CN102883716B - 改善伴有学习/记忆障碍和运动障碍等的中枢神经变性疾病的干燥植物组织和植物组织提取物以及含有它们的药品和食品 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于：开发具有中枢神经变性疾病、特别是阿尔茨海默病和帕金森病的前所未有的显著的改善效果的干燥植物组织或植物组织提取物。本发明提供具有前所未有的显著的抗阿尔茨海默病活性和/或抗帕金森病活性的干燥植物组织和植物组织提取物。本发明还提供含有上述干燥植物组织或植物组织提取物的用于改善中枢神经变性疾病、特别是增强记忆的获得、保持和记起能力的药品和食品。

Description

改善伴有学习/记忆障碍和运动障碍等的中枢神经变性疾病的干燥植物组织和植物组织提取物以及含有它们的药品和食品

技术领域

本发明涉及改善伴有学习/记忆障碍和运动障碍等的中枢神经变性疾病的干燥植物组织和植物组织提取物。本发明还涉及含有上述干燥植物组织或植物组织提取物的药品和食品。

背景技术

在现代的高龄化社会中，阿尔茨海默病和帕金森病等中枢神经变性疾病的患者增多，已成为社会问题。其中，阿尔茨海默病是一种伴有认知功能障碍、学习/记忆障碍等的进行性中枢神经变性疾病，认为其原因在于：由降低对学习/记忆重要的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体功能的β-淀粉状蛋白肽的聚合和蓄积引起的神经变性(参照非专利文献1)。

通常，记忆包括三个过程、即记忆的获得(encoding)、保持(retention)和记起(recall)的过程，认为这三个过程的机理不同。在作为阿尔茨海默病的核心症状的学习/记忆障碍中，可理解为特别是在记忆的保持和记起过程中产生明显的障碍。其中，作为具有改善记起能力的作用的天然黄酮类之一，已知有式(I)：

[化学式1]

所表示的川陈皮素(参照专利文献1或非专利文献1或2)，已知川陈皮素还对神经细胞具有伸长神经突起的作用(参照专利文献2)。川陈皮素包含在各种柑橘类植物的果皮等中，但通常只是极微量的。因此，作为来自柑橘类植物的果皮的生药之一的陈皮通常显示出健胃作用、去痰作用或镇咳作用等，认为川陈皮素并不参与这些作用。迄今为止，凌驾于川陈皮素特有的药效之上、即显示出超过川陈皮素的中枢神经变性疾病改善作用的柑橘类的干燥植物组织及其提取物还是未知的。

另外，还已知有含有来自柑橘类的全果的榨汁液或其提取物、且显示出学习/记忆障碍改善作用的功能性食品(参照专利文献3)，其中使用的柑橘类的全果中仅含有微量的川陈皮素，其药效并没有超过川陈皮素单体的增强记起能力的效果。

另一方面，作为中枢神经变性疾病之一的帕金森病以震颤、动作缓慢、肌肉僵硬、姿势反射障碍等四大运动症候为特征，是由于多巴胺动作性神经系统因为某种要因发生变性脱落而引起的运动领域的功能障碍。作为其治疗方法之一，目前在施行多巴胺补充疗法等。已知有多种提高多巴胺生物合成路径中酶的转录活性、即其mRNA的表达量的药物，但增加多巴胺自身的生成量的药物几乎还未知。另外，显示出多巴胺合成能力促进作用和多巴胺分泌促进作用的柑橘类的干燥植物组织及其提取物也还未知。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2005/082351号公报；

专利文献2：日本特开2002-60340号公报；

专利文献3：日本特开2007-61028号公报；

非专利文献

非专利文献1：日药理志 (Folia Pharmacol. Jpn.) 132, 155-159 (2008)；

非专利文献2：The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2007, 第321卷, No. 2, 第784-790页。

发明内容

发明所要解决的课题

在这种状况下，若开发出具有中枢神经变性疾病、特别是阿尔茨海默病和帕金森病的改善效果的干燥植物组织或植物组织提取物，则可以期待实现中枢神经变性疾病中有望的根治性治疗药(根本治療薬)的开发。其结果，可以朝向我国所面临的克服高龄化社会中的认知症等难治进行性神经疾病或解决医疗保险制度的问题大幅前进。而且，若开发出不仅增强学习/记忆障碍中的记忆的记起能力、还增强记忆的获得和保持能力的干燥植物组织或植物组织提取物，则在药品和食品中的应用更为有效。

解决课题的方法

本发明人等深入研究的结果，发现了具有显著的中枢神经变性疾病改善效果的柑橘类的干燥植物组织和植物组织提取物。特别是本发明人等发现了可以用作中枢神经变性疾病中的阿尔茨海默病和帕金森病的根治性治疗药的柑橘类的干燥植物组织和植物组织提取物。本发明人等进一步发现了在作为阿尔茨海默病的核心症状的记忆障碍中不仅增强记忆的记起能力、还增强记忆的获得和保持能力的柑橘类的干燥植物组织和植物组织提取物。

具体而言，本发明包括以下方案：

(1) 用于改善中枢神经变性疾病的柑橘类的果皮的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.4重量%以上的川陈皮素；

(2) 用于改善中枢神经变性疾病的柑橘类的叶的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3重量%以上的川陈皮素；

(3) (1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织，其中，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0以上；

(4) (1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病和/或帕金森病；

(5) (1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织，其中，中枢神经变性疾病的改善是通过提高cAMP应答序列(CRE)依赖性转录活性、增强记忆的获得、保持和记起能力、促进酪氨酸羟化酶(TH)转录活性、提高TH表达量、促进多巴胺合成能力或促进多巴胺分泌来实现的；

(6) 用于改善中枢神经变性疾病的柑橘类的植物组织提取物，其中，相对于100重量%的植物组织提取物，含有0.6重量%以上的川陈皮素；

(7) (6)所述的植物组织提取物，其中，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0以上；

(8) (6)所述的植物组织提取物，是由(1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织通过水提取、优选60～100℃的水提取而得到的；

(9) (6)所述的植物组织提取物，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病和/或帕金森病；

(10) (6)所述的植物组织提取物，其中，中枢神经变性疾病的改善是通过提高CRE依赖性转录活性、增强记忆的获得、保持和记起能力、促进TH转录活性、提高TH表达量、促进多巴胺合成能力或促进多巴胺分泌来实现的；

(11) (1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织，其中，柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)；

(12) (6)所述的植物组织提取物，其中，柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)；

(13) (1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织，其中，柑橘类为立花桔、优选日本立花桔；

(14) (6)所述的植物组织提取物，其中，柑橘类为立花桔、优选日本立花桔；

(15) (1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织，其中，柑橘类为大红桔；

(16) (6)所述的植物组织提取物，其中，柑橘类为大红桔；

(17) 阿尔茨海默病治疗用药品，其中，相对于100重量%的药品，以10～100重量%的(1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织或10～90重量%的(6)所述的植物组织提取物作为有效成分；

(18) 帕金森病治疗用药品，其中，相对于100重量%的药品，以10～100重量%的(1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织或10～90重量%的(6)所述的植物组织提取物作为有效成分；

(19) 中枢神经变性疾病的治疗用药品，该药品以由混合物通过水提取、优选60～100℃的水提取得到的提取物作为有效成分，所述混合物是将(1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织与医药上可接受的生药成分以1:5～1:10的重量比率混合而得到的；

(20) 用于改善中枢神经变性疾病的食品，其中，相对于100重量%的食品，含有10～100重量%的(1)或(2)中任一项所述的干燥植物组织或10～90重量%的(6)所述的植物组织提取物；

(21) (20)所述的食品，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病和/或帕金森病；

(22) (20)所述的食品，其中，中枢神经变性疾病的改善是通过增强记忆的获得、保持和记起能力的机理来实现的；

(23) (4)所述的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3～2.0重量%的川陈皮素，并且川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0～23.0；

(24) (4)所述的干燥植物组织，其是将柑橘类的植物组织在50～100℃下加热干燥1～3小时而得到的，且收率为20～50%；

(25) (9)所述的植物组织提取物，其中，相对于100重量%的植物组织提取物含有0.6～3.0重量%的川陈皮素，并且川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0～14.0；

(26) (19)所述的药品，该药品为细粒剂、茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂的形态。

发明效果

与现有的柑橘类的干燥植物组织相比，本发明的柑橘类的干燥植物组织和植物组织提取物显示出显著的中枢神经变性疾病改善效果。

本发明的干燥植物组织和植物组织提取物还具有活化PKA/ERK/CREB信号传递、改善阿尔茨海默病的症状之一即学习/记忆障碍的效果。本发明的干燥植物组织和植物组织提取物特别是在学习/记忆障碍改善效果中显示出增强记忆的获得、保持和记起能力的效果。本发明的干燥植物组织和植物组织提取物与其中所含的川陈皮素含量等量的川陈皮素单体相比还具有强效的磷酸化促进作用和PKA/ERK信号传递促进效果。除此之外，本发明的干燥植物组织和植物组织提取物还通过提高CRE转录活性、TH转录活性和TH表达量的作用、或者多巴胺合成能力促进作用或多巴胺分泌促进作用而显示出帕金森病的改善效果。

