CN103930106A

CN103930106A - 中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物

Info

Publication number: CN103930106A
Application number: CN201380002998.2A
Authority: CN
Inventors: 山国彻; 川畑伊知郎; 吉田雅昭; 安藤英广
Original assignee: KOTARO PHARMACEUTICAL CO Ltd; Tohoku University NUC
Current assignee: KOTARO PHARMACEUTICAL CO Ltd; Tohoku University NUC
Priority date: 2012-06-21
Filing date: 2013-06-20
Publication date: 2014-07-16
Also published as: HK1199831A1; WO2013191236A1; JPWO2013191236A1; JP6033863B2

Abstract

本发明提供伴有学习·记忆障碍的中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物。中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物，该组合物是包含选自通式I所示化合物的至少一种化合物作为有效成分而形成的。通式I中，R₁、R₂、R₃和R₄为甲氧基、且R₅为H的化合物S4(橙黄酮)；R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₁和R₃为H的化合物S3(6-去甲氧基橘皮素)；以及R₁、R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₃为H的化合物S2(6-去甲氧基川陈皮素)。

Description

中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物

技术领域

本发明涉及伴有学习·记忆障碍的中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物。

背景技术

在现代的高龄化社会中，阿尔茨海默病和帕金森病等中枢神经变性疾病的患者增加，正成为社会问题。其中，阿尔茨海默病是一种伴有认知功能障碍、学习·记忆障碍等的进行性中枢神经变性疾病，认为其原因在于：由降低对学习·记忆重要的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体功能的β-淀粉状蛋白肽的聚合和蓄积引起的神经变性(参照非专利文献1)。

通常，记忆至少包括三个过程、即记忆的获得(以下，在本说明书中还称作“铭记”；encoding)、保持(retention)和想起(以下，在本说明书中还称作“追忆”；recall)的过程，认为这三个过程的机理不同。在阿尔茨海默病中，若神经变性进行，则形成阻碍新记取的能力即记忆的获得(或学习)或铭记、同时还无法保持和想起过去获得的记忆的状况。其结果，理解为作为本疾病的核心症状的学习·记忆障碍变得明显。

其中，作为具有改善记忆的保持和想起能力的作用的天然黄酮类之一，已知有式(I-5)所示的川陈皮素(Nb)(参照专利文献1或非专利文献1或2)，还已知川陈皮素对神经细胞具有伸长神经突起的作用(参照专利文献2)。

[化学式1]

同样，已知作为天然黄酮类之一的式(I-1)所示橘皮素(S1)对神经细胞具有伸长神经突起的作用(参照专利文献2)。

[化学式2]

在学习·记忆形成的神经回路的海马中，作为控制学习·记忆的重要的神经细胞内信号传递路径，近年来明确了与NMDA受体连接的环腺苷3’,5’-1磷酸(cAMP)/cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)/ERK(细胞外信号调节激酶)/cAMP应答序列(CRE)结合蛋白(CREB)系统。已经明确：若该神经细胞内信号传递路径(cAMP/PKA/ERK/CREB信号传递路径)被激活，则学习·记忆能力亢进，同时还引起cAMP应答序列(CRE)依赖性转录活性(以下，在本说明书中还称作“CRE依赖性转录活性”)的增强(参照非专利文献3)。另外还暗示：在阿尔茨海默病患者脑内，cAMP/PKA/ERK/CREB信号传递路径的功能降低(参照非专利文献4)。事实上，证实这种情况的证据也有报道(参照非专利文献5)。

已知该CRE依赖性转录活性不仅与学习记忆能力有关，还与作为多巴胺(DA)的生物合成酶的酪氨酸羟化酶的转录调节有关。

本发明人之前公开了：与来自现有的柑橘类果皮干燥物(陈皮)的提取物相比，来自含有高比例的川陈皮素的特殊柑橘类果皮干燥物(N陈皮、橘皮和大红桔的果皮等)的提取物显示出优越的中枢神经变性疾病改善效果；以及显示出CRE依赖性转录活性和学习·记忆障碍改善作用(参照专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2005/082351号公报；

专利文献2：日本特开2002-60340号公报；

专利文献3：国际公开2011/105568号公报；

非专利文献

非专利文献1：日本薬理誌(Folia Pharmacol. Jpn.) 132, 155-159(2008)；

非专利文献2：The Journal of Pharmacology and Experimental

Therapeutics, 第321卷, No.2, 第784-790页(2007)；

非专利文献3：Nat Neurosci. 1, 595-601(1998)；

非专利文献4：Trends in Pharmacological 27, 33-40(2006)；

非专利文献5：Brain Research 824, 300-303(1999)。

发明内容

发明所要解决的课题

在这样的状况下，若开发出超过川陈皮素(Nb)和橘皮素(S1)的抗中枢神经变性疾病活性、特别是阿尔茨海默病的改善和/或治疗效果的化合物，则可以期待着实现该疾病的有望的根本性治疗药的开发。该目标的实现会朝着克服现代高龄化社会中的认知症等难治进行性神经疾病大幅前进。

而且，若开发出不仅象川陈皮素那样改善学习·记忆障碍中的记忆的保持和想起障碍、而且除改善记忆的保持障碍和想起障碍外还改善记忆的获得障碍和铭记障碍而具有超过川陈皮素的活性的化合物，则可将其应用于具有新的作用机制的认知症、特别是阿尔茨海默病等的治疗药等，其结果，具有较现有药品优异的药效，期待着有效药的研制。

用于解决课题的方法

本发明人发现：在专利文献3中，含有高浓度的川陈皮素的陈皮(以下，在本说明书中还称作“N陈皮”)、橘皮和大红桔的果皮的中枢神经变性疾病改善效果、特别是CRE依赖性转录促进活性显示出超过N陈皮、橘皮和大红桔的果皮中所含的浓度的川陈皮素所显示出的促进活性的值。由此设想该N陈皮、橘皮和大红桔的果皮的CRE依赖性转录促进活性源自其中所含的川陈皮素和其以外的成分的协同作用，对该活性本身进行了深入的探索研究。其结果，在本发明中查明了：作为天然黄酮的一种且具有特定结构的多种化合物或它们的特定组合对N陈皮和上述两种柑橘果皮的活性有贡献。尤其是，首次发现：作为这些化合物中的一种，橙黄酮对该活性的贡献度大，而且其活性强度远远超过川陈皮素和橘皮素的CRE依赖性转录促进活性。更令人惊奇的是，在本发明中证实了：橙黄酮不仅改善记忆的保持障碍和想起障碍，还改善记忆的获得障碍和铭记障碍。本发明人基于迄今为止谁都没有发现的上述事实，完成了本发明。

即，本发明如下。

项1：中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物，该组合物是包含选自通式I所示化合物的至少一种化合物作为有效成分而形成的：

[化学式3]

通式I中，

R₁、R₂、R₃和R₄为甲氧基、且R₅为H的化合物S4(橙黄酮)；

R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₁和R₃为H的化合物S3(6-去甲氧基橘皮素)；以及

R₁、R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₃为H的化合物S2(6-去甲氧基川陈皮素)。

项2：项1所述的组合物，其中，有效成分为式I-4所表示的化合物S4：

[化学式4]

