啉、普瑞博思、西沙必利等都有一定的效果，但病情易反复，有一定的副作用，其远期疗效有待于进一步提高。

本发明的目的是针对上述已有药物的缺点，研制出一种完全由中草药配制的口服药物及其制备方法、检测方法。本发明人经过大量的实验筛选和验证从而完成了本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗消化不良的中药组合物。

本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备工艺。

本发明的又一目的是提供该中药组合物片剂的检测方法。

本发明的又一目的是提供该中药组合物用于治疗消化不良的疾病的用途。

本发明药物是由有效成分和/或药学上可接受的赋形剂组成，其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的：

陈皮36～64％、枳壳36～64％。

为了获得更好的疗效，优选原料用量为：

陈皮43～57％、枳壳43～57％。

为了获得最佳疗效，原料用量最佳为：

陈皮50％、枳壳50％。

其中所述的中药原料为：

陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮。枳壳为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实，均为果实类药物，为中医治病的常用中药。均具理气宽中，行滞消胀。功效。用于用于胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化等。陈皮、枳壳主要含有黄铜类、挥发油等化学成份。

本发明药物的有效成分是醇提物，通过对本品的制备工艺的药理实验和正交试验研究，确定取陈皮、枳壳，用6倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用6倍量70％乙醇回流提取2小时，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15(60℃)，加乙醇至70％，静置24小时，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度约1.33(60℃)，

本发明药物的提取物可以与药学上可接受的各种赋形剂按照不同剂型制备方法制备成各种剂型如片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂、口服液剂、膏剂等。

提取工艺的优选研究资料

1提取溶剂的优选

上述化学成分和药理作用研究报道证明，陈皮、枳壳均含黄酮类化合物、挥发油和少量生物碱，药理作用表现在对胃肠道运动有促进作用，黄酮类化合物通常水溶性较差，而在稀乙醇中溶解性较好，传统中药以水煎煮汤剂入药，为探索其最佳提取溶剂，我们分别采用水煎煮提取与低浓度醇回流提取，进行有效成分的含量测定，同时将水提取液和醇提取液进行药理实验研究，以确定最佳提取溶剂。由于大生产时通常以60％左右乙醇回流提取，因此，我们拟采用60％乙醇回流提取。

1.1水煎煮提取：取陈皮与枳壳各100g，加7倍量水煎煮提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩至约150ml，转移至200ml容量瓶中，分别加水至刻度，摇匀，即得。(取150ml供药理研究用，称受试药1；余50ml含量测定用)

1.2醇回流提取：取陈皮与枳壳各100g，加60％乙醇6倍量加热回流2次，每次2小时，滤过，合并滤液，浓缩至约150ml，转移至200ml容量瓶中，分别加水至刻度，摇匀，即得(取150ml供药理研究用，称受试药2；余50ml含量测定用)。

1.3含量测定：照下述项下含量测定方法，测定二种不同提取溶剂中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量，结果见表1。

表1不同提取溶剂黄酮类成分含量测定结果

表1结果显示，陈皮、枳壳醇提液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量均高于陈皮、枳壳水提液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量，说明醇提液对柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的提取效果优于陈皮、枳壳水提液。

2药理作用比较研究

2.1对多巴胺致肠功能低下小鼠的影响

小鼠80只，体重19～22g，随机分为8组：对照组、模型组、醇回流和水煎煮(25、50、100mg·kg-1)3个剂量组，每组10只，♀♂各半。各组小鼠禁食不禁水16小时，次日一次给药，对照组灌胃蒸馏水，其他组给予相应药物灌胃。各小鼠灌胃30分钟后除对照组外，其余小鼠给予1.7mg·kg-1盐酸多巴胺注射液皮下注射造模，20分钟后80只小鼠分别灌服2％的羧甲基纤维素钠碳末混悬液0.2ml·10g-1，20分钟后小鼠脱颈处死，立即取出胃肠，平铺，测定碳末前端至幽门的距离和小肠全长，以两者之比计算推进百分率。试验结果显示，皮下注射1.7mg·kg-1的多巴胺可明显抑制小鼠的肠推进，水提、醇提取物(25、50、100mg·kg-1)能提高由多巴胺抑制的小鼠肠推进活动，但醇提取作用强于水煎煮提取，见表2。

