CN101408519B - 一种检测盐酸西布曲明的方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种快速检测盐酸西布曲明的方法及其应用，该方法通过提取、萃取、显色检测三步即可检验出样品中是否含有盐酸西布曲明。本发明的检测方法操作简便，分析成本低，不需要使用贵重分析仪器，专属性强，显色反应迅速，现象明显，显色反应的灵敏度高，检验结果正确率高，可适用于现场快速检测中成药、保健食品中是否添加盐酸西布曲明。根据本发明的检测方法可制成盐酸西布曲明的快速检测试剂盒，能满足检验技术条件落后的农村地区和中小城市进行中成药保健食品监督检验的需要。

Description

一种检测盐酸西布曲明的方法及其应用

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种快速检测盐酸西布曲明的方法及其应用。

背景技术

近年来，由于人类物质生活的改善和饮食结构的不尽合理，肥胖症的人数呈逐年上升趋势。美国肥胖症患者约占总人口的二分之一，每年大约有30万人死于肥胖及其并发症。我国肥胖症患者已近2亿，城市肥胖人口已占整个城市人口近三分之一。肥胖可诱发或加重糖尿病、脂肪肝、心脑血管系统疾病、睡眠呼吸暂停综合征等，已成为影响人类健康长寿的大敌，越来越引起人们的重视。因此，减肥药物已走进人们的生活。减肥药物多为作用于中枢神经系统的食欲抑制药，最常见的是盐酸西布曲明。

盐酸西布曲明，其英文名为Sibutramine Hydrochloride，化学名称为(±)N-{1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-3-甲基丁基}-N，N-二甲胺盐酸盐一水合物，分子式为C₁₂H₂₆ClN·HCl·H₂O，分子量为334.33，结构式如式(I)所示。

盐酸西布曲明为作用于中枢神经的肥胖症治疗药，主要通过其胺类(仲胺和伯胺类)代谢产物而产生作用，其主要机理为抑制去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的再摄取而增强饱食感，而对去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的释放无明显影响。盐酸西布曲明可用于饮食控制和运动不能减轻和控制体重的肥胖症治疗。

但目前关于盐酸西布曲明引起的药物不良反应已有不少报道，英国、新西兰、意大利等多个国家报道服用西布曲明的人有不良反应，如头疼、头昏、目眩、高血压、心动过速、心悸、胸痛、失眠、焦虑抑郁、记忆力受损和轻微的胃肠综合症，此外还有多例的死亡报告。我国允许使用西布曲明类减肥药品，但须要慎用此类药物，应在医生指导下使用。使用时身体状况要随时监测，使用前应该接受肝功能、血脂、蛋白、血压等一系列检查，使用中的身体状况也要随时监测才能确保安全用药。它禁用于妊娠、准备妊娠及哺乳期妇女，器质性肥胖(如没有治疗的甲状腺能低下)者，接受单胺氧化酶抑制剂(MAOI)治疗的病人，对西布曲明过敏的病人、神经性厌食症的病人，接受其他中枢性食欲抑制药的患者。

随着市场的繁荣，这几年，减肥中成药和保健食品市场销售在不断增长，一方面，显示了人们对此有需求，另一方面，也给制假劣药品者提供了“商机”。一些造假分子利用老百姓对中药无毒副作用的认识误区，大量在减肥类中成药和保健食品中非法添加盐酸西布曲明，象“佳丽纤美胶囊”、“四清降脂减肥片”、“俏之源减肥胶囊”等这些减肥类中成药和保健食品就这样混迹药品流通市场，消费者在不知情的情况下购买和使用这些假药劣药，直接给消费者带来巨大危害。尤其在广大的农村和经济欠发达的中小城市，这些地区缺少必要的检验仪器，技术监管能力又相对薄弱。

针对在减肥类中药制剂和保健食品中非法添加盐酸西布曲明的情况日趋严重，国家进行了多次专项整治。国家药品监督管理局于2006年3月14日批准了针对治疗肥胖症的中成药的药品检验补充检验方法，批准件编号为2006004。该方法适用于治疗肥胖症的中成药中涉嫌非法添加西布曲明、麻黄碱、芬氟拉明的监督检验，采用的是高效液相色谱法和液/质联用法检测对药品中非法添加的西药成分进行确证和含量测定。该方法涉及的仪器非常昂贵，而且使用时需要的耗材亦不便宜，对于大量的检验，以及在广大的农村地区开展这项检验活动有较大的难度。

