CN1850208A - 一种驴胶补血制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种驴胶补血制剂的质量控制方法，该方法增加了驴胶补血制剂中党参、熟地黄、白术的定性鉴别，并对黄芪甲苷进行定量，使产品质量得到更有效的控制，并为临床疗效提供更可靠保证。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，特别涉及驴胶补血制剂的质量控制方法。
背景技术
驴胶补血颗粒(冲剂)是由阿胶、黄芪、党参、熟地黄、白术、当归经提取加工制成，具有滋阴补血，健脾益气，调经活血之功效。用于久病体虚，气虚血亏型月经不调。临床广泛应用于贫血症、白细胞减少症、血小板减少症和月经病等的治疗，疗效确切(余三红.驴胶补血冲剂的临床应用概述.湖南中医杂志.1999，(1)：40)。驴胶补血颗粒(冲剂)的配方和质量控制方法已经收入在中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十一册(WS3-B-2159-96)和中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十六册(WS3-B-3062-98)。分别描述如下：
标准编号：WS3-B-2159-96：
驴胶补血颗粒(冲剂)
Lüjiao Buxue Keli
【处方】阿胶 216g 黄芪 180g 党参 180g
熟地黄120g 白术 90g 当归 60g
【制法】以上六味，取当归、白术进行蒸馏，收集蒸馏液备用，残渣与黄芪、党参、熟地黄加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.08～1.10(75～80℃)的清膏，冷却后，加乙醇使含醇量为50～55％，搅匀，冷却，静置，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25，备用，阿胶粉碎成细粉，与蔗糖粉1800g混匀，加入上述浓缩液、蒸馏液，混匀，制成颗粒，干燥，过筛，制成2000g，即得。
【性状】本品为黄棕色的颗粒；味甜。
【鉴别】取本品10g，加乙醚20ml，浸泡1小时，滤过，滤液挥干，残渣加0.5％香草醛硫酸溶液，显紫红色。
【检查】总氮量 取本品1.5g，精密称定，照氮测定法(附录IXL第一法)测定，含氮量不得少于1.30％。
其他 应符合颗粒剂项下有关的各项规定(附录IC)。
【功能与主治】滋阴补血，健俾益气，调经养血。用于久病体虚，血亏气虚，妇女血虚、经闭、经少等症。
【用法与用量】口服，一次20g，一日4次。
【规格】每袋装20g
【贮藏】密封。
标准编号：WS3-B-3062-98：
驴胶补血颗粒
Lüjiao Buxue Keli
【处方】阿胶 黄芪 党参 熟地黄 白术 当归
【性状】本品为黄棕色的颗粒；味甜。
【鉴别】(1)取本品30g，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸至约1ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10靗，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝白色荧光斑点。
(2)取本品50g，研细，加甲醇60ml，浸泡4小时，时时振摇，滤过，滤液加于已处理好的中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇置水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】总氮量 取本品1.5g，精密称定，照氮测定法(附录IXL)测定，含氮量不得少于1.30％。
其他 应符合颗粒剂项下有关的各项规定(附录IC)。
【功能与主治】滋阴补血，健脾益气，调经活血。用于久病体虚，气虚血亏型月经不调等妇科疾患。
【用法与用量】开水冲服，一次20g，一日2次。
【规格】每袋装20g
【贮藏】密封，置阴凉干燥处。
由于上述标准采用的质量控制方法对当归和黄芪进行了定性鉴别和对总氮量进行定量，未对熟地黄、白术、党参的定性鉴别和黄芪甲苷进行定量，故不能达到很好的质量控制。由于中药成分复杂，且不同产地、不同季节、不同来源的药材质量差异较大，并直接影响制剂的质量，引起药物质量的变化和影响疗效。所以建立一个方法可行、稳定可靠的驴胶补血制剂质量控制方法有非常重要的现实意义。
发明内容
本发明就是基于上述质量控制方法的不足而进行的，目的在于建立一种更好的驴胶补血制剂质量控制方法，在原来标准的基础上增加熟地黄、白术、党参的定性鉴别和黄芪甲苷的定量方法，使制剂质量更可控，从而保证药物质量和临床疗效。
本发明可通过以下技术方法实现：
1.白术的定性鉴别
白术具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效，用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。主含挥发油，油中主要成分为苍术酮(Atractylone，C15H20O)、苍术醇(Atracylol，C15H20O)、白术内酯A(Butenolide A)、白术内酯B(ButenolideB)、3-β-乙酰氧基苍术酮(Acetoxyatractylon)、3-β-羟基苍术酮(Hydroxyatractylon)、芹烷二烯酮(Selina-4(14)，7(11)-dien-8-one)等，此外尚含倍半萜化合物，有桉树萜(Aronadendrene，C15H24)，还含氧双香豆素类(Oxicoumarines)、果糖、菊糖、白术多糖、丝氨酸、谷氨酸等多种氨基酸等成分。中国药典2000版一部收载了鉴别其挥发性成分苍术酮的鉴别方法，但苍术酮不稳定，在制剂中未能鉴别出。本发明鉴别驴胶补血制剂中白术的脂溶性成分。
1.1供试品溶液的制备：方法用极性或中等极性溶剂超声处理或回流提取成分的制备方法(固体制剂)，溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、乙醚或乙酸乙酯等；或液体、半固体制剂加适量硅藻土混匀，干燥，然后同上述方法同法制备的方法；对于液体制剂，最直接的方法为采用与水不互溶的中等极性溶剂萃取成分的制备方法，溶剂如乙醚、乙酸乙酯等；或固体制剂加水溶解后用与水不互溶的中等极性溶剂萃取成分的制备方法，溶剂如乙醚、乙酸乙酯等；另根据实践，该方法制备的供试品溶液也适合用于标准编号为WS3-B-3062-98驴胶补血颗粒项下当归鉴别方法。方法包括但不仅限于：
方法1：取驴胶补血颗粒35g(约相当于原药材15g)，加热水30ml溶解，加乙酸乙酯振摇提取2～3次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法2：取驴胶补血颗粒35g，研细，加甲醇回流1小时，过滤，滤液蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法3：取驴胶补血颗粒35g，加热水30ml溶解，加乙醚振摇提取2～3次，每次20～40ml，合并乙醚液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法4：取驴胶补血口服液(约相当于原药材15g)，加乙酸乙酯振摇提取2～3次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