表2水提、醇提取物对多巴胺致小鼠肠推进的影响

注：与对照组比较，^△P＜0.05，与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.2对阿托品致肠功能低下小鼠的影响

小鼠80只，体重19～22g，随机分为8组：对照组、模型组、醇回流和水煎煮(25、50、100mg·kg-1)3个剂量组，每组10只，♀♂各半。各组小鼠禁食不禁水16小时，次日一次给药，对照组灌胃蒸馏水，其他组给予相应药物灌胃。各小鼠灌胃30分钟后除对照组外，其余小鼠给予2.5mg·kg-1的阿托品皮下注射造模，20分钟后80只小鼠分别灌服2％的羧甲基纤维素钠碳末混悬液0.2ml·10g-1，20分钟后小鼠脱颈处死，立即取出胃肠，平铺，测定碳末前端至幽门的距离和小肠全长，以两者之比计算推进百分率。试验结果显示，皮下注射2.5mg·kg-1的阿托品可明显抑制小鼠的肠推进，水提、醇提取物(25、50、100mg·kg-1)能提高由阿托品抑制的小鼠肠推进活动，但醇提取作用强于水煎煮提取，见表3。

表3水提、醇提取物对阿托品致小鼠肠推进的影响

注：与对照组比较，^△P＜0.05；与模型组比较，^*P＜0.05

结论：陈皮、枳壳水提液和陈皮、枳壳醇提液对小鼠胃排空均有促进作用。但陈皮、枳壳醇提液效果明显强于陈皮、枳壳水提液。结合前面化学实验含量测定的结果，醇提液中检测出的有效成分柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量均明显高于水提液。因此，我们确定以一定浓度的乙醇作为提取溶剂。

3.提取工艺的正交实验

3.1实验设计

药理实验所用的陈皮、枳壳醇提液采用60％乙醇回流提取，但有效成分提取率的高低与乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数有关。因此，我们将乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数作为考察因素，用正交实验表L₉(3⁴)安排实验，表头设计见表4。

表4表头设计

3.2考察指标及指标成分测定方法的确定

陈皮含橙皮苷，枳壳柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷，黄酮类化合物在二种药材中含量较高，而且中国药典项陈皮以橙皮苷、枳壳以柚皮苷为指标成分，也有药理研究证明橙皮甙具有一定的促胃肠动力作用，因此，我们将提取工艺中柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷的转移率作为提取工艺的筛选指标。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(24∶76)为流动相；检测波长为283nm；理论板数按柚皮苷峰计应不低于3000。

对照品溶液的制备精密称柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含24μg的柚皮苷、17μg的橙皮苷、28μg的新橙皮苷对照品混合溶液。

供试品溶液的制备取相当于1g陈皮、枳壳药材的提取液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理(功率250±70w，频率33±2kHz)10分钟，放冷，以甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.3正交实验及供试品溶液的制备

按处方量分别取陈皮和枳壳各100g，共9份，按L₉(3⁴)正交表中的实验安排进行回流提取，提取液滤过，定容至一定的体积，编号，再分别吸取各样号的提取液适量，加甲醇制成每毫升约含0.02g药材的溶液，按照上述柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷含量测定的方法进行测定，计算，柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量结果见表5，柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量测定结果经方差分析，影响提取率因素结果见表6、7、8。

表5正交实验结果

表6影响柚皮苷提取率因素的方差分析

表7影响橙皮苷提取率因素的方差分析

表8影响新橙皮苷提取率因素的方差分析

注：F_0.05(2，2)＝19.0  F_0.01(2，2)＝99.0  “^*”有显著性差异

从柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量测定结果的方差分析中可见：因素A(溶剂浓度)、因素B(溶剂用量)和因素C(提取时间)对柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量无明显影响；因素D(提取次数)对柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量有显著性影响，换言之，影响柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷提取率的主要因素是提取次数，结合K值分析，应选择A₃B₃C₃D₃，即用8倍量70％乙醇，提取3次，每次提取2小时。

