CN104931597A - 能同时检测水产品中多种类药物残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种能同时检测水产品中多种类药物残留的方法。该能同时检测水产品中多种类药物残留的方法包括对待测水产品中多种类药物残留的提取处理、对含有药物残留提取液的净化处理、将含有农药残留提取净化液上LC-MS/MS进行定量分析等步骤。本发明能同时检测水产品中多种类药物残留的方法实现了一步式分离和检测所有农药残留，提高了样品前处理和分析过程的效率，且灵敏度高，同时使得本发明方法检测成本降低为常规方法的十分之一。

Description

能同时检测水产品中多种类药物残留的方法

技术领域

本发明属于农药残留检测技术领域，具体涉及一种能同时检测水产品中多种类药物残留的方法。

背景技术

我国是农产品生产大国，也是农药的生产和使用大国。2010年来，我国水产品生产总量已经跃居世界第一，其中淡水水产品的总消费量占总水产品消费量的50％以上。然而，随着农业规模化生产的发展，养殖水产品的农药残留问题日益突出，已成为国际国内社会关注的食品安全热点问题。

水产品中的农药残留通常来源于两个方面，其一是养殖过程施用药物来防治水产品的疫病和虫害，其二是大量在环境施用的农药随雨水冲淋流入养殖水体。养殖水体中的农药种类逐渐增多，且大部分农药具有亲脂性特点，并随着生物富集和食物链作用，水体中的农药被水产品富集并通过食物链蓄积，进而影响人类的食品安全。发达国家相继制定了严格的农药残留限量标准，

如2003年，美国农业部开发了一种快速(Quick)、简单(Easy)、廉价(Cheap)、高效(Effective)、耐用(Rugged)、安全(Safe)样品前处理方法——QuEChERS(简称)。QuEChERS方法的步骤可以简单归纳为：(1)样品粉碎；(2)单一溶剂乙腈提取分离；(3)加入MgSO₄等盐类除水；(4)加入乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、十八烷基硅烷键合硅胶(C₁₈)或石墨化碳黑(GCB)等吸附剂除杂；(5)离心后上清液进行色谱-质谱分析检测。QuEChERS方法在排除样品基质干扰和多残留分析方面具有显著优势，目前在全球多个国家和组织的多种类农残检测和筛查标准方法中应用。

然而，实际操作中，尽管PSA、C18和GCB等填料及其组合能有效去除基质干扰，但这些填料普遍存在价格高、用量大、成本较高等缺点，不利于QuEChERS方法的推广和应用，因此发展价格低廉、快速高效、净化效果优越的改良吸附剂的QuEChERS方法显得尤为重要。

针对农药的检测，国内也做了相应探索与研究，如目前公开的一种以超声波提取-气质联用法检测北京市场淡水鱼体内的农药残留，检出乙草胺、百菌清等农药残留，最大残留浓度近2mg/kg。另一种以凝胶色谱净化，气质联用检测鱼、鳗鱼和对虾的中的191种农药残留。另一种以类似的凝胶渗透色谱技术进行样品前处理,毛细管气相色谱测定南海海鱼中11种有机氯农药残留，发现有六六六、滴滴涕、狄氏剂和环氧七氯有一定检出。另一种以二氯甲烷萃取、PCX或ENVI-Carb固相萃取柱净化后，进行HPLC-MS/MS测定检测了鱼肉中的杀草强残留。还公开了一种采用冷冻除脂-固相萃取/气质联用方法测定水产品中20种农药残留的。

上述国内已公开报道的水产品中农药残留检测方法需采用超声或凝胶色谱经行提取和净化，净化过程涉及有机溶剂提取和固相萃取柱净化，过程繁琐且有机溶剂用量大，而且灵敏度高及重复性还有待提高。因此，为增强我国水产品行业的健康发展，维护我国水产品食品安全的声誉，研究水产品中多种类农药残留快速检测方法十分有必要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，旨在解决现有检测药物残留方法存在的成本高，过程繁琐，检测效率低，灵敏度高及重复性还有待提高等技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，包括如下步骤：