而且，本发明的干燥植物组织和植物组织提取物不仅显示出超过由其川陈皮素含有浓度预测的效果的中枢神经变性疾病改善效果、特别是提高CRE依赖性转录活性的效果、增强记忆的获得、保持和记起能力的效果、促进TH转录活性的效果以及提高TH表达量的作用，还显示出促进多巴胺生物合成的效果或促进多巴胺分泌的效果。认为上述效果来源于该干燥植物组织和植物组织提取物中所含的川陈皮素与其他成分的协同效果。

使用川陈皮素单体时，在上述增强记忆的获得、保持和记起能力的效果中没有确认到增强记忆的获得和保持能力的效果，因此认为本发明的干燥植物组织和植物组织提取物是通过与川陈皮素单体完全不同的新的机理来发挥上述效果。

附图说明

图1A显示本发明的陈皮中所含的黄酮类的三维色谱图；

图1B显示现有陈皮中所含的黄酮类的三维色谱图。

图2A显示海马神经细胞中陈皮提取物的CREB磷酸化促进活性；

图2B显示海马神经细胞中陈皮提取物的PKA底物磷酸化促进活性；

图2C显示海马神经细胞中陈皮提取物的ERK1/2磷酸化促进活性；

图2D显示海马神经细胞中陈皮提取物的PKA信号传递促进效果；

图2E显示海马神经细胞中陈皮提取物的ERK信号传递促进效果；

图2F显示海马神经细胞中来自本发明的陈皮1和现有陈皮7的提取物以及川陈皮素的CRE依赖性转录活性；

图2G显示海马神经细胞中来自本发明的陈皮2～4和现有陈皮8～10的提取物以及川陈皮素的CRE依赖性转录活性。

图3A显示陈皮提取物的学习/记忆障碍改善效果、即增强记忆的获得、保持和记起能力的效果；

图3B显示川陈皮素对MK801诱发性学习/记忆障碍的作用。

图4A显示PC12D细胞中陈皮提取物的TH转录活性促进效果；

图4B显示PC12D细胞中陈皮提取物的提高TH表达量的效果；

图4C显示PC12D细胞中陈皮提取物的提高多巴胺含量的效果。

图5A显示海马神经细胞中橘皮提取物的CRE转录活性；

图5B显示橘皮提取物的改善学习障碍的效果。对于学习促进效果的所有对，进行包含post Bonferroni试验在内的双因素方差分析(two-way ANOVA)。附图中的数值表示平均值±标准偏差；整个试验中n = 5。与对照(■)相比，** p<0.01、*** p<0.001；与MK-801(▲)相比，###p<0.01、★p<0.05；

图5C显示橘皮提取物的改善记忆障碍的效果。关于记忆改善效果的所有对，包括post Tukey试验在内的单因素方差分析。附图中的数值表示平均值±标准偏差；在整个试验中n = 5。与对照相比，*** p<0.001；与MK-801相比，#p<0.05、###p<0.01；

图5D显示PC12D细胞中橘皮提取物的CRE转录活性；

图5E显示PC12D细胞中橘皮提取物的TH转录活性；

图5F显示PC12D细胞中橘皮提取物的提高GCH I表达量的效果。对于所有对，进行包括post Tukey试验在内的单因素方差分析(one-way ANOVA)。附图中的数值表示平均值±标准偏差；在整个试验中n = 3。与对照相比，* p<0.05、** p<0.01、*** p<0.001。与陈皮提取物相比，# p<0.05、## p<0.01、### p<0.001。

图6A显示海马神经细胞中来自立花桔叶的提取物的CRE转录活性；

图6B显示PC12D细胞中来自立花桔叶的提取物的CRE转录活性。

图7A显示海马神经细胞中来自大红桔果皮的提取物的CRE转录活性；

图7B显示PC12D细胞中来自大红桔果皮的提取物的CRE转录活性；

图7C显示PC12D细胞中来自大红桔果皮的提取物的TH转录活性。

具体实施方式

本发明中使用的柑橘类是指选自日本立花桔(Citrus tachibana)、高丽立花桔(C. nipponokoreana)、花柚、四季橘、枳实、酸橙、地中海柑、丹西红桔、大红桔、小红桔、无核纪州蜜柑、福克雷蜜柑、卡蒲橘、太田椪柑、乳桔、酸橘、印度酸橘、柑子、奇利蜜柑、宜昌柠檬、温州蜜柑(Citrus unshiu Markovich)、芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、扁平橘、香橙、文旦、日向夏、椪柑、夏蜜柑、脐橙、八朔、伊予柑和卡抱斯的植物中川陈皮素含量高的物质，优选为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、日本立花桔(Citrus tachibana)、高丽立花桔(C. nipponokoreana)或大红桔。在本说明书中，“立花桔”一词是指日本立花桔或高丽立花桔。

本发明的干燥植物组织是指，将上述柑橘类的果皮在收率(干燥后质量/干燥前质量的比例)达到20～50%的条件下、或者将上述柑橘类的叶在收率(干燥后质量/干燥前质量的比例)达到20～50%的条件下干燥而得到的物质。作为加热干燥条件，可以列举在温度50～100℃下加热干燥1～3小时，优选在温度60℃下加热干燥2小时。本发明的优选的干燥植物组织为陈皮、橘皮和立花桔叶。陈皮是指柑橘类植物(例如芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、大红桔等)的成熟果皮，橘皮特别是指日本立花桔或高丽立花桔等立花桔的成熟果皮，立花桔叶是指日本立花桔或高丽立花桔等立花桔的叶。

本发明的植物组织提取物是指来自上述干燥植物组织的提取物，优选为通过水提取得到的提取物。本说明书中优选的水提取是指在60～100℃下利用水进行的提取。

作为本发明的干燥植物组织和植物组织提取物中所含的成分，可以列举黄酮类、例如川陈皮素、芸香柚皮苷、橘皮素和橘皮苷等。关于本发明的干燥植物组织和植物组织提取物的活性，由于其中所含的成分的含量和含有比率产生的协同效果，因此与川陈皮素单体的药效相比显著。

本发明的干燥植物组织，相对于总重量含有0.3或0.4重量%以上、优选0.3～2.0重量%、更优选0.4～2.0重量%的川陈皮素；0.7重量%以下、优选0.4重量%以下的芸香柚皮苷；0.1～0.8重量%的橘皮素和0.4～12重量%的橘皮苷。本发明的干燥植物组织中，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0以上、优选1.5～23.0、更优选2.0～15.0、进一步优选为5.0～15.0。

本发明的干燥植物组织，当其中所含的各成分的比例为上述范围内时，即使是来自任一种植物的组织，也显示出本发明的药效、即中枢神经变性疾病改善效果(抗阿尔茨海默病活性、抗帕金森病活性等)、学习/记忆障碍改善效果、磷酸化促进作用和PKA/ERK信号传递促进效果、提高CRE转录活性、TH转录活性和TH表达量的作用、多巴胺合成能力促进作用或多巴胺分泌促进作用。

本发明的植物组织提取物，相对于总重量含有0.6～2.0重量%以上、优选0.6～3.0重量%的川陈皮素；0.7重量%以下、优选0.4重量%以下的芸香柚皮苷；0.1～1.0重量%的橘皮素和1.8～6.0重量%的橘皮苷。本发明的植物组织提取物中，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0以上、优选2.0～14.0、更优选为2.5～10.0。

本发明的植物组织提取物，当其中所含的各成分的比例为上述范围内时，即使是来自任一种植物的提取物，也显示出本发明的药效、即中枢神经变性疾病改善效果(抗阿尔茨海默病活性、抗帕金森病活性等)、学习/记忆障碍改善效果、磷酸化促进作用和PKA/ERK信号传递促进效果、提高CRE转录活性、TH转录活性和TH表达量的作用、多巴胺合成能力促进作用或多巴胺分泌促进作用。

在本说明书中，作为“中枢神经变性疾病”一词，可以列举阿尔茨海默病、特别是学习/记忆障碍和帕金森病。

作为本发明的干燥植物组织和植物组织提取物的抗阿尔茨海默病活性和/或抗帕金森病活性，可以列举与中枢神经变性疾病的发病机理有关的改善学习/记忆障碍或促进多巴胺合成。具体而言，是指促进突触可塑性的活性和促进CRE(cAMP应答序列)依赖性转录活性或酪氨酸羟化酶(TH)转录活性的活性、提高TH表达量的活性、提高多巴胺含量的活性、促进多巴胺分泌的活性等。

更详细而言，本发明的干燥植物组织和植物组织提取物根据植物组织的种类可以显示出不同的活性。例如，关于与多巴胺有关的活性，陈皮或陈皮提取物能够显示出提高多巴胺含量的活性，而橘皮或橘皮提取物能够显示出促进多巴胺分泌的活性。

在本说明书中，学习/记忆障碍是指降低记忆过程中的以下三种能力的障碍：记忆的获得(encoding)、保持(retention)和记起(recall)能力。在本说明书中，“获得”一词是指将信息输入记忆中，“保持”是指保存所输入的信息，“记起”是指想起所保存的信息。

通过按照本领域中通常使用的方法处理本发明的干燥植物组织或植物组织提取物，可以制备中枢神经变性疾病用治疗药。在本说明书中，作为中枢神经变性疾病用治疗药，可以列举抗阿尔茨海默病药和/或抗帕金森病药、即具有抗阿尔茨海默病活性和/或抗帕金森病活性的药品。

在本说明书中，“药品”一词是指用于人和动物的疾病的诊断、治疗或预防的物质，包括含生药的药品、例如生药制剂和中药。优选的药品为口服给药形态，更优选为细粒剂、茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂。

