CN100586424C - 一种中药制剂及其制法和质控方法 - Google Patents

Abstract

本发明一种中药制剂及其制法和质控方法，属于中药的技术领域。它由灵芝、黄芪、刺梨、熟地黄、女贞子、淫羊藿、姜制半夏等药组成，制成分散片、微丸、滴丸等剂型，同时提供了本制剂的含量测定和鉴别方法，该制剂主要用于治疗肿瘤放化疗引起的白细胞下降，血小板减少，免疫功能降低所致的体虚乏力、食欲不振、呕吐、失眠等病症，同时工艺合理，质量可控，可直接指导生产；服用方便，外观美洁，易于被患者接受。

Description

一种中药制剂及其制法和质控方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂及其制法和质控方法，属于中药的技术领域。

技术背景

康艾扶正胶囊是由灵芝、黄芪、刺梨、熟地黄、女贞子、淫羊藿、姜制半夏七味药组成。该方益气解毒，散结消肿，和胃安神。用于肿瘤放化疗引起的白细胞下降，血小板减少，免疫功能降低所致的体虚乏力、食欲不振、呕吐、失眠等症的辅助治疗。但是在长期的临床实践中发现，该产品的黄芪等药物水提得到的浸膏，含有多糖、粘液质等，极易吸潮变质，出现严重粘结等情况。并且剂型品种单一，限制了药物组合的应用。鉴于这些情况，需要寻找一种治疗效果理想，工艺合理可行，质量稳定可控的有效治疗药物制剂。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种中药制剂及其制法和质控方法。本发明提供的制备方法工艺合理可行，能够指导大生产，并且本发明提供的分散片制剂、微丸，崩解性好，生物利用度高，质量稳定，服用方便，特别适合于老年人及吞服药片或胶囊有困难的患者服用；本发明提供的滴丸制剂，解决了药物遇湿热不稳定的问题，还可以掩盖药物的不良口味、气味，并且起到增加稳定性、改善生物利用度的作用。

本发明是这样构成的：按照重量计算，它主要是由灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g制作而成的制剂，包括：注射剂，包括：注射液、粉针、冻干粉针、凝胶剂、片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、凝胶剂、口服液体制剂、煎膏剂、浸膏剂和膜剂等药剂学上所有可以接受的剂型。准确的说：所述的制剂是滴丸、微丸、分散片。

所述制剂中的滴丸剂这样制备：取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶0.7～2.2加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为1～9cm，滴速20～50d/min、料温60～90℃，将药液滴入冷却剂中，冷却剂温度为10～40℃，收集滴丸并吸除表面的冷却剂，即得。所述制剂中的滴丸剂这样制备：取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶1.7加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为3～7cm，滴速30～40d/min、料温70～80℃，将药液滴入冷却剂甲基硅油中，冷却剂温度为20～30℃，收集滴丸并吸除表面的甲基硅油，即得。所述制剂中的微丸剂这样制备：取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，加入无水乙醇作润湿剂制软材，过24目筛制得湿颗粒，随即投入转速为40r/min的糖衣机中滚圆，并置于40℃烘箱中干燥后取出，再过筛选择24～40目的微丸进行包衣：包衣液为浓度4％的丙烯酸树脂溶液，进风温度为50℃，喷雾压力为1.5kg/cm²，输液速度为18ml/min，即得。所述制剂中的分散片剂这样制备：取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入膏粉，再加入5％乳糖、7％交联聚乙烯吡咯烷酮，混匀，加入乙醇，制软材，制粒，干燥，40目筛整粒，混匀后压片，另取薄荷脑，加乙醇适量使溶解，喷入，再喷入上述挥发油，混匀，密闭2小时，即得。

鉴别方法包括以下全部或部分内容：

a.制剂中黄芪甲苷、黄芪药材中一种或两种的薄层色谱法鉴别

取本品适量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，滤过，滤液，加于100～200目的中性氧化铝柱上，用30～50％甲醇或20～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用氢氧化钠溶液溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加溶剂使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪药材，同法制成对照药材溶液；取黄芪甲苷对照品，制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝11～15∶5～7∶1.5～2.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

b.制剂中女贞子、齐墩果酸中一种或两种的薄层色谱法鉴别

取本品适量，加三氯甲烷或乙酸乙酯提取，滤过，滤液浓缩或蒸干再加溶剂溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材，加甲醇或乙醇提取，滤过，滤液浓缩或蒸干再加溶剂溶解，作为对照药材溶液；取齐墩果酸对照品，制成为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯＝4～6∶1.5～2.5∶0.8～1.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

c.制剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷中一种或两种的薄层色谱法鉴别

取本品适量，加水溶解或提取，水液用乙酸乙酯或三氯甲烷或正丁醇振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；取淫羊霍对照药材，滤液浓缩或蒸干再加溶剂溶解，作为对照药材溶液；另取淫羊霍苷对照品，制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝9～11∶0.8～1.2∶0.8～1.2∶0.8～1.2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

准确的说：鉴别方法包括以下全部或部分内容：

a.制剂中黄芪药材、黄芪甲苷中一种或两种的薄层色谱法鉴别

取本品粉末适量，加甲醇超声提取，滤过，滤液，加于100～200目的中性氧化铝柱上，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用氢氧化钠溶液溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪药材，同法制成对照药材溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶6∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯365nm下显相同的橙黄色荧光斑点；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

b.制剂中女贞子药材、齐墩果酸中一种或两种的薄层色谱法鉴别

取本品粉末适量，加三氯甲烷或乙酸乙酯，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷或乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材，加甲醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷＝3∶2混合溶液使溶解，作为对照药材溶液；取齐墩果酸对照品，加三氯甲烷或乙酸乙酯或乙醇制成为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯＝5∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

c.制剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷中一种或两种的薄层色谱法鉴别

取本品粉末适量，加水溶解或提取，水溶液用乙醚振摇提取，弃去乙醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；取淫羊霍对照药材，加甲醇或乙醇提取，提取液浓缩，作为对照药材溶液；另取淫羊霍苷对照品，加甲醇或乙醇制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定方法如下：