将待测水产品进行多种类药物残留提取处理，获得含有药物残留提取液；

将所述含有药物残留提取液采用聚苯乙烯-二乙烯基苯微球或聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA混合物进行萃取净化处理，并配制含有农药残留提取净化液；

将所述含有农药残留提取净化液上LC-MS/MS进行定量检测，对检出的农药峰面积与混合农药标准曲线的峰面积对比，计算出所述待测水产品中各种农药具体残留量。

与现有技术相比，本发明能同时检测水产品中多种类药物残留的方法具有以下技术效果：

1.采用的聚苯乙烯-二乙烯基苯微球作为吸附剂，有效提高了其对残留农药的吸附能力，满足复杂样品中药物残留化合物的吸附分离需求，而且其价格仅为C18、PSA、GCB吸附剂的五分之一到三分之一，有效降低了本发明能同时检测水产品中多种类药物残留的方法成本；

2.采用改良的QuEChERS方法结合LC-MS/MS方法，无需按照农药的类别进行分类处理，而是根据样品中的脂肪、蛋白和水分含量特点，实现一步式分离和检测所有农药残留，提高了样品前处理和分析过程的效率，且灵敏度高，同时使得本发明方法检测成本降低为常规方法的十分之一；

3.待测水产品前处理采用改良QuEchERS方法进行处理提取和净化处理，大大缩短了每个水产品样品前处理的萃取前处理时间，使实验操作简单、快捷，同时具有操作准确、灵敏度高及重复性好等优点。

附图说明

图1为本发明实施例能同时检测水产品中多种类药物残留的方法流程图；

图2以本发明实施例1能同时检测水产品中多种类药物残留的方法添加水平为20μg/kg的罗非鱼样品重构离子色谱图；

图3以本发明实施例2能同时检测水产品中多种类药物残留的方法从草虾样本中检出58.4μg/kg嘧菌酯的重构离子色谱图；

图4以本发明实施例2能同时检测水产品中多种类药物残留的方法从草虾样本中检出38.6μg/kg嘧菌酯的重构离子色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实例提供了一种能一步式分离和检测所有农药残留的操作准确、灵敏度高及重复性好、且成本低的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法。该能同时检测水产品中多种类药物残留的方法工艺流程如图1所示，其包括如下步骤：

步骤书S01.对待测水产品中多种类药物残留的提取处理：

将待测水产品进行多种类药物残留提取处理，获得含有药物残留提取液；

步骤书S02.对含有药物残留提取液的净化处理：

将所述药物残留提取液采用聚苯乙烯-二乙烯基苯微球或聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA混合物进行萃取净化处理，并配制含有农药残留提取净化液；

步骤书S03.将含有农药残留提取净化液上LC-MS/MS进行定量分析：

将所述含有农药残留提取净化液上LC-MS/MS进行定量检测，对检出的农药峰面积与混合农药标准曲线的峰面积对比，计算出所述待测水产品中各种农药具体残留量。

具体地，上述步骤S01中，水产品一般都含有丰富的蛋白质、脂肪等，理所当然的其干物质含量比较低。而且不同种类的水产品，这些物质成分的含量会明显不同。因此，根据水产品的种类和蛋白质、脂肪的含量不同，在本发明实施例中，将该水产品分为两大类：一类是鱼类，另一类是虾类。

为了有效提取水产品中的农药残留物，在一实施例中，将待测水产品进行多种类药物残留提取处理的方法如下：

向待测水产品加入乙酸体积百分含量为1～2.5％的乙酸-乙腈溶剂，同时加入醋酸钠和无水硫酸镁，进行混料处理和振荡提取后，离心，取上清液。

该提取处理方法采用乙酸和乙腈特定比例范围的混合溶剂，能有效将待测水产品中的农药残留最大限度的浸提出来。这样能有效克服美国农业部开发QuEChERS法采用传统C18、GCB和PSA混合进行净化的问题。。因此，在一实施例中，该乙酸-乙腈溶剂与所述待测水产品的体积质量比为(3-5ml)：1g。在一些具体实施例中，该乙酸-乙腈溶剂与所述待测水产品的体积质量比为3ml：1g、4ml：1g、5ml：1g。在另一些具体实施例中，该乙酸在乙酸-乙腈混合溶剂中的体积百分含量为1％。