。

化合物S4(橙黄酮)的CRE依赖性转录活性的增强效果非常高，因此优选。

项3：项1所述的组合物，其中，有效成分为式I-4所表示的化合物S4(橙黄酮)和式I-3所表示的化合物S3(6-去甲氧基橘皮素)和/或式I-2所表示的化合物S2(6-去甲氧基川陈皮素)的混合物：

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

。

项4：项1～3中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病、学习障碍、记忆障碍、帕金森病、皮克氏病或亨廷顿舞蹈病。

项5：项1～4中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病为学习障碍或记忆障碍。

项6：项5所述的组合物，其中，记忆障碍为记忆的获得障碍、保持障碍或想起障碍、铭记障碍、追忆障碍、记忆增进障碍、记忆减退障碍或记忆错误障碍。

项7：项6所述的组合物，其中，记忆障碍为记忆的获得障碍或铭记障碍。

项8：项4所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病。

项9：项4所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病为帕金森病。

项10：项1～9中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病的改善和/或治疗是通过cAMP应答序列依赖性转录活性(CRE依赖性转录活性)的增强或记忆形成功能的增强来实现的。

项11：项1～10中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病的改善和/或治疗是通过cAMP应答序列依赖性转录活性(CRE依赖性转录活性)的增强、或记忆的获得、记忆的保持或想起能力的增强来实现的。

项12：项1～11中任一项所述的组合物，其中，化合物S4、S3和S2是从柑橘类果皮的干燥物中进行水提取而得到的。

项13：项12所述的组合物，其中，柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、橘或大红桔。

项14：项1～13中任一项所述的组合物，该组合物是进一步混合选自威灵仙、乌药、延胡索、黄芪、黄芩、黄柏、远志、藿香、葛根、干姜、甘草、桔梗、菊花、枳实、杏仁、桂皮、红花、香附子、厚朴、牛膝、吴茱萸、五味子、柴胡、山栀子、地黄、芍药、生姜、升麻、神麹、石膏、川芎、前胡、苍术、苏木、紫苏叶、大黄、大枣、大腹皮、泽泻、竹茹、知母、钩藤、天麻、天门冬、当归、桃仁、人参、麦芽、麦冬、半夏、白芷、白术、槟榔子、茯苓、防己、芒硝、防风、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、龙胆和羌活以及它们中的两种以上的组合的生药成分而形成的。

项15：项1～14中任一项所述的组合物，该组合物为口服给药形态。

项16：项15所述的组合物，其中，口服给药形态为细粒剂、茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂的形态。

项17：项1～16中任一项所述的组合物，该组合物为中枢神经变性疾病治疗用的药物组合物。

项18：中枢神经变性疾病的治疗方法，其特征在于：对需要治疗的对象给予有效量的选自通式I所示化合物的至少一种化合物，

[化学式8]

[式中，各记号与项1中记载的记号同义]。

项19：选自通式I所示化合物的至少一种化合物在中枢神经变性疾病的改善和/或治疗中的应用，

[化学式9]

[式中，各记号与项1中记载的记号同义]。

项20：食品，该食品包含选自通式I所示化合物的至少一种化合物和添加成分，

[化学式10]

通式I中，

R₁、R₂、R₃和R₄为甲氧基、且R₅为H的化合物S4；

R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₁和R₃为H的化合物S3；以及

R₁、R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₃为H的化合物S2。

项21：项20所述的食品，该食品包含式I-4所表示的化合物S4，

[化学式11]

。

项22：项20或21中任一项所述的食品，该食品是中枢神经变性疾病改善用的食品。

发明效果

本发明的S4(橙黄酮)具有远远超过以往已知的川陈皮素(Nb)和橘皮素(S1)的CRE依赖性转录活性的促进效果的CRE依赖性转录增强活性。而且，S4不仅具有记忆的保持和想起障碍的改善作用，还具有在川陈皮素中没有确认到的记忆的获得障碍和铭记障碍的改善作用，因此显示出中枢神经变性疾病、特别是阿尔茨海默病的显著的改善和/或治疗效果。另一方面，S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)利用与作为Fr.2-2(非川陈皮素分馏)的成分的上述S4(橙黄酮)或S1(橘皮素)协同作用以增强CRE依赖性转录活性的独特活性，在认知症等中枢神经变性疾病的改善和/或治疗中显示出优异的效果。

本发明的S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)还激活PKA/ERK/CREB信号传递，具有改善和/或治疗作为阿尔茨海默病的症状之一的学习·记忆障碍的效果。本发明的S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)特别是在学习·记忆障碍改善效果中显示出记忆的获得、保持和想起能力以及铭记能力和追忆能力的增强效果。更优选为记忆的获得能力或铭记能力的增强效果。由于CRE依赖性转录活性还与多巴胺合成的限速酶的酪氨酸羟化酶的转录增强密切相关，因此本发明的S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)进一步显示出多巴胺(DA)合成·促进作用或通过多巴胺合成·分泌促进作用而产生的帕金森病的改善和/或治疗效果。

附图说明

图1显示从N陈皮提取物中分离本发明的黄酮类化合物(S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素))的步骤的前段部分；

图2显示本发明的S4、S3和S2以及比较化合物(川陈皮素(Nb)和橘皮素(S1))的化学结构；

图3显示海马神经细胞中本发明的S4、S3和S2以及比较化合物(Nb和S1)的CRE依赖性转录活性。图中，* p＜0.05、** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)；§§ p＜0.01显示与Nb的显著差异；

图4显示海马神经细胞中本发明的橙黄酮(S4)和比较化合物川陈皮素(Nb)的CRE依赖性转录活性的浓度变化依赖性。图中，** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)；

图5显示海马神经细胞中多甲氧基黄酮类组分(Fr.2、Fr.2-1和Fr.2-2；各浓度与N陈皮中的含有比例对应)、由Fr.2-1和Fr.2-2重新构成的混合组分(Fr.2-1+Fr.2-2；各浓度与N陈皮中的含有比例对应)、重新构成的甲氧基黄酮类(REC；0.222μg/mL的橙黄酮+0.135μg/mL的6-去甲氧基橘皮素+0.177mg/mL的6-去甲氧基川陈皮素+0.585mg/mL的橘皮素+1.89μg/mL(5.0μM)的川陈皮素；各浓度与N陈皮中的含有比例对应)和对照(生理盐水)的CRE依赖性转录活性。图中，** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照的显著差异(检验结果)；

图6显示海马神经细胞中浓度统一为30μM的多甲氧基黄酮类组分(Fr.2、Fr.2-1和Fr.2-2)和川陈皮素以及对照(生理盐水)的CRE依赖性转录活性。图中，** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照的显著差异(检验结果)；

图7显示橙黄酮的MK801诱发性记忆的获得障碍的改善效果。纵轴显示畏缩行为(%)，横轴显示休克事件(次数)。图中，*** p＜0.001、**** p＜0.0001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，§§ p＜0.01、§§§ p＜0.001显示与“MK801”的显著差异；

图8显示橙黄酮对MK801诱发性记忆的保持和想起障碍的作用。纵轴显示畏缩行为(%)。图中，**** p＜0.0001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，§§§ p＜0.001显示与“MK801”的显著差异；