在本说明书中，“生药”一词是指，不必从天然存在的具有药效的产物中纯化有效成分、而用于改善对象的体质的物质的总称，包含一种以上的生药成分。在本说明书中，“中药”一词是指根据中医学理论进行配方的药品。

在本说明书中，“食品”一词包含所谓的健康食品和根据是否具有当局的许可等或食品的目的、功能等的不同进行区分的特定保健用食品和营养功能食品等保健功能食品。本说明书中优选的食品为细粒、凝胶材料(ゼリーの素)、皮(ピール)、果子酱或茶，更优选为细粒或茶。

本说明书中的药品和食品中各成分的混和量可以根据对象的使用目的、性别、症状等适当调整，例如10～100重量%的本发明的干燥植物组织或10～90重量%的植物组织提取物、以及0～90重量%的其他载体或添加剂。本发明的干燥植物组织或植物组织提取物的成人每天的摄取量分别优选为3～50g或1～20g，更优选为5～30g或2～10g。

作为本说明书中的其他载体和添加物，可以列举本领域中通常使用的物质，例如有药品或食品卫生上可接受的生药成分、抗坏血酸、阿斯巴甜、苹果香料、橙子香料、卡拉胶、焦糖、巴西棕榈蜡、羧甲纤维素、羧甲纤维素钙、还原麦芽糖液糖、还原麦芽糖糖稀、含水二氧化硅、木糖醇、枸橼酸、枸橼酸三钠、白砂糖、轻质硅酸酐、凝胶化剂(FG-2266、新田ゼラチン株式会社)、合成硅酸铝/羟丙基淀粉/结晶纤维素、白蜡、氧化钛、食盐、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸镁、纤维素、滑石粉、糊精、玉米淀粉、乳糖、蜂蜜、羟丙基甲基纤维素、微粒二氧化硅、普鲁兰、果胶、麦芽糖、硅铝酸镁、甲基纤维素、卵磷脂和刺槐豆胶。

作为本说明书中的药品或食品卫生上可接受的生药成分，可以列举本领域中通常使用的成分，例如有威灵仙、乌药、延胡索、黄芪、黄芩、黄柏、远志、藿香、葛根、干姜、甘草、桔梗、菊花、枳实、杏仁、桂皮、红花、香附子、厚朴、牛膝、吴茱萸、五味子、柴胡、山栀子、地黄、芍药、生姜、升麻、神麹、石膏、川芎、前胡、苍术、苏木、紫苏叶、大黄、大枣、大腹皮、泽泻、竹茹、知母、钩藤、天麻、天门冬、当归、桃仁、人参、麦芽、麦冬、半夏、白芷、白术、槟榔子、茯苓、防己、芒硝、防风、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、龙胆和羌活。

实施例

在以下的实施例中，陈皮1～6、橘皮1～6、橘叶1～3和大红桔1(果皮)是本发明的干燥植物组织，陈皮7～12是现有物质。另外，下述实施例中使用的样品和从含有成分的角度考虑为相同程度的植物组织可以从小太郎汉方制药株式会社获取。

[实施例1] 干燥植物组织的制备

在本实施例中，将从各种柑橘类中采集的果皮和叶阴干、晒干或加热干燥，由此制备陈皮、橘皮、立花桔叶和大红桔的果皮的干燥物。进行加热干燥直至达到以下收率(干燥后质量/干燥前质量的比例)：陈皮和橘皮的收率为20～50%、立花桔叶的收率为20～50%、大红桔的果皮的收率为20～50%，具体而言，在温度60℃下加热干燥2小时。

[实施例2] 植物组织提取物的制备

将实施例1中得到的陈皮、橘皮、立花桔叶或大红桔的果皮细切，向约10g的细切物中加入400mL纯水后加热(对于橘皮6，是向约20g的细切物中加入1000mL纯水后加热)。混合物沸腾后，在100℃下用1小时进行提取。然后，通过两块纱布进行过滤，将滤液冷冻干燥，得到植物组织提取物。植物组织提取物的制备结果见以下的表1。

[表1]

。

[实施例3] 含有成分的分析

如下测定实施例1和2中得到的干燥植物组织和植物组织提取物的含有成分。以下给出陈皮和陈皮提取物的分析方法。

(川陈皮素和橘皮素的定量)

如下制备用于川陈皮素和橘皮素的定量的标准溶液。使用干燥器(硅胶)将川陈皮素(和光纯药工业株式会社)干燥24小时以上。将约5mg的干燥川陈皮素溶解于甲醇/水混合液(7:3)中使达到100mL，作为川陈皮素标准溶液。另外，使用干燥器(硅胶)将橘皮素(和光纯药工业株式会社)干燥24小时以上。将约3mg的干燥橘皮素溶解于甲醇/水混合液(7:3)中使达到100mL，作为橘皮素标准溶液。

作为陈皮的试样溶液，将约0.3g的陈皮粉末装入50mL的共栓离心沉淀管中，向其中加入50mL甲醇。向混合物照射超声波(UT-305HS、シャープ株式会社)以进行提取，之后进行离心分离(KUBOTA KN-70、株式会社久保田制作所)。之后，过滤，作为陈皮的试样溶液。

作为陈皮提取物的试样溶液，将约0.3g的陈皮提取物装入50mL的共栓离心沉淀管中，向其中加入50mL甲醇/水混合液(7:3)。向混合物照射超声波(UT-305HS、シャープ株式会社)以进行提取，之后进行离心分离(KUBOTA KN-70、株式会社久保田制作所)。之后，过滤，作为陈皮提取物的试样溶液。

在以下的分析条件下，对如上制备的标准溶液和试样溶液进行定量。

检测器：紫外吸光光度计(测定波长：338nm)；

柱：Mightysil RP-18 4.6mm×15cm(关东化学株式会社)；

流动相：水/乙腈混合液(3:2)；

流速：1.0mL/分钟(川陈皮素的保留时间为约10分钟)；

柱温：40℃；

注入量：10μL。

(橘皮苷和芸香柚皮苷的定量)

如下制备用于橘皮苷和芸香柚皮苷的定量的标准溶液。使用干燥器(硅胶)将橘皮苷(和光纯药工业株式会社)干燥24小时以上。将约10mg的干燥橘皮苷溶解于50%的甲醇中使达到50mL，作为橘皮苷标准溶液。另外，使用干燥器(硅胶)将芸香柚皮苷(和光纯药工业株式会社)干燥24小时以上。将约10mg的干燥芸香柚皮苷溶解于50%的甲醇中使达到500mL，作为芸香柚皮苷标准溶液。

作为陈皮的试样溶液，向约0.1g的陈皮粉末中加入30mL甲醇。向混合物照射超声波20分钟(UT-305HS、シャープ株式会社)以进行提取，之后进行离心分离(KUBOTA KN-70、株式会社久保田制作所)，分离收集上清。向残留物中加入20mL甲醇，再照射超声波20分钟以进行提取，之后进行离心分离。将其与分离收集的上清合并，作为陈皮的试样溶液。

作为陈皮提取物的试样溶液，将约0.1g的陈皮提取物装入50mL的共栓离心沉淀管中，向其中加入50mL甲醇/水混合液(1:1)。向混合物照射超声波(UT-305HS、シャープ株式会社)以进行提取，之后进行离心分离(KUBOTA KN-70、株式会社久保田制作所)。之后，进行过滤，作为陈皮提取物的试样溶液。

在以下的分析条件下对如上制备的标准溶液和试样溶液进行定量。

检测器：紫外吸光光度计(测定波长：285nm)；

柱：L-column2 ODS 4.6mm×25cm(化学物质评价研究机构)；

流动相：水/乙腈/乙酸混合液(40:10:1)；

流速：0.8mL/分钟(橘皮苷的保留时间为约15分钟)；

柱温：30℃；

注入量：10μL。

实施例1和2中得到的陈皮、橘皮、立花桔叶和大红桔的果皮的分析结果见以下的表2，上述植物组织提取物的分析结果见表3。另外，本发明的陈皮和现有陈皮中所含的黄酮类的三维色谱图分别见图1A和1B。

[表2]

*：各成分的含量有时会根据使用的柑橘类植物体的采集场所或采集时期等发生变化。例如，在橘皮的青色果皮中川陈皮素含量为约1.60重量%，但若变成黄色果皮则川陈皮素含量为约1.1重量%。

[表3]

*：各成分的含量有时会根据使用的柑橘类植物体的采集场所或采集时期等发生变化。

[试验例]

针对上述实施例中得到的陈皮提取物，进行以下的体外和体内试验。

[一般的试验步骤1]

下述试验例1采用的一般的试验步骤如下。

(大鼠胎仔初代海马神经细胞的培养)

对于妊娠Sprague-Dawley(SD)大鼠，以12小时周期的明暗循环喂食、喂水进行饲养。将妊娠第18天的大鼠(E18)在乙醚深度麻醉下切开腹部正中，在无菌下取出子宫。在实体显微镜下、在冰冷的磷酸缓冲生理盐水(PBS)中取出胎仔的海马，使用木瓜蛋白酶(SUMILON)使组织分散，再以1000rpm的转速离心分离4分钟，之后除去上清。然后，将细胞颗粒(pellet)分散在分散液(SUMILON)中，再通过移液使其充分分散，向所得的细胞中加入除去液(SUMILON)，以900rpm的转速离心分离5分钟，之后除去上清。

