CN110954525A - 一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,包括以下操作步骤:S1、样品制备:取适量减肥茶固体,加入5‑50倍质量体积的水溶液,涡旋振荡1min或超声提取3min左右,得到减肥茶液;S2、前处理:将S1中得到的减肥茶液离心至澄清,取1体积上清液,加入0.5‑2体积乙酸乙酯或相似有机溶剂,振荡萃取,静置分层;取出有机相,按0.01‑0.05g/mL的比例加入GCB,振荡后,取出有机相,加入0.5‑2体积的1mM‑1M酸液进行反萃取,取水相待测;S3、检测:在拉曼检测管中,加入S2中水相待测样品,再加入金属纳米粒子和凝聚剂,混匀进行拉曼检测。本发明能够快速、灵敏地识别减肥茶中的西布曲明,前处理简单、试剂廉价,检测方式快捷,在食品快速检测领域具有广阔的应用空间。
Description
技术领域
本发明涉及保健品中违禁减肥药检测技术领域,尤其涉及一种减 肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法。
背景技术
西布曲明及其盐酸盐是一种中枢神经抑制剂,具有兴奋、抗抑郁、 抑食等作用。主要通过其胺类(仲胺和伯胺类)代谢产物而产生作用, 其主要机理为抑制去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的再摄取而增强 饱食感。1997年,西布曲明获美国FDA批准上市。由于西布曲明可 能增加服用者患心脏病及中风几率,中国药监局已于2010年10月强 制停止在中国大陆生产销售。
关于保健食品中西布曲明的检测尚无正在执行的国家标准和行 业标准,但是国家食品药品监督管理总局分别于2017年2月和11月 分别发布了《食品中西布曲明等化合物的测定》和《保健食品中75 种非法添加化学药物的检测》等两条补充检验方法。两条补充检验方 法均采用高效液相色谱-串联质谱测定,虽然有比较优秀的检出限, 但是实验成本高昂,检测时间需要数个小时,难以用于快速检测及大 批量抽检活动。
针对补充检验方法中的不足,以及目前尚无关于拉曼增强快速检 测方面的技术,为此我们设计出了一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速 检测方法来解决以上问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中实验成本高昂,检测时间需 要数个小时,难以用于快速检测及大批量抽检活动,而提出的一种减 肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,包括以下操作步 骤:
S1、样品制备:取适量减肥茶固体,加入5-50倍质量体积的水 溶液,涡旋振荡1min或超声提取3min左右,得到减肥茶液;
S2、前处理:将S1中得到的减肥茶液离心至澄清,取1体积上 清液,加入0.5-2体积乙酸乙酯或相似有机溶剂,振荡萃取,静置分 层;取出有机相,按0.01-0.05g/mL的比例加入GCB,振荡后,取出 有机相,加入0.5-2体积的1mM-1M酸液进行反萃取,取水相待测;
S3、检测:在拉曼检测管中,加入S2中水相待测样品,再加入 金属纳米粒子和凝聚剂,混匀进行拉曼检测。
优选的,所述S1中,减肥茶固体为拆开包装后的固体颗粒或整 个渗透包装,优选的,减肥茶产品本身为液体时,可以不需加后续操 作。
优选的,所述S1中,加入5-50倍质量体积的水溶液,所述水溶 液可以是温水或室温水。
优选的,所述S2中,相似有机溶剂包含乙酸乙酯、戊烷、己烷、 环己烷、庚烷、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳的一种或多 种混合溶液,优选的,乙酸乙酯及极性在2-5之间的混合溶剂。
优选的,所述S2中,所述1mM-1M酸液包含盐硫酸、硝酸、盐酸、 磷酸和乙酸的一种或多种混合溶液。
优选的,所述S3中,金属纳米粒子为40-60nm粒径的金纳米粒 子,所述金纳米粒子的合成步骤为:将50mL 0.01%的氯金酸加热至 沸腾,迅速加入0.5mL 1%柠檬酸钠,高速搅拌30min,冷却至室温。
优选的,所述S3中,凝聚剂包含含氯离子无机化合物,所述含 氯离子无机化合物为包含钠、钾、镁、钡、铁、锌的氯盐或钠、钾、 镁、钡、铁、锌盐与盐酸的混合溶液。
