CN102879518B - 降血压、降血脂药物的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种降血压、降血脂药物的检测方法，该法对现有决明山绿茶有关中药制剂质量检测进行了改进，主要是增加了三七叶、决明子药材及决明子中大黄酚的薄层色谱鉴别，以及决明子中大黄酚的含量测定方法。本发明的检测方法稳定性佳、重现性好、专属性强且操作简单，据此建立决明山绿茶新的质量控制标准，可帮助有效控制决明山绿茶生产中的成品质量和提高其质量水平，保证生产工艺可控，确保临床使用疗效，为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。

Description

降血压、降血脂药物的检测方法
技术领域
本发明属于药物质量检测领域，尤其是一种降血压、降血脂药物的检测方法。
背景技术
决明山绿茶系一种降血压、降血脂药物，是由山绿茶、三七叶、决明子、白芍、陈皮等药味制成的袋泡茶剂，具有清热平肝、化瘀活血功效，用于高血压、高血脂症和肝阳上亢引起的眩晕等症的辅助治疗。国家药品监督管理局标准（试行）WS-5809(B-0809)-2002中只有山绿茶和白芍两味药材的薄层鉴别，没有涉及含量控制方法，难以有效控制生产中的成品质量，不同批次产品的质量没有规范的指标来进行衡量，无法确保产品疗效，对临床治疗影响巨大。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种稳定佳、重现性好、专属性强且操作简单的降血压、降血脂药物的检测方法，帮助有效控制决明山绿茶生产中的成品质量和提高其质量水平，确保临床使用疗效。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：降血压、降血脂药物的检测方法，包括以下步骤：
<1>三七叶的薄层色谱鉴别
<2>决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别
<3>药物中大黄酚的含量测定
上述降血压、降血脂药物为决明山绿茶。
上述的降血压、降血脂药物的检测方法，各步骤按以下操作：
<1>三七叶的薄层色谱鉴别
取决明山绿茶4.5g，研细，置研钵中，用7％（g/ml）硫酸溶液研磨提取3次，每次25-30ml，滤过，合并硫酸提取液，置沸水浴中加热回流1-1.5小时，放冷，用石油醚（30～60℃）提取3次，每次30ml，合并石油醚提取液，水浴蒸干，残渣用氯仿0.5ml溶解，作为供试品溶液；另取三七叶药材2.4g，同法制成对照药材溶液；再取人参二醇对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－丙酮混合溶液（体积比5-8：2-6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％（g/ml）硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；
<2>决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别
取决明子药材2.4g，用7％（g/ml）硫酸溶液研磨提取3次，每次25-30ml，滤过，合并硫酸提取液，置沸水浴中加热回流1-1.5小时，放冷；用石油醚（30～60℃）提取3次，每次30ml，合并石油醚提取液，水浴蒸干，残渣用氯仿0.5ml溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取鉴别步骤<1>中供试品溶液及上述二种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯－甲酸混合溶液（体积比10-12：0.5-1：0.1-0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视；
<3>药物中大黄酚的含量测定
照《中国药典》2010年版一部附录VID的高效液相色谱测定方法试验：
3.1色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；甲醇－0.1%磷酸水溶液（体积比75：25）为流动相；检测波长为254nm，理论板数按大黄酚峰计算不低于2500；
3.2对照品溶液的制备，取大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含33μg的溶液，即得；
3.3供试品溶液的制备，取决明山绿茶装量差异项下的内容物，研细，混匀，取粉末约1.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20-40ml，密塞，称定重量，水浴加热回流1-1.5小时，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液10ml，水浴蒸干，残渣加水20-30ml、盐酸2-3ml、氯仿20-40ml，水浴加热回流0.5-1小时，放冷，分取氯仿层，水层用氯仿振摇提取3次，每次15-20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液，即得，测定前用0.45μm的有机微孔滤膜过滤；
3.4测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
其中，%（g/ml）表示每100ml溶液中含有溶质若干克。
上述的降血压、降血脂药物的检测方法，步骤<1>供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；步骤<2>供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；步骤<3>高效液相色谱中，测得每袋决明山绿茶含决明子以大黄酚（C15H10O4）计，不得少于0.3mg。
上述决明山绿茶按以下步骤制备：山绿茶1600克、三七叶1600克、决明子1600克、白芍1600克、陈皮160克，将山绿茶粉碎成粗粉，其余四味加水煎煮三次；第一次加水10倍重量，煎煮1小时，第二次加水8倍重量，煎煮1小时，第三次加水8倍重量，煎煮1小时；合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.30（60℃）的清膏，加入山绿茶粗粉，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000袋，即得。
针对现有决明山绿茶有关中药制剂检测方法存在的问题，发明人进行了改进，主要是增加了三七叶、决明子药材及决明子中大黄酚的薄层色谱鉴别，以及决明子中大黄酚的含量测定方法。本发明的检测方法稳定性佳、重现性好、专属性强且操作简单，据此建立决明山绿茶新的质量控制标准，可帮助有效控制决明山绿茶生产中的成品质量和提高其质量水平，保证生产工艺可控，确保临床使用疗效，为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明。
实施例1决明山绿茶的制备
山绿茶1600克、三七叶1600克、决明子1600克、白芍1600克、陈皮160克，将山绿茶粉碎成粗粉，其余四味加水煎煮三次；第一次加水10倍重量，煎煮1小时，第二次加水8倍重量，煎煮1小时，第三次加水8倍重量，煎煮1小时；合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25（60℃）的清膏，加入山绿茶粗粉，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000袋，即得。
性状：本品为棕褐色的颗粒状袋装茶剂；气微香,味微苦、微甘。
实施例2应用本发明检测决明山绿茶质量
按以下操作：
<1>三七叶的薄层色谱鉴别
取决明山绿茶4.5g，研细，置研钵中，用7％（g/ml）硫酸溶液研磨提取3次，每次25ml，滤过，合并硫酸提取液，置沸水浴中加热回流1小时，放冷，用石油醚（30～60℃）提取3次，每次30ml，合并石油醚提取液，水浴蒸干，残渣用氯仿0.5ml溶解，作为供试品溶液；另取三七叶药材2.4g，同法制成对照药材溶液；再取人参二醇对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－丙酮混合溶液（体积比5：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％（g/ml）硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
<2>决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别
取决明子药材2.4g，用7％（g/ml）硫酸溶液研磨提取3次，每次25ml，滤过，合并硫酸提取液，置沸水浴中加热回流1小时，放冷；用石油醚（30～60℃）提取3次，每次30ml，合并石油醚提取液，水浴蒸干，残渣用氯仿0.5ml溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取鉴别步骤<1>中供试品溶液及上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯－甲酸混合溶液（体积比10：0.5：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。
<3>药物中大黄酚的含量测定
照《中国药典》2010年版一部附录VID的高效液相色谱测定方法试验：
3.1色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；甲醇－0.1%磷酸水溶液（体积比75：25）为流动相；检测波长为254nm，理论板数按大黄酚峰计算不低于2500；
3.2对照品溶液的制备，取大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含33μg的溶液，即得；
3.3供试品溶液的制备，取决明山绿茶装量差异项下的内容物，研细，混匀，取粉末约1.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，水浴加热回流1小时，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液10ml，水浴蒸干，残渣加水20ml、盐酸2ml、氯仿20ml，水浴加热回流1小时，放冷，分取氯仿层，水层用氯仿振摇提取3次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液，即得，测定前用0.45μm的有机微孔滤膜过滤；
3.4测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
结果：测得每袋决明山绿茶含决明子以大黄酚（C15H10O4）计为0.42mg。

