CN105259267A - 一种测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种气相色谱检测方法，具体涉及一种测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法，包括标样溶液的配制、试样溶液的配制以及按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序通过气相色谱仪进行测定步骤。本发明方法操作简单，能够同时测定嘧菌酯和戊唑醇质量分数，并可作为40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂的质量控制方法。

Description

一种测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法

技术领域

本发明涉及一种气相色谱检测方法，具体涉及一种测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法。

背景技术

嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯(Strobilurin)类杀菌农药，高效、广谱，对几乎所有的真菌界(子囊菌亚门、担子菌亚门、鞭毛菌亚门和半知菌亚门)病害如白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性。可用于茎叶喷雾、种子处理，也可进行土壤处理，主要用于谷物、水稻、花生、葡萄、马铃薯、果树、蔬菜、咖啡、草坪等。该产品主要信息如下：

通用名称：嘧菌酯

ISO通用名称：azoxystrobin

化学名称：(E)-[2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基]-3-甲氧基丙烯酸甲酯

结构式：

实验式：C₂₂H₁₇N₃O₃

相对分子质量：403.4

熔点：114～116℃

蒸气压(25℃)：1.1×10^-10Pa

溶解度(g/L,20℃)：水6×10^-3；易溶于乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷；溶于甲醇、甲苯、丙酮；微溶于乙烷、正辛醇

稳定性：水溶液中光解半衰期为2周，对水解稳定。

戍唑醇(Tebuconazole)是一种轻乙基三唑衍生物,属于麦角留醇合成抑制剂,能迅速被植物有生长力的部分吸收并主要向顶部转移，不仅具有杀菌活性，还可促进作物生长。用于防治白粉菌属、丙锈菌属、核控菌属和壳针属引起的病害如小麦白粉病、三黑穗病、玉米丝黑穗病、高梁丝黑穗病、大豆锈病、油菜菌核病、梨叶斑病、茶饼病、苹果斑点落叶病、苹果轮纹病、葡萄灰霉病等效果较好。但它也存在使用成本较高，连续单一使用容易导至病原菌产生抗性等问题。戊唑醇信息如下：

通用名称：戊唑醇

ISO通用名称：tebuconazole

化学名称：1-(4-氯苯基)-3-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-4,4-二甲基戊-3-醇

结构式：

实验式：C₁₆H₂₂ClN₃O

相对分子质量：307.8

生物活性：杀菌

熔点：102.4℃

蒸气压(25℃)：1.33×10^-5Pa

溶解度(g/L，20℃)：二氯甲烷＞200，甲苯50～100，己烷＜0.1，异丙醇、水0.032

稳定性：在pH值4～9，22℃条件下水解DT₅₀大于1年。

嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂是由嘧菌酯和戊唑醇混配而成，该复配杀菌剂对苹果斑点落叶病菌有较好的增效作用，同时对环境影响小。

如何简便、高效检测农药中二者的含量，尤其是两种药物复配时同时检测二者含量，从而判断农药质量和药效，是目前需要解决的问题。

发明内容

本发明公开了一种利用气相色谱法测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法，该方法操作简单，能够同时测定嘧菌酯和戊唑醇的含量。

本发明解决技术问题采用的技术方案为：

一种测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法，包括以下步骤：

(1)、标样溶液的配制：在标准样品中加入内标溶液和三氯甲烷，混匀；其中内标溶液为邻苯二甲酸二苯酯的三氯甲烷溶液；

(2)、试样溶液的配制：在试样中加入冰乙酸并置于超声波浴，然后水浴加热至液体蒸干，加入内标溶液和三氯甲烷，振摇后置超声波浴，然后加入水振摇提取，取下层有机相进行离心，取上清液作为试样溶液；