方法5：取驴胶补血膏(约相当于原药材15g)，加硅藻土3g，混匀，干燥，粉碎，加乙酸乙酯50ml回流1小时，过滤，滤液蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，即得。
1.2白术对照药材溶液的制备：取白术对照药材1g，加水15ml，加热煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液加乙酸乙酯振摇提取2～3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。
1.3缺白术阴性对照溶液制备：按驴胶补血颗粒处方工艺制备缺白术阴性对照，取缺取缺白术阴性对照(相当于供试品溶液所含白术量)，同供试品溶液制备方法同法制备，即得。
1.4TLC鉴别法：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、缺白术阴性对照溶液及上述对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。缺取缺白术阴性对照无干扰。
2.熟地黄鉴别：
熟地黄具有滋阴补血，益精填髓的功效。用于肝肾阴虚，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，内热消渴，血虚萎黄，心悸怔忡，月经不调，崩漏下血，眩晕，耳鸣，须发早白。主含环烯醚萜、单萜及其苷类，如梓醇、二氢梓醇、乙酰梓醇、桃叶珊瑚苷等，此外还含有糖类、多种氨基酸等。本发明鉴别了熟地黄中的5-羟甲基糠醛成分。
2.1供试品溶液制备：同白术鉴别供试品溶液制备。
2.15-羟甲基糠醛对照品溶液制备：取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，即得。
2.3缺熟地黄阴性对照溶液制备：按驴胶补血颗粒处方工艺制备缺熟地黄阴性对照，取缺取缺熟地黄阴性对照(相当于供试品溶液所含熟地黄量)，同供试品溶液制备方法同法制备，即得。
2.4TLC鉴别法：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、缺熟地黄阴性对照溶液及对照品溶液各2～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺熟地黄阴性对照无干扰。
展开剂根据薄层板厚度及温、湿度等可以调节不同比例和溶剂成分，如正己烷-乙酸乙酯(8∶2)等，也适合于标准编号为WS3-B-3062-98驴胶补血颗粒项下与当归同时鉴别。能以能得到清晰的斑点达到良好鉴别为宜。
3.党参的鉴别：
党参具有补中益气，健脾益肺功效。用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴。主含糖和苷类，如丁香苷β-D-吡喃葡萄糖己苷、α-D-呋喃果糖乙醇苷、党参苷I等；还含生物碱及含氮成分、挥发性成分、三萜(齐墩果酸等)和铁、锌、铜、锰、钴、铬、钼、硒等20多种微量元素和氨基酸类等。
本发明鉴别驴胶补血制剂中党参的水溶性苷类成分，以党参对照药材为对照进行薄层色谱鉴别，以党参炔苷对照品用高效液相色谱法进行鉴别。
3.1供试品溶液制备：方法采用极性溶剂超声处理或回流提取样品，提取溶剂可以为水、甲醇、乙醇、丙酮等，提取液蒸干后用水微热使溶解，为达到更好的精制效果，提取液可先经低极性溶剂除去小极性成分，所述的低极性溶剂为石油醚、氯仿、乙醚等，水层继续用正丁醇萃取，合并正丁醇液，蒸干，残渣加适量甲醇溶解，即得；或通过D101大孔吸附树脂柱进一步精制，即：正丁醇液蒸干残渣加水溶解，微热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，续用50％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。对于液体制剂，最直接的方法为直接萃取，同上述方法制备。供试品溶液制备方法包括但不仅限于：
方法1：取驴胶补血制剂颗粒35g(约相当于原药材15g)，加甲醇50ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，用石油醚洗涤2次，每次15ml，取水层，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水微热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，续用50％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。
方法2：取驴胶补血口服液适量(约相当于原药材15g)，用石油醚洗涤2次，每次20ml，取水层，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水微热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，续用50％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。
方法3：取驴胶补血制剂颗粒30g，加乙醇50ml，加热回流60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，用石油醚(或三氯甲烷、乙醚)洗涤2次，每次15ml，取水层，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至5ml量瓶中，即得。
方法4：取驴胶补血制剂颗粒35g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水微热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，续用50％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。
3.2党参对照药材溶液制备：取党参对照药材2g，同法供试品溶液制备方法同法制备，即得。
3.3缺党参阴性对照溶液制备：按驴胶补血颗粒处方工艺制备缺党参阴性对照，取缺取缺党参阴性对照(相当于供试品溶液所含党参量)，同供试品溶液制备方法同法制备，即得。
3.4TLC鉴别法：照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、缺党参阴性对照溶液及党参对照药材溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5～1)或乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(2∶8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。缺党参阴性对照无干扰。