图9显示组分2(Fr.2)的MK801诱发性记忆的获得障碍的改善效果。图中，*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，## p＜0.01显示与“MK801”的显著差异；

图10显示组分2(Fr.2)对MK801诱发性记忆的保持和想起障碍的作用。图中，*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，## p＜0.001显示与“MK801”的显著差异；

图11显示川陈皮素给药中的学习试行的结果；

图12显示川陈皮素给药中的确认试行的结果。图中，*显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，#显示与“MK801”的显著差异。

具体实施方式

以下，对用于实施本发明的方式进行详细说明。

在本发明中用作有效成分的多甲氧基黄酮类化合物是指S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)这三种中的至少一种化合物。有效成分可以是选自S4、S3和S2的任意两种化合物的混合物，也可以是这三种化合物的混合物。

其中，S4(橙黄酮)是式I-4所表示的化合物：

[化学式12]

；

S3(6-去甲氧基橘皮素)是式I-3所表示的化合物：

[化学式13]

；以及

S2(6-去甲氧基川陈皮素)是式I-2所表示的化合物：

[化学式14]

。

本发明的多甲氧基黄酮类S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)通常是由柑橘类植物的果皮得到的化合物。柑橘类是指选自日本立花桔(Citrus tachibana)、高丽立花桔(C. nipponokoreana)、花柚、四季橘、枳实、酸橙(Citrus aurantium)、地中海柑(Citrus deliciosa)、丹西红桔、大红桔(Citrus aurantium)、小红桔(C. erythrosa)、无核纪州蜜柑、福克雷蜜柑、卡蒲橘、太田椪柑、乳桔(Citrus kinokuni)、酸橘、印度酸橘、柑子(Citrus leiocarpa)、奇利蜜柑、宜昌柠檬(香圆, C. wilsonii Tanaka)、温州蜜柑(Citrus unshiu Markovich)、芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、扁平橘(平实柠檬，Citrus depressa)、香橙(Citrus junos)、文旦、日向夏、椪柑(Citrus tangerina)、夏蜜柑(Citrus natsudaidai)、脐橙、八朔(Citrus hassaku)、伊予柑和卡抱斯(Citrus sphaerocarpa)的植物。

柑橘类的果皮作为陈皮或橘皮等生药在市场上大量流通。

陈皮例如是指温州蜜柑(Citrus unshiu Marcowicz)或芸香科桔的成熟果皮，橘皮例如是指日本立花桔或高丽立花桔等橘的成熟果皮。

本发明中用作原料的陈皮类(即N陈皮、橘皮或大红桔的果皮等)是指，将上述柑橘类的果皮在收率(干燥后质量/干燥前质量的比例)达到20～50%的条件下进行干燥而得到的物质。作为加热干燥条件，可以列举在50～100℃的温度下加热干燥1～3小时，优选在60℃的温度下加热干燥2小时。

本发明的化合物是以来自上述柑橘类果皮的提取物(即来自N陈皮、橘皮或大红桔的果皮等的提取物)为原料的化合物，优选为通过水提取得到的提取物。本说明书中优选的水提取是指在60～100℃下利用水进行的提取。

本发明的多甲氧基黄酮类S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)，可以将上述提取物进一步经过普通的分馏方法、例如柱层析分离进行分离。

＜一般的制备方法＞

图1显示在初始原料中使用N陈皮提取物的分离方法的非限定性的例子。根据该图，对S4、S3和S2的分离方法的概要进行说明。

即，将规定量的N陈皮提取物悬浮于极性溶剂(例如，30%乙腈/70%纯净水等)中，使该溶液流过填充有表面处理硅胶(例如，十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)等)的固相提取柱。适当分析流出液的组成(例如，薄层层析等)，确认成分的分离性，同时使极性溶剂(例如，30%乙腈/70%纯净水等)流经该柱，将洗脱液减压浓缩，从而得到Fr.1。再使用疏水性洗脱溶剂(例如，甲醇等)，得到下面的洗脱组分，在减压下馏去溶剂，则得到Fr.2。

然后，对于Fr.2，以极性溶剂(例如，40%乙腈/60%纯净水等)作为洗脱液进行ODS柱层析。改变洗脱液的极性(例如，丙酮/己烷(1：1)、以及乙酸乙酯/己烷(4：1)等的组合等)，反复进行硅胶柱层析，从而得到包含高纯度的川陈皮素的Fr.2-1。另一方面，以不含川陈皮素的组分作为Fr.2-2。

这里得到的Fr.2-1是通过薄层层析(TLC)确认了川陈皮素的存在、且包含高纯度的川陈皮素(Nb)的川陈皮素组分，Fr.2-2是从Fr.2中除去Fr.2-1后的非川陈皮素组分。

接下来，对于上述得到的Fr.2-2(非川陈皮素组分)，使用调节了亲水性的洗脱液(例如，60%甲醇/40%纯净水等)，通过ODS柱层析反复进行分离纯化。得到的洗脱液浓缩后，通过重结晶等进行纯化，从而可以分离4种结晶性物质，将它们称作S1～S4。通过IR、UV、¹H NMR、¹³C NMR和ESI-MS分析S1～S4，从而可以确定它们的结构。

接下来，对本发明的组合物的药理活性进行说明。

本发明的包含多甲氧基黄酮类S4(橙黄酮)、S3(6-去甲氧基橘皮素)和S2(6-去甲氧基川陈皮素)中的至少一种而形成的组合物，可用于改善和/或治疗中枢神经变性疾病。

这里，在本发明的实施方式中，中枢神经变性疾病的改善和/或治疗是通过cAMP应答序列依赖性转录活性(CRE依赖性转录活性)的增强来实现的，进一步通过以该活性的增强为基础的记忆的获得、记忆的保持和想起能力等记忆形成功能的增强来实现的。因此，CRE依赖性转录活性的增强有助于记忆形成功能障碍的改善，不仅有助于改善学习记忆能力，还有助于多巴胺(DA)合成·分泌促进及其所伴随的帕金森病的改善。

另外，在某实施方式中，中枢神经变性疾病的改善和/或治疗是通过CRE依赖性转录活性促进来实现的。

另外，在某实施方式中，中枢神经变性疾病是指与学习和/或记忆的障碍有关的疾病，优选为学习障碍或记忆障碍。中枢神经变性疾病更优选为记忆的获得、保持和/或想起障碍、铭记障碍、追忆障碍、记忆增进障碍、记忆减退障碍或记忆错误障碍，特别优选为记忆的获得障碍或铭记障碍。

另外，在某实施方式中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病。

另外，在某实施方式中，中枢神经变性疾病为帕金森病，其改善和/或治疗是通过多巴胺合成能力促进作用来实现的。

在本说明书中，作为“中枢神经变性疾病”一词，可以列举阿尔茨海默病、特别是学习·记忆障碍、帕金森病、皮克氏病、亨廷顿舞蹈病等。

在本说明书中，作为“记忆障碍”一词，可以列举记忆的获得、保持和/或想起障碍、铭记障碍、追忆障碍、记忆增进障碍、记忆减退障碍、记忆错误障碍等。

作为本发明化合物(S4、S3和S2)的抗阿尔茨海默病活性和/或抗帕金森病活性，可以列举与中枢神经变性疾病的发病机制有关的学习·记忆障碍的改善或多巴胺合成的促进。具体是指CRE(cAMP应答序列)依赖性转录活性、多巴胺含量上升活性、多巴胺分泌促进活性等。