接下来，使用Neurobasal培养基(Neurobasal Medium 500mL/不含酚红、10ml 50×B27的补充物、0.5mM的L-谷氨酰胺、0.005%的青霉素-链霉素)使颗粒悬浮，并接种在用聚-L-赖氨酸包被的皿或板上。培养1天后交换培养基，之后每3～4天交换半量的培养基，在含有10μM AraC的培养基中、于37℃下在5% CO₂培养箱内培养14天。

需要说明的是，药物处置实验用试验培养基使用含有10μM AraC的Neurobasal培养基。

(SDS-PAGE和蛋白质印迹分析1)

将大鼠胎仔初代海马神经细胞以1×10⁶个细胞/皿接种在35mm的皿中，使用5% CO₂培养箱在生长培养基中培养14天，之后用药物处置10分钟。

对各细胞进行药物处置，之后用冰冷的PBS清洗。然后，用细胞增溶液(1mM的EDTA、1%的SDS、10mM的NaF、10nM的花萼海绵诱癌素、320nM的黑海绵酸、1mM的原钒酸钠、1mM的p-APMSF、10μg/mL的胃酶抑素A、10μg/mL的抗蛋白酶、10μg/mL的亮肽素、10μg/mL的胰凝乳蛋白酶抑制剂、10μg/mL的磷酸阿米酮、10mM的HEPES、pH7.5)回收。之后，迅速地在95℃下煮沸5分钟，使蛋白变性，之后将DNA进行超声波破碎，制备SDS-PAGE用样品。

使用12.5%的聚丙烯酰胺凝胶作为SDS-PAGE的分离凝胶，在35V、10mA下泳动，之后将蛋白从凝胶转移到PVDF膜上，使用含有5%脱脂乳的TBST(10mM的Tris-HCl、100mM的NaCl、0.05%的Tween 20、pH7.4；以下称作封闭缓冲液)在室温下封闭1或2小时。然后，用TBST清洗样品，与用封闭缓冲液稀释至1000倍的一次抗体在4℃下培育一夜。再用TBST清洗样品，与用封闭缓冲液稀释至2000倍的HRP标记IgG抗体在室温下培育2小时，用TBST清洗。在抗体阳性谱带的检测中采用ECL法。重探测如下进行：将PVDF膜放入预先加热至50℃的剥离缓冲液(62.5mM的Tris-HCl、2%的SDS、100mM的β-巯基乙醇、pH7.4)中，在50℃下培育30分钟，剥离抗体，用TBST清洗。之后，通过重探测来检测内部标准蛋白。

(统计学分析1)

通过单因素方差分析(Student-Newman-Keuls)评价实验结果。在两侧5%下检验显著水平，以p＜0.05为显著。

[试验例1] 陈皮提取物的学习·记忆障碍改善作用(体外试验)

在本试验例中，研究本发明的陈皮提取物对学习/记忆障碍的作用。在体外试验中，研究陈皮提取物在海马神经元中的核内蛋白CREB的磷酸化促进作用，研究初代培养海马神经细胞中陈皮提取物对NMDA受体阻断药(MK801)引起的PKA/ERK信号传递抑制的影响。

需要说明的是，本说明书中使用的MK801是作为谷氨酸受体的亚型之一的NMDA受体的非选择性拮抗剂，还称作地佐环平(dizocilpine)。

本试验例中使用的陈皮提取物如下制备。即，在体外试验中，秤量7.2g来自陈皮1的陈皮提取物，将其放入50ml的离心管中，再向其中加入二甲基亚砜(DMSO)使达到30mL。之后，进行30分钟的超声波处理，以3000rpm的转速进行10分钟离心分离，回收上清，将其用作陈皮提取物。

[试验例1-1] 初代培养海马神经细胞中陈皮提取物的CREB磷酸化促进效果

关于各种浓度的陈皮提取物对CREB磷酸化的效果，利用蛋白质印迹法进行研究。培养以1×10⁶个细胞/35-mm塑料皿的密度增殖的E18大鼠海马神经细胞14天。用陈皮提取物(30、60、120、240和480μg/ml)处理细胞10分钟。使用抗磷酸化CREB抗体进行蛋白质印迹法。然后，剥下印迹，对抗14-3-3-β抗体再次进行试验，确认使等量的蛋白在各泳道中电泳。

如图2A所示，陈皮提取物浓度依赖性地促进CREB磷酸化。

[试验例1-2] 初代培养海马神经细胞中陈皮提取物的PKA底物磷酸化促进效果

关于各种浓度的陈皮提取物对PKA底物磷酸化的效果，利用蛋白质印迹法进行研究。培养以1×10⁶个细胞/35-mm塑料皿的密度接种的E18大鼠海马神经细胞14天。用不同浓度的陈皮提取物处理细胞10分钟。使用抗磷酸化PKA底物抗体进行蛋白质印迹法。然后，剥下印迹，对抗14-3-3-β抗体再次进行试验，确认使等量的蛋白在各泳道中电泳。

如图2B所示，陈皮提取物浓度依赖性地促进PKA底物磷酸化。

[试验例1-3] 初代培养海马神经细胞中陈皮提取物的细胞外信号调节激酶(ERK)1/2磷酸化促进效果

关于各种浓度的陈皮提取物或川陈皮素对ERK1/2磷酸化的效果，利用蛋白质印迹法进行研究(60μg/ml的陈皮提取物中含有1μM的川陈皮素)。培养以1×10⁶个细胞/35-mm塑料皿的密度增殖的E18大鼠海马神经细胞14天。以陈皮提取物(30、60、120、240和480μg/ml)或川陈皮素(4、8和30μM)处理细胞10分钟。使用抗磷酸化ERK1/2抗体进行蛋白质印迹法。然后，剥下印迹，对抗ERK1/2抗体再次进行试验，确认使等量的蛋白在各泳道中电泳。

如图2C所示，陈皮提取物浓度依赖性地促进ERK1/2磷酸化。另外，与川陈皮素相比，陈皮提取物显示出强的作用。即，根据印迹的大小，暗示含有4μM川陈皮素的本发明的240μg/ml陈皮提取物的磷酸化促进效果较4μM的川陈皮素的效果强。

[试验例1-4] 初代培养海马神经细胞中陈皮提取物的PKA/ERK信号传递促进效果

研究在初代培养大鼠海马神经细胞中陈皮提取物对MK801引起的PKA/ERK信号传递抑制带来的影响。使用陈皮提取物或川陈皮素对初代培养大鼠海马神经细胞进行1小时的前处置，之后用MK801处置30分钟，再用N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)处置15分钟。使用抗磷酸化PKA底物抗体进行蛋白质印迹法。然后，剥下印迹，对抗14-3-3-β抗体再次进行试验，确认使等量的蛋白在各泳道中电泳(参照图2D)。另外，使用抗磷酸化ERK1/2抗体进行蛋白质印迹法。然后，剥下印迹，对抗ERK1/2抗体再次进行试验，确认使等量的蛋白在各泳道中电泳(参照图2E)。

其结果，MK801抑制由NMDA介导的PKA/ERK信号传递。但是，陈皮提取物浓度依赖性地对MK801所产生的信号传递抑制显示出拮抗作用，陈皮提取物(480μg/ml的陈皮提取物中含有8μM的川陈皮素)的作用较8μM的川陈皮素的作用强。

(考察1)

由上述试验例的结果可知：在已知与突触形成和长期记忆的形成密切相关的核内蛋白即CREB、以及位于其上游的PKA底物和ERK1/2的磷酸化中，本发明的陈皮提取物具有显著的磷酸化促进作用。另外，本发明的陈皮提取物在ERK1/2中显示出较川陈皮素强的磷酸化促进作用。

并且，本发明的陈皮提取物对MK801所产生的PKA/ERK信号传递抑制明显显示出拮抗作用，其作用较川陈皮素强。由此显示：本发明的陈皮提取物与其中所含的川陈皮素和川陈皮素以外的成分具有协同作用。

[试验例2] 海马神经细胞中陈皮提取物的CRE依赖性转录活性(体外试验)

在本试验例中，比较本发明的陈皮提取物的CRE依赖性转录活性作用与现有的陈皮提取物和川陈皮素的转录活性作用。

如上述一般的试验步骤1所述，将大鼠海马神经细胞进行初代培养，之后进行报告基因测试。将海马神经细胞以8×10⁴个细胞/孔接种在48孔板上，用Neurobasal培养基培养10～14天。利用脂质转染法转染报告基因质粒(0.1μg/孔)、海肾pRG-TK质粒(0.01μg/孔)，之后培养16小时。用未添加AraC的Neurobasal培养基(含有B-27 补充物、L-谷氨酰胺、青霉素-链霉素)稀释，之后用300μg/ml浓度的陈皮提取物处置8小时。需要说明的是，以150mg/ml的DMSO溶液作为储备溶液，分别注入陈皮提取物中，在-20℃下保存。转录活性的测定使用Promega公司制的双色荧光素酶(注册商标)报道测定系统来进行。用被动裂解缓冲液(Promega)增溶海马神经细胞，之后混和荧光素酶测定试剂II(Promega)和Stop ＆ Glo(注册商标)Reagent(Promega)，使用照度计测定荧光值。

为了进行统计学分析，通过报告基因测试、RT-PCR得到的结果利用单因素方差分析(Tukey)进行评价。以两侧5%检验显著水平，以p＜0.05为显著。

(考察2)

