CN102854281A - 一种无糖型强力枇杷露的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明关于一种无糖型强力枇杷露的检测方法，包括对薄荷脑的鉴别、罂粟壳的鉴别和枇杷叶的鉴别以及罂粟壳含量的测定。本检测方法的发明，能有效的控制产品质量，既保证了产品疗效，又不易使人产生成瘾性。
Description
技术领域
本发明涉及一种枇杷露的检测方法，尤其涉及一种无糖型强力枇杷露的检测方法，属于中药检验领域。
背景技术
强力枇杷露由薄荷脑、枇杷叶、罂粟壳、百部、桑白皮、百前、桔梗七位中药组成。现有的强力枇杷露（有糖型、无糖型）以及类似该成分的纯中药制剂强力枇杷露（有糖型、无糖型）检测方法简单，仅鉴别中药成分中的一类成分（生物碱类），不能很好的有效控制产品内在质量。这样的质量标准将给不法分子带来投机的机会，以其他药材代替处方中所规定的药材，严重影响患者的切身利益，所以按现有的质量标准控制所生产的产品均不能很好的适合临床要求。
本发明的目的是防止不法分子为了符合产品检验标准而进行生产的不良行为。本发明的检测方法按中医理论，将处方中的起主要作用的药味按其使用量合理计算取样量来进行检验，对易使人产生成瘾性的罂粟壳根据来货检验情况合理调配投料，以便使最终产品既有疗效，又不使人产生成瘾性。该检测方法的发明符合当今国家倡导的提升中药及中成药质量标准的大行动，为其他中成药标准的提升奠定了坚实基础，提供了新的思路，并且解决了现在一些不法分子为了利益而偷工减料的行为。
发明内容
为了解决现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种无糖型强力枇杷露的检测方法，不仅能有效的控制产品质量，又不易使人产生成瘾性。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种无糖型强力枇杷露的检测方法，该检测方法包括对薄荷脑的鉴别、罂粟壳的鉴别和枇杷叶的鉴别以及罂粟壳含量的测定。
其中，所述的对薄荷脑的鉴别方法，包括以下步骤：
取无糖型强力枇杷露40mL，在30~60℃下，用石油醚振摇提取2次，每次40mL，合并石油醚液，挥发至2mL，作为供试品溶液；另取薄荷脑对照品，在30~60℃下，加石油醚制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；按薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比17:3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
其中，所述的对罂粟壳的鉴别方法，包括以下步骤：
取无糖型强力枇杷露20mL，用氨试液调节pH值至11~13，再用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取罂粟壳对照药材1g，加甲醇20mL，加热回流30分钟，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；再取吗啡对照品和磷酸可待因对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10~20μL、对照品溶液5μL、对照药材溶液10μL，分别点于同一用2%（g/ml）氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比20:20:3:1的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
其中，所述的对枇杷叶的鉴别方法，包括以下步骤：
取无糖型强力枇杷露80mL，用氢氧化钠试液调节pH值至9~10，再用乙酸乙酯振摇提取4次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取枇杷叶对照药材0.5g，加水60mL，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨试液30mL洗涤，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:4:0.1的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分数为10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点，置365nm的紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光主斑点。
其中，所述的对罂粟壳含量的测定方法，包括以下步骤：
（1）对照品溶液的制备：取吗啡对照品、磷酸可待因对照品和盐酸罂粟碱对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL甲醇含吗啡0.4mg、磷酸可待因60μg、盐酸罂粟碱10μg的混合溶液，即得；
（2）供试品溶液的制备：量取本品25mL，加浓氨试液1mL，混匀，用乙酸乙酯振摇提取6次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（3）分别吸取供试品溶液与对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定各自的峰面积，即得。
其中，所述的超高效液相色谱条件是：以乙腈为流动相A，以体积百分数为0.2%三氟乙酸为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为237nm；柱温为35℃；流速为每分钟0.4mL，理论板数按磷酸可待因峰计算应不低于8000。
其中，所述梯度洗脱的设置是：在0~0.5分钟，流动相A的体积百分数是5.0%，流动相B的体积百分数是95.0%；在0.5~7.0分钟，流动相A的体积百分数从5.0%增大到14.2%，流动相B的体积百分数从95.0%降低到85.8%；在7.0~14.0分钟，流动相A的体积百分数从14.2%增大到45.0%，流动相B的体积百分数从85.8%降低到55.0%；在14.0~15.0分钟，流动相A的体积百分数从45.0%增大到100%，流动相B的体积百分数从55.0%降低到0%。
本检测方法的发明，能有效的控制产品质量，既保证了产品疗效，又不易使人产生成瘾性。
具体实施方式
一、药品和试剂
1、药品
| 名称 | 厂家 | 批号 |
| 无糖型强力枇杷露 | 哈尔滨市康隆药业有限责任公司 | 090525 |
| 薄荷脑对照品 | 中国药品生物制品检定所 | 110728-200506 |
| 罂粟壳对照药材 | 中国药品生物制品检定所 | 957-200003 |
| 吗啡对照品 | 中国药品生物制品检定所 | 171203-200521 |
| 磷酸可待因对照品 | 中国药品生物制品检定所 | 171203-200504 |
| 盐酸罂粟碱对照品 | 中国药品生物制品检定所 | 171214-200404 |
| 枇杷叶对照药材 | 中国药品生物制品检定所 | 121261-201003 |
2、试剂
二、主要成分的鉴别实验
实施例1：无糖型强力枇杷露中薄荷脑的鉴别
取无糖型强力枇杷露40mL，用石油醚（30~60℃）振摇提取2次，每次40mL，合并石油醚液，挥发至2mL，作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品，加石油醚（30~60℃）制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（17:3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液（按药典配制），加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
结论：按以上操作方法检测无糖型强力枇杷露，其供试斑点与对照药品的主斑点相符，且显色清晰，说明该检测方法能很好控制强力枇杷露中薄荷脑的质量。
实施例2：无糖型强力枇杷露中罂粟壳的鉴别