在上述提取处理方法中醋酸钠和无水硫酸镁的目的能有效吸附水分以及部分极性杂质。因此，在一实施例中，该醋酸钠、无水硫酸镁与所述待测水产品的质量比为1：1：(5-10)。在一具体实施例中，该醋酸钠、无水硫酸镁与所述待测水产品的质量比为1：1：5。

应当理解的是，在上述提取处理方法中，向待测水产品加入乙酸-乙腈溶剂、醋酸钠、无水硫酸镁后应当进行充分的混合处理，以实现对农药残留物的充分浸提。如进行充分混匀后于水平振荡充分提取处理，其中，水平振荡提取处理的时间为5～30min，具体的为10min。

提取处理后的离心处理是将浸提液与水产品中蛋白质、脂类以及其他成分分离。在一实施例中，该离心是在9500r/min离心5min。

理所当然的是，在对待测水产品进行多种类药物残留提取处理之前，还包括对待测水产品进行粉碎处理的步骤，如先将待测水产品进行粉碎处理，然后进行均质处理，以提高提取的效率。

上述步骤S02中，向步骤S01获得的含有药物残留提取液中加入聚苯乙烯-二乙烯基苯微球、PSA等物质的目的是有效除去含有药物残留提取液中残留的蛋白质、脂类等其他杂志，实现对含有药物残留提取液的净化目的，从而有效提高对农药残留物检测的精度。又由于如上述步骤S01中所述，待测水产品种类多样，且不同种类的蛋白质和脂类等含量不同。

为了有效实现对步骤S01获得的含有药物残留提取液进行净化，在一实施例中，当待测水产品为鱼类时，在对所述药物残留提取液进行萃取净化处理的方法为：向所述鱼类的所述药物残留提取液中加入聚苯乙烯-二乙烯基苯微球进行混合静置处理，取上清液，在无氧环境中浓缩至干，溶解定容，得到所述含有农药残留提取净化液。

其中，聚苯乙烯-二乙烯基苯微球作为吸附剂，对残留在步骤S01获得的含有药物残留提取液中的蛋白质、脂类以及其他物质进行有效吸附。另外，该聚苯乙烯-二乙烯基苯微球成本低廉，从而有效降低本发明实施例检测方法的成本。为了有效提高净化效果，在一实施例中，该聚苯乙烯-二乙烯基苯微球加入所述鱼类的所述药物残留提取液中的量是所述鱼类的所述药物残留提取液与聚苯乙烯-二乙烯基苯微球体积质量比为(1-5)mL：(20-200mg)，优选为(1-5)mL：(20-100mg)。在具体实施例中，两者的体积质量比为1mL：20mg。

在另一实施例中，当待测水产品为虾类时，在对所述药物残留提取液进行萃取净化处理的方法为：向所述鱼类的所述药物残留提取液中加入聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA混合物进行混合静置处理，取上清液，在无氧环境中浓缩至干，溶解定容，得到所述含有农药残留提取净化液。

其中，聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA形成复合吸附剂，对残留在步骤S01获得的含有药物残留提取液中的蛋白质、脂类以及其他物质进行有效吸附。另外，该聚苯乙烯-二乙烯基苯微球成本低廉，在提高吸附效果的基础上，有效降低了PSA的用量，从而有效降低本发明实施例检测方法的成本。为了有效提高净化效果，在一实施例中，所述聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA加入所述虾类的所述药物残留提取液中的量是所述虾类的所述药物残留提取液与聚苯乙烯-二乙烯基苯微球、PSA三者体积质量比为(1-5)mL：(40-200mg)：(10-50mg)。在具体实施例中，三者的体积质量比为1mL：40mg：10mg。