如图2F和2G所示，本试验例中使用的陈皮提取物中川陈皮素浓度为2.5μM，尽管这是30μM川陈皮素的十二分之一的浓度，但其CRE依赖性转录活性超过30μM的川陈皮素的转录活性。即，判明在多成分系统的本发明的陈皮提取物中，由于川陈皮素以外的成分的存在，川陈皮素的CRE依赖性转录促进活性较由川陈皮素单体预想的活性显著且协同性地增大。而且，在本发明的陈皮提取物中确认到较现有的陈皮提取物强的CRE依赖性转录活性，由此显示出学习/记忆障碍改善作用，还显示出更有效地改善阿尔茨海默病的认知功能。

[试验例3] 陈皮提取物的学习/记忆障碍改善作用(体内试验)

接下来，在体内试验中，使用MK801诱发性记忆障碍模型小鼠，研究本发明的陈皮提取物在行动药理学方面对学习/记忆障碍的作用。

本试验例中使用的陈皮提取物如下制备。即，秤量5.54g来自陈皮1的陈皮提取物，将其放入50ml的离心管中，向其中加入生理盐水使达到30mL。之后，进行30分钟的超声波处理。

根据川陈皮素含量来调整陈皮提取物对小鼠的给药量。这里，川陈皮素含量预先通过使用川陈皮素标准物质的HPLC法的绝对标准曲线法进行测定。

研究陈皮提取物的慢性给药对MK801诱发性学习/记忆障碍的作用。将小鼠分成4组，对每1组分别以1.48g/kg或3.69g/kg(以川陈皮素含量计：分别为10mg/kg或25mg/kg)给予陈皮提取物，对两组连续7天经口给予生理盐水。在第7天给予上述物质的90分钟后皮下给予MK801(0.08mg/kg)或生理盐水。在其30分钟后进行带有恐怖条件的学习试验。

在带有恐怖的学习试验中，将小鼠放入透明盒内，使其自由探索2分钟，之后给予0.7mA、2秒的电刺激。重复刺激3次，进行学习试行，评价记忆的获得和保持能力。24小时后，将小鼠再次放入透明盒内，以小鼠的畏缩行为、即停止呼吸以外的所有行为的状态为指标进行确认试行，作为学习/记忆行为，通过5分钟的测定来评价保持和记起能力。结果见图3A。

[比较试验1] 研究川陈皮素的学习/记忆障碍改善作用

在上述试验例1-1中，将经口给予陈皮提取物改成腹腔内给予川陈皮素(10、50mg/kg)，进行比较试验。结果见图3B。

如图3A和3B所示，通过MK801的处置，畏缩行为明显减少，但通过给予陈皮提取物，在学习试行和确认试行时均确认到有关该减少的用量依赖性的改善效果。特别是在学习试行中，给予了本发明的陈皮提取物的小鼠通过接受MK801的处置，其学习/记忆功能被抑制而容易忘记，但第3次的带有条件的记忆时间相对于对照小鼠为约1.5倍、相对于MK801处置的未给予陈皮提取物的小鼠为约4.4倍(图3A)。给予川陈皮素时并没有确认到这样的结果(比较试验1、图3B)。即，判明本发明的陈皮提取物具有只给予川陈皮素时没有确认到的增强记忆的获得和保持能力的效果。

而且，在确认试行中，在本发明的陈皮提取物的试验中，尽管是经口给药，但与腹腔内给予川陈皮素的结果相比并没有确认到显著差异。

(考察3)

由上述试验例的结果可知：即使在体内，通过本发明的陈皮提取物的慢性给药，也明显改善学习/记忆障碍，而且还增强给予川陈皮素时没有确认到的记忆的获得和保持能力。

上述结果显示：本发明的陈皮提取物利用突触可塑性促进作用和PKA/ERK保护作用，改善学习/记忆障碍，而且还增强记忆的获得能力。即，以上显示：本发明的陈皮提取物较川陈皮素更改善阿尔茨海默病的核心症状即学习/记忆障碍，特别是增强和/或改善在川陈皮素中没有确认到的记忆的获得和保持能力。

[一般的试验步骤2]

下述试验例4中使用的一般的试验步骤如下。

(PC12D细胞的培养)

将9.5g Dulbecco’s Modified Eagle培养基(DMEM)溶解于800mL MilliQ水中，向其中加入3.5g葡萄糖，用MilliQ水定容至1L。取830mL经高压釜灭菌的溶液，加入17mL 10%的碳酸氢钠水溶液和16.5mL 3%的L-谷氨酰胺水溶液。然后，加入马血清(HS)使达到10%、加入胎牛血清(FCS)使达到5%，以制得的溶液作为成长培养基，在37℃下、在5% CO₂培养箱内培养。

试验培养基使用含有2% HS、1% FCS的hDMEM。

(质粒的导入和报告基因测试)

将PC12D细胞以8×10⁴个细胞/孔接种在48孔板上，用成长培养基培养24小时，之后将pRTH质粒以0.1μg/孔、将海肾pRG-TK质粒以0.01μg/孔进行脂质转染。转染19小时后使用溶解有化合物的试验培养基进行培养基交换。培养24小时后吸引培养基，用被动裂解缓冲液回收。

关于萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，使用双色荧光素酶报道测定系统(Promega)，利用照度计来测定。

(SDS-PAGE和蛋白质印迹分析2)

将PC12D细胞以0.67×10⁶个细胞/皿接种在35mm的皿中，在成长培养基中使用5% CO₂培养箱培养2天，之后用药物处置24小时。

将各细胞处置后用冰冷的PBS清洗。然后，用细胞增溶液(1mM的EDTA、1%的SDS、10mM的NaF、10nM的花萼海绵诱癌素、320nM的黑海绵酸、1mM的原钒酸钠、1mM的p-APMSF、10μg/mL的胃酶抑素A、10μg/mL的抗蛋白酶、10μg/mL的亮肽素、10μg/mL的胰凝乳蛋白酶抑制剂、10μg/mL的磷酸阿米酮、10mM的HEPES、pH7.5)回收。之后，迅速地在95℃下煮沸5分钟使蛋白变性，之后将DNA进行超声波破碎，制得离心上清作为SDS-PAGE用样品。

使用12.5%的凝胶作为SDS-PAGE的分离凝胶，在35V、10mA下泳动，之后将蛋白从凝胶转移到PVDF膜上，使用含有5%脱脂乳的TBST(10mM的Tris-HCl、100mM的NaCl、0.05%的Tween 20、pH7.4；以下称作封闭缓冲液)在室温下封闭1小时。然后，用TBST清洗样品，与用封闭缓冲液稀释至1000倍的一次抗体在4℃下培育一夜。再用TBST清洗样品，与用封闭缓冲液稀释至2000倍的HRP标记IgG抗体在室温下培育1小时，用TBST清洗。抗体阳性谱带的检测采用ECL法。重探测如下：使用剥离缓冲液(62.5mM的Tris-HCl、2%的SDS、100mM的β-巯基乙醇、pH7.4)剥下抗体，用TBST清洗印迹，之后检测内部标准蛋白。

(统计学分析2)

使用单因素方差分析(Bonferroni)来评价实验结果。以两侧5%来检验显著水平，以p＜0.05为显著。

[试验例4] 陈皮提取物的多巴胺合成促进作用

在本试验例中，作为本发明的陈皮提取物对帕金森病的症状改善作用，以对多巴胺生物合成系统的影响为指标进行研究。具体而言，关于陈皮提取物对酪氨酸羟化酶(TH)转录活性的影响，在作为产生多巴胺的细胞的PC12D细胞中导入TH基因启动子区DNA报道基因，测定荧光素酶活性来进行研究。另外，为了研究对TH蛋白的影响，利用蛋白质印迹法研究用陈皮提取物处置的PC12D细胞中TH蛋白的表达。而且，为了在帕金森病模型小鼠中研究陈皮提取物或川陈皮素对黑质-纹状体多巴胺神经变性引起的纹状体中的多巴胺含量降低的药效，在给予陈皮提取物或川陈皮素后测定多巴胺含量。

[试验例4-1] PC12D细胞中的陈皮提取物的TH转录活性促进作用

培养以8×10⁴个细胞/48孔板的密度增殖的PC12D细胞24小时。使用荧光素酶报道构建体转染细胞19小时，然后用对照、来自陈皮1的本发明的陈皮提取物(30、60和120μg/ml)和现有的陈皮7的提取物(120μg/ml)或川陈皮素(2、10和30μM)处理24小时。

如图4A所示，在PC12D细胞中，与对照和现有的陈皮7的提取物相比，本发明的陈皮1的提取物的TH转录活性显著上升。此外还显示：以川陈皮素换算计为2μM的120μg/ml陈皮1的提取物较2μM和10μM的川陈皮素强效地促进TH转录活性。

[试验例4-2] PC12D细胞中陈皮提取物的TH表达量上升作用

在PC12D细胞中研究TH蛋白的表达促进作用。培养以0.67×10⁶个细胞/皿的密度增殖的PC12D细胞48小时。用对照或来自陈皮1的陈皮提取物(60、120、240和480μg/ml)处理细胞24小时。使用抗TH和抗PKAα抗体进行蛋白质印迹分析。最初对抗TH抗体进行研究，之后剥下印迹，用抗PKAα抗体再次进行试验，确认使等量的蛋白在各泳道中电泳。