因素A乙醇含量从50％～70％对提取结果没有显著影响，从节省生产成本等角度综合考虑，含醇量低可节约成本，应采用50％乙醇，正交实验中发现，用50％乙醇提取果胶提出量大，放冷后沉淀出大量果胶，而用60％乙醇第一次提取，放冷后只有少许果胶沉淀，由于陈皮、枳壳经第一次提取后药材溶胀与糊化，第二、三次再采用60％乙醇提取时果皮糊化，提取液放冷后有大量果胶，而采用70％乙醇提取，提取液放冷后仅有少量果胶沉淀，因此，乙醇提取宜第一次用60％乙醇，第二、三次用70％乙醇；因此，提取方案初步定为A₂B₃C₃D₃，即药材第一次用60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用70％乙醇回流提取2小时。

正交实验影响因素的方差分析结果还显示，因素B乙醇用倍4倍、6倍、8量均无显著影响，但从K值的直观分析，乙醇用8倍量更好，因此，在验证性实验中，我们拟对溶剂用量进行再考察。

4.验证性实验

按上述正交实验得出的初步方案，以柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量为指标，按处方量分别取陈皮、枳壳药材各100g，共3份，分三组实验，第一组：第一次用4倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用4倍量70％乙醇回流提取2小时。第二组：第一次用6倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用6倍量70％乙醇回流提取2小时。第三组：第一次用8倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用8倍量70％乙醇回流提取2小时。各组提取液定容到一定体积后，再精密吸取提取液适量，加甲醇制成每1ml约含0.02g药材的溶液，作为样品1、样品2、样品3，吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，测定柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量，结果见表9。

表9柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的百分含量

结论：从表9中的数据可以看出，测得柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的的含量与正交实验中最佳提取方案所测得的数据基本吻合，证明了正交实验所确定的最佳提取工艺合理性。进一步对溶剂用量考察的验证性实验还表明：用6倍量溶剂和用8倍量溶剂的提取效果较用4倍量溶剂好，且用6倍量溶剂和用8倍量溶剂的提取效果对柚皮苷、新橙皮苷无显著性差异，但对橙皮苷有明显差异。考虑到节约生产中的溶剂用量，我们选用提取溶剂为6倍量。由于第一次提取药材吸取较多溶剂，因此，最佳提取工艺确定为：第一次用7倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用6倍量70％乙醇回流提取2小时。

5.分离与纯化工艺研究

果实类药材通常含有大量果胶、粘液质，而该类成分一般认为是非活性成分，介于提取物中含有大量的果胶和粘液质类成分，拟对提取液进行分离与纯化。分离与纯化工艺包括两个方面：一是应根据粗提取物的性质，选择相应的分离方法与条件，以得到药用提取物质。二是将无效和有害组分除去，尽量保留有效成分或有效部位，可采用各种净化、纯化、精制的方法，为不同类别新药和剂型提供合格的原料或半成品。

在上述最佳提取工艺选择提取时，将提取液放置冷却后，出现大量果胶和少量油性物质，我们采用过滤的方法滤除果胶；回收乙醇后再加乙醇至70％沉淀；实验结果表明：去除果胶后，提取液的浸膏得率大大降低，由原来的35％下降到约20％。因此，我们采用提取后放置使冷却使果胶类沉淀，达到纯化的目的。

称取陈皮、枳壳各1000g，按照最佳提取工艺提取，测定其中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量和得膏率；将提取液冷却、静置24小时，滤过，去除果胶后测定其中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量和得膏率；将滤液回收乙醇，浓缩至相对密度约1.15(65℃)，加乙醇至含醇量达70％，静置24小时，滤过。滤渣用70％乙醇洗涤，洗涤液与前面滤液合并后，测定其中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量和得膏率。结果见表10。

表10醇沉后柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量及得膏率

结论：柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在热醇提取液中溶解度较大，提取率较高，但冷却后溶解度也降低，冷却液中含量下降，特别是橙皮苷影响最大，但浸膏得率明显下降，达到了纯化目的；而采用二次醇沉，加乙醇达70％醇沉后浸膏得率没有显著下降，仅下降0.89％，因此，宜采用提取液冷却、静置24小时，滤过的方法除去果胶等沉淀物。

