CN107496725B - 以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物，所述组合物的有效成分由湖北海棠和竹取物组成；所述湖北海棠为以下2者中的至少一种：湖北海棠植株、湖北海棠提取物；所述竹取物为以下7者中的至少一种：竹叶黄酮、竹茹三萜、竹笋甾醇、竹笋寡肽、竹硅、竹子多糖、竹膳食纤维。本发明还同时提供了该组合物的用途：用于制备预防或治疗预防以下任一疾病的药品：向心性肥胖、早更/更年期综合症、老年痴呆症及抑郁症。

Description

以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物及用途
技术领域
本发明涉及食品工业中的功能性食品领域，更具体地涉及以湖北海棠粉及其提取物与竹取物(包括竹叶黄酮、竹茹三萜、竹笋甾醇、竹笋寡肽、竹硅、竹多糖、竹纤维等)组合而成的膳食补充剂、功能食品、保健食品、特殊医学用途食品等。
背景技术
女性更年期(40～55岁)指的是绝经后的一系列以自主神经系统功能紊乱为主、伴有神经心理症状的症候群。早更，则是指40岁之前，由于社会压力过大等原因造成卵巢早衰，从绝经过渡期起便产生的一系列类更年期症状。目前，我国更年期女性群体已达1.6亿，跃居世界首位，更年期对90％以上的女性会造成严重的近期和远期健康影响。
女性一般自40岁左右开始进入更年期，即从生殖年龄向绝经期过渡，50岁前后卵巢功能彻底衰退。在此阶段，潮热、多汗、抑郁、焦虑、失眠等更年期综合征将使大多数女性受到困扰。再历经10～15年，骨代谢和心血管及脂代谢障碍等多种健康问题的折磨将会降临到多数女性面前。同时，更年期也为高血压、冠心病、糖尿病、肿瘤等老年病埋下隐患。绝经后妇女的心血管发病率比未绝经的同年龄段女性高2～6倍。我国每年有超过1.2亿人深受更年期综合征的困绕，但目前就医率不到10％。
一般情况下，女性更年期的平均年龄在45岁左右。但是，当今社会生活节奏日益加快、工作压力越来越大、环境污染难以控制等因素，导致妇女更年期年龄不断提前。早更的产生，除了工作与情感压力之外，不合理的减肥、长期避孕、多次流产等导致脏器衰老加快，内分泌紊乱亦会促使早更症状加重。30～40岁的都市白领近三成存在着不同程度的早更症状。
国外女性更年期最常见的表现是潮热、盗汗、失眠，中国女性最常见的表现首先是骨疼，其次是失眠、泌尿系统萎缩、抑郁，甚至突然的脾气性格改变。原因在于我国女性进入更年期后，卵巢分泌雌激素的水平呈现“折棍式”降低。雌激素下降的最大危害是骨质疏松。绝经后的1～2年内，骨量流失最快，甚至高达近1/10。人体骨骼中存在两种细胞：成骨细胞和破骨细胞。雌激素缺乏后，破骨细胞就失去控制，不停地在骨头上挖坑；成骨细胞则消极怠工，填坑的过程越来越慢，骨骼结构日益遭受破坏。同时，我国女性大多缺乏补钙意识，骨痛发生率较高。绝经后第一年骨质疏松症发生率可达22％，绝经满5年发生率可达45％。据调查数据显示，近十六年来，北京50岁以上女性的髋部骨折发生率增加了近3倍。目前，全国60～69岁女性的骨质疏松发生率高达50～70％。
由于雌激素对女性心脑血管有保护作用，故女性55岁前很少出现心脏问题，因此冠心病病人中男性比例远高于女性。绝经后，随着体内雌激素水平的下降，脂代谢改变会引发心脏病等。来自浙江大学医学院附属妇产科医院心内科的数据，每10个心绞痛病人中就有1个是更年期的原因。绝经是女性心血管疾病的高危因素，许多更年期女性都会出现血压不稳定、心悸或心前区不适、心律不齐、假性心绞痛等症状。目前，仅浙江一省约有500万女性处于更年期状态，其中高血压占了15％，假性心绞痛占29％。
雌激素的减少还带来最令女性烦恼的体征变化，如容颜变老、皮肤变糙、皱纹增长、体型发胖等。年轻女性发胖通常是胖在全身，更年期女性发胖则主要在腰腹部位(又称向心性肥胖)。不少进入更年期的女性很注意饮食和运动，但肚子和腰围却控制不住地增长，其祸根就是雌激素的锐减。女性腰臀比的健康范围在0.85以下，男性在0.95以下。超过这个比值，就说明腹部有多余脂肪堆积。腰臀比最早用于预测一个人是否可能患心脏病，高血脂等疾病。腰围大，说明脂肪存在于腹部，内脏脂肪比较高。内脏脂肪会破坏胰岛素系统，增加血糖血脂水平，导致糖尿病，高血压等病症。另外，过多的内脏脂肪还会导致肝脏肥大，使其功能受到影响。大量的研究表明，腰臀比是无法靠节食改善的。腰臀比与健康之间的关联性如下表1所示。
表1
性别 优秀 良好 正常 不健康
男 <0.85 0.85-0.89 0.90-0.95 ≥0.95
女 <0.75 0.75-0.79 0.80-0.86 ≥0.86
更年期无法控制的体重增加主要是由以下四个因素引起：
(1)压力和情绪：压力会导致皮质醇水平的上升，这种激素水平上升后的结果就是肾上腺疲乏。出现这种情况后，身体就会开启求生模式，在腹部区域堆积脂肪。太多的压力也会导致对一些垃圾食品的渴望度增加。
(2)有毒物堆积：毒素通过食物、水和空气进入体内，在体内堆积会增加肝脏和消化系统的负担，一旦压力过大就会引起炎症。炎症会导致激素失衡，影响免疫功能，也会导致体重增加和肿胀。
(3)激素失衡：在更年期期间，雌激素水平下降，身体通过在腰腹部区域囤积脂肪来留住少量这种激素。
(4)睡眠不良处于更年期的女性常常都会睡眠问题。激素不平衡会引起夜间盗汗，这会扰乱睡眠。低血清素会引起坏情绪，同时褪黑素的降低会影响睡眠，这两种激素同时也控制着食欲和体重。
更年期的症状可以持续很多年，最长的可持续40年。北京大学第一医院妇产科赵更立研究员对京、宁两市638名45～60岁女性进行的一项有关更年期的调查发现，随着经济社会的发展，乡村人口(农民)对生活改善的满意度较高，在更年期阶段情绪较好，精力也较旺盛。相比之下，城市人口由于工作、生活、住房、人际关系、子女、社会认同等问题，有更多的烦恼和更大的心理压力，更容易导致更年期症状的发生和持续。
更年期综合征越早治疗效果越好，激素补充治疗(又称激素替代疗法)是目前公认的缓解绝经相关症状最有效的治疗方法。医学界认为，激素补充治疗主要适用一下三种情况：(1) 出现潮热、盗汗、情绪不佳等更年期症状；(2)泌尿生殖系统萎缩引起一系列症状，例如尿急、尿频(不少人误以为尿路感染)；(3)骨质疏松的高危人群。但是，激素治疗具有显著的副作用，尤其是对于患有子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫内膜增生、有血栓形成倾向、中风、心肌梗死、乳腺良性疾病、乳腺癌家族史等高危因素者不宜采用。对绝大多数早更和更年期妇女而言，采用天然来源的植物药、膳食补充剂、功能/保健食品进行膳食干预无疑是一种最积极、最稳妥、最经济、最安全、最有效的手段。
骨质疏松症(OP)是以骨量减少和骨组织纤维结构退行性改变为特征，致使骨脆性增加、易发生骨折的一种全身代谢性骨病。目前全世界约有2亿人患有骨质疏松症，中国是世界上患者最多的国家，约有9000万人，占中人口的7％。骨质疏松症严重地危害妇女和老年人的健康。在原发性骨质疏松症中，绝经后骨质疏松(PMOP)占了很大比例，雌激素缺乏是其致病的重要原因。长期以来临床上采用以雌激素和孕激素为主的技术替代疗法(HRT)来治疗PMOP，但长期应用HRT可造成子宫内膜癌和乳腺癌的危险性。如何寻找安全有效的防治药物、或者说能够采用膳食干预的方法来防治PMOP具有重要的现实意义和社会价值。当前的一些研究表明了传统中草药(如骨碎补等)中的黄酮类化合物(如柚皮素等)为主要活性成分的。
抑郁症已成为现代社会的常见病、多发病，是一种常见的精神障碍，已成为世界范围内的首要致残原因，也是导致全球总体疾病负担的最大因素。2017年2月23日，WHO官方网站发布报告称，全球抑郁症患者已达3.22亿，2005～2015的十年间患者数量增加了18.4％。基于本次发布的数据，全球范围内约有4.3％的人罹患抑郁症，发病风险最高的三个群体为：年轻人群、孕产妇及老年人。抑郁及焦虑障碍每年可导致一万亿美元的经济损失。极端情况下，抑郁可导致自杀，每年夺走近80万人的生命(超过战争和自然灾害致死人数之和)，已成为15～29岁年龄段个体的第二大死因。而现有抑郁症患者中只有不到10％的人接受了相关的药物治疗。