如图4B所示，在PC12D细胞中，陈皮提取物浓度依赖性地提高TH蛋白的表达。

[试验例4-3] 在PC12D细胞中陈皮提取物提高多巴胺含量的作用

由于TH是多巴胺合成的限速酶、而PC12D细胞是多巴胺合成分泌细胞，因此研究提高多巴胺的作用。

将PC12D细胞以1.0×10⁶个细胞/皿接种在35mm皿中，在增殖培养基上、在5% CO₂培养箱中培养24小时，之后进一步培养添加有陈皮1和陈皮7的细胞培养液24小时。之后，用加热至37℃的低K⁺缓冲液(140mM的NaCl、4.7mM的KCl、1.2mM的KH₂PO₄、2.5mM的CaCl₂、1.2mM的MgSO₄、11mM葡萄糖和15mM的HEPES-Tris、pH7.4)清洗细胞，加入高氯酸溶液使最终浓度达到0.4N，用超声波破碎细胞达1分钟。离心分离所得的溶液，通过使用电化学检测器的高效液相色谱法分离定量多巴胺。

如图4C所示，与对照和现有的陈皮7的提取物相比，本发明的陈皮1的提取物在24小时和48小时的处置中均使多巴胺含量增加。

(考察4)

在上述试验例中，本发明的陈皮提取物在PC12D细胞中浓度依赖性地使TH转录活性、TH表达量和多巴胺含量均增加，与等浓度的川陈皮素相比，该作用出乎意料且格外强。

即，可知本发明的陈皮提取物较川陈皮素显著地显示出多巴胺合成促进活性。在现有的来自陈皮的提取物中并没有确认到该活性，由此认为：本发明的陈皮提取物通过高含量的川陈皮素与川陈皮素以外的其他成分的协同效果显示出多巴胺合成促进活性。根据以上结果，本发明的陈皮提取物被期待作为帕金森病治疗药的药效。

[试验例5] 海马神经细胞中橘皮提取物的CRE转录活性

使用根据本说明书中记载的方法从实施例2中得到的橘皮3中提取的提取物，就海马神经细胞中的CRE转录活性与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例2相同。结果见图5A。

需要说明的是，本试验例中使用的300μg/mL的橘皮3提取物中含有约9.4μM的川陈皮素。

如图5A所示，与对照和川陈皮素相比，橘皮3的提取物在海马神经细胞中显示出显著的CRE转录活性。由此期待着本发明的橘皮提取物作为阿尔茨海默病治疗药的药效。

[试验例6] 橘皮提取物的学习/记忆障碍改善作用(体内试验)

使用根据本说明书中记载的方法从实施例2中得到的橘皮6中提取的提取物，研究本发明的橘皮提取物对学习/记忆障碍的作用。试验步骤与试验例3相同。结果见图5B和图5C。

需要说明的是，对每1组连续7天以1.87g/kg或3.73g/kg(以川陈皮素含量计：分别为25mg/kg或50mg/kg)经口给予橘皮提取物。

如图5B和图5C所示可知：通过慢性给予本发明的橘皮提取物，显著改善学习/记忆障碍，而且还增强在川陈皮素中没有确认到的记忆的获得和保持能力。

(考察5)

由上述试验例的结果，期待着本发明的橘皮提取物作为阿尔茨海默病治疗药的药效。

[试验例7] PC12D细胞中的橘皮提取物的CRE转录活性

使用根据本说明书中记载的方法从实施例2中得到的橘皮3中提取的提取物，就PC12D细胞中的CRE转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例2相同。结果见图5D。

需要说明的是，本试验例中使用的300μg/mL的橘皮3提取物中含有约9.4μM的川陈皮素。

如图5D所示，与对照和川陈皮素相比，橘皮3的提取物在PC12D细胞中显示出显著的CRE转录活性。

[试验例8] PC12D细胞中的橘皮提取物的TH转录活性

使用根据本说明书记载的方法从实施例2中得到的橘皮3中提取的提取物，就PC12D细胞中的TH转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例4-1相同。结果见图5E。

如图5E所示，与对照和川陈皮素相比，橘皮3的提取物在PC12D细胞中显示出显著的TH转录活性。

[试验例9] PC12D细胞中橘皮提取物的提高三磷酸鸟苷环化水解酶I(GTP环化水解酶I；GCH I)量的作用

在PC12D细胞中，研究提高GCH I量的作用。GCH I是TH所必须的辅酶四氢生物蝶呤(BH₄)的生物合成中的限速酶。

将PC12D细胞用120μg/mL浓度的橘皮提取物、陈皮提取物和DMSO(对照)处理48小时，之后用PBS清洗，在细胞溶解液(1mM的EDTA、1%的SDS、10mM的HEPES、10mM的NaF、1mM的p-APMSF、1mM的原钒酸钠、10nM的花萼海绵诱癌素(calyculin)、320 μM的黑海绵酸、10μg/mL的胃酶抑素(pepstatin)、10μg/mL的抗蛋白酶、10μg/mL的亮肽素、10μg/mL的抑糜蛋白酶素(chymostatin)、10μg/mL的磷酸阿米酮、240pM的氯氰菊酯)中溶解。之后，在95℃下煮沸5分钟，超声后以10000×g的离心力离心10分钟，使用上清进行SDS-PAGE。将10μg样品添加到凝胶浓度为12.5%的凝胶中。之后，以36V、用2小时转录到PVDF膜上，膜用5%脱脂乳封闭1小时。之后，使用GCH I抗体(ABBIOTEC、稀释1000倍)，分别在4℃下反应一夜，清洗后再与过氧化物酶标记抗兔2次抗体(CST、稀释2000倍)反应，利用ECL法检测谱带。将结果与陈皮提取物进行比较，见图5F。

需要说明的是，在本试验例中使用的120μg/mL的橘皮提取物中含有约3.76μM的川陈皮素，在120μg/mL的陈皮提取物中含有约2.02μM的川陈皮素。

如图5F所示，在PC12D细胞中，与对照相比，橘皮提取物和陈皮提取物使GCH I的表达量显著上升。而且，即使与陈皮提取物相比，橘皮提取物也使GCH I的表达量显著上升。

(考察6)

关于TH的活性表达所必须的辅酶BH4，若细胞内的BH4量变得较米氏常数所表示的量高，则TH蛋白量增加，TH的酶活性增大，促进多巴胺的合成。

根据上述试验例的结果，由于本发明的橘皮提取物使GCH I的表达量显著上升，因此通过增加TH的活性表达所必须的辅酶BH4合成的限速酶即GCH I量，使TH活性增大，其结果，推测促进多巴胺的产生和分泌，期待着作为帕金森病治疗药的药效。

[试验例10] 海马神经细胞中来自立花桔叶的提取物的CRE转录活性

使用根据本说明书记载的方法从实施例2得到的立花桔叶1～3中提取的提取物，就海马神经细胞中的CRE转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例2相同。结果见图6A。

需要说明的是，本试验例中使用的来自立花桔叶1的300μg/mL的提取物中含有约4.9μM的川陈皮素，来自立花桔叶2的300μg/mL的提取物中含有约8.5μM的川陈皮素，来自立花桔叶3的300μg/mL的提取物中含有约6.9μM的川陈皮素。

如图6A所示，与对照和川陈皮素相比，来自立花桔叶的提取物在海马神经细胞中显示出显著的CRE转录活性。

[试验例11] PC12D细胞中的来自立花桔叶的提取物的CRE转录活性

使用根据本说明书记载的方法从实施例2得到的立花桔叶1～3中提取的提取物，就PC12D细胞中的CRE转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例2相同。结果见图6B。

需要说明的是，本试验例中使用的来自立花桔叶1的300μg/mL的提取物中含有约4.9μM的川陈皮素、来自立花桔叶2的300μg/mL的提取物中含有约8.5μM的川陈皮素、来自立花桔叶3的300μg/mL的提取物中含有约6.9μM的川陈皮素。

如图6B所示，与对照和川陈皮素相比，来自立花桔叶的提取物在PC12D细胞中显示出显著的CRE转录活性。

(考察7)

根据上述试验例的结果，本发明的来自立花桔叶的提取物显示出超过由川陈皮素含量预测的活性的显著的CRE转录活性，被期待着作为阿尔茨海默病治疗药和帕金森病治疗药的药效。

[试验例12] 海马神经细胞中来自大红桔果皮的提取物的CRE转录活性

使用根据本说明书记载的方法从实施例2得到的大红桔1中提取的提取物，就海马神经细胞中的CRE转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例2相同。结果见图7A。

需要说明的是，本试验例中使用的来自大红桔1果皮的100μg/mL的提取物中含有约3.4μM的川陈皮素、300μg/mL的提取物中含有约10.1μM的川陈皮素。

如图7A所示，与对照和川陈皮素相比，来自大红桔果皮的提取物在海马神经细胞中显示出显著的CRE转录活性。

(考察6)

根据上述试验例的结果，本发明的来自大红桔果皮的提取物显示出超过由川陈皮素含量预测的活性的显著的CRE转录活性，被期待着作为阿尔茨海默病治疗药的药效。

[试验例13] PC12D细胞中来自大红桔果皮的提取物的CRE转录活性

使用根据本说明书记载的方法从实施例2得到的大红桔1中提取的提取物，就PC12D细胞中的CRE转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例2相同。结果见图7B。