检测中成药保健食品中添加盐酸西布曲明的方法目前主要有以下几种：

1.薄层色谱法[胡娟，郑春松，朱新法.减肥中成药中添加西布曲明西药成分的检测.中国药学杂志.2006，12]。

样品中的待测成分用混合溶剂[甲醇-水-三乙胺(体积比＝110∶25∶0.3，磷酸调混合液总pH为4.35)]提取，所得的供试品溶液和对照品(标准品)溶液点在同一块薄层色谱板上(薄层板通常用硅胶制成)，以氯仿∶甲醇＝8∶1的体积比为展开剂，展开后，取出，晾干，喷洒改良碘化铋钾溶液显色。不同的物质在薄层色谱板不同的位置上以斑点的形式出现(原因是不同的物质有不同迁移的速度，常以色谱迁移值表示展开后斑点到原点之间的距离)，根据待测样品是否在与对照品(标准品)相应的位置上出现斑点这一实验所得的现象来判断待测样品是否含有目标成分。盐酸西布曲明对照品溶液和样品提取所得的供试品溶液在同一块薄层色谱板上点样，展开剂展开，晾干后，薄层色谱板在紫外灯下检示，如果供试品溶液薄层色谱图在与盐酸西布曲明对照品相应的位置上出现呈现相同的橘红色斑点，则提示样品中可能含有盐酸西布曲明。

薄层色谱法的优点是不需要使用昂贵的分析仪器。该法缺点是：(1)色谱分辩率较低，中药制剂成分复杂，干扰因素多，易将某些共存成分误判为盐酸西布曲明，某些共存成分如果量较大且色谱迁移值与盐酸西布曲明接近则会干扰目标成分的检出。(2)色谱展开和晾干的时间长，不能满足快速测定的要求。(3)薄层色谱板需要自行铺制，烘干并干燥存放(预制的薄层色谱板需要干燥存放)，环境温度和湿度对分离效果的影响大。(4)要求实验人员有较好的经验。(5)需要有固定的实场所，不适合作流动性大的现场检测。

2.高效液相色谱法[曹文丁，余佳文，官柳，肖礼娥.高效液相色谱法测定曲美胶囊中的含量.中国药房.2004，04]。

高效液相色谱法是常用的现代分析方法。在相同的色谱条件下，不同的物质有不同的色谱保留时间。在相同的色谱条件下，盐酸西布曲明对照品溶液和样品提取所得的供试品溶液分别进样，根据两者的色谱峰保留时间可判断待测样品是否含有盐酸西布曲明。

高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高，色谱保留时间精度高，灵敏度高；缺点是：(1)仪器价格昂贵，样品前处理时间长，色谱柱易受污染，分析成本高，不易推广；(2)需要使用昂贵的分析仪器，对环境要求高，需要固定摆放，不适合作流动性大的现场检测。

3.高效液相色谱-质谱法[中国药品生物制品检定所.2006004.2006年3月14日.液质联用(HPLC/MS/MS)分析鉴定西布曲明、麻黄碱、芬氟拉明的补充检验方法[S].国家食品药品监督管理局；钮伟民，戴军，陈尚卫，戴维杰.高效液相色谱-质谱联用检测鉴定减肥保健品中.中国卫生检验杂志.2002年12月第12卷第6期]。

高效液相色谱与质谱检测器结合可大大提高检测结果的可靠性，这是因为物质的色谱峰保留时间以及其质谱裂解获得的碎片离子、各离子与基峰离子的相对强度决定于物质的内在性质，具有极高的专属性。高效液相色谱一串联质谱联用法更适合于成分复杂、背景干扰严重的样品分析，这种分析方法可提高检测灵敏度和结果的可靠性。

高效液相色谱-质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱法更高、操作更复杂的分析方法。仪器对使用的环境要求更高，需要固定摆放，不适合作流动性大的现场检测。因此，这类型检验只能在少数技术条件很好的实验室中进行，不易推广使用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种分析成本低，不需要使用贵重分析仪器，专属性强，灵敏度高，检验结果正确率高，尤其适用于现场检测中成药、保健食品中是否添加盐酸西布曲明的快速检测方法。

本发明的另一目的在于提供上述检测方法在制备盐酸西布曲明快速检测试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

盐酸西布曲明是(±)N-{1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-3-甲基丁基}-N，N-二甲胺盐酸盐一水合物。采用仪器方法分析样品中的盐酸西布曲明，其样品提取和净化处理与简便性就是一个难以兼顾、目前也未能很好解决的问题。然而，由其分子结构可推断和盐酸西布曲明易溶于无机酸溶液。