抑郁症的发病机制非常复杂，涉及的主要理论有神经递质学说、神经可塑性假说、神经营养学假说、内分泌系统功能失调等。大量的研究表明,神经营养因子(NGF、BDNF、NT-3和NT-4等)中，与抑郁症密切相关的是BDNF。从天然植物和膳食成分中挖掘安全有效的黄酮类化合物(能起到BDNF小分子激动剂的功能)是采用精准膳食干预防止抑郁症高发的一条重要路径和手段。
当前治疗抑郁症的一线药物包括三环类抗抑郁药(以丙咪嗪为代表)、选择性5-羟色胺 (5-HT)重摄取抑制剂(如氟西汀)、和/或去甲肾上腺素再摄取抑制剂、以及单胺氧化酶抑制剂等。然而，这些药物效力有限，表现出长时程效应，且带有一定的副作用，如镇静、冷漠、疲劳、睡眠障碍、认知障碍、性功能障碍等。德国出品的―路优泰-圣约翰草提取物片”是第一个纯植物抗抑郁药(其主成分就是黄酮类化合物)。能同时非特异地抑制单胺类神经递质的重吸收，下调肾上腺素受体的密度，最终使大脑中单胺类神经递质的浓度恢复正常，从根本上治疗抑郁。路优泰对免疫系统无影响，不影响生殖能力，对男性性功能无影响，没有依赖性和反弹性，对心律血压没影响，不会导致记忆障碍，对驾驶和机械操作无影响，与酒精合用没有相互作用，无成瘾性，停药后无戒断症状和停药综合征，可用于长期治疗。
老年痴呆已被称为当今世界的“流行病”之一，在发达国家被估计列为第四位最常见的死亡原因。痴呆症是一种综合征，体现为记忆、思考、行为和日常活动能力衰退，其特征性病理变化为大脑皮层萎缩，并伴有β-淀粉样蛋白沉积，神经原纤维缠结，大量记忆性神经元数目减少，以及老年斑的形成。阿兹海默病(AD)是痴呆症最常见的病因，可能导致60～70％的痴呆症。
世界卫生组织(WHO)估计全球65岁以上老年人群AD的患病率为4～7％。AD患病率与年龄密切相关，年龄平均每增加6.1岁，患病率升高1倍；在85岁以上老年人群中，AD 患病率可高达20～30％。当前，全世界有4750万痴呆症患者，每年新增病例770万，估计到 2040年，全球AD患者将超过8000万。鉴于老年痴呆的病因迄今未明，目前尚无特效治疗或逆转疾病进展的治疗药物。
痴呆症是全世界老年人残疾和依赖他人的主要原因之一。对痴呆症的认识和理解不足导致歧视以及诊断和护理方面的障碍。痴呆症的社会和经济影响巨大，包括直接医疗成本、直接社会成本和非正式护理成本。2010年，全球痴呆症社会总成本据估计为6040亿美元，占全世界国内生产总值的1.0％。中国作为世界上老年痴呆症患者最多的国家，2040年将达到 2200万，是所有发达国家老年痴呆症患者数的总和。老年痴呆症患者数量的快速增长，给中国经济社会可持续发展带来了严重挑战，高额的养老和医疗费用，以及长期照料所需的人力、设施等问题，在老龄化快速发展的情况下尤为突出。
越来越多的研究表明，BDNF及其受体酪氨酸受体激酶B(TrkB)的减少可能是老年痴呆症病因的发病机制中的原因之一。BDNF是一个25kDa的蛋白，它在体内不稳定并具有很差的药代动力学。为了规避这些多肽的内在缺点，发明人开发了一种基于细胞的筛选试验，发现了BDNF的小分子激动剂---7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)，它能选择性地引起TrkB的激活，但不影响TrkA的活性。口服给药2～4小时后激活了小鼠大脑的TrkB受体，表明7,8-DHF能通过血脑屏障，并具有口服后的生物活性。越来越多的证据支持，BDNF为治疗老年痴呆症提供了一种新的治疗策略。比如，BDNF的注射和在体内转基因方法对老年痴呆症(APP) 的转基因小鼠产生了有益的影响，包括改善学习和记忆。此外，神经干细胞移植能挽救空间记忆受损的三重转基因(3xTg-AD)小鼠，这可能与提高海马BDNF表达水平有关。7,8-DHF 能够增强小鼠的学习和记忆功能，且具有抗应激和抗抑郁的作用。7,8-DHF给药可改善老年痴呆症相关的记忆障碍，这可能是由于BACE1的表达和β-amyloidogenesis的减少。因此， 7,8-DHF可能代表了一种有前途的和可行的干预手段，以防治因缺乏BDNF-TrkB信号导致的老年痴呆症相关的记忆障碍。
目前，全球已获准上市用于治疗阿尔氏海默症(AD)的药物有4个，其中乙酰胆碱酯酶 (AChE)抑制剂占据主导地位。这些被称为乙酰胆碱酯酶抑制剂的药物已被证明可以部分提高认知和记忆，但对改善疾病的最终进展影响不大。大型制药企业治疗老年痴呆症的策略都集中在包括抗炎、抗氧化剂、反amyloidal等方法上，尚未有以TrkB受体为目标的治疗老年痴呆症的候选药物。市场上已有的产品或正在临床试验的新药也都旨在部分地缓解症状，但不能治本。虽然国内外许多实验室正在开发基于BDNF结合TrkB受体位点的多肽模拟物激动剂和单克隆抗体，也仅表现出有限的神经营养作用。而发明人找到的7,8-DHF可以防止引发各种刺激导致的神经退行性病变，包括Aβ引起的神经细胞凋亡，基本可以完全模拟和部分取代BDNF的生物学功能。可长期服用，无任何毒副作用。将含有7,8-DHF的食源性植物或药食两用植物经过加工提炼和合理组方后，作为早期膳食干预可能会对抑郁症和老年痴呆症等起到“治未病”的作用。
除了神经营养活性以外，BDNF/TrkB信号在食物摄取及体重控制方面也起着关键作用，肥胖和糖尿病患者体内的BDNF水平显著降低。通过对膳食诱导的肥胖小鼠饲喂7,8-DHF 5 个月，在不改变食物摄入量及无显著生理异常的情况下，雌鼠的体重发生了显著下降。研究表明，7,8-DHF是通过作用于肌肉中的TrkB受体从而诱导了与非战栗产热相关的一种线粒体蛋白UCP1在肌肉中异位表达(这种蛋白主要是在褐色脂肪的线粒体中表达)及AMPK的活化从而增加全身的能量支出及脂肪利用，最终达到减肥效果。但同样条件下，7,8-DHF对雄性小鼠的减肥作用却不明显，提示了其作用机制与雌激素之间的关联性。
湖北海棠【英文名：Leaf of Hupeh Crabapple；拉丁名：Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.[Pirus hupehensis Pamp.】是蔷薇科苹果属的落叶小乔木，产自湖北、湖南、江西、江苏、浙江、安徽、福建、广东、甘肃、陕西、河南、山西、山东、四川、云南、贵州海拔50～2900米的山坡或丛林中。别名有：野海棠(河南土名)、野花红(浙江土名)、花红茶(湖北土名)、秋子 (四川土名)、茶海棠(中国植物图谱)、小石枣(甘肃土名)等。
据文献记载，湖北海棠其根治筋骨扭伤，果可入药治胃病，嫩叶可代茶，俗称―海棠茶”，为民间常用饮品之一，在湖北、湖南、江西等地己有400多年的饮用历史。味酸，性平，消积化滞，和胃健脾。主治：食积停滞、消化不良、痢疾、疳积等。现报道的海棠叶有效成分主要是黄酮类化合物，如根皮素-2-葡萄糖甙(phloretin-2-glucoside)、儿茶精(catechin)、表儿茶精(epicatechin)及微量的黄酮醇-3-葡萄糖甙(flavonol-3-glucoside)，并认为根皮苷是湖北海棠的主要成分。有人对湖北海棠叶的水煎液进行了初步研究，显示具有抗菌、消炎、耐缺氧、抗疲劳、降血糖等作用。目前，湖北海棠叶已于2014年被我国政府批准作为“新食品原料”。
我国素有“竹子王国”之称。竹取物是指运用现代工程技术手段，从竹子中提取、分离得到的具有多种生物学功能的植物化学素，即竹子的次生代谢产物，包括但不限于竹叶黄酮、竹茹三萜、竹笋甾醇、竹笋氨基酸肽、竹多糖、竹硅、以及竹膳食纤维等。发明人长期以来从事竹取物的研究与开发，大量的实践表明竹取物在食养领域具有广阔的应用前景。
竹叶黄酮是采用专利技术(张英，从竹叶中提取黄酮类化合物浸膏或粉剂的生产方法， ZL 98 104564.2)从刚竹属竹叶中获得的一类植物黄酮制剂，其代表性化合物为以荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷为代表的碳苷黄酮和以对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸为代表的植物酚酸。大量的基础研究表明，竹叶黄酮易被人体吸收，并能透过血脑屏障，能有效清除活性氧自由基和脂质过氧化产物，并阻断强致癌物质N-亚硝酸胺的合成；能显著提高机体免疫能力，抵御疾病；能有效调节脂质代谢，有助于降低血脂、体脂和血胆固醇；能强化心脏功能，改善心肌和脑部缺血；同时具有显著的抗疲劳、抗衰老、抗辐射、抗菌、抗病毒的生物学功效。竹叶黄酮现已广泛用于保健食品、健康饮品、功能性化妆品等领域，2014年又被国家正式批准为―新食品原料”，进一步拓展了其在食品工业中的应用空间。