需要说明的是，本试验例中使用的来自大红桔果皮的100μg/mL的提取物中含有约3.4μM的川陈皮素。

如图7B所示，与对照和川陈皮素相比，来自大红桔果皮的提取物在PC12D细胞中显示出显著的CRE转录活性。

[试验例14] PC12D细胞中来自大红桔果皮的提取物的TH转录活性

使用根据本说明书记载的方法从实施例2得到的大红桔1中提取的提取物，就PC12D细胞中的TH转录活性，与对照和川陈皮素进行比较研究。试验步骤与试验例4-1相同。结果见图7C。

需要说明的是，本试验例中使用的来自大红桔果皮的100μg/mL的提取物中含有约3.4μM的川陈皮素。

如图7C所示，与对照和川陈皮素相比，来自大红桔果皮的提取物在PC12D细胞中显示出显著的TH转录活性。

(考察7)

根据上述试验例的结果，本发明的来自大红桔果皮的提取物显示出超过由川陈皮素含量预测的活性的显著的CRE转录活性和TH转录活性，被期待着作为帕金森病治疗药的药效。

[制备例] 本发明的药品和食品的制备

按照以下的步骤，制备本发明的含有陈皮、橘皮或立花桔叶的药品或食品。

[制备例1] 细粒剂A

以3.0g陈皮、3.0g当归、3.0g钩藤、3.0g川芎、4.0g白术、4.0g茯苓、2.0g柴胡、1.5g甘草和5.0g半夏(总计28.5 g)的比率混合生药使总量达到200～800kg，使用2000～8000L水在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～5000rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到提取物制剂(抑肝散加陈皮半夏提取物)。相对于得到的6.1g抑肝散加陈皮半夏提取物，以2.9g由硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖、普鲁兰和硅铝酸镁构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转速混合(容器旋转型混合机)20分钟，以490～2500Pa的辊压成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～50号间进行粒子分级(盒式筛选，cassette screen)，得到细粒剂A。

在得到的9.0g细粒剂A中含有6.1g混合有3.0g陈皮和其他生药的抑肝散加陈皮半夏提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用9.0g细粒剂A。

[制备例2] 细粒剂B

以3.0g橘皮、4.0g槟榔子、3.0g厚朴、3.0g桂皮、1.5g紫苏叶、1.0g甘草、1.0g大黄、1.0g生姜、1.0g木香、1.0g吴茱萸和3.0g茯苓(总计22.5g)的比率混合生药使总量达到200～800kg，使用2000～8000L水在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～5000rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到提取物制剂(九味槟榔汤提取物)。相对于3.7g得到的九味槟榔汤提取物，以2.3g由硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖、普鲁兰和硅铝酸镁构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转速混合(容器旋转型混合机)20分钟，以490～2500Pa的辊压成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～50号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂B。

在得到的6.0g细粒剂B中含有3.7g混合有3.0g橘皮和其他生药的九味槟榔汤提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用6.0g细粒剂B。

[制备例3] 细粒剂C

以2.4g陈皮、2.4g钩藤、2.4g半夏、2.4g麦冬、2.4g茯苓、1.6g人参、1.6g防风、1.6g菊花、0.8g甘草、0.8g生姜和4.0g石膏(总计22.4g)的比率混合生药使总量达到200～800kg，使用2000～8000L水在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～5000rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到提取物制剂(钓藤散提取物)。相对于得到的4.48g钓藤散提取物，以1.52g由含水二氧化硅、硬脂酸镁和玉米淀粉构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转速混合(容器旋转型混合机)20分钟，以490～2500 Pa的辊压成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～50号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂C。

在得到的6.0g细粒剂C中含有4.48g混合有2.4g陈皮和其他生药的钓藤散提取物，作为标准，成人每天分3次服用6.0g细粒剂C。

[制备例4] 茶剂

将陈皮或橘皮切成850～4750μm的四方形，将3～7g切断的陈皮或橘皮装入纸袋或布袋中，作为茶剂。

成人每天按3次(1袋/次)将所得的茶剂浸出后服用。

[制备例5] 生药末-细粒剂D

将陈皮或橘皮以转数2000～3500rpm、网孔0.5～3.0mm粗碎(粉碎机)，再以转数5000～8000rpm、网孔150μm粉碎(制粉机)，作为生药末。相对于得到的10g陈皮或橘皮的生药末，以9.2g由含水二氧化硅、硬脂酸镁和玉米淀粉构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，以辊压490～2500Pa成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～42号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂D。

在得到的19.2g细粒剂D中含有10g陈皮或橘皮，作为标准，成人每天分2～3次服用19.2～38.4g细粒剂D。

[制备例6] 煎剂

将10～30g陈皮或橘皮用20倍量的200～600mL水在100℃下煎煮1小时使水达到半量，过滤，作为煎剂。

在得到的100～300 mL煎剂中含有10～30g陈皮或橘皮，作为标准，成人每天分3次服用100～300mL煎剂。

[制备例7] 细粒剂E

将50kg陈皮或橘皮在500～2000 L水中、于60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的7.2g提取物，以1.8g由微粒二氧化硅和蔗糖脂肪酸酯构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，在辊压490～2500Pa下成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～42号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂E。

在得到的9.0g细粒剂E中，含有相当于20g陈皮或橘皮的7.2g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用9.0g细粒剂E。

[制备例8] 胶囊剂

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、于60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的10g提取物，以4.75g由硅铝酸镁、合成硅酸铝/羟丙基淀粉/结晶纤维素、玉米淀粉、轻质硅酸酐、硬脂酸镁和羧甲纤维素钙构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机) 20分钟，在辊压490～2500 Pa下成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～42号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒。将400mg该细粒填充(胶囊充填机)在本领域通常使用的市售胶囊中，得到胶囊剂。

在得到的13个(470～480mg/个)胶囊剂中，含有相当于10g陈皮或橘皮的3.6g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用13～26个胶囊剂。

[制备例9] 包衣片剂

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的10g提取物，以9.1g由麦芽糖、乳糖、硅铝酸镁和硬脂酸镁构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，以转数20～55rpm、一次压缩0.6mm以上、二次压缩0.4mm以上进行压片(高速旋转式压片机)，得到每片为350mg的素片。将1.1g由羟丙基甲基纤维素、滑石粉、氧化钛和焦糖构成的包衣剂溶解或悬浮于水/乙醇混合液(3:7～10:0)中，在排气温40～55℃、流量200～400g/mL、转数4～6rpm下包衣(包衣机)，使用微量的巴西棕榈蜡和白蜡，在转数1rpm、排气温20～30℃下进行抛光(包衣机)，得到每片为370mg的包衣片剂。

在得到的20片包衣片剂中含有相当于10g陈皮或橘皮的3.6g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用20～40片包衣片剂。

[制备例10] 细粒剂F

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的10g提取物，以15g由玉米淀粉、麦芽糖、含水二氧化硅和硬脂酸镁构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，在辊压490～2500Pa下成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～42号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂F。

在得到的4.5g细粒剂F中含有相当于5g陈皮或橘皮的1.8g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用4.5～9.0g细粒剂F。

[制备例11] 颗粒剂

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的10g提取物，以40g由羧甲纤维素钙、含水二氧化硅、硅铝酸镁和硬脂酸镁构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，以490～2500Pa的辊压成型，整粒(干式造粒装置)，在筛12号～42号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到颗粒剂。

在得到的18g颗粒剂中含有相当于10g陈皮或橘皮的3.6g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用18～36g颗粒剂。

[制备例12] 凝胶剂

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的10g提取物，以40g由卡拉胶、刺槐豆胶、还原麦芽糖液糖、木糖醇、苹果香料、卵磷脂和枸橼酸构成的添加物的比率，在总量为10～30kg的范围内混合，以50～150rpm的转数混合(混合搅拌机)，边搅拌边加入等量的80℃以上的热水，再冷却至15℃以下，作为凝胶剂。

在得到的18g凝胶剂中含有相当于10g陈皮或橘皮的3.6g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用18～36g凝胶剂。

[制备例13] 细粒

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的3.6g提取物，以0.9g由微粒二氧化硅和蔗糖脂肪酸酯构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，以490～2500Pa的辊压成型，整粒(干式造粒装置)，在筛30号～42号间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒。

在得到的4.5g细粒中含有相当于10g陈皮或橘皮的3.6g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天摄取4.5g细粒。

[制备例14] 凝胶材料

将50kg陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下提取(提取罐)30～180分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)以进行固液分离，之后在8kPa以下的减压下浓缩(螺旋旋转型浓缩机)直至浓度为约10～40%。将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥(喷雾干燥机)，得到陈皮或橘皮的提取物。相对于得到的10g提取物，以15.9g由卵磷脂、还原麦芽糖糖稀、阿斯巴甜、抗坏血酸、枸橼酸三钠、凝胶化剂(FG-2266、新田ゼラチン株式会社)和橙子香料构成的添加物的比率，在总量为50～400kg的范围内混合，以4rpm的转数混合(容器旋转型混合机)20分钟，作为凝胶材料。

在得到的9.3g凝胶材料中含有相当于10g陈皮或橘皮的3.6g陈皮提取物或橘皮提取物，作为标准，成人每天摄取9.3～18.6g凝胶材料。

[制备例15] 茶

将立花桔叶切成850～4750μm的四方形，将3～7g切断的立花桔叶装入纸袋或布袋中、或者以其原来的状态作为茶。

作为标准，成人每天以3次～5次(1袋或3～7g/次)用热水浸泡所得的茶后摄取。

[制备例16] 皮

将200g陈皮或橘皮和2g食盐放入足以浸没的程度的水中，盖上盖，沸腾15分钟，之后舍去热水，浸入冷水中。将滤干水分的上述陈皮或橘皮放入混合200g白砂糖和100mL水并沸腾的混合溶液中，边不时混合边煮至皮中出现透明感。不用盖盖，用极弱的火边不时混合边煮40～50分钟使不变焦。除去煮汁，充分滤干水分，之后趁热取出，铺展晾干。向得到的皮上撒入20g白砂糖，制成皮。