更详细而言，本发明的中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物可以显示出与有效成分(S4、S3、S2或它们的组合)的含量和各成分间的比例相符的活性程度。例如，当上述3种化合物的总含量相同时，CRE依赖性转录活性最高的S4(橙黄酮)的比例高的组合物整体显示出高的CRE依赖性转录活性。

在本说明书中，学习·记忆障碍是指降低记忆过程中的以下三种能力的障碍：记忆的获得或铭记(encoding)、保持(retention)和想起或追忆(recall)能力。在本说明书中，“获得”和“铭记”的用语是指获取信息作为记忆，“保持”是指保存或维持已获取的信息，“想起”和“追忆”是指想起所保存或维持的信息。

通过在本发明的化合物(S4、S3和S2)中进一步适当混合生药成分和/或添加成分，可以制备本发明的组合物。在本说明书中，本发明的组合物可以是中枢神经变性疾病用治疗药，作为该治疗药，可以列举抗阿尔茨海默病药和/或抗帕金森病药、即具有抗阿尔茨海默病活性和/或抗帕金森病活性的药品。

在本说明书中，“药品”一词是指用于人和动物的疾病的诊断、治疗和/或预防的物质，包括含有生药的药品、例如含有生药制剂和中药。优选的药品为口服给药形态，更优选为细粒剂、茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂。

在本说明书中，“食品”一词包括所谓的健康食品和根据是否有当局的许可等或食品的目的、功能等的不同进行区别的特定保健用食品和营养功能食品等保健功能食品。本说明书中优选的食品形态为细粒、凝胶材料(ゼリーの素)、皮(ピール)、果子酱或茶，更优选为细粒或茶。

本发明的中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物中，作为有效成分的S4、S3和S2的含有率(在本说明书中还称作“有效量”)可以根据对象的使用目的(药品或食品)、性别、症状等适当调整，相对于100重量%的该组合物，通常为约0.001～约5重量%，优选约0.01～约3重量%，更优选为约0.02～约1.2重量%的范围。

作为本说明书中的生药成分，例如可以列举：威灵仙、乌药、延胡索、黄芪、黄芩、黄柏、远志、藿香、葛根、干姜、甘草、桔梗、菊花、枳实、杏仁、桂皮、红花、香附子、厚朴、牛膝、吴茱萸、五味子、柴胡、山栀子、地黄、芍药、生姜、升麻、神麹、石膏、川芎、前胡、苍术、苏木、紫苏叶、大黄、大枣、大腹皮、泽泻、竹茹、知母、钩藤、天麻、天门冬、当归、桃仁、人参、麦芽、麦冬、半夏、白芷、白术、槟榔子、茯苓、防己、芒硝、防风、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、龙胆和羌活以及它们中的两种以上的组合。

本发明的化合物(S4、S3和S2)可以作为生药成分混合在本发明的组合物中。

作为本说明书中的添加成分，只要是本领域通常使用的成分即可，没有特别限定，例如可以列举：抗坏血酸、阿斯巴甜、苹果香料、橙子香料、卡拉胶、焦糖、巴西棕榈蜡、羧甲纤维素、羧甲纤维素钙、还原麦芽糖液糖、还原麦芽糖糖稀、含水二氧化硅、木糖醇、枸橼酸、枸橼酸三钠、细砂糖、轻质硅酸酐、凝胶化剂(FG-2266、新田ゼラチン株式会社)、合成硅酸铝·羟丙基淀粉·结晶纤维素、白蜂蜡、氧化钛、食盐、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸镁、纤维素、滑石粉、糊精、玉米淀粉、乳糖、蜂蜜、羟丙基甲基纤维素、微粒二氧化硅、普鲁兰、果胶、麦芽糖、硅铝酸镁、甲基纤维素、卵磷脂、刺槐豆胶和它们的组合。

添加成分可以按照本领域中通常采用的配比进行混合，例如，相对于100重量%的本发明的组合物，通常为0.0～70.0重量%，优选5.0～50.0重量%，更优选为10.0～40.0重量%。

实施例

在以下的实施例中，用于提取化合物S4、S3和S2的初始原料中使用的N陈皮可以从小太郎汉方制药株式会社获取。

＜制备例1＞ (N陈皮提取物的制备)

如下操作，制备本发明中使用的初始原料的N陈皮。

通过将含有高比例(0.44重量%)的川陈皮素的芸香科桔的果皮阴干、晒干或加热干燥，制备N陈皮。进行加热干燥直至陈皮的收率(干燥后质量/干燥前质量的比例)达到20～50%，在温度60℃下加热干燥2小时。将如此操作得到的N陈皮细切，在约10g细切物中加入400mL纯水，进行加热。混合物沸腾后，在100℃下提取1小时。然后，通过2块纱布进行过滤，将滤液冷冻干燥，得到N陈皮提取物。N陈皮提取物的收量为3.5g，收率为35%。

＜实施例1＞

使用以制备例1的方式操作得到的、以干燥重量计为81.11g的N陈皮提取物，按照以下所示的程序进行分离。

在烧瓶中将81.11g N陈皮提取物悬浮于360mL 30%乙腈/70%纯净水中，让液体在Varian Bond Elut C18(10g)中流过，使100mL 30%乙腈/70%纯净水流经该柱，将洗脱液减压浓缩，则得到79.95g Fr.1。再用50mL甲醇洗脱，将所得洗脱液在减压下馏去溶剂，则得到1.16g Fr.2。对于0.505g Fr.2，以40%乙腈/60%纯净水作为洗脱液进行ODS柱层析，再以丙酮/己烷(1：1)、以及乙酸乙酯/己烷(4：1)为洗脱液，反复进行硅胶柱层析，与含有川陈皮素的组分合并，得到0.224g包含高纯度的川陈皮素的Fr.2-1。再合并不含川陈皮素的组分，作为Fr.2-2(0.314g)。图1显示出含N陈皮提取物的成分的柱层析等分离操作。

如此操作，得到79.95g Fr.1以及0.224g Fr.2-1和0.314g Fr.2-2。如以下分析项中所述，确定Fr.2-1是川陈皮素(Nb)。

关于Fr.2-2(非川陈皮素组分)，根据薄层层析分析的结果，判断其含有多种成分，因此按照以下实施例2所示的程序进一步通过柱层析进行分离。

＜实施例2＞ (Fr.2-2的柱层析分离)

对200mg Fr.2-2实施ODS柱层析，以40%乙腈/60%纯净水作为洗脱溶剂进行分馏。再通过以60%甲醇/40%纯净水作为洗脱溶剂的ODS柱层析进行纯化、重结晶，得到20mg S1、11mg S2、12mg S3和14mg S4。