本发明片剂的检测方法可以通过下述技术方法实现：

本发明片剂检测方法，该方法包括下列步骤：

1、用高效液相色谱法测定该片剂中的柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)、新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)、橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)的含量：

a、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，配比为20～30∶70～80的乙腈∶0.1％磷酸为流动相，检测波长为283±2nm；

b、对照品溶液的制备：精密称柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇或乙醇中的任何一种分别制成每1ml含10～30μg的柚皮苷、10～40μg的橙皮苷、20～50μg的新橙皮苷对照品混合溶液。

c、供试品溶液的制备：取片剂适量，研细，取20～100mg，精密称定，置100ml三角烧瓶中，精密加入甲醇或乙醇中的任何一种25～250ml，称定重量，超声处理(功率250±70w，频率33±2kHz)10～50分钟，放冷，再称定重量，以甲醇或乙醇中的任何一种补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

d、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

e、本品每片含枳壳以柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)计，不得少于6.0mg；以新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于5.0mg；含陈皮、枳壳以橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于2.5mg。

2、该片剂中药材陈皮、枳壳用薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)鉴别：

a、供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取粉末0.2g～1.0g，加甲醇10～40ml，超声处理10～30分钟，滤过，作为供试品溶液。

b、对照品溶液的制备：另取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，分别加甲醇或乙醇中的任何一种制成每毫升含0.2～0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

c、照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述供试品和对照品溶液各1～5μl分别点于同一聚酰胺薄膜上，以配比为7～10∶0.5～1.5的氯仿∶甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，1％三氯化铝乙醇溶液显色，挥干乙醇后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

较优选的技术方案包括下列测定步骤：

1.用高效液相色谱法测定该片剂中的柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)、新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)、橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)的含量：

a、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，配比为24∶76的乙腈∶0.1％磷酸为流动相，检测波长为283nm；

b、对照品溶液的制备：精密称柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含24μg的柚皮苷、17μg的橙皮苷、28μg的新橙皮苷对照品混合溶液。

c、供试品溶液的制备：取片剂适量，研细，取约50mg，精密称定，置100ml三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250±70w，频率33±2kHz)30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

d、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

e、本品每片含枳壳以柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)计，不得少于6.0mg；以新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于5.0mg；含陈皮、枳壳以橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于2.5mg。

2、该片剂中药材陈皮、枳壳用薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)鉴别：

a、对照品溶液的制备：取片剂适量，研细，取粉末0.4g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，作为供试品溶液。

b、对照品溶液的制备：另取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成每毫升含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。

c、照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述供试品和对照品溶液各2μl分别点于同一聚酰胺薄膜上，以氯仿-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，1％三氯化铝乙醇溶液显色，挥干乙醇后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

治疗消化不良中药组合物药效学试验研究资料

1.试验材料

1.1药品及试剂

本中药组合物提取液(表格中称：提取物)，批号：071028。江西省中医药研究院提供。

归脾丸，每克丸含生药量为2.2g，批号070611，河南省宛西制药有限公司。

配制方法：临用前将中药组合物提取液用生理盐水配制成浓度为0.4g_(生药)/ml、0.2g_(生药)/ml及0.1g_(生药)/ml的混悬液，冰箱保存，备用。

归脾丸碾细，用生理盐水配制成浓度为4.0g₍₎/ml的混悬液，冰箱保存，备用。

2.实验方法及结果

2.1对大鼠胃液分泌及胃蛋白活力的影响

参考文献^[1]，取SD大鼠50只随机分组，按表1所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7d，末次给药后动物禁食不禁水24h，第8日将动物用乙醚麻醉后行幽门结扎术，于十二指肠给药1次，缝合腹壁切口，覆盖伤口，4h后，拆线开腹结扎贲门取胃，倾出胃内容物，离心后记录胃液总量。吸取上清液2.0ml，加蒸馏水20.0ml，加酚红指示剂2滴，用20mmol/LNaOH中和滴定，记录NaOH溶液消耗量，计算总酸度和总酸排出量。另取离心后的上清液0.50ml，按1∶1体积加入匀浆介质稀释后取0.04ml，按操作表进行胃蛋白活力测定。结果见表1。

结果显示：高、中剂量中药组合物提取液及归脾丸对大鼠胃液分泌量、总酸及总酸排出量有明显的促进作用。

表1-1中药组合物提取液对大鼠胃液分泌的影响

表1-2中药组合物提取液对大鼠胃蛋白活力的影响

注：经T检验，给药组与对照组比较“^*”表示P＜0.05，“^**”表示P＜0.01。(下同)