3.5HPLC鉴别法：
党参炔苷对照品溶液制备：精密称取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
检测波长确定：取上述党参炔苷对照品溶液，于200-400nm光谱扫描，其最大吸收波长为242，253，267，282nm处均有最大吸收，优选267nm为检测波长。
照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VID)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(18～25∶82～75)为流动相；检测波长为267nm；分别精密吸取党参炔苷对照品溶液与上述供试品溶液的甲醇稀释液(1→5)各20μl，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中，呈现出与对照品保留时间相同的色谱峰。缺党参阴性对照无干扰。
4.黄芪甲苷定量
黄芪具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白尿，糖尿病。主含皂苷类、多糖类、黄酮类、氨基酸类和无机类等成分。黄芪甲苷为其有效成分之一。本专利公开了驴胶补血制剂黄芪甲苷定量方法，所述的黄芪甲苷定量方法为以下高效液相色谱法、薄层色谱扫描法中的一种：
4.1供试品溶液的制备：方法包括：溶剂提取-正丁醇萃取精制—碱溶液洗涤除杂—正丁醇提取物—上大孔吸附树脂柱精制等关键步骤，方法采用极性溶剂溶解或超声处理或回流提取适量样品(约相当于原药材10～30g)，提取溶剂可以为水、甲醇、乙醇等，有机溶剂提取液蒸干后用水微热使溶解，水层用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用碱溶液充分洗涤2次，所述的碱溶液为化学上可接受的碱性化合物的水溶液，包括但不仅限于氨水、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠等，弃去碱洗液，正丁醇液蒸干(如为不挥发碱液则先用水洗涤至中性)，残渣加水使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水1～4倍柱体积洗脱，弃去水液，再用15％～40％乙醇约0.5～3倍柱体积洗脱，弃去洗脱液，继用60％～80％乙醇洗脱至洗脱液无色后继续1～3个柱体积，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
4.2高效液相色谱法：取驴胶补血制剂适量(约相当于原药材20g)，加热水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得对照品溶液的制备。照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VID)测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(30～36∶70～64)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。精密吸取对照品溶液10祃、20祃，供试品溶液20祃，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
4.3薄层色谱扫描法：取驴胶补血制剂适量(约相当于原药材15g)，加热水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，精密吸取供试品溶液2靗与6靗、对照品溶液2靗与4靗，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λS＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
4.4黄芪甲苷限量：通过上述2种定量方法对已上市三批驴胶补血颗粒(湖南九芝堂股份有限公司)黄芪甲苷的测定结果，并结合中国药典2005版黄芪药材中黄芪甲苷含量不得少于0.040％的限量规定，确定本品每服用量制剂(颗粒1袋)含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.30mg。
实施例1：驴胶补血颗粒(处方、制法同卫生部药品标准WS3-B-2159-96)
白术鉴别：取本品35g，加热水40ml溶解，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材1g，加水15ml，煎沸30分钟，放冷，滤过，滤液加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。
熟地黄鉴别：取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
党参鉴别：取本品35g，加水40ml加热使溶解，用石油醚洗涤2次，每次20ml，取水层，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次40ml，合并回收正丁醇液，残渣加水2ml微热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，续用50％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材2g，加水30ml，煎沸45分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。
黄芪甲苷含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品40g，加热水适量使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
测定法 精密吸取对照品溶液10祃、20祃，供试品溶液20祃，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
本品每袋含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.30mg。
实施例2：驴胶补血合剂
【处方】阿胶 216g 黄芪 180g 党参 180g
熟地黄120g 白术 90g 当归 60g
【制法】以上六味，阿胶加水使溶解，当归、白术进行蒸馏，收集蒸馏液备用，残渣与黄芪、党参、熟地黄加水煎煮，合并煎液，滤过，合并上述当归、白术煎液，浓缩，冷却，加乙醇使含醇量为40％～85％，搅匀，冷却，静置，滤过，滤液回收乙醇，浓缩，与上述阿胶液混匀，加入适量增溶剂、矫味剂、防腐剂，混匀，加水至2000ml，过滤，即得。
白术鉴别：取本品40ml，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材1g，加水15ml，煎沸30分钟，放冷，滤过，滤液加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。
熟地黄鉴别：取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