竹茹三萜是采用CO2超临界萃取技术从竹茹中获得的低极性部位(张英等，从竹子中提取的三萜总皂甙元的组合物、制法及用途，ZL 02154401.8)，以一组以木栓酮和羽扇豆烯酮为主成分的五环三萜类化合物。竹茹三萜及其特征性成分木栓酮表现出对自发性高血压大鼠的显著降压作用，对苯肾上腺素诱导的大鼠主动脉收缩均具有显著的舒张作用。同时，竹茹多糖能明显延长小鼠负重游泳时间和爬杆时间，明显降低小鼠运动后的尿素氮和血乳酸的含量，增加小鼠运动时肝糖元的含量，表现出良好的抗疲劳作用。
竹笋甾醇是采用专利技术(张英等，从竹笋中提取的植物甾醇类提取物及其制备方法和用途，ZL 200410099219.8)从竹笋及其加工副产物中获得的植物甾醇类化合物。竹笋甾醇中相对含量较高的是β-谷甾醇，其他包括芸苔甾醇、豆甾醇、胆固醇、麦角甾醇和谷烷醇等。竹笋甾醇能显著降低高脂血症大鼠血清的总TC、TG、LDL-c含量和动脉粥样硬化指数，有效降度大鼠肝脏的TC、TG水平，减轻脂肪肝和降低肝指数，对肝脏的色泽、质地、体积有显著改善作用；同时，表现出显著的抗炎作用，具有消除前列腺炎症和水肿、维持前列腺上皮细胞结构的稳定性、改善上皮分泌酸性磷酸酶的功能的作用，并能有效调节细胞因子及受体的分泌和调节炎症细胞因子与受体基因芯片中所有差异表达基因。
竹笋寡肽(张英等，竹笋氨基酸肽类组合物及其制备方法和用途，ZL200510025443.7) 是源自罐头笋加工废液的竹子有效成分，富含的氨基酸、肽及多酚类化合物，氨基酸组成以酪氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、δ-羟基赖氨酸等为主，具有良好的感官品质和浓郁的鲜味，可广泛用于功能性食品、饮品和调味品等。特征性的功能二肽是天冬氨酸-酪氨酸(Asp–Tyr)，是一种高效的天然ACE抑制。竹笋氨基酸肽显著的降压、降脂、抗氧化功能，能显著改善高脂血大鼠脂质代谢和氧化应激状态，降低自发性高血压模型大鼠的血压、并改善SHR大鼠的氧化应激状态,提高机体内源性SOD和GSH-Px 活力，降低肝脏MDA含量。
竹膳食纤维包含水溶性(竹多糖)和不溶性(竹纤维)二类，来源于不施化学农药和化肥的有机竹子，是一种天然的有机食品和功能性配料。是将全竹或竹子在加工过程中产生的剩余物，经蒸汽爆破处理后，提取、分离、纯化得到具有强免疫促进作用和抗肿瘤活性的竹多糖，提取后的残渣进一步经过漂白、烘干、粉碎，得到不溶性的竹膳食纤维微粉。竹膳食纤维可广泛应用于食品工业中，作为具有整肠、通便、降脂、减肥的功能食品配料。
竹多糖是一种水溶性的竹子膳食纤维，可来自竹叶、竹笋和竹茹等不同部位。采用蒸汽爆破预处理联合水热抽提法制备毛竹半纤维素多糖(BSP)(张英等，竹子多糖的提取法，CN 201310064648.0)。竹子半纤维素多糖(竹茹多糖)是一种强有力的免疫促进剂。具体表现在： (1)可显著增加免疫低下小鼠的骨髓有核细胞、外周血白细胞、淋巴细胞(B淋巴细胞) 计数，并降低其骨髓嗜多染红细胞微核率；(2)可显著提高免疫低下小鼠单核/巨噬细胞的吞噬功能(碳廓清能力)和体液免疫应答反应(血清溶血素及免疫球蛋白的生成)，并增强其脾淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤活性；(3)可显著上调免疫低下小鼠脾淋巴细胞Th1/Th2 转录因子Tbet/GATA-3的mRNA表达水平，从而促进Th1/Th2细胞因子(IL-2、IL-12、TNF-α、INF-γ/IL-4)的分泌。此外，连续灌胃200mg/kg BW/day剂量的竹茹多糖两周能够显著提高正常小鼠的免疫功能，表现为显著上调正常小鼠脾淋巴细胞Th1/Th2转录因子 T-bet/GATA-3的mRNA表达水平及Th1/Th2细胞因子(IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ/IL-4、 IL-10)的分泌水平、促进正常小鼠脾淋巴细胞增殖能力和体液免疫应答反应(血清溶血素及免疫球蛋白的生成)。同时，竹茹多糖具有更好的抑制肿瘤生长、延长模式小鼠生存周期的作用；在体内免疫调节试验中，在增强Th1/Th2细胞因子的表达水平等方面也较香菇多糖表现为优。并可通过口服途径增强机体免疫活性，起到预防保健的作用。
竹纤维(张英等，高品质不溶性植物膳食纤维微粉及其制法和用途，ZL200610116034.2) 主要来自竹笋和竹的嫩茎，也可以是竹竿及其加工副产物。这是一种高品质不溶性植物膳食纤维微粉，90％以上的粒径在30微米以下。在上述专利技术的基础上，进一步采用纳米化手段，可将其粒径分散至10μm以下(即1000目以上)，得到细腻均一的乳白色粉末。接近纳米级的竹纤维具有很强的持水性、溶胀性、吸脂(油)性和螯合金属离子的能力，同时又具有天然的抗菌、抑菌活性，可广泛应用于减肥、通便、排毒等功能性食品，用于焙烤、膨化食品中的纤维强化，也可用作药品的填充材料。
竹硅：硅是构成成骨细胞的主要成分之一，它参与骨的钙化过程。在骨组织和软骨组织生长的过程中，均伴随有大量的胶原合成。研究发现，硅可以使骨和软骨基质中的胶原含量明显增加，同时羟脯氨酸、总蛋白及非胶原蛋白的含量也显著增加。硅能增强血管特别是血管内膜弹力层的弹力纤维的强度，它形成的屏障还可阻挡脂质对血管内膜的侵犯。因此硅有抗动脉粥样硬化的作用。硅能在多糖链内或链间以及多糖链与蛋白质多肽链之间形成交联，促进细胞外骨架网状结构的形成，促进结缔组织纤维成分的充分发育，并增强其强度和抗性，以便维持结构的完整性。竹子是典型的硅超富集植物。竹子中含有1～5％的有机硅，比无机硅更适于人体吸收，能够保护牙齿、强健骨骼、促进头发生长代谢、降低胆固醇、预防老年痴呆，因此竹有机硅产品在欧美市场很受欢迎。
美国FDA推荐人体每日摄入硅为20～50mg/天。随着年龄的增长，人体吸收、同化硅的能力下降，又由于饮食结构的变化，饮食加工日益精细造成硅的流失，使硅的摄入量减少，与此同时人体随排尿、头发和指甲的脱落，也伴随着硅的流失。调查表明，全世界每年因骨质疏松而导致骨折的病例有890余万起，而全球范围内估计有2亿人受骨质疏松的影响，其中大约80％的骨质疏松症患者是50岁以上的女性。我国是世界上骨质疏松症患者最多的国家，患者总人数超9000万，由于对疾病治疗缺乏认识，半数以上患者因为骨折而发生残疾。随着生活方式的变化，加上运动量日益减少，骨质疏松这一原本属中老年人的疾病，呈年轻化趋势。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种以湖北海棠和竹取物(尤其是竹叶黄酮)为有效成分的功能性组合物，用于制备预防或治疗向心性肥胖、更年期综合征、老年痴呆症及抑郁症的药物。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物，所述组合物的有效成分由湖北海棠和竹取物组成；
所述湖北海棠为以下2者中的至少一种：湖北海棠植株、湖北海棠提取物；
所述竹取物为以下7者中的至少一种：竹叶黄酮、竹茹三萜、竹笋甾醇、竹笋寡肽、竹硅、竹子多糖、竹膳食纤维。
作为本发明的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物的改进：
湖北海棠植株指以下任一：湖北海棠叶片、湖北海棠花、湖北海棠果、湖北海棠全植株；
湖北海棠提取物是指以下任一的提取物：湖北海棠叶片、湖北海棠花、湖北海棠果、湖北海棠全植株。
作为本发明的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物的进一步改进：所述组合物含有 7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)：