(3)按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序通过气相色谱仪进行测定。

优选的，其中气相色谱仪具有氢火焰离子化检测器，毛细管色谱柱为10m×0.53mm(id)，DB-1石英毛细管柱。

优选的，其中气相色谱的操作条件为：

柱温：185℃保持1.8min，以25℃/min升温速度升至238℃，并于238℃保持1.5min；

气化室温度：275℃；

检测器温度：275℃；

气体流速(mL/min)：载气(N₂)55，尾吹气25，氢气45，空气500；

进样量：1μL。

优选的，所述方法包括以下步骤：

(1)、标样溶液的配制：称取0.015g嘧菌酯标样和/或0.025g戊唑醇标样，置于30mL具塞玻璃瓶中，用移液管准确加入10mL内标溶液，加5mL三氯甲烷，混匀；

(2)、试样溶液的配制：称取0.1g试样，置于50mL具塞锥形瓶中，加入3mL冰乙酸溶液，置超声波浴1min，置70℃水浴加热，待瓶内液体蒸发至近干后取出恢复至室温。用与步骤(1)中使用的同一支移液管准确加入10mL内标溶液，加5mL三氯甲烷，振摇后置超声波浴3min，将瓶内溶液转移至梨形分液漏斗，加10mL水后紧塞猛烈振摇，静置2min，取下层有机相溶液10mL进行离心处理，取上清液进样；

(3)待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比值相对变化小于1.2％后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

优选的，进行测定后还包括以下计算步骤：

将测得的两针试样溶液和试样前后两针标样溶液中嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积之比，分别进行平均。试样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数ω₁(％)按式(1)计算：

${\mathrm{\ω}}_1=\frac{r_2\×m_1\×\mathrm{\ω}}{r_1\×m_2}\mathrm{...}\left(1\right)$

式中：

r₁──标样溶液中，嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比的平均值；

r₂──试样溶液中，嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比的平均值；

m₁──嘧菌酯和/或戊唑醇标样的质量，单位为克(g)；

m₂──试样的质量，单位为克(g)；

ω──标样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数，以％表示。

优选的，测定样品为40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂。

优选的，所述40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂由嘧菌酯原药、戊唑醇原药与助剂和填料加工制成。

一种40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂的质量控制方法，使用上述方法测定是否达到以下指标要求，以确定农药质量是否合格：

项目	指标
		嘧菌酯质量分数/％	15±0.9
戊唑醇质量分数/％	25±1.5

。

本发明方法操作简单，能够同时测定嘧菌酯和戊唑醇质量分数，并可作为40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂的质量控制方法。

附图说明

图1为40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂试样溶液气相色谱图。

具体实施方式

以下具体描述通过上述方法测定40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂中二者的质量分数，其质量控制要求如下：

1要求

1.1组成和外观

样品应由符合标准的嘧菌酯原药、戊唑醇原药与适宜的助剂和填料加工制成。外观为可流动、易测量体积的悬浮液体；经存放外观发生变化后，用手摇动应恢复原状，不应有结块。

1.2技术指标

40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂应符合表1要求。

表140％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂控制项目指标

2试验方法

2.1一般规定

本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682-2008中规定的三级水。检验结果的判定按GB/T8170-2008的4.3.3“修约值比较法”进行。

2.2抽样

按照GB/T1605-2001中“液体制剂采样”方法进行。用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量应不少于200mL。

2.3鉴别试验

气相色谱法－本鉴别试验可与嘧菌酯和/或戊唑醇质量分数测定同时进行。在相同的色谱操作条件下，试样溶液被测目标色谱峰的保留时间对比标样溶液的嘧菌酯和/或戊唑醇色谱峰的保留时间，其相对差值应在1.5％以内。

2.4气相色谱法测定嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数

2.4.1方法提要

试样中的嘧菌酯和/或戊唑醇用三氯甲烷溶解，以邻苯二甲酸二苯酯为内标物，使用DB-1键合型大口径石英毛细管柱和FID检测器，对试样中嘧菌酯和/或戊唑醇进行气相色谱分离，内标法定量。