取本品，研细，取粉末适量，精密称定，加甲醇充分浸渍后超声提取，滤过，甲醇溶液加于100～200目中性氧化铝柱上，用30～50％甲醇或20～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用碱性溶液溶解，碱性溶液用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解并定容，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝30～38∶70～62为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；精密吸取对照品溶液、供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.15mg。准确的说，制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定方法如下：

取本品，研细，取粉末适量，精密称定，加甲醇充分浸渍后超声提取，滤过，甲醇溶液加于100～200目中性氧化铝柱上，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用氢氧化钠溶液溶解，氢氧化钠溶液用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解并定容，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝34∶66为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.30mg。

与现有技术相比，本发明针对现有技术，采用合理可行的工艺，能够用于指导生产。本申请人在研制过程中发现，滴丸和分散片崩解时间、微丸中的辅料是影响产品质量的关键。通过大量实验，本发明提供的工艺制得的微丸、分散片、崩解性好，生物利用度高，特别适合于老年人及吞服药片或胶囊有困难的患者服用；本发明提供的滴丸，解决了药物遇湿热不稳定的问题，还可以掩盖药物的不良口味、气味，并且起到增加稳定性、改善生物利用度的作用。而且本发明提供的制剂不良反应小、可供病人长期使用，达到了发明的目的。

申请人进行了一系列实验，以选择本发明提供的药物制剂的制备工艺、使用的辅料种类及用量、比例等；保证其科学、合理、可行；得到的制剂具有有效的治疗效果。

实验例1：提取等工艺的研究

现有技术中，加水量和加醇量没有明确，因此采用单因素试验方法，以黄芪甲苷含量和出膏率为考察指标进行优选，试验方法及结果如下：

1.1加醇量的确定

康艾扶正胶囊中灵芝、女贞子药材采用乙醇提取，提取时间和次数已确定，加醇量没有明确，因此采用单因素试验方法，以出膏率为考察指标进行优选，试验方法及结果如下：

称取灵芝30g，女贞子20g，混在一块，共6份，分别加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩、干燥，以出膏率为考察指标，实验设计及结果见下表。

加醇量的考察

                            加醇量(倍)

试验号

                                                    浸膏收得率(％)

              第一次                第二次

1                6                     6                6.34

2                8                     8                7.06

3                10                    10               8.19

4                10                    8                8.16

5                10                    6                7.31

6                8                     6                6.86

由上表可见：加醇量为10、10倍和10、8倍量时浸膏收得率较高，而两者之间没有明显的区别，在保证有效成分提取充分的前提下，为了节约成本和缩短工时，确定提取加醇量第一次10倍量，第二次8倍量。

1.2水溶性成分提取时用水量的确定

为使药材中的有效成分得到充分提取，灵芝药渣和女贞子药渣再与黄芪、刺梨、熟地黄、淫羊藿、半夏药材进行提取。影响采用煎煮法提取中药中有效成分提取的主要因素有提取次数、提取时间、加水量。现有技术中，加水量没有明确，因此采用单因素试验方法，以黄芪甲苷为考察指标进行优选，试验方法及结果如下：

称取黄芪30g、刺梨25g，熟地黄20g、淫羊藿20g、半夏10g，混在一块，共6份，将上述“加醇量的考察”试验中醇提后所剩的药渣混在一块，平均分成6份，和黄芪、刺梨、熟地黄、淫羊藿、半夏一块煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩，干燥，以黄芪甲苷为考察指标，实验设计及结果见下表。

加水量的考察

                                                    黄芪甲苷含量

                加水量(倍)        浸膏收得率(％)

试验号

                                                    (mg/g)

        第一次            第二次

1         6                 6          7.21          0.12

2         8                 8          8.36          0.17

3         10                10         11.90         0.32

4         10                8          11.87         0.31

5         10                6          8.76          0.20

6         8                 6          7.69          0.14

由上表可见：加水量为10、10倍和10、8倍量时浸膏收得率和黄芪甲苷含量较高，而两者之间没有明显的区别，在保证有效成分提取充分的前提下，考虑都加10倍量耗费的资源和能源较多，因此确定提取加水量第一次10倍量，第二次8倍量。

1.3提取工艺的验证：

为了验证所确定的制备工艺的可行性，我们对此工艺条件进行了三次验证实验。

试验方法：按处方比例称取黄芪60g、刺梨50g，熟地黄40g、淫羊藿40g、半夏20g，灵芝60g，女贞子40g，共3分；灵芝粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取2次，每次2小时，第一次加10倍量乙醇，第二次加8倍量乙醇，滤过，滤液减压浓缩，干燥，称定干膏(I)膏重；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮2次，每次2小时，第一次加10倍量水，第二次加8倍量水，滤过，合并滤液，减压浓缩，干燥，称定干膏(II)膏重及黄芪甲苷含量，结果见下表。

提取工艺验证实验

试验  药材量  膏重I  浸膏收得  膏重II  浸膏收得  黄芪甲苷含量

号    (g)     (g)    率(％)    (g)     率(％)    (mg/g)