优选的,所述S3中,待测液、金属纳米粒子和凝聚剂加入比例 为1:1-10:0-2。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明通过简单的提取、 萃取和除杂步骤,可以在5-10min内完成前处理操作,最后通过简便 快捷的表面拉曼增强方法检测,得出带有分子振动和转动信息的拉曼 光谱谱图;可以根据谱图信息进行定性和线性范围内的定量判断,对 比除HPLC-MS外的其它检测方法,是最有效的控制假阳性、假阴性结 果的检测方法,并利用金胶在酸性条件下通过氯离子凝聚剂对目标分 子的有效检出,足使本发明的检出限远低于市面上减肥产品中西布曲 明的有效添加量(>0.5%),达到ppm级别,满足对减肥产品中违禁 添加药物的快速筛查;该方案能够快速、灵敏地识别减肥茶中的西布曲明,前处理简单、试剂廉价,检测方式快捷,可以在10分钟内得 到反映分子结构信息的拉曼光谱谱图,根据拉曼光谱位移识别西布曲 明特征峰及其强度,可以定性和定量判断减肥茶中西布曲明存在情 况,在食品快速检测领域具有广阔的应用空间。
附图说明
图1为西布曲明标准品表面增强拉曼光谱特征信号图;
图2为实施例1中某减肥茶不同浓度加标的表面增强拉曼光谱特 征信号图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
参照图1-2,一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,包括 以下操作步骤:
S1、样品制备:取适量减肥茶固体,加入5-50倍质量体积的水 溶液,涡旋振荡1min或超声提取3min左右,此处加入水溶液的作用 是提取西布曲明之用,所加入的质量体积在5-50倍为优化条件,加 入水太少会影响整体提取效率和基质富集过量,加入水太多会影响单 位体积提取液的提取浓度,增大后续萃取步骤试剂使用量;涡旋振荡 和超声时间视提取效率而定,当所加入水为温水时,可以适当减少提 取时间;
S2、前处理:将上述减肥茶液离心至澄清,取1体积上清液,加 入0.5-2体积乙酸乙酯或相似有机溶剂,振荡萃取,静置分层;取出 有机相,按0.01-0.05g/mL的比例加入GCB,振荡后,取出有机相, 加入0.5-2体积的1mM-1M酸液进行反萃取,取水相待测;加入乙酸 乙酯等溶剂是为了萃取提取液中的西布曲明,加入量太多或太少都会 影响西布曲明在有机相的分配浓度,经过大量实验证明,加入0.5-2 体积乙酸乙酯或相似有机溶剂为最优化条件;而后在萃取液中添加 GCB的是通过GCB的多孔结构吸附减肥茶中基质,GCB添加量过少会 导致除基质不充分,过多会导致西布曲明也被过量吸附,按 0.01-0.05g/mL的比例加入GCB是最优化条件。最后加入酸液的目的 是通过西布曲明在酸液中的溶解优势反萃取有机相中的目标物, 1mM-1M为有效反萃取的酸液浓度范围,大于1M则由于酸度太高易造 成腐蚀而不推荐;
S3、检测:在拉曼检测管中,加入上述S1中水相待测样品,再 加入金属纳米粒子和凝聚剂,混匀进行拉曼检测;
具体地,所述S1中,减肥茶固体可以是拆开包装后的固体颗粒 或整个渗透包装,当减肥茶产品本身为液体时,可以不需加后续操作; 此处减肥茶也可以是具有其它名称的,相同性质的减肥功能饮料;
其中,所述S1中,加入5-50倍质量体积的水溶液,其中水溶液 可以是温水或室温水;温水可以根据浸泡效率适当降低涡旋或超声时 间;
具体地,所述S2中,相似有机溶剂包含乙酸乙酯、戊烷、己烷、 环己烷、庚烷、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳及其任意比 例混合溶液;优选乙酸乙酯及极性在2-5之间的混合溶剂;
其中,所述S2中,1mM-1M酸液包含盐硫酸、硝酸、盐酸、磷酸、 乙酸及其任意比例混合溶液;
具体地,所述S3中,金属纳米粒子为40-60nm粒径的金纳米粒 子。金纳米粒子的合成:将50mL 0.01%的氯金酸加热至沸腾,迅速 加入0.5mL 1%柠檬酸钠,高速搅拌30min,冷却至室温;
其中,所述S3中,凝聚剂包含含氯离子无机化合物,含氯离子 无机化合物为包含钠、钾、镁、钡、铁、锌的氯盐,或钠、钾、镁、 钡、铁、锌盐与盐酸的混合溶液,优选钠的氯盐或其盐酸混合溶液;
具体地,所述S3中,待测液、金属纳米粒子和凝聚剂加入比例 为1:1-10:0-2;由于待测液中包含的基质具有凝聚作用,当反萃取 溶液中含有氯离子时,是否添加凝聚剂视待测液与金属纳米粒子的凝 聚情况而定。
实施例一
对减肥茶中不同浓度西布曲明加标的检测,具体步骤如下:
1、标准品配置:准确称取西布曲明0.1g(精确至0.0001g),用 超纯水溶解并定容至10mL,标记为10000ppm;
2、标准系列溶液配置:分别取上述10000ppm标准品1mL,2mL, 5mL用超纯水定容至10mL,分别标记为1000ppm,2000ppm,5000ppm。
3、样品加标:分别取1g减肥茶固体颗粒至15mL离心管中,分别 均匀加入超纯水,1000ppm,2000ppm,5000ppm西布曲明标准品100uL, 标记为空白,100ppm,200ppm和500ppm西布曲明模拟样品;