2.4.2试剂和溶液

三氯甲烷；

嘧菌酯标样：已知准确质量分数，ω≥98％；

戊唑醇标样：已知准确质量分数，ω≥98％；

内标物：邻苯二甲酸二苯酯(应不含有干扰分析的杂质)；

内标溶液：ρ(邻苯二甲酸二苯酯)＝1.4g/L.。称取1.4g邻苯二甲酸二苯酯，用三氯甲烷溶解并稀释至1000mL，摇匀；

冰乙酸溶液：(冰乙酸+水)体积分数＝30％。3体积冰乙酸与7体积的蒸馏水混匀。

2.4.3仪器

气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器；

毛细管色谱柱：10m×0.53mm(id)，DB-1石英毛细管柱。

色谱工作站；

单标玻璃移液管：10mL；

恒温水浴：控制温度(70±0.2)℃；

过滤器：滤膜孔径约0.45μm；

梨形分液漏斗：250mL；

离心机：4000r/min。

超声波清洗器。

2.4.4气相色谱操作条件

柱温：185℃(保持1.8min)→238℃(升温速度25℃/min)，238℃(保持1.5min)；

气化室温度：275℃；

检测器温度：275℃；

气体流速(mL/min)：载气(N₂)55，尾吹气25，氢气45，空气500；

进样量：1μL；

保留时间(min)：戊唑醇约1.6，内标物(邻苯二甲酸二苯酯)约2.4，嘧菌酯约4.4。

上述操作参数是典型的。可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。典型的试样溶液气相色谱图见图1，图中数字标号分别代表：1—戊唑醇；2—内标物(邻苯二甲酸二苯酯)；3—嘧菌酯。

2.4.5测定步骤

2.4.5.1标样溶液的配制

称取0.015g(精确至0.00002g)嘧菌酯标样和0.025g(精确至0.00002g)戊唑醇标样，置于30mL具塞玻璃瓶中，用移液管准确加入10mL内标溶液，加5mL三氯甲烷，混匀。

2.4.5.2试样溶液的配制

称取0.1g(精确至0.0002g)试样，置于50mL具塞锥形瓶中，加入3mL冰乙酸溶液，置超声波浴1min，置70℃水浴加热(瓶口端连接抽气装置)，待瓶内液体蒸发至近干后取出恢复至室温。用与4.4.5.1同一支移液管准确加入10mL内标溶液，加5mL三氯甲烷，振摇后置超声波浴3min，将瓶内溶液转移至梨形分液漏斗，加10mL水后紧塞猛烈振摇，静置2min，取下层有机相溶液10mL进行离心处理，取上清液进样。

2.4.5.3测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针戊唑醇与内标物峰面积比值相对变化小于1.2％后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.6计算

将测得的两针试样溶液和试样前后两针标样溶液中嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积之比，分别进行平均。试样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数ω₁(％)按式(1)计算：

${\mathrm{\ω}}_1=\frac{r_2\×m_1\×\mathrm{\ω}}{r_1\×m_2}\mathrm{...}\left(1\right)$

式中：

r₁──标样溶液中，嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比的平均值；

r₂──试样溶液中，嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比的平均值；

m₁──嘧菌酯和/或戊唑醇标样的质量，单位为克(g)；

m₂──试样的质量，单位为克(g)；

ω──标样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数，以％表示。

也可先求算校正因子f，再计算试样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数，但进样顺序应保持不变。

2.4.7允许差

嘧菌酯和/或戊唑醇质量分数的两次平行测定结果之差应不大于0.8％，其算术平均值作为测定结果。

2.5悬浮率的测定

称取1.0g(精确至0.0002g)试样，按GB/T14825-2006中4.2方法进行。

移出量筒上层9/10悬浮液后，将余下的悬浮液和沉淀物移至分液漏斗，用与4.4.5.1中使用的同一支移液管准确加入10mL内标溶液，加入5mL三氯甲烷，10mL水，紧塞后振摇溶液，静置，取下层有机相溶液10mL进行离心处理，取上清液进行测定。