(±)N-{1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-3-甲基丁基}-N，N-二甲胺基团(简称：盐酸西布曲明母核)的阳离子化倾向如图1所示。

盐酸西布曲明母核中的N原子其最外层电子轨道采取SP³杂化，轨道上有一对孤对电子，由于其轨道的S成分(球形)较小，而P成分(纺锤形)较大，又由于其轨道取向为正四面体结构，孤对电子裸露伸出在外，在无机酸溶液中易于与质子接近并有与之结合形成铵正离子的倾向。而与N原子结合的烷基可以给电子，使形成的铵正离子正电荷分散而稳定。质子化的西布曲明母核，由于氮原子的负电性，与之结合的氢可与水形成氢键如图2所示，从而获得溶剂化，因此盐酸西布曲明易溶于无机酸溶液中。

另一方面，盐酸西布曲明的脂肪胺结构也决定了其能溶于甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、苯、二氯甲烷等有机溶剂。

中成药保健食品中成分复杂，有大量有色物质(如植物色素等)，它们中有些能溶于有机溶剂，而有些则可溶于水溶液，如不进行分离，则会严重干扰快速检测方法的显色反应的观察，难以得出正确的判断结果。

本发明利用盐酸西布曲明既可溶于有机溶剂又可溶于无机酸溶液的特点，首先采用有机溶剂作为提取液进行提取，使不溶于有机溶剂的干扰物质得到分离，然后采用无机酸溶液进行液-液萃取，对提取液中溶解于有机溶剂的干扰物质进行分离，从而达到进一步排除干扰的目的。

提取液的选取原则：(1)提取液必须很好地溶解、盐酸西布曲明，但又不宜与之有有太强的结合，否则不利于无机酸溶液对其萃取；(2)提取液与无机酸溶液互不相溶；(3)提取液对操作者和环境没有毒害性。

经实验证实，有多种有机溶剂都符合以上的选取原则，可作为本发明实施的提取液，其中，乙酸乙酯的提取效果较好且对人体和环境没有毒害性，因此本发明优选乙酸乙酯作为提取液。

乙酸乙酯与盐酸西布曲明母核均为给电子化合物，互相之间不能形成结合力较强的氢键，而是以范德华力作用相结合，由于极性相近，故“相似相溶”，乙酸乙酯可溶解盐酸西布曲明母核。当加入无机酸溶液后，大量的质子使盐酸西布曲明母核质子化。一方面，质子化的盐酸西布曲明母核极性增大了，与乙酸乙酯极性差别变大，与之结合作用减弱。另一方面，质子化的盐酸西布曲明母核在无机酸溶液中与水形成结合力强的氢键，并进一步溶剂化，从而离开有机相进入到无机酸溶液中。

乙酸乙酯和水的相溶性差，在水中只有很小的溶解度。

本发明的萃取液选择无机酸溶液，如磷酸，硫酸等，由于磷酸没有腐蚀性，不挥发，有利于携带和操作使用，因此，本发明优选磷酸溶液作为萃取液。

盐酸西布曲明均有可接受质子的氮原子，在酸性溶液中，接受质子后生成带正电荷、呈游离态的阳离子(以R⁺表示)。较大的酸度可增强盐酸西布曲明生成游离态阳离子(R⁺)的能力，使溶液中有较高的游离态阳离子(R⁺)浓度。

本发明的检测剂选择能与叔胺产生沉淀反应的试剂，优选硫氰铬酸铵溶液。

硫氰铬酸铵，俗称雷氏盐，分子式为：NH₄[Cr(NH₃)₂(SCN)₄]，是一种配位化合物。硫氰铬酸铵可溶于水，这是因为其中的NH₄ ⁺有四个氢，均有与水形成氢键的倾向而被溶剂化，从而生成游离态的NH₄ ⁺和游离态的[Cr(NH₃)₂(SCN)₄]^-。

游离态阳离子的(R⁺)正电荷密度高，能与游离态的[Cr(NH₃)₂(SCN)₄]^-发生离子反应，生成在酸性的水介质中不易溶解的有机盐，该有机盐为粉红色不溶物，显色明显。离子反应式如下：