2.2对小鼠胃排空的影响

参考文献^[2]，按表2所示剂量灌服中药组合物提取液及归脾丸，每日1次，连续7d，第7d动物禁食不禁水，给药2小时后按0.2ml/只灌服0.1％甲基橙溶液，15min后脱臼处死，剖腹摘取胃，置于小烧杯内，加蒸馏水10ml，剖开胃后将胃内容物充分洗于蒸馏水中，用5％碳酸氢钠调pH至6.0～6.5，3500r/min离心20min后于420nm处比色，以蒸馏水调零，测量溶液吸光度值(ABS)，并除以0.1％甲基橙吸光度值计算甲基橙残留率，各组进行比较，结果见表2。

结果显示：高、中剂量的中药组合物提取液和归脾丸均能加快胃蠕动速度，提高胃排空速度，降低甲基橙的残留率。

表2中药组合物提取液对小鼠胃排空的影响

2.3对小鼠肠蠕动的影响

参考文献^[3]，按表3所示剂量灌服中药组合物提取液和归脾丸，每日1次，连续7d，第7d以印度墨汁与药物混合灌胃给药，20min后处死动物，称量体重，取出小肠段，量取幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁在小肠内推近距离”；从幽门至回盲部的总长度作为“小肠总长度”，计算出墨汁推进率。结果见表3。

结果显示：归脾丸能促进小肠蠕动，加快小肠推进运动，而中药组合物提取液对小鼠小肠推进运动无明显作用，略有抑制趋势。

表3中药组合物提取液对小鼠肠蠕动的影响

2.4对肾上腺素所致的小鼠胃排空、小肠推进功能的影响

参考文献^[4]，取昆明小鼠60只，按表4所示组别随机分组。给药组灌服上述相应药物，给药体积均为0.20ml/10g，对照组灌服等体积蒸馏水，每日1次，连用3天。末次给药前禁食12小时，按表4所示剂量给药，对照组和肾上腺素组给等体积生理盐水，给药后1小时45分除对照组外，各组小鼠肌肉注射肾上腺素0.3mg/kg，15分钟后每只小鼠用0.04％酚红溶液(含1O％明胶)0.20mL灌胃，20分钟后处死动物，同时取出胃及小肠。将小肠平铺于白纸上，以酚红在小肠中的移行距离与小肠全长的百分比乘以100％作为小肠推进百分率来评价小肠推进速度；胃置于0.5NaOH溶液30mI中，沿胃大弯剪开，充分清洗胃内容物.取洗液5ml离心(3000r/min，10分钟)，吸上清液用紫外分光光度计于560nm波长处比色，测其吸光度，计算胃酚红残留率，以胃酚红残留率为指标评价胃排空速度。

结果表明：肾上腺素组动物胃中酚红残留率明显高于正常对照组，小肠墨汁推进率明显低于正常对照组，表明肾上腺素明显抑制胃及小肠平滑肌推进运动，而各剂量中药组合物提取液给药组与模型组比均无显著差异，归脾丸与模型组比能明显降低酚红残留率和提高小肠推进率。

表4对肾上腺素引起小鼠胃排空、小肠推进功能抑制的影响(X±S)

注：“^△△”表示模型对照组与空白对照组比较经T检验，P＜0.01，“^**”表示给药组与模型对照组比较，P＜0.01。(下同)

2.5对新斯的明所致小鼠胃排空、小肠推进亢进的影响

参考文献^[4]，取昆明小鼠60只.雌雄兼用，按表5所示组别随机分组。中药组合物提取液和归脾丸给药剂量和方法同实验2.4。对照组和新斯的明组给等体积生理盐水。末次给药前禁食12小时。给药后1小时45分除对照组外，各组小鼠肌肉注射新斯的明0.1mg/kg，15分钟后酚红溶液灌胃，2O分钟后处死动物。按上述方法分别测量胃酚红残留率和小肠推进率。

结果表明：新斯的明组动物胃中酚红残留率明显低于正常对照组，小肠墨汁推进率明显高于正常对照组，表明肾上腺素明显促进胃及小肠平滑肌推进运动，而各剂量中药组合物提取液给药组与模型组比均无显著差异，表明药物与新斯的明无协同作用。

表5对新斯的明所致小鼠胃排空、小肠推进亢进的影响(X±S)