按4.4测定量筒底部溶液中嘧菌酯和/或戊唑醇质量分数，并计算悬浮率。

2.6pH值的测定

按GB/T1601进行。

2.7湿筛试验测定

按GB/T16150中的“湿筛法”进行。

2.8持久泡沫量的测定

2.8.1方法提要

将规定量的试样与标准硬水混合，静置后记录泡沫体积。

2.8.2试剂和溶液

标准硬水：ρ(Ca²⁺+Mg²⁺)＝342mg/L，pH＝6.0～7.0。按GB/T14825配制。

2.8.3仪器和器具

具塞量筒：250mL(分度值2mL，0～250mL；刻度线20cm～21.5cm，250mL刻度线到塞子底部4cm～6cm)。

2.8.4测定步骤

量筒内加入标准硬水至180mL，称取加入试样1.0g(准确至0.1g)，加标准硬水至距离量筒塞子底部9cm的刻度线处，盖上塞子，以量筒底部为中心，上下颠倒30次(每次2s)。放在试验台上静置1min，记录泡沫体积。

2.9倾倒性试验

2.9.1方法提要

将规定量的试样在标准量筒放置规定时间，再按照一定要求测定倾倒后量筒中残余物的量和用水洗涤后量筒中残余物的量。

2.9.2试剂和溶液

水：蒸馏水。

2.9.3仪器

具标准磨口塞(B34)量筒：500mL±2mL；量筒高度39cm(量筒内底部至塞子底部)，内径5cm，总容积的8/10处(靠近塞子)有刻度线；

秒表。

2.9.4测定步骤

2.9.4.1称量具塞量筒的质量(精确至0.1g)。加入样品至量筒总容积的80％刻度线处，盖上盖子，再称量(精确至0.1g)。室温下静置24h后，先将量筒由直立位置倾斜135度，倾倒60s，再倒置60s。重新称量具塞量筒的质量(精确至0.1g)。样品倾倒后残余物的质量分数ω₂(％)按式(2)计算：

${\mathrm{\ω}}_2=\frac{m_2-m_0}{m_1-m_0}\×\mathrm{100...}\left(2\right)$

式中：

ω₂──倾倒后残余物的质量分数，以％表示；

m₀──具塞量筒的质量，单位为克(g)；

m₁──样品+具塞量筒的质量，单位为克(g)；

m₂──倾倒后残余物+具塞量筒的质量，单位为克(g)；

2.9.4.2加入蒸馏水(20℃)至量筒总体积8/10刻度线处，塞紧磨口塞，颠倒量筒10次(颠倒量筒时，应保证每次以量筒中部为中心，使量筒从直立状态翻转180度倒置，再回到原来状态的时间大约在2s，操作应平稳均匀的完成)，然后采用与4.9.4.1的倾倒方法把水倒出，再盖上盖子称量(精确至0.1g)。样品的洗涤后残余物质量分数ω₃按式(3)计算：

${\mathrm{\ω}}_3=\frac{m_3-m_0}{m_1-m_0}\×\mathrm{100...}\left(3\right)$

式中：

ω₃──洗涤后残余物的质量分数，以％表示；

m₀──具塞量筒的质量，单位为克(g)；

m₁──样品+具塞量筒的质量，单位为克(g)；

m₃──洗涤后残余物+具塞量筒的质量，单位为克(g)；

2.10低温稳定性试验

按GB/T19137-2003中2.2进行，悬浮率和湿筛试验仍符合标准要求，则为合格。

2.11热贮稳定性试验

按GB/T19136-2003中2.1进行，嘧菌酯和戊唑醇质量分数不低于热贮前测定值的95％，悬浮率和倾倒性仍符合标准要求为合格。

2.12产品的检验与验收

产品的检验和验收应符合GB/T1604的规定。

3标志、标签、包装、贮运、安全和保证期

3.1标志、标签、包装

40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂的标志、标签和包装应符合GB3796的规定。产品用塑料瓶包装。也可根据用户要求或定货协议采用其他形式的包装，但须符合GB3796的规定。

3.2贮运

40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂包装件应贮存在通风、干燥的库房中。贮运时，严防潮湿和日晒，不得与食物、种子、饲料混放，避免与皮肤、眼睛接触，防止由口鼻吸入。