1     310     8.14    8.14     36.84    11.88     0.29

2     310     8.21    8.21     37.05    11.95     0.31

3     310     8.09    8.09     36.74    11.85     0.32

由验证实验的结果可见该条件提取结果浸膏收得率及黄芪甲苷含量比较稳定，说明该提取工艺条件是合理、稳定可行的。

1.4分离、浓缩工艺研究

分离选择：均采用200目滤布滤过。

浓缩工艺条件：结合工厂现有的生产设备，滤液采用三效浓缩罐浓缩，浓缩至相对密度约为1.30(60℃)的稠膏，备用。浓缩条件为：温度为一效84℃、二效80℃、三效69℃，真空度为一效0.025Mpa、二效0.046Mpa、三效0.068Mpa。

实验例2：成型工艺研究

2.1分散片剂成型工艺研究

分散片遇水可迅速崩解形成均匀的粘性悬液的水分散片，解决了原剂型崩解性差，溶出缓慢的缺点，本申请人制得的分散片在19℃～21℃水中3min内完全崩解，混悬性好、生物利用度高、分散均匀度。崩解时限检查：采用转篮法，升降式崩解仪，取6片，观察通过筛网的情况，通过率高则崩解性好，更宜人体吸收；片剂硬度的测定：用片剂四用仪测定片剂的硬度。

组别    乳糖％    交联聚乙烯吡咯烷酮％    崩解时间s

1        3        3                        123

2        3        5                        85

3        3        7                        102

4        5        3                        114

5        5        5                        138

6        5        7                        69

7        8        3                        209

8        8        5                        118

9        8        7                        105

结果表明，最佳工艺条件为加入5％乳糖、7％交联聚乙烯吡咯烷酮，混匀，加入乙醇，制软材。

2.2微丸

以丙烯酸树脂为包衣材料，对其包衣液浓度、进风温度、喷雾压力及输液速度4个主要处方工艺参数，利用U₈(8⁴)均匀设计表安排试验，采用拟水平方法，将各因素所取4个水平重复使用，以P(通过16/36筛的百分数)、F(在30min溶解的百分数)为指标。

包衣液浓度％   进风温度℃   喷雾压力Pa  输液速度mL·min^-1    P％         F％

4              40            1.0        15                   78.2        84.1

4              50            1.5        18                   89.7        93.2

6              60            1.0        15                   78.6        90.6

6              70            1.5        18                   77.5        80.4

8              40            1.0        15                   72.4        70.4

8              50            1.5        18                   68.5        72.6

10             60            1.0        15                   52.1        65.3

10             70            1.5        15                   67.5        702

结果表明，包衣液为浓度4％的丙烯酸树脂溶液，进风温度为50℃，喷雾压力为1.5kg/cm²，输液速度为18ml/min为最佳工艺条件。

2.3滴丸成型工艺研究

2.3.1制剂处方设计和筛选

根据文献报道，选择常用的滴丸基质聚乙二醇4000和聚乙二醇6000进行比较试验。将不同型号的聚乙二醇置小烧杯内，加热至80-90℃，待全部熔融后，加入浸膏粉，考察基质与浸膏粉的的融合情况，选择融合情况较好的处方进行滴制(滴制条件：料温75℃，冷却剂为二甲基硅油，滴距3～7cm，滴速30～40滴/分)，结果见下表。

基质与主药的融合情况比较

处方号        处方1       处方2        处方3      处方4       处方5        处方6        处方7        处方8

浸膏粉

                10          10          10          10          10           10           10           10

(g)

聚乙二醇

                 7          12           17         22        --------    ---------    ----------  -----------

4000(g)

聚乙二醇

              -------     -------      --------   -------        7            12           17          22

6000(g)

主药：基

             1：0.7       1：1.2        1：1.7     1：2.2        1：0.7       1：1.2       1：1.7      1：2.2

质

                          主药能与      主药能与

             主药能与                              主药能与                   主药能与     主药能与

主药与基                  基质融        基质融                   主药与基                              主药能与基

             基质融合，                            基质融合，                 基质融合，   基质融合，

质的融合                  合，但体      合，体系                 质融合较                              质融合，体系

             但体系无                              体系流动                   但体系无     体系流动

情况                      系流动性      流动性很                 差                                    流动性较好

             流动性                                性很好                     流动性       性较差

                          较差          好

                          圆整度        光滑，圆   光滑，圆整                 圆整度差，   圆整度差，  圆整度稍差，

滴丸外观    -----------                                          -----------

                          差，拖尾      整度好     度好                       严重拖尾     拖尾        稍有拖尾

滴丸硬度    -----------   硬度较好      硬度较好   硬度较好      -----------  硬度较好     硬度较好    硬度较好

丸重差异    -----------   7.5％         8.0％      8.5％         -----------  ----------   25％        20％

溶限        ------------  6～9          6～9       6～9          -----------  ----------   10～15      10～15

(min)

上述结果表明，处方3熔融药液的流动性好，滴丸成型性好，光滑、圆润，丸重差异小，溶散较快，故选3号处方。

2.3.2丸重规格确定

根据上述处方筛选结果，并由于本品设计为含浸膏22.5mg/丸，故确定丸重规格为60mg/丸。

2.3.3冷却剂选择

取浸膏粉10g，聚乙二醇4000 17g，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，取适量，分别滴入二甲硅油和液体石蜡冷却剂中，观察滴丸成型情况，结果见下表。