2.6中药组合物提取液对大鼠离体肠道运动的影响

取大鼠处死，参考文献^[5]进行制备离体小肠，每段肠管约2cm，分别放入装有台式液的平滑肌标本管中，其中台氏液37℃，通入空气，连接张力换能器并接通生物信号采集与处理系统，记录一段正常收缩曲线，分别加入不同剂量药物，观察对肠管收缩幅度变化作用及对乙酰胆碱(Ach 5ug/ml-0.02ml)引起强直性收缩的拮抗作用，结果见表6-1，6-2。

表6-1结果显示：对大鼠体外肠管自主收缩运动，中药组合物提取液对其收缩幅度有明显抑制作用，其抑制强度与药物浓度有关，药物浓度高抑制作用强。表6-2结果显示：Ach能引起大鼠肠管强直性痉挛，加入中药组合物提取液后会引起肠管短暂收缩后再松弛，且松弛作用强度与中药组合物提取液浓度有关，浓度大松弛肠管作用强，表明中药组合物提取液能拮抗Ach引起的肠管强直性痉挛。见附图1-8。

表6-1中药组合物提取液对大鼠肠管自主运动的影响

表6-2中药组合物提取液对大鼠肠管自主运动的影响

3.讨论

中药组合物提取液具调胃消滞作用，临床上拟用于功能性消化不良，其症状主要表现为上腹痛或不适，腹部胀气，餐后饱胀、嗳气、恶心等，发病机制目前认为可能与胃酸分泌及胃肠动力障碍，胃肠动力异常，内脏敏感性增高等因素有关。

中药组合物提取液可促进小鼠胃排空，促进大鼠胃液分泌，使胃酸度总酸排出量及胃蛋白酶活力提高，促使消化液的分泌和酶活力的提高对消积导滞气是很有好处的。另一方面胃肠运动紊乱是脾胃气滞相当重要的一个方面。本验结果显示：中药组合物提取液对小鼠小肠推进运动呈一定的抑制趋势；对新斯的明引起的胃排空和小肠推进亢进无明显的拮抗作用，对肾上腺素所致的小鼠胃排空小肠推进抑制无明显作用；体外试验显示对离体大鼠肠道平滑肌自发活动也有一定的抑制作用，且能明显拮抗Ach引起的肠道收缩痉挛，且拮抗Ach作用随剂量加大而加强，呈明显的剂量关系。表明中药组合物提取液能提高消化酶活力从而消积导滞作用，调节胃肠张力，延长食物在肠道消化时间，从而发挥消积导滞作用。

综上所述，中药组合物提取液促消化液分泌及提高胃蛋白酶活力及调节张力可能是其作用于功能性消化不良的部分药理基础。

具体实施方式

实施例：取陈皮500g、枳壳500g，用6倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用6倍量70％乙醇回流提取2小时，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15(60℃)，加乙醇至70％，静置24小时，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度约1.33(60℃)，加淀粉等辅料适量，混匀，干燥，粉碎成细粉，加入微晶纤维素等，混匀，制粒，干燥。再加低取代羟丙纤维素和硬脂酸镁等辅料适量，混匀，压制成1000片，薄膜包衣。该药物的检测方法包括下列步骤：1用高效液相色谱法测定该片剂中的柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)、新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)、橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)的含量：

a、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，配比为24∶76的乙腈∶0.1％磷酸为流动相，检测波长为283nm；

b、对照品溶液的制备：精密称柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含24μg的柚皮苷、17μg的橙皮苷、28μg的新橙皮苷对照品混合溶液。

c、供试品溶液的制备：取片剂适量，研细，取约50mg，精密称定，置100ml三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250±70w，频率33±2kHz)30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

d、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

e、本品每片含枳壳以柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)计，不得少于6.0mg；以新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于5.0mg；含陈皮、枳壳以橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于2.5mg。

2、该片剂中药材陈皮、枳壳用薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)鉴别：

a、对照品溶液的制备：取片剂适量，研细，取粉末0.4g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，作为供试品溶液。

b、对照品溶液的制备：另取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成每毫升含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。

c、照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述供试品和对照品溶液各2μl分别点于同一聚酰胺薄膜上，以氯仿-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，1％三氯化铝乙醇溶液显色，挥干乙醇后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