3.3安全

本品属低毒杀菌剂。使用本品时要避免与皮肤接触，防止口鼻吸入。使用后应用肥皂和清水冲洗。中毒者应立即送医院对症治疗。

保证期：在规定的贮运条件下，产品的保证期，从生产日期算起为2年。

规范性文件引用

本发明引用下列文件，其内容通过引用并入本文中。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T1601农药pH值的测定方法。

GB/T1604-1995商品农药验收规则。

GB/T1605-2001商品农药采样方法。

GB3796农药包装通则。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和实验方法。

GB/T8170-2008数值修约规则与极限数值的表示和判定。

GB/T14825-2006农药悬浮率测定方法。

GB/T16150-1995农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法。

GB/T19136-2003农药热贮稳定性测定方法。

GB/T19137-2003农药低温稳定性测定方法。

Claims (8)

1.一种测定嘧菌酯和/或戊唑醇含量的方法，包括以下步骤：

(1)、标样溶液的配制：在标准样品中加入内标溶液和三氯甲烷，混匀；其中内标溶液为邻苯二甲酸二苯酯的三氯甲烷溶液；

(2)、试样溶液的配制：在试样中加入冰乙酸并置于超声波浴，然后水浴加热至液体蒸干，加入所述内标溶液和三氯甲烷，振摇后置超声波浴，然后加入水振摇提取，取下层有机相进行离心，取上清液作为试样溶液；

(3)按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序通过气相色谱仪进行测定。

2.根据权利要求1所述的方法，其中气相色谱仪具有氢火焰离子化检测器，毛细管色谱柱为10m×0.53mm(id)，DB-1石英毛细管柱。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中气相色谱的操作条件为：

柱温：185℃保持1.8min，以25℃/min升温速度升至238℃，并于238℃保持1.5min；

气化室温度：275℃；

检测器温度：275℃；

气体流速(mL/min)：载气(N₂)55，尾吹气25，氢气45，空气500；

进样量：1μL。

4.根据权利要求3所述的方法，包括以下步骤：

(1)、标样溶液的配制：称取0.015g嘧菌酯标样和/或0.025g戊唑醇标样，置于30mL具塞玻璃瓶中，用移液管准确加入10mL内标溶液，加5mL三氯甲烷，混匀；

(2)、试样溶液的配制：称取0.1g试样，置于50mL具塞锥形瓶中，加入3mL冰乙酸溶液，置超声波浴1min，置70℃水浴加热，待瓶内液体蒸发至近干后取出恢复至室温；用与步骤(1)中使用的同一支移液管准确加入10mL内标溶液，加5mL三氯甲烷，振摇后置超声波浴3min，将瓶内溶液转移至梨形分液漏斗，加10mL水后紧塞猛烈振摇，静置2min，取下层有机相溶液10mL进行离心处理，取上清液进样；

(3)待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比值相对变化小于1.2％后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

5.根据权利要求4所述的方法，其中进行测定后通过以下方式进行计算：

将测得的两针试样溶液和试样前后两针标样溶液中嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积之比，分别进行平均；试样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数ω₁(％)按式(1)计算：

${\mathrm{\ω}}_1=\frac{r_2\×m_1\×\mathrm{\ω}}{r_1\×m_2}...\left(1\right)$

式中：

r₁──标样溶液中，嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比的平均值；

r₂──试样溶液中，嘧菌酯和/或戊唑醇与内标物峰面积比的平均值；

m₁──嘧菌酯和/或戊唑醇标样的质量，单位为克(g)；

m₂──试样的质量，单位为克(g)；

ω──标样中嘧菌酯和/或戊唑醇的质量分数，以％表示。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中测定样品为40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂由嘧菌酯原药、戊唑醇原药与助剂和填料加工制成。

8.一种40％嘧菌酯·戊唑醇悬浮剂的质量控制方法，使用权利要求6或7所述的方法测试是否达到以下指标要求，以确定质量是否合格：

项目 指标 嘧菌酯质量分数/％ 15±0.9 戊唑醇质量分数/％ 25±1.5

。