冷却剂选择

冷取剂种         冷却剂温度      滴距    滴速           料温     滴丸成型情况

类

二甲基硅         30℃             3cm    30～40d/min    75℃     圆整度好，成型好

油

液体石蜡         30℃             3cm    30～40d/min    75℃     滴丸拖尾，形状较差

上表表明，以二甲硅油为冷却剂滴丸圆整度好，成型好。

2.3.4冷却剂温度选择

取浸膏粉10g，聚乙二醇400017g，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，取适量，分别滴入不同温度的二甲硅油冷却剂中，观察滴丸成型情况，结果见下表。

冷却剂温度选择

冷却剂温度      滴距       滴速         料温           滴丸成型情况

20℃            3cm        30～40d/min  75℃           圆整度好，成型好

30℃            3cm        30～40d/min  75℃           圆整度好，成型好

梯度冷却        3cm        30～40d/min  75℃           圆整度好，成型好

注：梯度冷却方法为：上部30～40℃，中部为15～30℃，下部为5～15℃。

上表表明，在上述三种冷却温度下，本品的成型性均良好，为简便操作，故选择冷却剂温度为20～30℃。

2.3.5滴头口径选择

取浸膏粉10g，聚乙二醇400017g，按制法制得熔融药液，分别以不同口径的滴头滴制，考察所得滴丸的平均丸重与目标丸重(60mg/丸)的接近程度，结果见下表。

滴头口径选择

滴头口径

(内/外            2.7/3.1    3.3/4.1    3.6/4.8    4.3/5.1    4.9/5.8

mm/mm)

平均丸重(mg)      31.7       40.8       49.6       60.4       69.5

目标丸重(mg)                            60mg

丸重差(mg)        -28.3      -19.2      -10.4      0.4        9.5

上述结果表明，滴头口径为4.3/5.1(内/外mm/mm)的滴头所滴制的滴丸丸重与目标丸重最接近，故选择滴头口径为4.3/5.1(内/外mm/mm)。

2.3.6滴距选择

取浸膏粉10g，聚乙二醇4000 17g，按制法制得熔融药液，分别以不同的滴距滴制，考察所得滴丸的丸重差异和外观形状，结果见下表。

滴距选择

滴距(cm)      重量差异          滴丸外观

1              ------           滴丸粘连，圆整度差

3             10％              滴丸外观圆整，表面光滑

5             9％               滴丸外观圆整，表面光滑

7             9％               滴丸外观圆整，表面光滑

9             26％              滴丸外观圆整，表面光滑

上表表明，当滴距在3～7cm时，滴丸外观圆整，表面光滑，重量差异小，故选择滴距为3～7cm。

2.3.7熔融药液温度(料温)、滴制速度选择

取浸膏粉10g，聚乙二醇4000 17g，按制法制得熔融药液，按下表的料温和滴制速度(其余条件按制法)进行滴制，结果见下表。

熔融药液温度(料温)、滴制速度选择

序    滴速       料温        重量差异        平均丸重        平均丸重-60

                                                                            滴丸外观

号    (d/min)    (℃)        系数(％)        (mg)            (mg)

1     20~30      60~70        8.4            57.7            -2.3           圆整、美观

2     20~30      70~80        7.6            56.5            -3.5           圆整、美观

3     20~30      80~90        8.2            52.4            -7.6           圆整、美观

4     30~40      60~70        7.1            62.9            2.9            圆整、美观

5     30~40      70~80        6.8            60.6            0.6            圆整、美观

6     30~40      80~90        7.2            61.7            1.7            圆整、美观

7     40~50      60~70        9.8            70.1            10.1           圆整度稍差

8     40~50      70~80        9.4            68.7            8.7            圆整度稍差

9     40~50      80~90        9.3            66.8            6.8            圆整度稍差

从上表可知，当选用滴速30～40d/min、料温70～80℃时，所得丸重与目标丸重最接近，同时重量差异小、滴丸外观圆整、美观。故选择滴速30～40d/min、料温70～80℃。

实验例3：药理实验

试验动物：昆明种小白鼠，体重22～24g，♂♀各半，试验前饲养观察一周。

3.1对小白鼠常压耐缺氧存活时间的影响

小鼠60只随机分4组。口服灌胃蒸馏水或不同浓度药物0.4ml/20g体重两天，实验当日再给药一次后30分钟，皮下注射异丙肾上腺素20mg/kg，15分钟后将动物放于125ml广口磨口瓶内(瓶内置25g钠石灰，并以滤纸覆盖)，每瓶一只，立即以凡士林封闭，计时，记录自小白鼠投入后至死亡的时间，结果见下表。

3.2对小白鼠游泳疲劳时间的影响

小鼠60只随机分4组。实验前同法预先给药3天，实验当日再给药一次后30分钟，于小白鼠尾根部负2g的重物，将小白鼠放入80×60×40cm水池内，水深25cm，水温20±1℃，每次各组放一只，观察小白鼠头部沉入水中10秒钟不能浮出水面者的游泳时间，结果见下表。

对小白鼠常压耐缺氧存活时间的影响(x±s)

组别              动物数(只)      剂量(g/kg)        缺氧存活时间(min)

空白对照          15              -                 12.1±1.8

康艾扶正胶囊      15              4.0               18.5±1.5

本发明分散片剂    15              4.0               18.7±0.8

本发明软胶囊剂    15              4.0               19.0±1.0

对小白鼠游泳时间的影响(x±s)

组别             剂量(g/kg)      动物数(只)         小白鼠游泳时间(min)