如以下分析项中所述，S4、S3、S2和S1分别被确定是橙黄酮(S4)、去甲氧基橘皮素(S3)、去甲氧基川陈皮素(S2)和橘皮素(S1)。

实施例1和2中得到的结果见图2。

＜分析例＞

通过IR、UV、¹H-NMR、¹³C-NMR和ESI-MS分析实施例1和2中得到的各分馏成分，由此确定它们的结构。所得结果如下所示。

＜N陈皮提取物的Fr.2-1的分析结果＞

根据下述数据和通过TLC和HPLC与市售标准品进行的比较，确定Fr.2-1为川陈皮素。

无色针晶；UV：λ_max(MeOH)nm(logε)：248(4.23)、269(4.19)、331(4.35)；阳离子ESI-MS m/z 403([M+H]⁺)。

＜从N陈皮提取物的Fr.2-2中分离的化合物S1～S4的分析结果＞

[S1]：根据下述数据，确定是橘皮素(S1)。

无色针晶；mp 150-151℃；IR_max(KBr)cm^-1：1650、1608、1514、1465、1408、1364、1266、1182、1110、1074、1019、970、830; UV：λ_max(MeOH)nm(logε)：323(4.46)、270(4.31); 阳离子ESI-MS m/z 373([M+H]⁺)。

[S2]：根据下述数据，确定是6-去甲氧基川陈皮素(S2)。

无色针晶；mp 199-200℃；IR λ_max(KBr)cm^-1：1640、1601、1514、1427、1327、1259、1234、1124、1048、1021、843; UV λ_max(MeOH)nm(logε)：338(4.31)、269(4.29)、248(4.27); ¹H NMR(CDCl₃)：δ7.57(1H、dd、J＝10.7、2.8Hz)、7.40(1H、d、J＝2.8Hz)、6.97(1H、d、J＝10.7Hz)、6.60(1H、s)、6.42(1H、s)、3.99(3H、s)、3.97(3H、s)、3.95(3H、s)、3.94(3H×2、s); ¹³C NMR(CDCl₃)：δ 177.8、160.5、156.4、156.3、151.9、151.7、149.2、130.7、124.0、119.5、111.1、108.9、108.5、107.1、92.4、61.5、56.5、56.3、56.0、55.9; 阳离子ESI-MS m/z 373([M+H]⁺)。

[S3]：根据下述数据，确定是6-去甲氧基橘皮素(S3)。

无色针晶；mp 213-214℃; IR λ_max(KBr)cm^-1：1638、1598、1510、1342、1249、1211、1184、1112、1048、841、802; UV λ_max(MeOH)nm(logε); 310(4.29)、269(4.37); ¹H NMR(CDCl₃)：δ 7.86(2H、d、J＝11.3Hz)、7.00(2H、d、J＝11.3Hz)、6.58(1H、s)、6.41(1H、s)、3.98(3H、s)、3.96(3H、s)、3.93(3H、s)、3.86(3H、s); ¹³C NMR(CDCl₃)：δ 177.8、162.1、160.6、156.4、156.2、151.9、130.7、127.6、123.8、114.4、109.0、106.9、92.5、61.5、56.6、56.2、55.4; 阳离子ESI-MS m/z 343([M+H]⁺)。

[S4]：根据下述数据，确定是橙黄酮(S4)。

无色针晶；mp 175-176℃; IR λ_max(KBr)cm^-11636、1601、1516、1421、1326、1253、1121、1022、843; UV λ_max(MeOH)nm(logε)：329(4.39)、239(4.30); ¹H NMR(CDCl₃)：δ 7.50(1H、dd、J＝10.7、2.5Hz)、7.31(1H、d、J＝2.5Hz)、6.95(1H、d、J＝10.7Hz)、6.78(1H、s)、6.59(1H、s)、3.98(3H、s)、3.97(3H、s)、3.96(3H、s)、3.94(3H、s)、3.90(3H、s); ¹³C NMR(CDCl₃)：δ 177.2、161.1、157.7、154.5、152.6、151.8、149.3、140.4、124.1、119.6、112.9、111.1、108.7、107.4、96.2、62.2、61.5、56.3、56.1、56.0; 阳离子ESI-MS m/z 373([M+H]⁺)。

＜药理活性试验例＞

对上述实施例中得到的化合物S1～S4、川陈皮素(Nb)和多甲氧基黄酮类组分(Fr.2、Fr.2-1、Fr.2-2)进行以下的体外和体内试验。

[常规的试验程序1]

下述试验例1和2中采用的常规试验程序如下。

(大鼠胎仔原代海马神经细胞的培养)

对于妊娠Sprague-Dawley(SD)大鼠，以12小时周期的明暗循环喂食、喂水进行饲养。将妊娠第18天的大鼠(E18)在异氟烷深度麻醉下切开腹部正中，在无菌下取出子宫。在实体显微镜下、在冰冷的磷酸缓冲生理盐水(PBS)中取出胎仔的海马，用神经细胞分散液(住友ベークライト)分散组织，以1000rpm的转速离心分离4分钟，之后除去上清。然后，将细胞片状沉淀物(cell pellet)分散在分散液(住友ベークライト)中，再向通过移液充分分散的细胞中加入除去液(住友ベークライト)，以900rpm的转速离心分离5分钟，之后除去上清。

接下来，将片状沉淀物(pellet)用Neurobasal培养基(500mL Neurobasal培养基/不含酚红、10mL 50倍的B27补充物、0.5mM L-谷氨酰胺、0.005%青霉素-链霉素)悬浮，接种在用聚-L-赖氨酸包被的皿或板中。培养1天后交换培养基，之后每3～4天交换半量的培养基，在含有10μM Ara-C的培养基中、于37℃下在5%CO₂培养箱内培养14天。

需要说明的是，药物处置实验用试验培养基使用不含Ara-C的Neurobasal培养基。

(CRE依赖性转录活性的测定)

将大鼠海马神经细胞进行原代培养后，进行报告基因测试。将海马神经细胞以8×10⁴细胞/孔接种在48孔板中，使用Neurobasal培养基培养10～14天。利用脂质转染法转染报告质粒(0.1μg/孔)、海肾phRＧ-TK质粒(0.01μg/孔)，培养16小时。用未添加Ara-C的Neurobasal培养基(含有B-27补充物、L-谷氨酰胺、青霉素-链霉素)稀释，处置受检样本8小时。

转录活性的测定使用Promega公司制的双重-萤光素酶(Dual-luciferase)(注册商标)报告基因测试系统来进行。将海马神经细胞用被动裂解缓冲液(Promega)增溶后，混合萤光素酶分析试剂II(Promega)和Stop＆Ｇlo(注册商标)试剂(Promega)，使用照度计测定荧光值。

(统计学分析1)

实验结果采用单因素方差分析(one-way ANOVA)(TuKey)进行评价。以两侧5%检验显著水平，以p＜0.05为显著。

[试验例1] (海马神经细胞中本发明化合物(S4、S3、S2)和比较化合物(Nb和S1)的CRE依赖性转录活性(体外试验))

在本试验例中，比较本发明化合物(S4、S3、S2)的CRE依赖性转录活性和比较化合物(Nb和S1)的CRE依赖性转录活性。

如上述试验程序1所记载，用浓度为30μM的本发明化合物(S4、S3、S2)和相同浓度的比较化合物(Nb和S1)进行处置。

所得结果见图3。图中，在所有组合中进行单因素方差分析(post TuKey)检验。值表示平均值±标准偏差；样本数n＝4；* p＜0.05、** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)；§§ p＜0.01显示与Nb的显著差异。