Figure GDA0002681508160000091
作为本发明的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物的进一步改进：所述组合物还含有下述4种黄酮类化合物中的任意一种：
Figure GDA0002681508160000092
作为本发明的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物的进一步改进：
所述有效成分中，湖北海棠：竹取物＝1～4:1。
进一步而言：
当湖北海棠为湖北海棠植株时，湖北海棠：竹取物＝3～4：1；
当湖北海棠为湖北海棠提取物时，湖北海棠提取物：竹取物＝1～2:1；
当湖北海棠为湖北海棠植株和湖北海棠提取物的混合物时，湖北海棠：湖北海棠提取物：竹取物＝2～2.5:0.5～1:1。
作为本发明的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物的进一步改进：所述有效成分为以下任意一种：
有效成分由海棠叶粉：海棠果粉：竹叶黄酮：竹膳食纤维＝4:2:1:0.5的重量比组成；
有效成分由海棠果粉：海棠全植株超临界萃取物＝3:1的重量比组成；
有效成分由海棠叶粉提取物：竹硅＝1:1的重量比组成；
有效成分由海棠全株提取物：竹叶黄酮：竹多糖＝5:3:1.9的重量比组成。
本发明还同时提供了利用上述以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物制备而成的功能性食品，该功能性食品中，有效成分的含量≥30％。
说明：该组合物的最终产品形式可以是任何食品形态(包括糖果、饮料、烘焙食品、发酵食品、含乳制品、代餐粉等)，也可以是胶囊、片剂、颗粒剂等常用的保健食品及药品形态。产品中除了有效成分(湖北海棠、竹取物)外，可以含有构成相应食品及药品形态所需的一切原、辅材料。
本发明还同时提供了以湖北海棠及竹取物为有效成分的组合物的用途，用于制备预防或治疗以下任一疾病的药物：
向心性肥胖、早更/更年期综合症、老年痴呆症及抑郁症。
作为本发明的上述用途的改进：
所述预防或治疗早更/更年期综合症包括：调节内分泌、提高雌激素水平、缓解更年期症状；抑制向心性脂肪堆积、减小腰围和体重、保持苗条体态；增强骨骼和韧带强度、预防骨质疏松和骨折；改善大脑功能、提高学习记忆能力、预防老年痴呆；调节心情、防止抑郁。
本发明的以湖北海棠和竹取物(尤其是竹叶黄酮)为有效成分的功能性组合物，其主要功能成分为黄酮类化合物。所述的组合物至少含有下述5种黄酮类化合物中的1种：7,8-二羟基黄酮、荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷。
本发明中的湖北海棠(英文名：Leaf of Hupeh Crabapple)特指蔷薇科苹果属的落叶小乔木[拉丁名：Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.]，主要应用部位为叶片，也可以是花、果或植株的其他部位。同时，既可以是湖北海棠不同部位的粉末、碎片，也可以是采用不同技术手段得到的不同部位的海棠提取物。
本发明中的竹取物(英文名：Extract of Bamboo,EOB)特指从禾本科(Graminae)竹亚科(Bambusoideae)植株的不同部位获得的具有健康效应的生物制剂，包括但不限于竹叶黄酮、竹茹三萜、竹笋甾醇、竹笋寡肽、竹硅、竹子多糖以及竹膳食纤维等。
所述组合物既可以是湖北海棠叶(或其提取物)与海棠植株的其他部位(或其提取物) 组合而成，也可以是在此组合的基础上，进一步与不同的竹取物相配合。
本发明组合物的最终产品形式可以是任何食品形态(包括糖果、饮料、烘焙食品、发酵食品、含乳制品、代餐粉等)，也可以是胶囊、片剂、颗粒剂等常用的保健食品及药品形态。产品中除了湖北海棠和竹取物外，可以含有构成相应食品及药品形态所需的一切原、辅材料。
本发明组合物主要体现的生物学效应和健康功能主要是由以7,8-DHF为代表的黄酮类化合物带来的。7,8-DHF作为脑源性神经营养因子(BDNF)的小分子激动剂，它们能穿过人体的血脑屏障，有效模拟BDNF，专一性地结合于TrkB受体，从而诱导TrkB发生二聚化及自磷酸化，并进一步激活受体下游的MAPK/ERK、PI3K/Akt以及PCγ1三条信号通路，从而调节人体的神经内分泌功能和糖、脂代谢。
所述组合物对于具有早更或更年期症状的超重与肥胖的妇女人群，将产生如下的健康效应：调节内分泌、提高雌激素水平、缓解更年期症状；抑制向心性脂肪堆积、减小腰围和体重、保持苗条体态；增强骨骼和韧带强度、预防骨质疏松和骨折；改善大脑功能、提高学习记忆能力、预防老年痴呆；调节心情、防止抑郁等。对于其他更为广泛的受众，也将带来控制体重、预防老年痴呆(包括阿尔茨海默病和帕金森综合征)和防止抑郁症的保健功效。
在本发明中：
本发明所用的竹叶黄酮粉末，其总黄酮含量为10～50％(可根据需要变化)；
本发明所用的竹茹三萜粉末，其总三萜皂苷元的含量为20～50％(可根据需要变化)；
本发明所用的竹笋甾醇粉末，其总甾醇含量为15～25％(可根据需要变化)；
本发明所用的竹笋氨基酸肽粉，其氨基酸总量为15～25％(可根据需要变化)；
本发明所用的竹多糖粉末，其多糖含量为30～70％(可根据需要变化)；
本发明所用的竹硅粉末，其有机硅含量为50～70％(可根据需要变化)；
本发明所用的竹膳食纤维微粉，其纤维总量应在75％以上，平均细度在400目以上。
上述含量均为重量含量。
湖北海棠茶(干叶)及非叶部分(海棠果、枝条等)均从湖北恩施的农贸市场上获得。
其他原辅料均为市售商品。
在本发明中：
湖北海棠CO2超临界萃取物的制备方法为：
将晒干后(含水率≤8％)的湖北海棠(包括全植株，或者叶、枝、根)粉碎后放入萃取釜内，升温到50～60℃，开动CO2泵，升压到25～35兆帕，通过预热器进入萃取釜内；开启夹带剂泵，使10％体积比的夹带剂(例如丙酮)通过预热器后同时进入萃取釜，在50～60℃下进行动态萃取2～4h。分离釜1设定分离压力为8兆帕、温度为45℃，分离釜2设定分离压力为5～6兆帕、温度为27～30℃；从分离釜1中取出目标产物，经低温干燥、粉碎后，得湖北海棠CO2超临界萃取物。
海棠提取物的制备方法为：
取湖北海棠(包括全植株，或者叶、枝、根)粉，以1:15～25的固液比加入4～8mol/L的盐酸水溶液，热回流提取1.5～2.5h，趁热过滤，取上清液，减压浓缩至1:1左右的生药量，加入2～4倍体积的提取剂(例如乙醇)，搅拌均匀后3～5℃过夜；抽滤，取上清液减压浓缩至浸膏状，真空干燥得到海棠提取物。
本发明的突出优势是：发明人在对国内外几千种植物进行大规模筛查的过程中，发现了湖北海棠的不同部位中均存在7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)，既有以苷元的形式存在，也有以糖苷的形式存在。
将湖北海棠(叶)和竹取物(竹叶黄酮)这二类极具我国资源和文化特色的原料有机结合，为更年期综合征、肥胖症、骨质疏松症、抑郁症、老年痴呆症等人类日益高发的慢病防治提供精准膳食干预的有效手段。
本发明具有调节脂肪代谢、抑制向心性脂肪堆积、减小腰围和体重；增强骨骼和韧带强度、预防骨质疏松和骨折；改善大脑功能、提高学习记忆能力；调节心情、防止抑郁；改善胰岛素敏感性、调节糖脂代谢等多重功能。尤为适合对具有早更或更年期症状的超重与肥胖妇女进行精准膳食干预，也将为其他更为广泛的受众带来控制体重、预防老年痴呆(包括阿尔茨海默病和帕金森综合征)和防止抑郁的健康效应。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是7,8-DHF的紫外(UV)吸收光谱图(光谱纯甲醇溶液)。
图2是湖北海棠和竹取物复合的片剂对SDS小鼠抑郁相关指证的影响(n＝10)；
图2中，
A代表湖北海棠和竹取物复合的片剂对SDS小鼠在强迫游泳试验中不动时间的影响；
B代表湖北海棠和竹取物复合的片剂对SDS小鼠在笼子活动试验中自发活动时间的影响；
C代表湖北海棠和竹取物复合的片剂对SDS小鼠在悬尾试验中不动时间的影响；
D代表湖北海棠和竹取物复合的片剂对SDS小鼠蔗糖偏好的影响。