空白对照         -               15                 6.89±2.06

康艾扶正胶囊     4.0             15                 8.90±0.59

本发明滴丸剂     4.0             15                 9.08±2.21

本发明微丸剂     4.0             15                 9.11±1.58

结果表明，本发明产品疗效好，不低于胶囊剂。

实验例4滴丸剂中黄芪甲苷、黄芪药材的薄层色谱鉴别方法研究

为了突出黄芪的特征，选择了黄芪甲苷作为其特征成分斑点，但是由于制剂中存在较多与黄芪甲苷结构相近或极性相似的成分，例如灵芝、熟地黄中的多糖类，淫羊霍中的淫羊霍苷等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验以硅胶G薄层板为固定相，筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果如下：

滴丸剂中黄芪甲苷、黄芪药材的薄层色谱鉴别方法研究

条件                                     结果

正己烷-醋酸乙酯＝9∶1                    分离不清晰

三氯甲烷-丙酮＝10∶3                     阴性有干扰

苯-甲醇＝10∶1                           Rf值偏低

三氯甲烷-乙醇＝13∶7                     分离不清晰

甲苯-甲醇-冰醋酸＝60∶5∶1               阴性有干扰

甲苯-甲醇＝8∶1                          阴性有干扰

氯仿-甲醇-水＝19∶6∶2                   分离不清晰

氯仿-甲醇-水＝15∶5∶2.5                 分离清晰，阴性无干扰

氯仿-甲醇-水＝11∶7∶1.5                 分离清晰，阴性无干扰

氯仿-甲醇-水＝13∶6∶2                   分离最清晰，Rf值适中，阴性无干扰

经过筛选，确定了最佳条件：以硅胶G薄层板为固定相，以氯仿-甲醇-水＝13∶6∶2为展开剂，在此条件下，黄芪甲苷特征斑点的Rf值适中，和其它斑点分离最清晰，阴性无干扰。

实验例5滴丸剂中女贞子药材、齐墩果酸的薄层色谱鉴别方法研究

为了突出女贞子的特征，选择了齐墩果酸作为其特征成分斑点，但是由于制剂中存在较多与齐墩果酸结构相近或极性相似的成分，例如刺梨、半夏中的有机酸类等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验以硅胶G薄层板为固定相，筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果如下：

滴丸剂中女贞子药材、齐墩果酸的薄层色谱鉴别方法研究

条件                                    结果

正己烷-三氯甲烷＝9∶1                分离不清晰

石油醚-三氯甲烷-丙酮＝10∶3∶1       分离不清晰

苯-甲醇＝10∶1                       分离不清晰

三氯甲烷-乙醇＝13∶7                 分离不清晰

苯-甲醇-冰醋酸＝10∶5∶1             分离不清晰

苯-甲醇＝8∶1                        阴性有干扰

环己烷-丙酮-醋酸乙酯＝7∶2∶1        阴性有干扰

环己烷-丙酮-醋酸乙酯＝4∶2.5∶1.2    分离清晰，阴性无干扰

环己烷-丙酮-醋酸乙酯＝6∶1.5∶0.8    分离清晰，阴性无干扰

环己烷-丙酮-醋酸乙酯＝5∶2∶1        分离最清晰，Rf值适中，阴性无干扰

经过筛选，确定了最佳条件：以硅胶G薄层板为固定相，以氯仿-甲醇-水＝13∶6∶2为展开剂，在此条件下，齐墩果酸特征斑点的Rf值适中，和其它斑点分离最清晰，阴性无干扰。

实验例6滴丸剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷的薄层色谱鉴别方法研究：

为了突出淫羊霍的特征，选择了淫羊霍苷作为特征斑点，但是由于制剂中存在较多与淫羊霍苷结构相近或极性相似的成分，例如黄芪中的黄芪甲苷等。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。薄层色谱法效果优劣的关键因素为展开条件，特别是展开剂的组成。因此，试验筛选了多种展开条件，部分展开条件与结果如下：

滴丸剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷的薄层色谱鉴别方法研究

条件                                                结果

苯-醋酸乙酯-甲醇＝8∶3∶1  硅胶H薄层板              分离不清晰

三氯甲烷-乙醇＝10∶3  硅胶G薄层板                   分离不清晰

石油醚-丙酮-冰醋酸＝10∶1∶1  硅胶H薄层板           阴性有干扰

苯-醋酸乙酯＝10∶1  硅胶G薄层板                     分离不清晰

丁酮-甲醇＝8∶5  硅胶H薄层板                        Rf值偏高

乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1  硅胶G薄层板     阴性有干扰

乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1  硅胶H薄层板     分离清晰，阴性无干扰

乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1  硅胶H薄层板     分离清晰，阴性无干扰

                                                    分离最清晰，Rf值适中，

乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1  硅胶H薄层板

                                                     阴性无干扰

经过筛选，确定了最佳条件：以硅胶H薄层板为固定相，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，在此条件下，淫羊霍特征斑点的Rf值适中，和其它斑点分离最清晰，阴性无干扰。

实验例7滴丸剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定

1仪器与试药

1.1主要仪器

高效液相色谱仪           426           Alltech

蒸发光散射检测器         2000ES        Alltech

电子分析天平             BP211D        SARTORIUS

超声波清洗机             KQ250B        昆山市超声仪器有限公司

1.2试药

黄芪甲苷 含量测定用 中国药品生物制品检定所

甲醇    分析纯    北京化工厂

乙腈    色谱级    迪马公司

2色谱条件：

色谱柱：Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm

检测器：蒸发光散射检测器

漂移管温度：105℃

载气量：2.7L/min

流动相：乙腈-水(34∶66)