(考察1)

如图3所示，橙黄酮(S4)显示出远远超过川陈皮素(Nb)的CRE依赖性转录活性的CRE依赖性转录活性。另外，与川陈皮素(Nb)和橘皮素(S1)相比，6-去甲氧基橘皮素(S3)和6-去甲氧基川陈皮素(S2)也显示出同等的CRE依赖性转录活性。

上述结果表明：本发明的橙黄酮(S4)、6-去甲氧基橘皮素(S3)和6-去甲氧基川陈皮素(S2)具有记忆形成功能的增强作用，暗示通过该作用能够与阿尔茨海默病的治疗相关联。

[试验例2] (海马神经细胞中本发明的橙黄酮(S4)和比较化合物川陈皮素(Nb)的CRE依赖性转录活性的浓度依赖性(体外试验))

在本试验例中，比较本发明的橙黄酮(S4)和比较化合物川陈皮素(Nb)的CRE依赖性转录活性的浓度依赖性。

如上述试验程序1所记载，为了确认S4的药效的浓度依赖性，使用浓度为1～30μM的S4和比较化合物Nb。

所得结果见图4。图中，在所有组合中进行单因素方差分析(post TuKey)检验。值表示平均值±标准偏差；样本数n＝4；** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)。

(考察2)

如图4所示，在橙黄酮(S4)中确认到极强的CRE依赖性转录活性的促进作用。即，川陈皮素(Nb)在30μM的浓度下显示出最大活性，但橙黄酮(S4)在其30分之一浓度、即1μM的浓度下显示出同等的活性，而且其最大活性为川陈皮素(Nb)的最大活性的2倍。这样，在本发明的橙黄酮(S4)中确认到远远强于现有的川陈皮素(Nb)的CRE依赖性转录活性，超过了川陈皮素(Nb)。因此，以低于川陈皮素(Nb)的用量即可发挥效果的橙黄酮(S4)，其安全性高，显示出超过川陈皮素(Nb)的学习·记忆障碍改善作用，暗示会更有效地改善阿尔茨海默病的识别功能障碍。

[试验例3] (海马神经细胞中来自N陈皮的组分的CRE依赖性转录活性(体外试验))

在本试验例中，比较本发明的来自N陈皮的组分的CRE依赖性转录活性和比较化合物(Nb和S1)的CRE依赖性转录活性。

如上述试验程序1所记载，就实施例1中得到的多甲氧基黄酮类组分(Fr.2)、川陈皮素组分(Fr.2-1)、非川陈皮素组分(Fr.2-2)、由Fr.2-1和Fr.2-2重新构成的混合组分(Fr.2-1+Fr.2-2)和重新构成的甲氧基黄酮类(REC；0.222μg/mL的橙黄酮+0.135μg/mL的6-去甲氧基橘皮素+0.177mg/mL的6-去甲氧基川陈皮素+0.585mg/mL的橘皮素+1.89μg/mL(5.0μM)的川陈皮素)的CRE依赖性转录活性进行试验。

所得结果见图5。样品浓度如下：Fr.2为4.29μg/mL、Fr.2-1为1.89μg/mL、Fr.2-2为2.67μg/mL、Fr.2-1+Fr.2-2为4.56μg/mL、REC为3.009μg/mL，作为与N陈皮中的组分量比较的样本量。图中，在所有组合中进行单因素方差分析(post TuKey)检验。值表示平均值±标准偏差；样本数n＝4；** p＜0.01、*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)。

另外，以相当于30μM川陈皮素浓度的12μg/mL为基准，Fr.2、Fr.2-1和Fr.2-2的样品浓度为12μg/mL，所得数据见图6。图中，在所有组合中进行单因素方差分析(post TuKey)检验。值表示平均值±标准偏差；样本数n＝4；** p＜0.01、***p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)。

(考察3)

如图5所示，在与海马神经细胞中由短期记忆转变成长期记忆有关的CRE依赖性转录活性方面，在只包含5μM的川陈皮素的重新构成的混合组分(Fr.2-1+Fr.2-2)和重新构成的多甲氧基黄酮类(REC)的样品中，均确认到强于川陈皮素组分(Fr.2-1)的活性。另外，这2种重新构成样品呈同等的活性，通过在橙黄酮中增加6-去甲氧基橘皮素或6-去甲氧基川陈皮素，增强CRE依赖性转录活性，在认知症等中枢神经变性疾病的改善和/或治疗中显示出优异的效果。

如图6所示，作为非川陈皮素组分的Fr.2-2虽然不含川陈皮素，但确认其在相同浓度下较川陈皮素的活性高，再次确认到图3所示的橙黄酮等的效果。

另外，考虑试验例1中得到的结果时，意味着重新构成的甲氧基黄酮类(REC)的CRE依赖性转录活性，这还可以是指6-去甲氧基橘皮素(S3)和6-去甲氧基川陈皮素(S2)通过与橙黄酮(S4)和橘皮素(S1)的协同作用，显示出有助于REC的CRE依赖性转录活性的表达、以及Fr.2的活性表达的独特的活性。

[试验例4] (本发明的橙黄酮(S4)的学习·记忆障碍改善作用(体内试验))

在本试验例的体内试验中，使用MK801诱发性记忆障碍模型小鼠，研究本发明的橙黄酮(S4)在行为药理学方面对学习·记忆障碍的药效。

具体而言，研究橙黄酮的慢性给药对MK801诱发性学习·记忆障碍的作用。将小鼠分成3组，1组以25mg/kg给予橙黄酮、剩下的2组给予生理盐水，均连续7天口服给药。第7天给予上述物质90分钟后，对2组腹腔内给予作为谷氨酸受体亚型之一的MK801(80μg/kg)，对照组腹腔内给予生理盐水。30分钟后进行带有恐怖条件的学习(记忆的获得)试验。

在带有恐怖的学习试验中，将小鼠放入透明盒内，让其自由探索2分钟，之后给予0.7mA、2秒的电刺激(休克事件)。重复该刺激3次，进行学习试行，评价记忆的获得和铭记能力(即，通电后1分钟的停止状态(Freezing％：不动(呆板或僵硬)%))。

所得结果见图7。图中，纵轴显示畏缩行为(%)，横轴显示休克事件(次数)。“对照”是指仅给予生理盐水的组，“MK801”是指给予生理盐水和MK801(80μg/kg)的组，“S25+MK801”是指给予橙黄酮(25mg/kg)和MK801(80μg/kg)的组。另外，在所有组合中进行单因素方差分析(post TuKey)检验。*** p＜0.001、**** p＜0.0001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，§§ p＜0.01、§§§ p＜0.001显示与“MK801”的显著差异。

在学习(记忆的获得)试行的24小时后，将小鼠再次放入透明盒内，进行以小鼠的畏缩行为、即呼吸以外的所有动作均停止的状态为指标的确认(记忆的保持和想起)试行，作为学习·记忆行为，通过5分钟的测定评价记忆的保持、想起能力和追忆能力(即，通电后5分钟的停止状态(不动%))。