取无糖型强力枇杷露20mL，用氨试液调节pH值至11~13，再用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取罂粟壳对照药材1g，加甲醇20mL，加热回流30分钟，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。再取吗啡对照品和磷酸可待因对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10~20μL、对照品溶液5μL、对照药材溶液10μL，分别点于同一用2%（g/ml）氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20:20:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液（按药典配制）和亚硝酸钠乙醇试液（按药典配制）。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
结论：按以上操作方法检测无糖型强力枇杷露，其供试斑点与对照药品的主斑点相符，且显色清晰，说明该检测方法能很好控制强力枇杷露中罂粟壳的质量。
实施例3：无糖型强力枇杷露中枇杷叶的鉴别
取无糖型强力枇杷露80mL，用氢氧化钠试液调节pH值至9~10，再用乙酸乙酯振摇提取4次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取枇杷叶对照药材0.5g，加水60mL，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨试液30mL洗涤，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（8:4:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分数为10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点，置紫外光灯（365nm）下检视，显相同颜色的荧光主斑点。
结论：按以上操作方法检测无糖型强力枇杷露，其供试斑点与对照药品的主斑点相符，且显色清晰，说明该检测方法能很好控制强力枇杷露中枇杷叶的质量。三、照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D）测定罂粟壳含量
对照品溶液的制备：取吗啡对照品、磷酸可待因对照品和盐酸罂粟碱对照品适量，置棕色量瓶中，精密称定，加甲醇制成每1mL甲醇含吗啡0.4mg、磷酸可待因60μg（相当于可待因44μg）、盐酸罂粟碱10μg（相当于罂粟碱9μg）的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：精密量取无糖型强力枇杷露25mL，加浓氨试液1mL，混匀，用乙酸乙酯振摇提取6次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。
测定法：分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定各自的峰面积，计算后即得强力枇杷露中罂粟壳含量。
色谱条件与系统适用性试验：在ACQUITY UPLC H-Class Core型UPLC（超高效液相色谱）上分析；应用ACQUITY UPLC HSS C18(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以体积百分数为0.2%三氟乙酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm；柱温为35℃；流速为每分钟0.4mL。理论板数按磷酸可待因峰计算应不低于8000。
表1 梯度洗脱的设置条件
结论：按以上操作方法检测出本批号的无糖型强力枇杷露中每1mL含罂粟壳以吗啡（C17H19O3N）计，应为0.016mg~0.240mg；以可待因（C18H21O3N）计，应为5.0μg~20.0μg；以罂粟碱（C20H21O4N）计，应为1.2μg~3.0μg。
以上这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种无糖型强力枇杷露的检测方法，其特征在于，该检测方法包括对薄荷脑的鉴别、罂粟壳的鉴别和枇杷叶的鉴别以及罂粟壳含量的测定。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对薄荷脑的鉴别方法，包括以下步骤：
取无糖型强力枇杷露40mL，在30~60℃下，用石油醚振摇提取2次，每次40mL，合并石油醚液，挥发至2mL，作为供试品溶液；另取薄荷脑对照品，在30~60℃下，加石油醚制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比17:3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对罂粟壳的鉴别方法，包括以下步骤：
取无糖型强力枇杷露20mL，用氨试液调节pH值至11~13，再用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取罂粟壳对照药材1g，加甲醇20mL，加热回流30分钟，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；再取吗啡对照品和磷酸可待因对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10~20μL、对照品溶液5μL、对照药材溶液10μL，分别点于同一用2%（g/ml）氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比20:20:3:1的甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对枇杷叶的鉴别方法，包括以下步骤：
取无糖型强力枇杷露80mL，用氢氧化钠试液调节pH值至9~10，再用乙酸乙酯振摇提取4次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取枇杷叶对照药材0.5g，加水60mL，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨试液30mL洗涤，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:4:0.1的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分数为10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的主斑点，置365nm的紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光主斑点。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对罂粟壳含量的测定方法，包括以下步骤：
（1）对照品溶液的制备：取吗啡对照品、磷酸可待因对照品和盐酸罂粟碱对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL甲醇含吗啡0.4mg、磷酸可待因60μg、盐酸罂粟碱10μg的混合溶液，即得；
（2）供试品溶液的制备：量取本品25mL，加浓氨试液1mL，混匀，用乙酸乙酯振摇提取6次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（3）分别吸取供试品溶液与对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定各自的峰面积，即得。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱条件是：以乙腈为流动相A，以体积百分数为0.2%三氟乙酸为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为237nm；柱温为35℃；流速为每分钟0.4mL，理论板数按磷酸可待因峰计算应不低于8000。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的设置是：在0~0.5分钟，流动相A的体积百分数是5.0%，流动相B的体积百分数是95.0%；在0.5~7.0分钟，流动相A的体积百分数从5.0%增大到14.2%，流动相B的体积百分数从95.0%降低到85.8%；在7.0~14.0分钟，流动相A的体积百分数从14.2%增大到45.0％，流动相B的体积百分数从85.8%降低到55.0%；在14.0~15.0分钟，流动相A的体积百分数从45.0%增大到100%，流动相B的体积百分数从55.0%降低到0%。
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