Normal为正常组，Control为模型组，7,8-DHF为阳性对照组，HDG为高剂量组，MDG为中剂量组，LDG为低剂量组；与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。
图3是湖北海棠和竹取物复合片剂对5XFAD小鼠空间记忆的影响(n＝10)；
Normal为正常组，Control为模型组，7,8-DHF为阳性药物对照组，HDG为高剂量组，MDG为中剂量组，LDG为低剂量组。
图4是湖北海棠和竹取物复合物抑制Aβ对原代培养大脑皮层神经元的不良影响(n＝10)
Normal为正常组，Control为模型组，7,8-DHF为阳性药物对照组，HDG为高剂量组，MDG为中剂量组，LDG为低剂量组；与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
图5是常规的超临界萃取装置的示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实验一、组合物中功能性成分的检测
(一)总黄酮含量测定(硝酸铝-亚硝酸钠比色法，以芦丁计)
1.仪器
分光光度计、电子天平、容量瓶、移液枪。
2.试剂
芦丁标准品，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇、甲醇均为分析纯，水为去离子水。
芦丁标准溶液的制备：称取经减压或常压105℃干燥至恒重的芦丁对照品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，配成150μg/mL的芦丁标准溶液。
3.测定步骤
3.1标准曲线的绘制
准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL，相当于芦丁0、75、150、300、450、600μg移入10mL刻度比色管中，加入30％乙醇溶液至5mL，各加5％亚硝酸钠溶液0.3mL，振摇后放置5min，加入10％硝酸铝溶液0.3mL摇匀后放置6min，加1.0mol/L氢氧化钠溶液4mL，用30％乙醇定容至10mL，摇匀后放置10min；以零管为空白，摇匀后用 1cm的比色杯、在510nm的波长处测定吸光度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线或求取线性回归方程。
3.2样品测定
精密称取组合物试样500～1000mg(精确至0.1mg)，加入20倍体积的30％乙醇， 50～60℃下超声辅助提取0.5h；取提取物液用30％乙醇定容。用定性滤纸过滤，即得试样溶液。取一定体积的待测液，按标准曲线制备中的操作步骤，于510nm波长处进行吸光度的测定。
4.结果计算
根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的芦丁含量，按下式求出样品总黄酮含量，单位为克每百克(g/100g)：
Figure GDA0002681508160000141
式中：
m1——依据标准曲线计算出被测液中的芦丁含量(μg)；
m2——供试品取样量(g)；
V1——待测液移取的体积(mL)；
V2——待测液的总体积(mL)
(二)四种碳苷黄酮的检测(HPLC法)
1.方法提要
试样用色谱纯甲醇溶解，以乙腈-乙酸水溶液(1+99)为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二级管阵列检测器，对试样中的异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷进行反相高效液相色谱分离和测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。
2.试剂
乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、冰乙酸(优级纯)、水(超纯水)。
碳苷黄酮(荭草苷、异荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷)标准品：纯度≥98.0％
标准溶液：准确称取4个碳苷黄酮标准品各5mg(精确至0.000 1g)，用甲醇溶解并定容至 10mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含4个碳苷黄酮各0.5mg(混标溶液)。
3.仪器和设备
高效液相色谱仪：包含可变波长的紫外光检测器和数据处理系统(色谱工作站或数据处理机)。推荐的色谱柱及典型操作条件见下表2。
表2
Figure GDA0002681508160000142
Figure GDA0002681508160000151
4.分析步骤
(1)试样处理
取一定量含有组合物的不同功能食品(如固体样品10.0g左右)，用20倍体积的30％乙醇浸润后，超声波辅助提取30min(水浴温度50℃)；取滤液，减压浓缩至1:1浓度左右(即10g 样品得到约10mL浓缩液)，冻干。取冻干物约100mg(精确至0.0001g)，用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜(0.45μm)过滤，即得试样溶液。
(2)标准曲线的绘制
准确吸取一定量的混标溶液，分别稀释4、8、10、16、20和40倍，进样10μL，在规定色谱条件下，进行色谱分析。根据标准溶液的不同进样量及相应谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标、表样浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(3)试样测定
准确吸取试样溶液10μL，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。
5.结果计算
碳苷黄酮的质量分数
Figure GDA0002681508160000152
式中：
c1——依据标准曲线计算出的待测液中的碳苷黄酮浓度的数值，单位为毫克每毫升 (mg/mL)；
V3——供试样定容体积的数值，单位为毫升(mL)；
m3——供试样取样质量的数值，单位为毫克(mg)。
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准(保留一位小数)。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过2.5％。
(三)7,8-DHF的检测(UPLC法)
1.仪器
Waters ACUITY UPLC；Millipore超纯水机；Satorius分析天平；冷冻干燥机；旋转蒸发仪；超声设备；恒温水浴锅等
测试条件：
主要设备：Waters ACQUITY UPLC H-Class(PDA检测器；EmpowerTM软件)
色谱柱：BEH C18 2.1×10mm×1.7μm
流动相：在0～20min之内从35％的甲醇水溶液逐渐变为90％的甲醇水溶液；
流速：0.2mg/min；
柱温：40℃；
检测波长：266nm；
进样量：2μL。
2.试剂
7,8-DHF标准品购自武汉万知化工医药(纯度≥99.62％)，测得其在甲醇溶液中的最大UV 吸收波长为265.9nm；无水乙醇(AR)和无水甲醇(CR)购自中国医药集团上海化学试剂有限公司；无水甲醇(GR)来自Merck。
7,8-DHF的紫外(UV)吸收光谱(光谱纯甲醇溶液)如图1所述。
3.标准曲线
精称7.00mg的7,8-DHF标样溶解于纯甲醇，并定容至5mL，混匀，制成浓度为1.4mg/mL 的标准品贮备液；分别取上述溶液0.05、0.08、0.1、0.15、0.2、0.4mL于10mL容量瓶中，用20％甲醇溶液定容，获得不同浓度梯度的标准溶液,过0.22μm有机滤膜，用UPLC法测定，获得标准工作曲线。
4.样品处理
取一定量含有组合物的不同功能食品(如固体样品10.0g左右)，用20倍体积的30％乙醇浸润后，超声波辅助提取30min(50℃)；取滤液，减压浓缩至1:1浓度左右(即10g试样得到10mL浓缩液)，冻干。取冻干物约0.2g，用20％甲醇水溶液溶解，并定容至5mL，涡旋振荡混匀，过0.22μm有机滤膜，待UPLC检测。