党参鉴别：取本品20ml，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VID)测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(22∶78)为流动相；检测波长为267nm。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱图中主峰的保留时间应与对照品一致。
黄芪甲苷含量测定：
取本品30ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，精密吸取供试品溶液2μl与6μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λS＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
本品每1ml含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于15μg。
Claims (7)
1.一种驴胶补血制剂的质量控制方法，其特征在于该方法至少包括以下方法中的一种：
a.对白术进行定性鉴别；
b.对熟地黄进行定性鉴别；
c.对党参进行定性鉴别；
d.对黄芪甲苷成分进行定量。
2.根据权利要求1所述的驴胶补血制剂的质量控制方法，所述的白术的定性鉴别方法为以下方法中的一种：
a.取驴胶补血制剂适量(约相当于原药材15g)，加水适量使溶解，加乙酸乙酯、乙醚任意一种溶剂振摇提取1～3次，合并提取液，蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取白术对照药材1g，加水适量，加热煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液同供试品溶液方法同法制备，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及上述对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。
b.取驴胶补血制剂适量(约相当于原药材15g)，研细，加甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中任意一种溶剂提取0.5～1小时，提取方法为超声处理和回流提取中的一种，提取液过滤，滤液蒸至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求1所述的驴胶补血制剂的质量控制方法，所述的熟地黄鉴别方法为：取5-羟甲基糠醛对照品，加甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI B)试验，吸取[白术鉴别]项下的供试品溶液及上述对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的驴胶补血制剂的质量控制方法，所述的党参鉴别方法为以下方法中的一种：
a.取驴胶补血制剂适量(约相当于原药材15g)，加水、甲醇、乙醇中的任意一种溶剂，超声处理或回流提取0.5～1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水微热使溶解，用石油醚、三氯甲烷、乙醚中的任意一种溶剂洗涤0～2次，取水层，用水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水微热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水洗脱，弃去水液，续用50％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及上述对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5～1)或乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(2∶8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。
b.精密称取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，作为党参炔苷对照品溶液。照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；检测波长为267nm；分别精密吸取对照品溶液与本权利要求方法a项下供试品溶液的甲醇稀释液(1→5)各20μl，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中，呈现出与对照品保留时间相同的色谱峰。
5.根据权利要求1所述的驴胶补血制剂的质量控制方法，所述的黄芪甲苷定量方法为以下方法中的一种：
a.取驴胶补血制剂适量(约相当于原药材20g)，加水、甲醇、乙醇中的任意一种溶剂，超声处理或回流提取0.5～1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，合并正丁醇液，用碱溶液充分洗涤1～2次，弃去碱洗液，用正丁醇饱和的水洗含不挥发碱的正丁醇液至中性，正丁醇液蒸干，残渣加水微热使溶解，放冷，通过D10l型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水约50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇约30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇约80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得对照品溶液的制备。照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
b.取本权利要求方法a项下供试品溶液的1/2浓缩液，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，精密吸取供试品溶液2μl与6μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λS＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
6.根据权利要求5所述的驴胶补血制剂的质量控制方法，所述的黄芪甲苷定量限度为：本品一次服用量含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.30mg。
7.权利要求1所述的驴胶补血制剂的质量控制方法，在颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂、煎膏剂、合剂、流浸膏剂与浸膏剂等制剂中的应用。
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