所得结果见图8。图中，纵轴显示畏缩行为(%)。在所有组合中进行单因素方差分析(post TuKey)检验。**** p＜0.0001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，§§§ p＜0.001显示与“MK801”的显著差异。

(考察4)

如图7和图8所示，通过MK801的处置，作为学习和记忆的结果来确认的畏缩行为明显减少，但通过给予橙黄酮，在学习试行和确认试行时均确认到对该减少的改善效果。特别是在学习试行中，给予了本发明的橙黄酮的小鼠，虽然其通过接受MK801的处置使学习·记忆功能被抑制而容易忘记，但畏缩行为的减少明显减轻。

[试验例5] (Fr.2的学习·记忆障碍改善作用(体内试验))

在上述试验例4中，用Fr.2代替橙黄酮，研究Fr.2口服给药(92.8mg/kg)的作用。得到的学习试行结果见图9。图中，*** p＜0.001显示与对照(生理盐水)的显著差异(检验结果)，## p＜0.01显示与“MK801”的显著差异。

另外，得到的确认试行结果见图10。图中，*** p＜0.001显示与对照的显著差异(检验结果)，## p＜0.001显示与“MK801”的显著差异。

(考察5)

如图9所示，在学习(记忆的获得)试行中，确认到以甲氧基黄酮类为主的Fr.2具有将MK801处置所引起的畏缩行为的减少强力改善到接近于对照的状态的效果。

如图10所示，在确认(记忆的保持和想起)试行中，也确认到了优越地改善由MK801引起的记忆障碍。

[比较例1] (川陈皮素的学习·记忆障碍改善作用(体内试验))

在上述试验例4中，用川陈皮素代替橙黄酮，研究川陈皮素腹腔内给药(50mg/kg)所产生的作用。结果见图11和图12。

如图11所示，在学习试行中，即使将川陈皮素进行腹腔内给药，MK801的处置所引起的畏缩行为的减少也没有改善。如图12所示，在确认试行中，确认到了川陈皮素的给药效果。

即，确认到了川陈皮素(腹腔内给药)只具有记忆的保持和想起障碍的改善效果。

＜制剂例＞(本发明的组合物的制备)

本发明的组合物如下制备。

[制剂例1] 细粒剂A

以3.0g N陈皮、3.0g当归、3.0g钩藤、3.0g川芎、4.0g白术、4.0g茯苓、2.0g柴胡、1.5g甘草和5.0g半夏(总计28.5g)的比例混合生药，使总量达到200～800kg，在2000～8000L水中、在60～100℃下用提取罐提取30～180分钟。使用离心分离机，以1000～5000rpm的转数过滤所得提取物以进行固液分离，之后使用螺旋旋转型浓缩机，在8kPa以下的减压下浓缩直至浓度为约10～40%。使用喷雾干燥机，将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥，得到提取物制剂(抑肝散加陈皮半夏提取物)。

相对于得到的6.1g抑肝散加陈皮半夏提取物，以2.9g由硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖、普鲁兰和硅铝酸镁构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机，以4rpm的转速混合20分钟，再使用干式造粒装置，以490～2500Pa的辊压成型，整粒，在30号～50号筛间进行粒子分级(盒式筛选，cassette screen)，得到细粒剂A。

在得到的9.0g细粒剂A中含有6.1g混合有3.0g N陈皮和其他生药的抑肝散加陈皮半夏提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用9.0g细粒剂A。

[制剂例2] 细粒剂B

以3.0g橘皮、4.0g槟榔子、3.0g厚朴、3.0g桂皮、1.5g紫苏叶、1.0g甘草、1.0g大黄、1.0g生姜、1.0g木香、1.0g吴茱萸和3.0g茯苓(总计22.5g)的比例混合生药，使总量达到200～800kg，在2000～8000L水中、在60～100℃下用提取罐提取30～180分钟。使用离心分离机以1000～5000rpm的转数过滤以进行固液分离，之后使用螺旋旋转型浓缩机，在8kPa以下的减压下浓缩直至浓度为约10～40%。使用喷雾干燥机，将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥，得到提取物制剂(九味槟榔汤提取物)。

相对于得到的3.7g九味槟榔汤提取物，以2.3g由硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖、普鲁兰和硅铝酸镁构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转速混合20分钟，再使用干式造粒装置，在490～2500Pa的辊压下成型，整粒，在30号～50号筛间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂B。

在得到的6.0g细粒剂B中含有3.7g混合有3.0g橘皮和其他生药的九味槟榔汤提取物，作为标准，成人每天分2～3次服用6.0g细粒剂B。

[制剂例3] 细粒剂C

以2.4g N陈皮、2.4g钩藤、2.4g半夏、2.4g麦冬、2.4g茯苓、1.6g人参、1.6g防风、1.6g菊花、0.8g甘草、0.8g生姜和4.0g石膏(总计22.4g)的比例混合生药，使总量达到200～800kg，在2000～8000L水中、在60～100℃下用提取罐提取30～180分钟。使用离心分离机以1000～5000rpm的转数过滤以进行固液分离，之后使用螺旋旋转型浓缩机，在8kPa以下的减压下浓缩直至浓度为约10～40%。使用喷雾干燥机，将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥，得到提取物制剂(钩藤散提取物)。

相对于得到的4.48g钩藤散提取物，以1.52g由含水二氧化硅、硬脂酸镁和玉米淀粉构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转速混合20分钟，使用干式造粒装置，在490～2500Pa的辊压下成型，整粒，在30号～50号筛间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂C。

在得到的6.0g细粒剂C中含有4.48g混合有2.4g N陈皮和其他生药的钩藤散提取物，作为标准，成人每天分3次服用6.0g细粒剂C。

[制剂例4] 细粒剂D

将50kg N陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下用提取罐提取30～180分钟。使用离心分离机以1000～2500rpm的转数过滤以进行固液分离，之后使用螺旋旋转型浓缩机，在8kPa以下的减压下浓缩直至浓度为约10～40%。使用喷雾干燥机，将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥，得到提取物制剂。

相对于得到的7.2g提取物制剂，以1.8g由微粒二氧化硅和蔗糖脂肪酸酯构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转数混合20分钟，使用干式造粒装置以490～2500Pa的辊压成型，整粒，在30号～42号筛间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂D。

在得到的9.0g细粒剂D中含有相当于20g N陈皮或橘皮的7.2g提取物制剂，作为标准，成人每天分2～3次服用9.0g细粒剂D。

[制剂例5] 茶剂

将N陈皮或橘皮切成850～4750μm的四方形，将3～7g切断的N陈皮或橘皮装入纸袋或布袋中，制成茶剂。

成人每天按3次(1袋/次)将所得茶剂浸出后服用。。

[制剂例6] 生药粉末-细粒剂E

使用粉碎机以转数2000～3500rpm、网孔0.5～3.0mm将N陈皮或橘皮粗碎，再使用制粉机以转数5000～8000rpm、网孔150μm进行粉碎，制成生药粉末。相对于得到的10g生药粉末，以9.2g由含水二氧化硅、硬脂酸镁和玉米淀粉构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转数混合20分钟，再使用干式造粒装置以辊压490～2500Pa成型，整粒，在30号～42号筛间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒剂E。