5.结果分析
在规定色谱条件下，水试样进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量，计算组合物产品中的7,8-DHF含量。
以下案例中：
竹叶黄酮购自杭州尤美特科技有限公司的竹叶黄酮粉末(BLF-d24)，总黄酮含量≥24％；
竹笋甾醇是由浙江大学生物系统工程与食品科学学院的“天然产物与人类健康”研究中心提供的粉末样品，总甾醇含量为25％；
竹茹三萜是由浙江大学生物系统工程与食品科学学院的“天然产物与人类健康”研究中心提供的粉末样品，总三萜皂苷含量为45％；
竹笋氨基酸肽是由浙江大学生物系统工程与食品科学学院的“天然产物与人类健康”研究中心提供的粉末样品，总氨基酸含量为21％；
竹多糖由湖南城步锦龙农林科技开发有限责任公司提供，灰白色粉末，多糖含量为35％；
竹硅由印度Indfrag公司(INDFRAG LTD，INDIA)提供，白色结晶或粉末，有机硅含量为70％；
竹膳食纤维微粉(平均细度为800目)由湖南城步锦龙农林科技开发有限责任公司提供，纤维总量为79％。
实施例1、以湖北海棠和竹叶黄酮为主要功能成分的压片糖果
取海棠茶(干叶，含水率≤8％)用中草药粉碎机达成80～100目的粉末后，再用纳米冲击磨制成800～1000目的微粉，得海棠叶粉。
取海棠果干(含水率≤10％)用中草药粉碎机达成80～100目的粉末后，再用纳米冲击磨制成800～1000目的微粉，得海棠果粉。
将上述海棠叶粉和海棠果粉与其他原辅料配合、混料均匀后压片，其配方组成见表3。每片净重0.8g，总黄酮含量≥40mg/片，其中代表性成分：7,8-DHF、异荭草苷、荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷的含量每片干重分别≥7.5mg、2.5mg、1mg、0.35mg和1.4mg。
表3、压片糖果配方
组分 质量(kg) 质量百分比(％)
海棠叶粉 2 40
海棠果粉 1 20
竹叶黄酮 0.5 10
木糖醇 0.8 16
麦芽糖醇 0.25 5
竹膳食纤维 0.25 5
聚乙烯醇(高黏度) 0.2 4
选取具有早更和更年期症状及绝经后妇女共10人(年龄分布在35～64岁之间)，进行为期3～6个月的试食试验。视个体情况不同，日摄入压片糖果3～6片(一次或分次摄入)。受试对象的基本情况见表4(除代谢性慢病以外，无其他疾病指证)。
表4、受试人员基本情况
Figure GDA0002681508160000171
Figure GDA0002681508160000181
试验期间保持原有生活方式不变，即能量摄入(食量)和消耗(运动量)基本不变，膳食补充剂和保健品等摄入也维持原状(在备注栏内加以说明)。分别于试验开始前和结束后抽取空腹血样，测定血脂、血胆固醇、性激素水平和骨密度；每周同一时间记录体重和腰围，同时记录试验期间的各种自觉症状，如对食欲、睡眠、心情、排便、血压等的影响。及试验前后体脂和血脂变化的情况如表5所示。
表5压片糖果(湖北海棠和竹叶黄酮组合物)对体脂和血脂的调节作用
Figure GDA0002681508160000191
表5数据显示了压片糖果对受试者体脂和血脂的调节作用。10名受试人员在试验周期中，除了7#(试验前BMI为19.53)表现出轻微增重外，其余9名的体重减少幅度在0.7～4.5kg 之间；而全部受试人员的腰围均显著减少(3～8cm)，表明体重的下降主要是由于向心性脂肪的减少带来的。其中，超重的试验者(1#、3#、9#)表现出更为有效的减低体重和收缩腰围的作用，肥胖的试验者(2#、5#、10#)其次；对正常体重范围(4#、6#、7#、8#)的试验者而言，腰围的减少显著于体重的降低，表明本发明产品的主要作用位点是动员了腰腹部脂肪的燃烧。已知7,8-DHF的减肥机制之一是通过作用于肌肉中的TrkB受体，诱导了与非战栗产热相关的一种线粒体蛋白UCP1在肌肉中异位表达及AMPK的活化，从而增加全身的能量支出及脂肪利用，即提高了人体的基础代谢率。与此同时，从表5的数据中还可看到，多数试验者的TG、TC和LDL-c水平均呈现下降趋势，其中1#和2#经过6个月试验后血清单脂质异常值回归至正常水平；7#、9#、10#显著下降。
从6位受试对象中还采集到了试验前后腰围、臀围和雌激素水平变化的数据(见表6)。经过3～6个月的摄食试验，由于腰围的明显减少，带来了腰臀比的显著改善，并表现出与雌二醇和孕酮水平的增加及卵泡刺激素和促黄体素水平下降之间的关联性。
此外，还采集到了3位受试者试验前后骨密度的变化情况(见表7)。1#(56岁)连续摄食9个月压片糖果后，骨密度从-3.8提高到-1.8；4#(51岁)连续摄食3个月的压片糖果后，骨密度从-3.3提高到+1.2；6#(53岁)连续摄食3个月的压片糖果后，骨密度从-1.8上升到+0.3。同时从表7中可见，在骨密度大幅度增长的同时，雌二醇与孕酮水平的显著增加和卵泡刺激素与促黄体素的显著下降，表明在雌激素水平提升的同时，卵巢功能得到显著改善。
表6压片糖果对腰臀比、胸围和雌激素水平的影响
Figure GDA0002681508160000201
*对于例假正常者，抽血化验的时间点为例假结束后2-3天；对于例假不正常或已绝经者，试验前后固定在同一个时间节点抽血。
更加重要的是，6名采集到腰臀比和胸围数据的受试者，在腰围显著缩减的同时，胸围都保留在原值，显示出本发明组合物“减腰不减胸”的重要功能特征。这一点，对女性群体而言是至关重要的。目前市面上几乎所有的减肥产品，很难能实现靶向性减脂。通常是在减肥的过程中胸部和腰部一起收缩，而在反弹的过程中则腰部“一马当先”、胸部“一蹶不振”。
最为极端的情况发生在4#受试者身上。51岁的她多年来体态苗条，身体素质好，几乎从不摄食保健品、也不补钙。但近年来腰腹部开始囤积脂肪，例假不正常，并表现出记忆力下降、睡眠质量不良、经常性地腿抽筋、情绪不稳定、心情不佳、易怒等更年期症状。摄食压片糖果的一周后，即感觉到记忆力改善，一个月后自觉情绪明显改善。3个月后的雌激素水平(雌二醇584pmol/mL、孕酮38.69ng/mL、卵泡刺激素1.21IU/L、促黄体素0.36IU/mL) 令妇科医生瞠目，嘱其用阴道B超测定子宫内膜厚度(测得厚度为1cm)，医生推断其一周内必来例假，否者属异常情况。结果是，5日后例假如期而至(行经一切正常)。采用超声波测得的骨密度(脚后跟)大幅度提升(从-3.3上升到+1.2)，为了验证其可靠性，1周后4#又采用双能X射线骨密度仪测定了腰椎(1-4)和脊柱(L1-L4)的骨密度，得到的Z值为-0.9 (注：绝经前妇女Z值大于-2.0示骨密度在同龄人范围)。这不能不说是膳食干预更年期综合征的一个奇迹。具体如表7所述。
表7压片糖果对更年期妇女骨密度和雌激素水平的影响
Figure GDA0002681508160000211
*采用超声波骨密度测定仪得到的脚后跟骨密度数据。
实施例2、以湖北海棠果及其全植株萃取物为主要功能成分的固体饮料
海棠果粉的来源和制法同实施例1。
湖北海棠CO2超临界萃取物的制备：
将晒干后(含水率≤8％)的湖北海棠全植株(含叶、枝和根)粉碎成20目左右的粗粉，取5kg放入萃取釜内，升温到55℃，开动CO2泵，升压到30兆帕，通过预热器进入萃取釜内；开启夹带剂泵，使10％体积比的丙酮(即，每1kg湖北海棠全植株粗粉配用100mL的丙酮)通过预热器后同时进入萃取釜(即下图所示的萃取柱)，在55℃下进行动态萃取3h。分离釜1设定分离压力为8兆帕、温度为45℃，分离釜2设定分离压力为5～6兆帕、温度为27～30℃；从分离釜1(即下图所示的盛样器1)中取出目标产物，经低温干燥(真空干燥箱50℃干燥50分钟)、粉碎后(粉碎至过80目的筛)，得到湖北海棠CO2超临界萃取物120 克，产率约为2.4％；从分离釜2(即图中所示的盛样器2)中回收夹带剂。
超临界萃取装置包括萃取釜、CO2泵、预热器、夹带剂泵、分离釜等，具体如图5所述(此属于现有技术)。