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

试验选择了黄芪甲苷作为其指标成分，但是由于制剂中存在较多与黄芪甲苷结构相近或极性相似的成分，例如灵芝、熟地黄中的多糖类，淫羊霍中的淫羊霍苷等成分。只有排除这些成分的干扰，才能获得理想的色谱效果。高效液相色谱法效果优劣的关键因素为洗脱条件，特别是流动相的组成。因此，试验以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，筛选了多种流动相，部分流动相与结果如下：

色谱条件的考察

流动相条件                                        结果

甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠＝30∶70                  分离不完全

乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠＝10∶90                  出峰时间较长

甲醇-水＝30∶70                                   分离不完全

乙腈-水＝40∶60                                   分离不完全

乙腈-水＝28∶72                                   出峰时间较长

乙腈-水＝38∶62                                   分离清晰，阴性无干扰

乙腈-水＝30∶70                                   分离清晰，阴性无干扰

乙腈-水＝34∶66                                   保留时间适中，分离最清晰，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水＝34∶66为流动相，在此条件下，黄芪甲苷保留时间适中，峰行尖锐，对称，与相邻峰分离最清晰，阴性无干扰。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000。

3测定法

取本品，研细，取约5g，精密称定，加甲醇50ml，浸渍过夜，超声处理30分钟，滤过，药渣再加甲醇超声处理2次(30ml、20ml)，每次30分钟，滤过，残渣用甲醇20ml洗涤，滤过，合并滤液与洗涤液，挥至20ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，24g，内径1.5cm)上，用40％甲醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5％氢氧化钠溶液30ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml、20ml、20ml、20ml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，外标两点法对数方程计算，即得。

4阴性干扰排除试验为考察其它药材和辅料是否干扰黄芪甲苷的测定，除黄芩外，按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照溶液并测定。结果表明，阴性对黄芪甲苷的含量测定无干扰。

5线性关系的考察精密量取黄芪甲苷对照品溶液(1.621mg/ml)0.25ml、0.50m、1.00ml、1.50ml、2.00ml，分置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.08105mg/ml、0.1621mg/ml、0.3242mg/ml、0.4863mg/ml、0.6484mg/ml的对照品溶液，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定。以峰面积的对数为横坐标，黄芪甲苷的进样量对数为纵坐标做图，绘制标准曲线。结果如下：

黄芪甲苷线性关系

编号      峰面积对数      进样量对数

1         5.3043          -0.0912

2         5.8178          0.2098

3         6.3088          0.5108

4         6.6101          0.6869

5         6.9099          0.8818

回归方程：Y＝0.6044X-3.302

相关系数：γ＝0.9999

结果表明，黄芪甲苷在0.6272μg～1.8816μg之间线性关系良好。

6精密度试验精密吸取同一份黄芪甲苷对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，重复测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结果如下：

精密度试验

试验次数      1          2          3          4          5          平均值     RSD(％)

峰面积        1982545    2071547    2012577    2006358    1974747    2009755    1.88

结果表明，对照品溶液精密度良好。

7稳定性试验

7.1对照品稳定性试验精密吸取同一份黄芪甲苷对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、8、24小时进样测定，测定结果如下：

对照品稳定性试验结果

时间(h)    0        2        6        8        24        平均值        RSD(％)

峰面积     1982545  2071547  2012577  2006358  1974747   2009755       1.88

结果表明，对照品溶液在24小时内稳定性良好。

7.2供试品溶液稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、24小时进样测定，测定结果如下：

供试品溶液稳定性试验结果

测试时间(h)    0        2        4        8        24        平均值        RSD(％)

峰面积         1825183  1800041  1705847  1793514  1785475   1782012        2.53

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

8重复性试验取同一批号的本品，研细，取约5g(共5份)，精密称定，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作。结果如下：

重复性试验

编号        1        2        3        4        5       平均值    RSD(％)

含量(μg/粒)7.90     8.31     7.99     8.32     7.95    8.09      2.51

结果表明，重复性良好。

9加样回收率试验采用加样回收法，取同一批号的本品，研细，取约2.5g(共6份)，精密称定，分置具塞锥形瓶中；精密量取黄芪甲苷对照品溶液(0.3154mg/ml)1ml，分置上述具塞锥形瓶中，按色谱条件和测定法项下操作，测定结果如下：

黄芪甲苷加样回收率试验

编号     称量(g)    供试品中黄芪甲苷量    黄芪甲苷加入量    测得值    回收率

                    (mg)                  (mg)              (mg)      (％)

1        2.63015    0.3540                0.3154            0.6634    98.10

2        2.66211    0.3583                0.3154            0.6644    97.05

3        2.72501    0.3668                0.3154            0.6716    96.64

4        2.59857    0.3498                0.3154            0.6629    99.27

5        2.70633    0.3643                0.3154            0.6708    97.18

6        2.59374    0.3491                0.3154            0.6522    96.10

平均回收率＝97.39％，RSD＝1.08％。

10样品含量测定按色谱条件和测定法项下操作，测定十批样品，结果如下：

康艾扶正滴丸中黄芪甲苷的含量

批号             黄芪甲苷平均含量(μg/粒)

1                10.43

2                11.25

3                14.76

4                6.91

5                7.22

6                10.92

7                6.69

8                7.72

9                7.65

10               7.94

具体的实施方式

本发明的实施例1：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶1.7加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为5cm，滴速35d/min、料温75℃，将药液滴入冷却剂甲基硅油中，冷却剂温度为25℃，收集滴丸并吸除表面的甲基硅油，即得滴丸剂，口服，一日三次，20-40丸/次。