R⁺+[Cr(NH₃)₂(SCN)₄]^-→R[Cr(NH₃)₂(SCN)₄]↓

综上所述，可得出本发明的一种检测盐酸西布曲明的方法，该方法采用有机溶剂作为提取液，从中成药、保健食品等样品中提取盐酸西布曲明，用无机酸溶液作为萃取液促使盐酸西布曲明母核质子化，并溶剂化后从有机相进入无机相，在提取和萃取过程中两次利用不同物质的溶解性差异分离除去干扰物质，最后，以硫氰铬酸铵溶液作为离子反应试剂进行检测，盐酸西布曲明可与之形成粉红色不溶物产物，从而可检测出中成药、保健食品等样品中是否含有盐酸西布曲明，该检测方法的具体实施步骤如下：

(1)从中成药、保健食品等复杂的样品中提取盐酸西布曲明，分离部分干扰物质：向样品中加入提取液，轻摇使溶散，静置后，吸取上层液体；

(2)从提取液中萃取出盐酸西布曲明，同时分离干扰物质：向上述上层液体中加入萃取液，轻摇使两相混合，放置分层，吸取下层溶液；

(3)通过检测剂的显色反应检测样品中是否存在盐酸西布曲明：向上述下层溶液中加入检测剂检测。

上述提取液为有机溶剂，萃取液为无机酸溶液，检测剂为能与叔胺产生沉淀反应的试剂。

上述提取液优选乙酸乙酯(分析纯)，萃取液优选磷酸溶液，检测剂优选硫氰铬酸铵溶液。

经过试验证明，当萃取液采用浓度为3％(v/v)的磷酸溶液，检测剂采用硫氰铬酸铵的饱和溶液(该饱和溶液的配制方法：取硫氰酸铬胺0.5g，加水20ml，振摇1小时，滤过，即得)时，得到的效果是最佳的，可获得高的检测专属性和较短的检测时间。

上述硫氰铬酸铵溶液的检测方法为：向步骤(2)中得到的下层溶液中滴加硫氰铬酸铵，如果溶液立刻产生明显的粉红色不溶物则表示样品中含有盐酸西布曲明，如果溶液没有立刻出现粉红色不溶物则表示样品中不含有盐酸西布曲明。

本发明的检测方法采用提取、萃取和显色反应三步进行，其干扰物质少，显色反应明显，检测灵敏度高，因此即使加入少量的样品，也可以得到明显的检测结果。具体实施例时可参考下面的用量设计：

当检测样品为固体样品或软胶囊剂时，样品的取样量约为0.1～0.5g，提取液的加入量约为7～8ml；当样品为口服液等液体样品时，样品的取样量约为2ml，提取液的加入量约为5～6ml；萃取液的加入量约为3ml。

本发明的检测方法可用于快速检验中成药、保健食品中是否添加盐酸西布曲明。

基于本发明的检测方法，可以制备盐酸西布曲明的快速检验试剂盒，也可以制备成适合药品检测车上使用的盐酸西布曲明的快速检测套装。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：1.本发明的检测方法，通过提取、萃取、检测三步即可检验出样品中是否含有盐酸西布曲明，且所用提取液、萃取液、检测剂均为普通的化学试剂，操作简便，分析成本低；2.本发明的检测方法中各步物质的用量小，整个检测方法在10ml的样品瓶或试管中即可进行，不需要使用贵重分析仪器；3.本发明的检测方法中，所用提取液、萃取液、检测剂的专属性强，通过提取和萃取过程中两次利用不同物质的溶解性差异分离除去干扰物质，使得显色反应的灵敏度高，检验结果正确率高，同时显色反应的反应迅速，现象明显，因此本发明适用于现场快速检测中成药、保健食品中是否添加盐酸西布曲明。

附图说明

图1为盐酸西布曲明母核质子化示意图；

图2为质子化西布曲明母核的溶剂化示意图。

具体实施方式

以下的实例将有助于本领域的普通技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1胶囊剂的检测

样品：曲美轻美爽瘦身胶囊(胶囊剂，标示广州万邦生物科技有限公司生产，批号：20060820，标示服用量为每次2粒，高效液相色谱法测定结果本品每粒含盐酸西布曲明5.90mg)。

检测步骤：

(1)取样品1粒，将其内容物(约0.4g)置于10ml样品瓶I中，加入乙酸乙酯试剂约8ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使溶散。静置，上层溶液呈棕黄色；

(2)用吸管吸取上层液体约3ml，置于10ml样品瓶II中，加入3体积％的磷酸溶液约3ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使两相混合，放置分层，下层溶液呈无色澄明；