固体饮料的配方见表8。每包试样净重1.5g，饮用时按1:200的固液比热水冲泡。该固体饮料的主要功能组分为黄酮、三萜和多糖，每包含总黄酮≥50mg，其中7,8-DHF含量≥8mg。主要保健功效表现在：美容养颜、整肠通便和改善更年期症状。
表8、固体饮料配方
组分 质量(kg) 百分比(％)
海棠果粉 3 30
洛神花粉* 3 30
海棠全植株超临界萃取物 1 10
低聚半乳糖 1.4 14
竹多糖 1.4 14
三氯蔗糖 0.2 2
*将市售的洛神花(干花)采用纳米冲击磨粉碎成800～1000目的微粉。
选择具有便秘症状的更年期妇女5名(年龄在48～58之间)，用本发明的固体饮料进行了为期3个月的膳食干预，每日早晚各摄食1包。试验结果见表9。
表9固体饮料对更年期妇女便秘症状的改善作用
Figure GDA0002681508160000221
注：“+++”表示极显著改善，“++”显著改善，“+”改善；“-”无明显改善
由表9可见，5名更年期妇女在摄食本发明的固体饮料3个月后，体重和腰围均不同程度地下降，多种自诉症状有不同程度改善，尤其是便秘症状得到显著和极显著改善。比较典型的是1#(老家江西)和4#(老家湖南)受试者，年轻时无辣不欢，但自从步入更年期和绝经期后，一吃辣就上火，大便干结，排便困难，经常还会引发痔疮发作。摄食固体饮料几天后就开始起效，1个月后“吃辣—上火—便秘—痔疮发作”的死循环就被破解，3个月后得到极显著改善。2#和3#的受试者情况则不相同，属于痰湿型体质，体内湿气很重，大多数时候大便糖稀、不成形，3个月后排便状况得到显著改善。表明以湖北海棠果及其全植株萃取物为主成分的固体饮料起到了显著的整肠和通便作用，这种作用可能与其调节肠道菌群、促进肠胃蠕动等机制有关。
与此同时，受试者一致反映，摄食固体饮料3个月后，皮肤光洁度和透亮度显著改善，睡眠质量变好，口臭情况缓解，情志舒展。但对记忆改善的自诉并不一致，可能与其指证较为模糊有关。
实施例3、湖北海棠和竹硅组合物对绝经期大鼠骨质疏松的干预作用
取20目左右的海棠叶粉2kg，以1:20的固液比加入6mol/L的盐酸水溶液40L，热回流提取2h，趁热过滤，取上清液，减压浓缩至1:1左右的生药量(即，得2L左右浓缩液)，加入3倍体积的乙醇，搅拌均匀，冷却，放置冰箱4℃(冷藏室)过夜(12h)。抽滤，取上清液减压浓缩至浸膏状，50℃下真空干燥得到海棠叶提取物约0.8kg，得率约为40％。
取上述海棠叶粉提取物100g，与竹硅(市售产品再用纳米冲击磨粉碎成800～1000目的微粉)50g混合均匀，套装成每粒净重为250mg的硬胶囊。每粒胶囊的总黄酮含量≥15mg，其中7,8-DHF的含量≥2.5mg。
以模拟绝经期状态的SD大鼠为试验模型、以骨碎补总黄酮(DRTF)为阳性对照，进行抗骨质疏松的作用研究。
1.实验动物
健康6月龄雌性SD大鼠60只，体重250±20g，随机分成6组(正常组、模型组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组)；试验前于动物房适应7d，动物房温度控制在 (23±2)℃，相对湿度为50～60％，12h昼夜循环(7:00～19:00)。
2.试样及对照品
用生理盐水配制0.5％CMC(羧甲基纤维素)溶液作为溶剂，将胶囊粉状物配制成高中低不同浓度的混悬液。保存于4℃冰箱中。每次给药前取出置于超声波清洗机中，37℃振荡预热15min。试样每周配制1次。
骨碎补总黄酮(DRTF，总黄酮含量≥80％)：来自北京岐黄药业有限公司，用上述同样方法配制成75mg/mL的悬浮液。
3.动物造模与治疗
去势手术大鼠适应性喂养7d后，随机分为两组，正常组10只和去卵巢组50只。正常组只去除卵巢周围少量脂肪组织，去卵巢组施行卵巢切除术，术后注射3天40万IU·kg-1。BW的青霉素预防感染。
分组给药手术完成待大鼠苏醒之后，将去卵巢组随机分为5个组(模型组、阳性对照组和高、中、低3个试验组)，每组10只，分笼喂养。每天适时添加饲料、换水，观察生存状态，给药前各组大鼠体重无统计学差异，大鼠术后一周基本恢复，进行试验。各组灌胃药物及相应剂量：①正常组：同体积0.5％CMC溶液；②模型组：同体积0.5％CMC溶液；③阳性对照组：每天给予DRTF 75mg/kg体重；④试验组：分别给予每日胶囊内容物400、200、100mg/kg体重。连续灌胃12周。给药期间，每两周称量体重一次。
4.指标检测
血清生化指标采用全自动生化仪检测。骨转换指标采用酶联免疫法检测血清骨钙素() (S-BGP)和尿液脱氧吡啶啉(U-DPD)的含量。骨矿密度(BMD)及骨矿含量(BMC)用骨密度测定仪的小动物模式对大鼠进行全身扫描。应用三点弯曲力学实验测定大鼠左侧股骨的生物力学性能，采用万能材料实验生物力学机进行测试，由力学实验测试机自带软件记录载荷-变形曲线和分析数据，所测定的生物力学参数包括骨应力(max-stress)和弹性模量(Young's modulus)。
5.试验结果
大鼠血清骨钙素(S-BGP)检测结果显示，模型组血清中的含量明显高于正常组(P<0.01)，而阳性对照组和高、中、低剂量组则不同程度地抑制由于卵巢切除而导致的血清中S-BGP水平升高。大鼠尿液脱氧吡啶啉(U-DPD)的检测结果显示，阳性对照组和高、中、低剂量组U-DPD含量明显高于正常组，但相对模型组而言，则有不同程度的降低，且高中低剂量组间表现出浓度依赖的趋势,说明湖北海棠和竹硅的组合物能够抑制卵巢切除后大鼠尿液中 U-DPD水平的升高。骨密度仪扫描结果显示,去卵巢12周后，模型组大鼠股骨的骨矿密度(BMD)显著低于正常组(P<0.01)，阳性对照和高、中、低剂量组显著增加了大鼠股骨的 BMD(P<0.01)，但骨矿含量(BMC)在各组之间未见显著性变化。三点弯曲力学测定结果显示，模型组大鼠与正常组相比，反映骨结构力学特性变化的股骨内在特性指标----骨应力 (max-stress)和弹性模量(Young's modulus)均显著性下降(P<0.01)；与模拟组相比，阳性对照和高、中剂量组均不同程度地增加了骨应力和弹性模量。数据详见表10。
表10、湖北海棠和竹硅组合物对绝经期大鼠骨质疏松的干预效果(平均值±标准偏差，n＝10)
Figure GDA0002681508160000241
注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。
对比例1-1、直接将实施例3制备而得的海棠叶粉提取物套装成每粒净重为250mg的硬胶囊(即，取消了竹硅的使用)。
对比例1-2、将实施例3中的“海棠叶粉提取物100g、竹硅50g”改成“海棠叶粉提取物100g、竹硅100g”，其余等同于实施例3。
上述2种硬胶囊的绝经期大鼠骨质疏松的效果的检测方式同实施例3，高剂量组对应所得的所得结果如下表11。
表11、湖北海棠与竹硅不同的比例对绝经期大鼠骨质疏松的干预效果(平均值±标准偏差， n＝10)
Figure GDA0002681508160000242
Figure GDA0002681508160000251
注：与表9模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001，与表9高剂量组比较，￥P<0.05
对比例1-1高剂量组中，相比较于模型组，除BMC外，S-BGP、U-DPD、BMD、Max-stress和Young's modulus均得到了不同程度的改善，说明单独使用海棠叶粉提取物对绝经期大鼠骨质疏松也具有较好的改善作用。将海棠叶粉提取物与竹硅的配比由2:1改为1:1后，相比较于 2:1时的高剂量组(表10)，U-DPD存在显著差异(P<0.05)，其余各组则无显著性差异。从数值上来看，改善程度略有下降，但与模型组相比，除BMC外，S-BGP、U-DPD、BMD、 Max-stress和Young's modulus的改善效果仍十分显著。说明竹硅与湖北海棠以适当比例配伍能有效改善绝经期大鼠的骨质疏松症状。
实施例4、湖北海棠和竹取物复合对神经功能障碍的干预作用