在得到的19.2g细粒剂E中含有10g N陈皮或橘皮，作为标准，成人每天分2～3次服用19.2～38.4g细粒剂E。

[制剂例7] 煎剂

将10～30g N陈皮或橘皮用20倍量的200～600mL水在100℃下煎1小时使水达到半量，过滤，制成煎剂。

在得到的100～300mL煎剂中含有10～30g N陈皮或橘皮，作为标准，成人每天分3次服用100～300mL煎剂。

[制剂例8] 胶囊剂

相对于得到的10g提取物制剂，以4.75g由硅铝酸镁、合成硅酸铝·羟丙基淀粉·结晶纤维素、玉米淀粉、轻质硅酸酐、硬脂酸镁和羧甲纤维素钙构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转数混合20分钟，使用干式造粒装置以490～2500Pa的辊压成型，整粒，在30号～42号筛间进行粒子分级(盒式筛选)，得到细粒。将400mg该细粒填充在本领域通常使用的市售胶囊中，得到胶囊剂。

在得到的13粒(470～480mg/粒)胶囊剂中含有相当于10g N陈皮或橘皮的3.6g提取物制剂，作为标准，成人每天分2～3次服用13～26粒胶囊剂。

[制剂例9] 包衣片剂

将50kg N陈皮或橘皮在500～2000L水中、在60～100℃下用提取罐提取30～180分钟。使用离心分离机，以1000～2500rpm的转数过滤以进行固液分离，之后使用螺旋旋转型浓缩机，在8kPa以下的减压下浓缩直至浓度为约10～40%。使用喷雾干燥机，将浓缩液在转数10000～20000rpm、供气温度130～180℃、排气温度60～120℃下喷雾干燥，得到提取物制剂。

相对于得到的10g提取物制剂，以9.1g由麦芽糖、乳糖、硅铝酸镁和硬脂酸镁构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转数混合20分钟，再使用高速旋转式压片机，以转数20～55rpm、一次压缩0.6mm以上、二次压缩0.4mm以上进行压片，得到每片为350mg的素片。将1.1g由羟丙基甲基纤维素、滑石粉、氧化钛和焦糖构成的包衣剂溶解或悬浮于水/乙醇混液(3：7～10：0)中，使用包衣机在排气温40～55℃、流量200～400mL/分钟、转数4～6rpm下将所得的素片包衣，再使用微量的巴西棕榈蜡和白蜂蜡，在转数1rpm、排气温20～30℃下进行抛光，制成每片为370mg的包衣片剂。

在得到的20片包衣片剂中含有相当于10g N陈皮或橘皮的3.6g提取物制剂，作为标准，成人每天分2～3次服用20～40片包衣片剂。

[制剂例10] 颗粒剂

相对于得到的10g提取物制剂，以40g由羧甲纤维素钙、含水二氧化硅、硅铝酸镁和硬脂酸镁构成的添加物的比例，在总量为50～400kg的范围内混合，使用容器旋转型混合机以4rpm的转数混合20分钟，再使用干式造粒装置，以490～2500Pa的辊压成型，整粒，之后在12号～42号筛间进行粒子分级(盒式筛选)，得到颗粒剂。

在得到的18g颗粒剂中含有相当于10g N陈皮或橘皮的3.6g提取物制剂，作为标准，成人每天分2～3次服用18～36g颗粒剂。

[制剂例11] 凝胶剂

相对于得到的10g提取物制剂，以40g由卡拉胶、刺槐豆胶、还原麦芽糖液糖、木糖醇、苹果香料、卵磷脂和枸橼酸构成的添加物的比例，在总量为10～30kg的范围内混合，使用混合搅拌机以50～150rpm的转数混合，边搅拌等量的80℃以上的热水，边冷却至15℃以下，制成凝胶剂。

在得到的18g凝胶剂中含有相当于10g N陈皮或橘皮的3.6g提取物制剂，作为标准，成人每天分2～3次服用18～36g凝胶剂。

产业实用性

本发明的中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物可用作改善阿尔茨海默病和帕金森病等中枢神经变性疾病的药品或食品，还可用作该疾病的有望的根本性治疗药的含有成分。本发明的中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物特别是对记忆的获得、保持和想起能力的增强有效。

Claims

1.中枢神经变性疾病的改善和/或治疗用组合物，该组合物是包含选自通式I所示化合物的至少一种化合物作为有效成分而形成的：

通式I中，

R₁、R₂、R₃和R₄为甲氧基、且R₅为H的化合物S4；

R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₁和R₃为H的化合物S3；以及

R₁、R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₃为H的化合物S2。

2.权利要求1所述的组合物，其中，有效成分为式I-4所表示的化合物S4：

。

3.权利要求1所述的组合物，其中，有效成分为式I-4所表示的化合物S4和式I-3所表示的化合物S3和/或式I-2所表示的化合物S2的混合物：

；

。

4.权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病为学习障碍或记忆障碍。

5.权利要求4所述的组合物，其中，记忆障碍为记忆的获得障碍、保持障碍或想起障碍、铭记障碍、追忆障碍、记忆增进障碍、记忆减退障碍或记忆错误障碍。

6.权利要求5所述的组合物，其中，记忆障碍为记忆的获得障碍或铭记障碍。

7.权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病为阿尔茨海默病。

8.权利要求1～7中任一项所述的组合物，其中，中枢神经变性疾病的改善和/或治疗是通过cAMP应答序列依赖性转录活性的增强或记忆形成功能的增强来实现的。

9.权利要求1～8中任一项所述的组合物，其中，化合物S4、S3和S2是从柑橘类果皮的干燥物中进行水提取而得到的物质。

10.权利要求9所述的组合物，其中，柑橘类为芸香科桔(Citrus reticulata Blanco, Rutaceae)、橘或大红桔。

11.权利要求1～10中任一项所述的组合物，该组合物是进一步混合选自威灵仙、乌药、延胡索、黄芪、黄芩、黄柏、远志、藿香、葛根、干姜、甘草、桔梗、菊花、枳实、杏仁、桂皮、红花、香附子、厚朴、牛膝、吴茱萸、五味子、柴胡、山栀子、地黄、芍药、生姜、升麻、神麹、石膏、川芎、前胡、苍术、苏木、紫苏叶、大黄、大枣、大腹皮、泽泻、竹茹、知母、钩藤、天麻、天门冬、当归、桃仁、人参、麦芽、麦冬、半夏、白芷、白术、槟榔子、茯苓、防己、芒硝、防风、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、龙胆和羌活以及它们中的两种以上的组合的生药成分而形成的。

12.权利要求1～11中任一项所述的组合物，该组合物为口服给药形态。

13.权利要求12所述的组合物，其中，口服给药形态为细粒剂、茶剂、煎剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、散剂、液剂、糖浆剂或提取物制剂的形态。

14.食品，该食品包含选自通式I所示化合物的至少一种化合物和添加成分，

通式I中，

R₁、R₂、R₃和R₄为甲氧基、且R₅为H的化合物S4；

R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₁和R₃为H的化合物S3；以及

R₁、R₂、R₄和R₅为甲氧基、且R₃为H的化合物S2。

15.权利要求14所述的食品，该食品包含式I-4所表示的化合物S4：

。