本发明的实施例2：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，再加入无水乙醇作润湿剂制软材，过24目筛制得湿颗粒，随即投入转速为40r/min的糖衣机中滚圆，并置于40℃烘箱中干燥后取出，再过筛选择24~40目的微丸进行包衣：包衣液为浓度4％的丙烯酸树脂溶液，进风温度为50℃，喷雾压力为1.5kg/cm²，输液速度为18ml/min，即得微丸剂。

本发明的实施例3：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，再加入5％乳糖、7％交联聚乙烯吡咯烷酮，混匀，加入乙醇，制软材，制粒，干燥，40目筛整粒，混匀后压片，另取薄荷脑，加乙醇适量使溶解，喷入，再喷入上述挥发油，混匀，密闭2小时，即得分散片剂。

本发明的实施例4：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶1.7加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为3cm，滴速30d/min、料温70℃，将药液滴入冷却剂甲基硅油中，冷却剂温度为20℃，收集滴丸并吸除表面的甲基硅油，即得滴丸。

本发明的实施例5：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶1.7加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为7cm，滴速40d/min、料温80℃，将药液滴入冷却剂甲基硅油中，冷却剂温度为30℃，收集滴丸并吸除表面的甲基硅油，即得滴丸。

本发明的实施例6：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶0.7加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为1cm，滴速20d/min、料温60℃，将药液滴入冷却剂中，冷却剂温度为10℃，收集滴丸并吸除表面的冷却剂，即得滴丸。

本发明的实施例7：灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g

取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶2.2加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为9cm，滴速50d/min、料温90℃，将药液滴入冷却剂中，冷却剂温度为40℃，收集滴丸并吸除表面的冷却剂，即得滴丸。

实施例8滴丸剂中黄芪甲苷的薄层色谱法鉴别

取本品粉末5g，加甲醇60ml，浸渍过夜，超声处理30分钟，滤过，药渣再加甲醇超声处理2次(30ml、20ml)，每次30分钟，滤过，残渣用甲醇20ml洗涤，滤过，合并滤液与洗涤液，挥至20ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，24g，内径1.5cm)上，用40％甲醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5％氢氧化钠溶液30ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml、20mml、20ml、20ml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，且阴性无干扰。

实施例9微丸剂中黄芪药材、黄芪甲苷的薄层色谱法鉴别

取本品1g，加50％乙醇50ml超声提取20分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，10g，内径1.0cm)上，用50％甲醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5％氢氧化钠溶液30ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次(30ml、20mml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芪药材1g，同法制成对照药材溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(15∶5∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

实施例10分散片剂中黄芪药材、黄芪甲苷的薄层色谱法鉴别

取本品粉末1g，加50％甲醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至10ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，10g，内径1.0cm)上，用40％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.2％氢氧化钠溶液20ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次(30ml、20mml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芪药材0.5g，同法制成对照药材溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(11∶7∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

实施例11滴丸剂中齐墩果酸的薄层色谱法鉴别

取本品粉末2.5g，加氯仿50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照溶液；另取齐墩果酸对照品，加氯仿制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，且阴性无干扰。

实施例12微囊剂中女贞子药材、齐墩果酸的薄层色谱法鉴别

取本品粉末1.5g，加醋酸乙酯30ml，超声15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材，加乙醇超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷(3∶2)混合溶液1ml使溶解，作为对照药材溶液；取齐墩果酸对照品，加氯仿制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，上述对照药材溶液、对照品溶液、供试品溶液2～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(4∶2.5∶1.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例13分散片剂中女贞子药材、齐墩果酸的薄层色谱法鉴别

取本品粉末1.0g，加醋酸乙酯30ml，超声15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材，加甲醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为对照药材溶液；取齐墩果酸对照品，加醋酸乙酯制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，上述对照药材溶液、对照品溶液、供试品溶液2～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(6∶1.5∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例14滴丸剂中淫羊霍苷的薄层色谱法鉴别

取本品3g，加水15ml，超声处理使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照溶液；另取淫羊霍苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，且阴性无干扰。

实施例15微囊剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷的薄层色谱法鉴别

取本品粉末2g，加水20ml，超声提取，水液用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊霍对照药材0.5g，加甲醇20ml提取，提取液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；取淫羊霍苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(11∶1.2∶0.8∶1.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例16微丸剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷的薄层色谱法鉴别

取本品粉末2g，加水20ml，超声提取，滤过，滤液用乙醚20ml振摇提取，弃去乙醚液，水液再用正丁醇30ml振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊霍对照药材0.5g，加乙醇20ml提取，提取液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；取淫羊霍苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(9∶0.8∶1.2∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例17滴丸剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定

取本品，研细，取约5g，精密称定，加甲醇50ml，浸渍过夜，超声处理30分钟，滤过，药渣再加甲醇超声处理2次(30ml、20ml)，每次30分钟，滤过，残渣用甲醇20ml洗涤，滤过，合并滤液与洗涤液，挥至20ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，24g，内径1.5cm)上，用40％甲醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5％氢氧化钠溶液30ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml、20ml、20ml、20ml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的对照品溶液。采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝34∶66为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，外标两点法对数方程计算，即得。本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.30mg。

实施例18分散片剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定

取本品，研细，取约3g，精密称定，加甲醇50ml，浸渍过夜，超声处理30分钟，滤过，药渣再加甲醇超声处理2次(30ml、20ml)，每次30分钟，滤过，残渣用甲醇20ml洗涤，滤过，合并滤液与洗涤液，挥至20ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，10g，内径1.5cm)上，用30％甲醇110ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5％氢氧化钠溶液30ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml、20ml、20ml、20ml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的对照品溶液。采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝30∶70为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，外标两点法对数方程计算，即得。本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.20mg。