参考文献：

1.杨龙飞、陈丹曼、邓慧敏等，调胃消滞丸对湿阻证模型大鼠胃液分泌及胃肠运动功能的影响，中药新药与临床药理，2007，18(5)：374-376

2.曾嵘、陈祥瑞、贺卫和等，枳实消痞丸对动物胃肠运动的影响，中药药理与临床，2008，24(1)：3-4

3.官福兰、王如俊、王建华，枳壳及辛弗林对小鼠胃排空、小肠推进功能的影响，现代中西医结合杂志，2002，11(11)：1001-1003

4.邹燕琴、王汝俊、赖天松等，枳实消痞丸治疗功能性消化不良的实验研究，中药新药与临床药理，2001，12(3)：221-223

5.徐叔云、卞如濂、陈修，药理实验方法学[M]，北京，人民卫生出版社，1991：1135

Claims (8)

1.一种治疗消化不良的中药组合物，它是由有效成分和药学上可接受的赋形剂组成，其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的：陈皮36～64％、枳壳36～64％。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的：陈皮43～57％、枳壳43～57％。

3.根据权利要求2所述的中药组合物，其中所述的有效成分是由下列重量配比的原料制成的：陈皮50％、枳壳50％。

4.根据权利要求1～3所述的中药组合物的制备方法，它是将陈皮、枳壳用6倍量60％乙醇回流提取2小时，第二、三次用6倍量70％乙醇回流提取2小时，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15(60℃)，加乙醇至70％，静置24小时，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度约1.33(60℃)的浸膏，再与药学上可接受的赋形剂制成各种剂型。

5.根据权利要求4所述的剂型，其特征在于：所述剂型的制剂是片剂。

6.权利要求5所述的片剂检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)、用高效液相色谱法测定该片剂中的柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)、新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)、橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)的含量：

a、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，配比为20～30∶70～80的乙腈∶0.1％磷酸为流动相，检测波长为283±2nm；

b、对照品溶液的制备：精密称柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇或乙醇中的任何一种分别制成每1ml含10～30μg的柚皮苷、10～40μg的橙皮苷、20～50μg的新橙皮苷对照品混合溶液。

c、供试品溶液的制备：取片剂适量，研细，取20～100mg，精密称定，置100ml三角烧瓶中，精密加入甲醇或乙醇中的任何一种25～250ml，称定重量，超声处理(功率250±70w，频率33±2kHz)10～50分钟，放冷，再称定重量，以甲醇或乙醇中的任何一种补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

d、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

e、本品每片含枳壳以柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)计，不得少于6.0mg；以新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于5.0mg；含陈皮、枳壳以橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于2.5mg。

(2)、该片剂中药材陈皮、枳壳用薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)鉴别：

a、供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取粉末0.2g～1.0g，加甲醇10～40ml，超声处理10～30分钟，滤过，作为供试品溶液。

b、对照品溶液的制备：另取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，分别加甲醇或乙醇中的任何一种制成每毫升含0.2～0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

c、照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述供试品和对照品溶液各1～5μl分别点于同一聚酰胺薄膜上，以配比为7～10∶0.5～1.5的氯仿∶甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，1％三氯化铝乙醇溶液显色，挥干乙醇后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

7.权利要求6所述的片剂检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)、用高效液相色谱法测定该片剂中的柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)、新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)、橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)的含量：

a、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，配比为24∶76的乙腈∶0.1％磷酸为流动相，检测波长为283nm；

b、对照品溶液的制备：精密称柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含24μg的柚皮苷、17μg的橙皮苷、28μg的新橙皮苷对照品混合溶液。

c、供试品溶液的制备：取片剂适量，研细，取约50mg，精密称定，置100ml三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250±70w，频率33±2kHz)30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

d、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

e、本品每片含枳壳以柚皮苷(C₂₇H₃₂O₁₄)计，不得少于6.0mg；以新橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于5.0mg；含陈皮、枳壳以橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于2.5mg。

(2)、该片剂中药材陈皮、枳壳用薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)鉴别：

a、对照品溶液的制备：取本品适量，研细，取粉末0.4g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，作为供试品溶液。

b、对照品溶液的制备：另取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成每毫升含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。

c、照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述供试品和对照品溶液各2μl分别点于同一聚酰胺薄膜上，以氯仿-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，1％三氯化铝乙醇溶液显色，挥干乙醇后置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

8.根据权利要求1～4之一的中药组合物用于制备治疗消化不良药物的用途。