为了进一步提高对残留在步骤S01获得的含有药物残留提取液中的蛋白质、脂类以及其他物质进行有效吸附。在一实施例中，步骤S02的上述各实施例中聚苯乙烯-二乙烯基苯微球选用粒径为微米级聚苯乙烯-二乙烯基苯微球。在进一步实施例中，该聚苯乙烯-二乙烯基苯微球的粒径为80μm～250μm。在一些具体实施例中，该聚苯乙烯-二乙烯基苯微球的粒径为80μm、100μm、、110μm、120μm、150μm、180μm、200μm、220μm、240μm、250μm等。选用该微米级聚苯乙烯-二乙烯基苯微球建立的新型QuEChERS方法能有效提高对杂质的吸附效果，显著提高对含有药物残留提取液的净化效果，从而有效提高对农药残留物检测的精度和灵敏度。另外，其代替常规QuEChERS方法中的C18、PSA和GCB等昂贵的吸附剂，显著降低本发明检测方法对农药检测的成本。

该步骤S02中，对含有药物残留提取液进行净化处理后，静置处理，分离并保留上清液。将上清液在无氧环境进行浓缩处理，除去溶剂，然后将固体溶解并定容，配置用于上LC-MS/MS的含有农药残留提取净化液。其中，在一实施例中，无氧环境进行浓缩处理是采用45-65℃水浴氮吹浓缩至干燥，在具体实施例中，无氧环境进行浓缩处理是采用40℃水浴氮吹浓缩至干燥。用于溶解固体并定容的溶剂可以采用能用于LC-MS/MS的常规溶剂。在一实施例中，将浓缩干燥的固体于乙酸与乙腈混合溶剂中定容，超声溶解，滤膜过滤。

上述步骤S03中，将上述步骤S02中配制的含有农药残留提取净化液上LC-MS/MS进行定量分析检测，从而得出农药残留曲线，以便与农药标准液曲线的农药峰面积进行比较计算得出精确的农药残留含量。

其中，将待测水产品所得到的农药峰面积与农药标准液曲线的农药峰面积进行比较计算的方法直接按照LC-MS/MS的峰面积计算方式进行定量计算。

所述混合农药标准曲线是将含量已知的农药标样溶液上LC-MS/MS进行分析，获得农药标准曲线。在一实施例中，该农药标样溶液含有以下标样农药成分：

氯嘧磺隆、异丙草胺、嘧菌酯、咪酰胺、烯酰吗啉、甲磺隆、三唑酮、噻嗪酮、唑螨酯、烯唑醇、多菌灵、噻菌灵、抑霉唑。

另外，该农药标样溶液可以直接市购，也可以根据实验检测项目临时自行配制。

另外，为了标准曲线，在一实施例中，将上述农药标样溶液上LC-MS/MS的LC条件如下：

Agilent C18色谱柱，流速：0.30mL/min，柱温：30℃，进样量：10μL，流动相：0.1％(体积百分含量)甲酸-水、0.1％甲酸(体积百分含量)-乙腈，梯度洗脱程序如下：

所述MS的条件为：ESI+模式下采集，分辨率：单位分辨率；CUR：40psi；CAD：Medium；TEM：500℃；GS1：40.00psi；GS2：60.00psi；IS：5000.00V。

将上述农药标样溶液上LC-MS/MS后，以外标法制备混合农药标准曲线，使得相关系数大于等于0.99。

在一实施例中，将上述步骤S02中配制的含有农药残留提取净化液按照上述实施例中的LC条件和MS条件上LC-MS/MS进行定量分析检测，获得农药残留曲线，从而与农药标准曲线进行比较和计算。

由上述分析可知，

1.上述能同时检测水产品中多种类药物残留的方法采用的聚苯乙烯-二乙烯基苯微球作为吸附剂具有优越的吸附能力，能满足复杂样品中药物残留化合物的吸附分离需求，且价格仅为C18、PSA、GCB吸附剂的五分之一到三分之一；

2.优选采用粒径为80μm～250μm的聚苯乙烯-二乙烯基苯微球代替常规QuEChERS方法中的C18、PSA和GCB等昂贵的吸附剂，并将其成功的用于水产品样品中农药残留的高效吸附分离和高灵敏检测；

3.采用改良的QuEChERS方法结合LC-MS/MS方法，无需按照农药的类别进行分类处理，而是根据样品中的脂肪、蛋白和水分含量特点，一步式分离和检测所有农药残留，提高了样品前处理和分析过程的效率，同时可全部检测成本降低为常规方法的十分之一；