将湖北海棠全植株的粗粉(同实施例2)，采用实施例3的酸提醇沉法制得海棠提取物 (干粉)，将其与一定量的竹叶黄酮和竹多糖混合均匀后干法造粒，造粒完成后加入1％质量比的硬脂酸镁后压成素片(配方见表12)。每片净重350mg，总黄酮含量≥35mg/片。其中，代表性成分：7,8-DHF、异荭草苷、荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷的含量每片干重分别≥5mg、 2.5mg、1mg、0.35mg和1.4mg。
表12、片剂配方
组分 质量(kg) 质量百分比(％)
海棠全株提取物 5 50
竹叶黄酮 3 30
竹多糖 1.9 19
硬脂酸镁 0.1 1
1.动物造模和分组治疗
将120只C57BL/6小鼠(体重30±2g)随机分成6组(即正常组、模型组、阳性对照组和片剂的高、中、低剂量组)。动物房温度控制在(23±2)℃，相对湿度为40～50％，12h昼夜循环(7:00～19:00)。分别对试验小鼠进行相应的造模处理，即成为社交失败模型小鼠(SDS小鼠)和阿尔兹海默症小鼠(5XFAD小鼠)。
用水作为溶剂，将片剂碾碎后配成400mg·mL-1的混悬液，7,8-DHF配制为20mg/mL的混悬液。试样配好后保存于4℃冰箱中，每次给药前取出置于超声波清洗机中、37℃振荡预热15min，每周配药1次。各组灌胃给药及相应剂量如下：①正常组:同体积的水溶液；②模型组:同体积水溶液；③阳性对照组：20mg/kg.体重的7,8-DHF；④试验组:片剂400 mg/kg.BW(高剂量)、300mg/kg.BW(中剂量)和200mg/kg.BW(低剂量)；连续灌胃12周。
阳性对照药物(7,8-DHF)由湖北武汉万知化工医药有限公司提供，纯度≥99.62％)。
抗抑郁的动物试验
将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、抑郁模型组(SDS)、7,8-DHF阳性对照组和片剂的高、中、低剂量组。除了第一、二组之外，其余各组于造模成功一周后灌胃给药进行干预，以抑郁行为学的改变作为评价标准。
强迫游泳试验：将小鼠保持平衡所必须的最小肢体划动及完全静止记为不动，观察并记录6min内的后4min不动时间总和，游泳不动时间表示为FST-L(s)；
笼子活动试验：利用笼子活动装置观察小鼠活动的状态，经过两分钟的适应期后，在垂直的光线照射下，记录6分钟内小鼠自发运动的时间，自发运动时间表示为SLA-T(s)；
悬尾试验：利用自动悬尾装置，观察并记录6min内的后4min不动时间总和，悬尾不动时间表示为TST-L(s)；
糖水消耗试验：禁食禁水4h后的小鼠给予两只分别装有蔗糖溶液和饮用水的相同水瓶，以1h内小鼠的蔗糖溶液消耗与饮用水加蔗糖溶液消耗总和之比反映其快感缺失状态；蔗糖偏嗜度表示为SP(％)。
3.改善记忆的动物试验
阿尔兹海默症小鼠(5XFAD)给药12周后进行Morris水迷宫检测。Morris水迷宫仪由圆形水池和自动录像及分析系统两部分组成，水池上方有一摄像机与计算机相连接。当设定的训练时间(120s)已到或动物已爬上平台，计算机便停止跟踪并记录游泳轨迹。训练3d后开始记录小鼠从入水池找到平台所用的时间(即逃避潜伏期)，共记录5d，逃避潜伏期表示为LAT(s)。
4.抑制Aβ对原代培养大脑皮层神经元的影响
采用体外细胞模型评价时，将片剂碾碎后用70％乙醇(1:20固液比)超声辅助萃取0.5h 后，回收乙醇后用PBS缓冲液定容。
在原代培养大脑皮层神经元(DIV 12)中加入或不加入阳性药物(7,8-DHF)、片剂高剂量(HDG)、中剂量(MDG)和低剂量(LDG)，并加入预聚合的Aβ(20μmol/L)共孵育 18h。采用免疫染色法检测神经元标志物MAP2，采用TUNEL染色法检测神经元凋亡，量化TUNEL阳性细胞反映凋亡率(APO，％)。
5.试验结果
(1)抗抑郁作用
如图2所示，强迫游泳试验表明模型组小鼠的不动时间显著高于正常组(P<0.001)说明造模成功，阳性对照和高、中、低剂量组均不同程度地减少了不动时间(图2A)。悬尾实验也得到了相似的结果(图2C)。笼子活动实验中，模型组小鼠的自发活动时间显著低于正常组(P<0.001)，而阳性对照组和高、中、低剂量组均显著延长了自发活动时间(P<0.01)(图2B)。糖水偏好实验显示，与正常组相比，模拟组小鼠蔗糖偏好度显著下降(P<0.01)(图2D)，但通过7,8-DHF和高、中、低3个剂量的片剂膳食干预，均不同程度的提高了小鼠的蔗糖偏好能力。因此，本发明的湖北海棠和竹取物复合而成的片剂具有一定的抵抗抑郁症功效。
(2)改善记忆
通过水迷宫试验检测了5XFAD小鼠的空间记忆能力。图3所示各组小鼠随着训练天数增加，逃避潜伏期越来越短，表明实验小鼠在学习训练过程中已逐渐学会寻找平台，但学习记忆能力存在明显差异，同时组别对潜伏期具有显著影响，但二者并无交互作用。与正常组比较，模型组的逃避潜伏期明显延长(P<0.01)；与模型组比较，7,8-DHF和片剂的高、中剂量组逃避潜伏期明显缩短(P<0.01)。因此，高、中剂量片剂在一定程度上改善了5XFAD小鼠的空间记忆能力。
(3)抑制Aβ对原代培养大脑皮层神经元的不良影响
由图4可见，使用Aβ预处理大鼠原代大脑皮层神经元。对神经元进行微管相关蛋白2 (MAP2)免疫染色及原位末端标记法(TUNEL)染色，通过细胞量化发现，Aβ单独处理后，神经元凋亡率显著提高(P<0.01)，而7,8-DHF和片剂的高、中、低剂量组均能够有效抑制Aβ引起的神经元凋亡(P<0.05)。表明，本发明的组合物片剂可在一定程度上缓解阿尔兹海默症的症状。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (7)

1.以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物，其特征是：
所述组合物的有效成分由湖北海棠和竹取物组成，湖北海棠：竹取物＝1～4:1的重量比；
所述湖北海棠为以下2者中的至少一种：湖北海棠植株、湖北海棠提取物；
所述竹取物为以下4者中的至少一种：竹叶黄酮、竹硅、竹子多糖、竹膳食纤维；
所述组合物中含有7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)：
Figure FDA0002681508150000011
2.根据权利要求1所述的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物，其特征是：
湖北海棠植株指以下任一：湖北海棠叶片、湖北海棠果、湖北海棠全植株；
湖北海棠提取物是指以下任一的提取物：湖北海棠叶片、湖北海棠果、湖北海棠全植株。
3.根据权利要求2所述的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物，其特征是：
所述组合物还含有下述4种黄酮类化合物中的任意一种：
Figure FDA0002681508150000012
4.根据权利要求3所述的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物，其特征是所述有效成分为以下任意一种：
有效成分由海棠叶粉：海棠果粉：竹叶黄酮：竹膳食纤维＝4:2:1:0.5的重量比组成；
有效成分由海棠叶粉提取物：竹硅＝1:1的重量比组成；
有效成分由海棠全株提取物：竹叶黄酮：竹多糖＝5:3:1.9的重量比组成。
5.如权利要求1～4任一所述的以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物制备而成的功能性食品，其特征是：该功能性食品中，有效成分的含量≥30％。
6.如权利要求1～4任一所述的以湖北海棠及竹取物为有效成分的组合物的用途，其特征是：用于制备预防或治疗以下任一疾病的药物：
向心性肥胖、早更/更年期综合症、老年痴呆症及抑郁症。
7.根据权利要求6所述的以湖北海棠及竹取物为有效成分的组合物的用途，其特征是：
预防或治疗早更/更年期综合症包括：提高雌激素水平、缓解更年期症状；抑制向心性脂肪堆积、减小腰围和体重、保持苗条体态；预防骨质疏松和骨折；提高学习记忆能力、预防老年痴呆；防止抑郁。
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