Claims (3)

1.一种降血压、降血脂药物的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
<1>三七叶的薄层色谱鉴别
取决明山绿茶4.5g，研细，置研钵中，用7％g/ml硫酸溶液研磨提取3次，每次25-30ml，滤过，合并硫酸提取液，置沸水浴中加热回流1-1.5小时，放冷，用石油醚30～60℃提取3次，每次30ml，合并石油醚提取液，水浴蒸干，残渣用氯仿0.5ml溶解，作为供试品溶液；另取三七叶药材2.4g，同法制成对照药材溶液；再取人参二醇对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比5-8：2-6的苯－丙酮混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％g/ml硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；
<2>决明子药材及大黄酚的薄层色谱鉴别
取决明子药材2.4g，用7％g/ml硫酸溶液研磨提取3次，每次25-30ml，滤过，合并硫酸提取液，置沸水浴中加热回流1-1.5小时，放冷；用石油醚30～60℃提取3次，每次30ml，合并石油醚提取液，水浴蒸干，残渣用氯仿0.5ml溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取鉴别步骤<1>中供试品溶液及上述二种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比10-12：0.5-1：0.1-0.5的苯－醋酸乙酯－甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
<3>药物中大黄酚的含量测定
照《中国药典》2010年版一部附录VID的高效液相色谱测定方法试验：
3.1色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；体积比75：25的甲醇－0.1%磷酸水溶液为流动相；检测波长为254nm，理论板数按大黄酚峰计算不低于2500；
3.2对照品溶液的制备，取大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含33μg的溶液，即得；
3.3供试品溶液的制备，取决明山绿茶装量差异项下的内容物，研细，混匀，取粉末约1.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20-40ml，密塞，称定重量，水浴加热回流1-1.5小时，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液10ml，水浴蒸干，残渣加水20-30ml、盐酸2-3ml、氯仿20-40ml，水浴加热回流0.5-1小时，放冷，分取氯仿层，水层用氯仿振摇提取3次，每次15-20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液，即得，测定前用0.45μm的有机微孔滤膜过滤；
3.4测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
其中，%g/ml表示每100ml溶液中含有溶质若干克。
2.根据权利要求1所述的降血压、降血脂药物的检测方法，其特征在于：
步骤<1>供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
步骤<2>供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。
3.根据权利要求2所述的降血压、降血脂药物的检测方法，其特征在于所述决明山绿茶按以下步骤制备：山绿茶1600克、三七叶1600克、决明子1600克、白芍1600克、陈皮160克，将山绿茶粉碎成粗粉，其余四味加水煎煮三次；第一次加水10倍重量，煎煮1小时，第二次加水8倍重量，煎煮1小时，第三次加水8倍重量，煎煮1小时；合并煎液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.20～1.30的清膏，加入山绿茶粗粉，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000袋，即得。
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