4.基于聚苯乙烯-二乙烯基苯微球建立的新型QuEChERS方法对于生物或食品等复杂样品中的药物残留的吸附分离和分析效果良好，预期有良好、广阔的应用前景；

5.对待测水产样品前处理采用改良QuEchERS方法，显著缩短了每个水产品样品前处理的萃取前处理时间，使实验操作简单、快捷，同时具有操作准确、灵敏度高及重复性好等优点。

以下通过多个实施例来举例说明上述能同时检测水产品中多种类药物残留的方法。

实施例1

本实施例提供的基于改良QuEChERS法与LC-MS/MS联用的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法。本方法所涉及到的仪器与试剂如下：

Agilent1200液相色谱仪联用API4000四极杆质谱、旋涡振荡仪(ThermoM376)、往复式振荡器(Yamato SA300)、高速离心机(Sigma 3K15)、超声波清洗器(Elma E70H)、氮吹仪(Caliper)，所使用的乙腈、甲酸、乙酸均为色谱纯，NaAc和MgSO₄均为分析纯。

本实施例能同时检测水产品中多种类药物残留的方法包括以下步骤：

(1)制备：采集选取500g代表性鱼肉样品，在高速均质器内充分粉碎、均质备用；

(2)提取：称取5g鱼肉(精确到0.01g)，置于50mL具塞离心管中，加入20mL1％(体积百分含量)乙酸乙腈溶剂，同时加入1g NaAc(醋酸钠)和1g无水MgSO₄，高速涡旋混匀，水平振荡提取10min，5500r/min离心5min；

(3)净化：将20mL上清液移入含400mg填料的50-mL具塞离心管中，高速涡旋混匀，水平振荡10min，取10mL上清液于15mL离心管中，40℃水浴氮吹浓缩至干，以1mL0.1％(体积百分含量)甲酸水：乙腈定容，超声溶解，过0.22μm滤膜，供LC-MS/MS上机检测；

(4)基质混合标准溶液的配制：以空白样品提取液配制具有浓度梯度的混合农药标准溶液作为标准曲线；吸取以上配制好的不同浓度的基质混合标准溶液注入LC-MS/MS；基质混合标准曲线溶液配制方式如下：从浓度为1mg/L的混合标准储备液中分别移取10μL、20μL、50μL、100μL于1ml进样瓶中，分别用空白样品提取溶液定容至1ml，配制成基质混合标准曲线；其中，该混合农药成分如表2中的化合物名单；

(5)测定方法：将配制好的不同浓度的基质混合标准曲线溶液和步骤(3)净化的待测液分别注入液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS)，以外标法进行残留量的定量分析，即以配置好的不同梯度的混标标准溶液作为标准曲线进行回归分析，相关系数大于等于0.99，对提取后的样品进行测定，对检出的农药和标准曲线的峰面积对比，并代入标准曲线，即可求得样品中各种农药的残留量；其中，仪器参数：采用的液相色谱条件为：

色谱柱：Agilent C₁₈色谱柱；

流速：0.30mL/min，柱温：30℃；

进样量：10μL，

流动相：0.1％甲酸-水、0.1％甲酸-乙腈梯度洗脱程序表见表1；

表1. 液相色谱洗脱程序

扫描方式：正离子扫描；电喷雾离子源(ESI)；停留时间50msec；多反应检测(MRM)模式采集，MRM参数见表2。

采用的质谱条件：ESI+模式下采集，质谱条件如下：分辨率：单位分辨率；CUR：40psi；CAD：Medium；TEM：500℃；GS1：40.00psi；GS2：60.00psi；IS：5000.00V。化合物质谱参数见表2。

表2 13种农药残留化合物质谱参数

(6)本发明方法的检出限：通过混标溶液经过前处理和进样分析，以3倍信噪比计算得到，范围在0.15～0.50μg/kg之间；

(7)本发明方法的重复性和加标回收率：

以罗非鱼样品为例，在罗非鱼肉样品中加入混合农药的标准溶液，进行按照鱼肉样品的前处理方法进行处理，LC-MS/MS分析，并按照加标量和测定值计算其回收率，结果见表3。由表3可以看出，13种农药化合物在三个浓度水平10、20、50μg/kg添加回收率范围在75％～120％，平均相对标准偏差(RSD)小于14.9％，其中添加20μg/kg的重构离子色谱图如图2所示；