实施例19微丸剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定

取本品，研细，取约3g，精密称定，加甲醇30ml，浸渍过夜，超声处理20分钟，滤过，药渣再加甲醇超声提取2次(20ml、20ml)，每次20分钟，滤过，残渣用甲醇20ml洗涤，滤过，合并滤液与洗涤液，挥至10ml，加于中性氧化铝柱(100～200目，10g，内径1.0cm)上，用40％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0.5％氢氧化钠溶液20ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(20ml、20ml、10ml、10ml)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.10mg的对照品溶液。采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝38∶62为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；分别精密吸取对照品溶液8μl、16μl、供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，外标两点法对数方程计算，即得。本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.15mg。

Claims (6)

1、一种用于肿瘤放化疗辅助用药的中药制剂，按照重量计算，它主要是由灵芝30g、黄芪30g、刺梨25g、熟地黄20g、女贞子20g、淫羊藿20g、姜制半夏10g制作而成的，其特征在于：取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶1.7～2.2加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为1～9cm，滴速20～50d/min、料温60～90℃，将药液滴入冷却剂中，冷却剂温度为10～40℃，收集滴丸并吸除表面的冷却剂，即得滴丸剂。

2、按照权利要求1所述的中药制剂的制备方法，其特征在于：所述制剂中的滴丸剂这样制备：取灵芝，粉碎成粗粉，与女贞子加乙醇浸泡12小时，加乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎；药渣与其余黄芪等五味药材，加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度80℃时为1.25～1.34的稠膏，干燥，粉碎，加入上述膏粉，按浸膏粉∶基质＝1∶1.7加入PEG4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴距为3～7cm，滴速30～40d/min、料温70～80℃，将药液滴入冷却剂甲基硅油中，冷却剂温度为20～30℃，收集滴丸并吸除表面的甲基硅油，即得。

3、按照权利要求1或2所述的中药制剂的检测方法，其特征在于：鉴别方法包括以下全部或部分内容：

a.制剂中黄芪甲苷、黄芪药材中一种或两种的薄层色谱法鉴别：

取本品适量，加50～100％甲醇或50～100％乙醇提取，滤过，滤液，加于100～200目的中性氧化铝柱上，用30～50％甲醇或20～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用氢氧化钠溶液溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加溶剂使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪药材，同法制成对照药材溶液；取黄芪甲苷对照品，制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝11～15∶5～7∶1.5～2.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

b.制剂中女贞子、齐墩果酸中一种或两种的薄层色谱法鉴别：

取本品适量，加三氯甲烷或乙酸乙酯提取，滤过，滤液浓缩或蒸干再加溶剂溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材，加甲醇或乙醇提取，滤过，滤液浓缩或蒸干再加溶剂溶解，作为对照药材溶液；取齐墩果酸对照品，制成为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯＝4～6∶1.5～2.5∶0.8～1.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

c.制剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷中一种或两种的薄层色谱法鉴别：

取本品适量，加水溶解或提取，水液用乙酸乙酯或三氯甲烷或正丁醇振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；取淫羊霍对照药材，滤液浓缩或蒸干再加溶剂溶解，作为对照药材溶液；另取淫羊霍苷对照品，制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝9～11∶0.8～1.2∶0.8～1.2∶0.8～1.2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

4、按照权利要求3所述的中药制剂的检测方法，其特征在于：鉴别方法包括以下全部或部分内容：

a.制剂中黄芪药材、黄芪甲苷中一种或两种的薄层色谱法鉴别：

取本品粉末适量，加甲醇超声提取，滤过，滤液，加于100～200目的中性氧化铝柱上，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用氢氧化钠溶液溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪药材，同法制成对照药材溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶6∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯365nm下显相同的橙黄色荧光斑点；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

b.制剂中女贞子药材、齐墩果酸中一种或两种的薄层色谱法鉴别：

取本品粉末适量，加三氯甲烷或乙酸乙酯，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷或乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材，加甲醇加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷＝3∶2混合溶液使溶解，作为对照药材溶液；取齐墩果酸对照品，加三氯甲烷或乙酸乙酯或乙醇制成为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯＝5∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

c.制剂中淫羊霍药材、淫羊霍苷中一种或两种的薄层色谱法鉴别：

取本品粉末适量，加水溶解或提取，水溶液用乙醚振摇提取，弃去乙醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液；取淫羊霍对照药材，加甲醇或乙醇提取，提取液浓缩，作为对照药材溶液；另取淫羊霍苷对照品，加甲醇或乙醇制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述对照药材溶液、对照品溶液中的一种或两种及供试品溶液适量，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

5、按照权利要求1或2所述的中药制剂的检测方法，其特征在于：制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定：

取本品，研细，取粉末适量，精密称定，加甲醇充分浸渍后超声提取，滤过，甲醇溶液加于100～200目中性氧化铝柱上，用30～50％甲醇或20～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用碱性溶液溶解，碱性溶液用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解并定容，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝30～38∶70～62为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；精密吸取对照品溶液、供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.15mg。

6、按照权利要求5所述的中药制剂的检测方法，其特征在于：制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法含量测定：

取本品，研细，取粉末适量，精密称定，加甲醇充分浸渍后超声提取，滤过，甲醇溶液加于100～200目中性氧化铝柱上，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用氢氧化钠溶液溶解，氢氧化钠溶液用水饱和的正丁醇振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加适量甲醇使溶解并定容，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水＝34∶66为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；本品每日用剂量含黄芪甲苷不得少于0.30mg。