(3)用吸管吸取下层溶液约2ml置试管中，滴加硫氰铬酸铵的饱和溶液1滴，立刻产生明显的粉红色不溶物，即判定曲美轻美爽瘦身胶囊中含有盐酸西布曲明。

实施例2片剂的检测

样品：自然美莱苹果醋减肥片(片剂，标示广州美来生物科技有限公司生产，批号：071102，标示服用量为每次2片，高效液相色谱法测定结果本品每片含盐酸西布曲明14.79mg)。

检测步骤：

(1)取样品1片(约0.4g)，将其粉碎，置于10ml样品瓶I中，加入乙酸乙酯试剂约8ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使两相混合，静置，上层溶液呈淡绿色；

(2)用吸管吸取上层液体约3ml，置于10ml样品瓶II中，加入磷酸溶液约3ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使两相混合，放置分层，下层溶液呈无色澄明；

(3)用吸管吸取下层溶液约2ml置试管中，滴加硫氰铬酸铵试剂1滴，立刻产生明显的粉红色不溶物，即判定为自然美莱苹果醋减肥片中含有盐酸西布曲明。

实施例3软胶囊剂的检测

样品：瘦身1号绿尼软胶囊(软胶囊剂，标示西安华盛保健有限公司生产，批号：070916，标示服用量为每次2粒，高效液相色谱法测定结果本品每粒含盐酸西布曲明12.97mg)。

检测步骤：

(1)取样品1粒，将其内容物(约0.4g)置于10ml样品瓶I中，加入乙酸乙酯试剂约7ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使溶散，静置，上层溶液呈乳白色。

(2)用吸管吸取上层液体约3ml，置于10ml样品瓶II中，加入3体积％的磷酸溶液约3ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使两相混合，放置分层，下层溶液呈无色澄明；

(3)用吸管吸取下层溶液约2ml置试管中，滴加硫氰铬酸铵的饱和溶液1滴，显白色沉淀，即判定瘦身1号绿尼软胶囊中含有盐酸西布曲明。

实施例4茶剂的检测

样品：美诺牌减肥便携茶(茶剂，标示北京美诺保健食品厂，批号：无，标示服用量为每次1包，高效液相色谱法测定结果本品不含盐酸西布曲明)。

检测步骤：

(1)取样品约0.5g，将其置于10ml样品瓶I中，加入乙酸乙酯试剂约8ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使溶散，静置，上层溶液呈淡绿色；

(2)用吸管吸取上层液体约3ml，置于10ml样品瓶II中，加入3体积％的磷酸溶液约3ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使两相混合，放置分层，下层溶液呈无色澄明；

(3)用吸管吸取下层溶液约2ml置试管中，滴加硫氰铬酸铵的饱和溶液1滴，无产生粉红色不溶物，即判定美诺牌减肥便携茶中不含有盐酸西布曲明。

实施例5颗粒剂的检测

样品：多维膳食素(排油基)(颗粒剂，标示广州燕香生物科技有限公司，广州伟能健生物科技发展有限公司生产，批号：20080102，标示服用量为每次1包，高效液相色谱法测定结果本品每包含盐酸西布曲明20.80mg)。

检测步骤：

(1)取本品约0.5g，将其粉碎，置于10ml样品瓶I中，加入乙酸乙酯试剂约8ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使溶散，静置，上层溶液呈无色；

(2)用吸管吸取上层液体约3ml，置于10ml样品瓶II中，加入3体积％的磷酸溶液约3ml，旋紧瓶盖，用手把样品瓶从正立至颠倒轻轻振摇5个来回，使两相混合，放置分层，下层溶液呈无色澄明；

(3)用吸管吸取下层溶液约2ml置试管中，滴加硫氰铬酸铵的饱和溶液1滴，立刻产生明显的粉红色不溶物，即判定多维膳食素(排油基)中含有盐酸西布曲明。

Claims (2)

1.一种检测盐酸西布曲明的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)向中成药、保健食品中加入提取液，轻摇使溶散，静置后，吸取上层溶液；

(2)向上述上层溶液中加入萃取液，轻摇使两相混合，放置分层，吸取下层溶液；

(3)向上述下层溶液中加入检测剂检测；

上述提取液为乙酸乙酯，萃取液为磷酸溶液，检测剂为硫氰铬酸铵溶液。

2.根据权利要求1所述检测盐酸西布曲明的方法，其特征在于所述磷酸溶液为体积百分比为3％的磷酸溶液，所述硫氰铬酸铵溶液为硫氰铬酸铵的饱和溶液。

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