表3. 鱼肉样品中13种农药残留的检出限、回收率和RSD

检测结果：收集市售不同来源的鱼肉样本12份，每种样本取两份平行样，按照实施例1所建立的分析方法进行检测。检测和数据分析工作在6小时内完成。经标准方法气相色谱检测为准确结果。通过实际样品分析，进一步证明所建立的基于聚苯乙烯-二乙烯基苯微球建立的改良QuEChERS方法和配方适用于水产品中多种类农残的同时检测，具有成本低、准确、可靠的优点。

实施例2

本实施例提供的基于改良QuEChERS法与LC-MS/MS联用的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法。本方法所涉及到的仪器与试剂如同实施例1。

本实施例能同时检测水产品中多种类药物残留的方法包括以下步骤：

(1)制备：采集虾肉样品选取500g代表性样品，在高速均质器内充分粉碎、均质备用；

(2)提取：称取5g虾肉样品(精确到0.01g)，置于50mL具塞离心管中，加入20mL1％乙酸乙腈溶剂，同时加入1g NaAc和1g无水MgSO4，高速涡旋混匀，水平振荡提取10min，5500r/min离心5min；

(3)净化：将20mL上清液移入含800mg聚苯乙烯-二乙烯基苯微球和200mg PSA的50mL具塞离心管中，高速涡旋混匀，水平振荡10min，取10mL上清液于15mL离心管中，40℃水浴氮吹浓缩至干，以1mL0.1％甲酸水：乙腈定容，超声溶解，过0.22μm滤膜，供LC-MS/MS上机检测；

(4)基质混合标准溶液的配制：以空白样品提取液配制具有浓度梯度的混合农药标准溶液作为标准曲线；吸取以上配制好的不同浓度的基质混合标准溶液注入LC-MS/MS；基质混合标准曲线溶液配制方式如下：从浓度为1mg/L的混合标准储备液中分别移取10μL、20μL、50μL、100μL于1ml进样瓶中，分别用空白样品提取溶液定容至1mL，配制成基质混合标准曲线；其中，该混合农药成分如表2中的化合物名单。

(5)测定方法：将配制好的不同浓度的基质混合标准曲线溶液注入液相色谱-串联质谱仪，以外标法进行残留量的定量分析，即以配置好的不同梯度的混标标准溶液作为标准曲线进行回归分析，相关系数大于等于0.99，对提取后的样品进行测定，对检出的农药和标准曲线的峰面积对比，并代入标准曲线，求得样品中各种农药的残留量；其中，液相色谱设定条件为：

色谱柱：Agilent C₁₈色谱柱；

流速：0.30mL/min，柱温：30℃；

进样量：10μL，

流动相：0.1％甲酸-水、0.1％甲酸-乙腈梯度洗脱程序表见上表1；

扫描方式：正离子扫描；电喷雾离子源(ESI)；停留时间50msec；多反应检测(MRM)模式采集，MRM参数见上表2；

质谱设定条件：ESI+模式下采集，质谱条件如下：分辨率：单位分辨率；CUR：40psi；CAD：Medium；TEM：500℃；GS1：40.00psi；GS2：60.00psi；IS：5000.00V。化合物质谱参数见上表2；

(6)本发明方法的检出限：通过混标溶液经过前处理和进样分析，以3倍信噪比计算得到，范围在0.15～0.50μg/kg之间；

(7)本发明方法的重复性和加标回收率：

在虾肉样品中加入混合农药的标准溶液，按照虾肉样品前处理方法进行前处理，LC-MS/MS分析，并按照加标量和测定值计算其回收率，结果见表4，由表4可以看出，13种农药化合物在三个浓度水平10、20、50μg/kg添加回收率范围在75.5％～118％，平均相对标准偏差(RSD)小于14.6％。