4、样品制备:在上述离心管中加入10mL去离子水,涡旋振荡1min;
5、前处理:取上述减肥茶液体样品1mL于2mL离心管中,5000rpm 离心3min;收集上清液(小于1mL)于2mL离心管中,并加入1mL乙 酸乙酯,振荡10s,静置分层;取上层(小于1mL,大于0.5mL)于 2mL离心管中,加入0.01g GCB,振荡10s,静置10s;取上清液于0.5mL,加入0.5mL 0.1M HNO3,振荡10s,静置分层,下层即为待测 液;
6、检测:取100uL待测液,加入100uL 0.1M NaCl溶液和200uL 金纳米粒子,混匀后在785拉曼上检测,检测结果得出附图2。
本发明利用水提取减肥茶固体中的西布曲明,通过极性有机溶剂 萃取和固相除杂,再通过酸液进行反萃取,可以在除去减肥茶基质的 基础上有效提取出探针分子;结合表面增强拉曼技术,采用金属纳米 粒子对探针分子实现特异性的信号增强,能够成功避开基质干扰并得 到探针分子的拉曼增强信号。本发明的检测方法对西布曲明标准品的 检出限可达0.1mg/kg,减肥茶实际样品中的检出限可达50mg/kg,远 低于市场中减肥类保健品中实际添加浓度。图1为西布曲明标准品表 面增强拉曼光谱特征信号图,横坐标是拉曼位移,纵坐标是拉曼信号, 其特征峰位移在636,764,1093cm-1,其中1093cm-1是主要特征峰。图2是本发明实施例1中对减肥茶及其加标模拟样品的表面增强拉曼
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范 围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技 术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改 变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,包括以下操作步骤:
S1、样品制备:取适量减肥茶固体,加入5-50倍质量体积的水溶液,涡旋振荡1min或超声提取3min左右,得到减肥茶液;
S2、前处理:将S1中得到的减肥茶液离心至澄清,取1体积上清液,加入0.5-2体积乙酸乙酯或相似有机溶剂,振荡萃取,静置分层;取出有机相,按0.01-0.05g/mL的比例加入GCB,振荡后,取出有机相,加入0.5-2体积的1mM-1M酸液进行反萃取,取水相待测;
S3、检测:在拉曼检测管中,加入S2中水相待测样品,再加入金属纳米粒子和凝聚剂,混匀进行拉曼检测。
2.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S1中,减肥茶固体为拆开包装后的固体颗粒或整个渗透包装,优选的,减肥茶产品本身为液体时,可以不需加后续操作。
3.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S1中,加入5-50倍质量体积的水溶液,所述水溶液可以是温水或室温水。
4.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S2中,相似有机溶剂包含乙酸乙酯、戊烷、己烷、环己烷、庚烷、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳的一种或多种混合溶液,优选的,乙酸乙酯及极性在2-5之间的混合溶剂。
5.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S2中,所述1mM-1M酸液包含盐硫酸、硝酸、盐酸、磷酸和乙酸的一种或多种混合溶液。
6.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S3中,金属纳米粒子为40-60nm粒径的金纳米粒子,所述金纳米粒子的合成步骤为:将50mL 0.01%的氯金酸加热至沸腾,迅速加入0.5mL 1%柠檬酸钠,高速搅拌30min,冷却至室温。
7.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S3中,凝聚剂包含含氯离子无机化合物,所述含氯离子无机化合物为包含钠、钾、镁、钡、铁、锌的氯盐或钠、钾、镁、钡、铁、锌盐与盐酸的混合溶液。
8.根据权利要求1所述的一种减肥茶中西布曲明的拉曼快速检测方法,其特征在于,所述S3中,待测液、金属纳米粒子和凝聚剂加入比例为1:1-10:0-2。
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