在得到的21.1g皮中含有10g陈皮或橘皮，作为标准，成人每天摄取21.1～42.2g皮。

[制备例17] 果子酱

向100g陈皮或橘皮中加入100mL 100℃的热水，放入容器内蒸一夜，用混合器粉碎。加入1L水，用强火煮1小时30分钟。加入25～30g白砂糖，用中火煮10～15分钟，之后改成弱火，加入25～30 g白砂糖并溶解。再加入25～30g白砂糖并溶解，冷却至70℃以下，之后加入60g蜂蜜、1.7g果胶和1.7g抗坏血酸，搅拌，制成果子酱。

在得到的100g果子酱中含有20g陈皮或橘皮，作为标准，成人每天摄取25～50g果子酱。

[制备例18] 茶

将30kg立花桔叶在300L水中、在60～100℃下提取(提取罐)5～30分钟。以1000～2500rpm的转数过滤(离心分离机)进行固液分离，向滤液中添加0.2g/L的抗坏血酸，制成茶。

在得到的500mL茶中含有5g立花桔叶，作为标准，成人每天摄取500mL茶。

产业实用性

本发明的干燥植物组织或植物组织提取物作为改善阿尔茨海默病和帕金森病等中枢神经变性疾病的药品或食品有效，还可用作该疾病的有望的根治性治疗药的含有成分。本发明的干燥植物组织或植物组织提取物特别是对增强记忆的获得、保持和记起能力有效。

Claims (31)

1.用于改善中枢神经变性疾病的柑橘类果皮的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.4重量%以上的川陈皮素，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0以上。

2.用于改善中枢神经变性疾病的柑橘类叶的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3重量%以上的川陈皮素，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0以上。

3.权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病和/或帕金森病。

4.权利要求1所述的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.4～2.0重量%的川陈皮素，并且川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0～23.0。

5.权利要求2所述的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3～2.0重量%的川陈皮素，并且川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0～23.0。

6.权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织，其中，中枢神经变性疾病的改善是通过提高cAMP应答序列依赖性转录活性、增强记忆的获得、保持和记起能力、促进酪氨酸羟化酶转录活性、提高酪氨酸羟化酶表达量、促进多巴胺合成能力或促进多巴胺分泌来实现的。

7.用于改善中枢神经变性疾病的柑橘类的植物组织提取物，其中，相对于100重量%的植物组织提取物，含有0.6重量%以上的川陈皮素，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0以上。

8.权利要求7所述的植物组织提取物，该提取物是由权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织通过水提取而得到的。

9.权利要求7所述的植物组织提取物，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病和/或帕金森病。

10.权利要求9所述的植物组织提取物，其中，相对于100重量%的植物组织提取物，含有0.6～3.0重量%的川陈皮素，并且川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0～14.0。

11.权利要求7所述的植物组织提取物，其中，中枢神经变性疾病的改善是通过提高cAMP应答序列依赖性转录活性、增强记忆的获得、保持和记起能力、促进酪氨酸羟化酶转录活性、提高酪氨酸羟化酶表达量、促进多巴胺合成能力或促进多巴胺分泌来实现的。

12.权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织，其中，柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、立花桔或大红桔。

13.权利要求7所述的植物组织提取物，其中，柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、立花桔或大红桔。

14.阿尔茨海默病治疗用药品，其中，相对于100重量%的药品，以10～100重量%的权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织或10～90重量%的权利要求7所述的植物组织提取物作为有效成分。

15.帕金森病治疗用药品，其中，相对于100重量%的药品，以10～100重量%的权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织或10～90重量%的权利要求7所述的植物组织提取物作为有效成分。

16.中枢神经变性疾病的治疗用药品，该药品以由混合物通过水提取得到的提取物作为有效成分，所述混合物是将权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织和医药上可接受的生药成分以1:5～1:10的重量比率混合而得到的。

17.权利要求16所述的药品，其中，提取物为权利要求7～11或13中任一项所述的植物组织提取物。

18.权利要求16所述的药品，其中，生药成分为选自威灵仙、乌药、延胡索、黄芪、黄芩、黄柏、远志、藿香、葛根、干姜、甘草、桔梗、菊花、枳实、杏仁、桂皮、红花、香附子、厚朴、牛膝、吴茱萸、五味子、柴胡、山栀子、地黄、芍药、生姜、升麻、神麹、石膏、川芎、前胡、苍术、苏木、紫苏叶、大黄、大枣、大腹皮、泽泻、竹茹、知母、钩藤、天麻、天门冬、当归、桃仁、人参、麦芽、麦冬、半夏、白芷、白术、槟榔子、茯苓、防己、芒硝、防风、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、龙胆和羌活的一种以上的生药成分。

19.权利要求14～18中任一项所述的药品，其中：

干燥植物组织为柑橘类的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3～2.0重量%的川陈皮素，含有0.4重量%以下的芸香柚皮苷，含有0.1～0.8重量%的橘皮素，含有0.4～12重量%的橘皮苷，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0～23.0；

提取物为柑橘类的植物组织提取物，其中，相对于100重量%的植物组织提取物，含有0.6～3.0重量%的川陈皮素，含有0.4重量%以下的芸香柚皮苷，含有0.1～1.0重量%的橘皮素，含有1.8～6.0重量%的橘皮苷，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0～14.0；

柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、立花桔或大红桔。

20.权利要求14～18中任一项所述的药品，其特征在于：促进突触可塑性、抑制PKA/ERK信号传递、增强记忆的获得或保持能力、提高GTP环化水解酶I量、促进多巴胺合成能力、提高多巴胺含量或促进多巴胺分泌。

21.权利要求20所述的药品，该药品为茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂的形态。

22.权利要求21所述的药品，该药品为细粒剂的形态。

23.用于改善中枢神经变性疾病的药品，该药品以柑橘类的植物组织提取物作为有效成分，其中，相对于100重量%的植物组织提取物，含有0.6～3.0重量%的川陈皮素，含有0.4重量%以下的芸香柚皮苷，含有0.1～1.0重量%的橘皮素，含有1.8～6.0重量%的橘皮苷，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0～14.0；

柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、立花桔或大红桔；

中枢神经变性疾病的改善是指促进突触可塑性、抑制PKA/ERK信号传递、增强记忆的获得或保持能力、提高GTP环化水解酶I量、促进多巴胺合成能力、提高多巴胺含量或促进多巴胺分泌。

24.权利要求23所述的药品，其中，植物组织提取物是由混合物通过水提取而得到的，所述混合物是将干燥植物组织和医药上可接受的生药成分以1:5～1:10的重量比率混合而得到的；

干燥植物组织为柑橘类的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3～2.0重量%的川陈皮素，含有0.4重量%以下的芸香柚皮苷，含有0.1～0.8重量%的橘皮素，含有0.4～12重量%的橘皮苷，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0～23.0。

25.权利要求23所述的药品，该药品为茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂的形态。

26.权利要求25所述的药品，该药品为细粒剂的形态。

27.权利要求23～26中任一项所述的药品，其中，生药成分为选自威灵仙、乌药、延胡索、黄芪、黄芩、黄柏、远志、藿香、葛根、干姜、甘草、桔梗、菊花、枳实、杏仁、桂皮、红花、香附子、厚朴、牛膝、吴茱萸、五味子、柴胡、山栀子、地黄、芍药、生姜、升麻、神麹、石膏、川芎、前胡、苍术、苏木、紫苏叶、大黄、大枣、大腹皮、泽泻、竹茹、知母、钩藤、天麻、天门冬、当归、桃仁、人参、麦芽、麦冬、半夏、白芷、白术、槟榔子、茯苓、防己、芒硝、防风、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、龙胆和羌活的一种以上的生药成分。

28.用于改善中枢神经变性疾病的食品，其中，相对于100重量%的食品，含有10～100重量%的权利要求1或2中任一项所述的干燥植物组织或10～90重量%的权利要求7所述的植物组织提取物。

29.权利要求28所述的食品，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病和/或帕金森病。

30.权利要求28所述的食品，其中，中枢神经变性疾病的改善是通过增强记忆的获得、保持和记起能力的机理来实现的。

31.权利要求28～30中任一项所述的食品，其中：

干燥植物组织为柑橘类的干燥植物组织，其中，相对于100重量%的干燥植物组织，含有0.3～2.0重量%的川陈皮素，含有0.4重量%以下的芸香柚皮苷，含有0.1～0.8重量%的橘皮素，含有0.4～12重量%的橘皮苷，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为1.0～23.0；

植物组织提取物为柑橘类的植物组织提取物，其中，相对于100重量%的植物组织提取物，含有0.6～3.0重量%的川陈皮素，含有0.4重量%以下的芸香柚皮苷，含有0.1～1.0重量%的橘皮素，含有1.8～6.0重量%的橘皮苷，川陈皮素/芸香柚皮苷的含有重量比为2.0～14.0；

柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、立花桔或大红桔。

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