表4. 虾肉样品中13种农药残留的检出限、回收率和RSD

另外，收集市售不同来源的虾肉样本18份，每种样本取两份平行样，按照实施例2所建立的分析方法进行检测，检测和数据分析工作在6小时内完成，检测结果表明，在虾肉中检出2份草虾样本含有58.4μg/kg、38.6μg/kg的嘧菌酯，色谱图见附图3、4。经标准方法气相色谱检测为准确结果。通过实际样品分析，进一步证明所建立的基于聚苯乙烯-二乙烯基苯微球建立的改良QuEChERS方法和配方适用于水产品中多种类农残的同时检测，具有成本低、准确、可靠的优点。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，包括如下步骤：

将待测水产品进行多种类药物残留提取处理，获得含有药物残留提取液；

将所述含有药物残留提取液采用聚苯乙烯-二乙烯基苯微球或聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA混合物进行萃取净化处理，并配制含有农药残留提取净化液；

将所述含有农药残留提取净化液上LC-MS/MS进行定量检测，对检出的农药峰面积与混合农药标准曲线的峰面积对比，计算出所述待测水产品中各种农药具体残留量。

2.根据权利要求1所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯-二乙烯基苯微球选用粒径为微米级。

3.根据权利要求1所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯-二乙烯基苯微球的粒径为80μm～250μm。

4.根据权利要求1-3任一所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述待测水产品为鱼类，在对所述药物残留提取液进行萃取净化处理的步骤中，向所述鱼类的所述药物残留提取液中加入聚苯乙烯-二乙烯基苯微球进行混合静置处理，取上清液，在无氧环境中浓缩至干，溶解定容，得到所述含有农药残留提取净化液。

5.根据权利要求4所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯-二乙烯基苯微球加入所述鱼类的所述药物残留提取液中的量是所述鱼类的所述药物残留提取液与聚苯乙烯-二乙烯基苯微球体积质量比为(1-5)mL：(20-200)mg。

6.根据权利要求1-3任一所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述待测水产品为虾类，在对所述药物残留提取液进行萃取净化处理的步骤中，向所述鱼类的所述药物残留提取液中加入聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA混合物进行混合静置处理，取上清液，在无氧环境中浓缩至干，溶解定容，得到所述含有农药残留提取净化液。

7.根据权利要求6所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯-二乙烯基苯微球与PSA加入所述虾类的所述药物残留提取液中的量是所述虾类的所述药物残留提取液与聚苯乙烯-二乙烯基苯微球、PSA体积质量比为(1-5)mL：(40-200)mg：(10-50)mg。

8.根据权利要求1、2、3、5、7任一所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：将所述待测水产品进行多种类药物残留提取处理方法如下：

向待测水产品加入乙酸体积百分含量为1％～2.5％的乙酸-乙腈溶剂，同时加入醋酸钠和无水硫酸镁，进行混料处理和振荡提取后，离心，取上清液。

9.根据权利要求8所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述乙酸-乙腈溶剂与所述待测水产品的体积质量比为(3-5ml)：1g；和/或

所述醋酸钠、无水硫酸镁与所述待测水产品的质量比为1：1：(5～10)。

10.根据权利要求1、2、3、5、7、9任一所述的能同时检测水产品中多种类药物残留的方法，其特征在于：所述LC-MS/MS进行定量检测的步骤中，所述LC的条件如下：

Agilent C18色谱柱，流速：0.30mL/min，柱温：30℃，进样量：10μL，流动相：0.1％(体积百分含量)甲酸-水、0.1％甲酸(体积百分含量)-乙腈，梯度洗脱程序如下：

或/和，所述MS的条件为：ESI+模式下采集，分辨率：单位分辨率；CUR：40psi；CAD：Medium；TEM：500℃；GS1：40.00psi；GS2：60.00psi；IS：5000.00V；

或/和，所述混合农药标准曲线是含有如下农药标样的标准曲线：

氯嘧磺隆、异丙草胺、嘧菌酯、咪酰胺、烯酰吗啉、甲磺隆、三唑酮、噻嗪酮、唑螨酯、烯唑醇、多菌灵、噻菌灵、抑霉唑。