CN104316614B - 出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法。包括提取、净化、浓缩和UPLC‑MS/MS测定等步骤，该方法可同时测定抑霉唑、毒死蜱、多菌灵、噻菌灵、咪鲜胺、嘧霉胺、腈菌唑、氟硅唑、丙环唑、三唑酮、异菌脲、腈苯唑、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙萘酚、对苯基苯酚十八种保鲜剂。本发明提供的出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法具有步骤简便、准确度和精密度高的优点。
Description
技术领域
本发明属于化学分析检测领域，具体涉及一种出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法。
背景技术
蔬菜是人们日常饮食中必不可少的食物之一，可以提供人体所必需的多种维生素和矿物质，在居民饮食中扮演着重要的角色。多吃蔬菜具有保健防病、防癌治癌、增强营养、促进消化、软化血管等多种功效。但蔬菜在田间生产期间由于经常受到真菌和病原菌等微生物的感染，导致采摘后易霉变腐败，因此保鲜剂在蔬菜采摘后发挥着重要的作用。保鲜剂常被制成各类制剂或喷洒于蔬菜表面, 或直接将蔬菜浸泡于其中, 或添加到蔬菜包装材料中，但这些措施都易造成蔬菜及其加工制品的保鲜剂残留。
蔬菜保鲜剂主要分为天然保鲜剂和化学保鲜剂，天然保鲜剂包含茶多酚、甲壳素及其衍生物、溶菌酶、香辛料抗菌制剂等。相对于天然保鲜剂，化学保鲜剂具有设备简单、投资小、成本低等优点，因此在蔬菜生产和蔬菜贮藏中使用最为广泛。但化学保鲜剂大多有毒性和残留，对人体健康产生不利影响，其使用量与残留量需要保持在一定的范围之内才能够保证食品安全。人们评价保鲜剂不再局限于它对农产品的防腐效果和提高销量的经济效益上，而更着重于无损害环境和健康的社会效益。因此，蔬菜中保鲜剂残留的检测有着极其重要的意义。国标中对于蔬菜保鲜剂残留定量的种类不多，且定量限相对较高。由此，更多种类蔬菜的检测、低定量限、多种保鲜剂同时检测成了发展的需求，这不仅可以保障蔬菜的进食健康，还可以减少人力、物力的大量损耗等。
重庆产蔬菜除满足本地需求外，还远销中国香港和台湾、韩国、日本等地。内陆蔬菜出口长距离运输容易腐败霉变，不规范使用或滥用蔬菜保鲜剂可能导致该类药物超标，危害人们的身体健康。众多的检测项目和较长的检测周期不仅给新鲜蔬菜原料收购、出口通关带来不便，还导致蔬菜保鲜品质下降以及经济损失等。如何缩短蔬菜检验的周期，对快速检测提出了新的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，该方法可同时检测出待测蔬菜中的十八种保鲜剂，包括抑霉唑、毒死蜱、多菌灵、噻菌灵、咪鲜胺、嘧霉胺、腈菌唑、氟硅唑、丙环唑、三唑酮、异菌脲、腈苯唑、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙萘酚、对苯基苯酚。
本发明方法具体包括如下步骤：
1）提取
按每1g蔬菜匀浆与2mL正己烷-乙酸乙酯溶液的比例，加入蔬菜匀浆与正己烷-乙酸乙酯溶液于离心管中，涡旋混匀2min，水平振荡5min，再按每1g蔬菜匀浆加入0.5g氯化钠的比例加入氯化钠于离心管中，再次涡旋混匀1min，5000r/min离心3min，吸取上清液Ⅰ于离心管中，待净化；
2）净化样本
将乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸钠按重量比1:5加入所述装有上清液Ⅰ的离心管中，涡旋混匀2min，5000r/min离心3min，吸取上清液Ⅱ于旋蒸瓶中；
3）浓缩
将旋蒸瓶置于40℃以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入1mL乙腈-水，涡旋振荡，溶解旋蒸瓶中残渣，过滤膜过滤后，供UPLC-MS/MS测定；
4）UPLC-MS/MS测定，测定条件如下：
色谱柱：C18;
流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱；
各化合物保留时间和质谱参数见表1，其中带*的代表定性离子和定量离子；
柱温：40℃；
流速：0.3mL/min；
进样量：1μL；
预运行时间：3.0min；
总运行时间：10min；
表1十八种保鲜剂的参考保留时间及质谱参数
获得超高效液相色谱串联质谱图；
5）结果计算
用色谱数据处理机或按公式（1）计算试样中保鲜剂的含量，计算结果须扣除空白值；
（1）
式中：
——待测试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克；
——从超高效液相色谱串联质谱图上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升；
——样液最终定容体积，单位为毫升；
m——最终样液所代表的待测试样质量，单位为克。
在现有的蔬菜保鲜剂检测方法中没有能同时检测十八种保鲜剂的方法，仅有的几种保鲜剂的检测方法只能检测4-6种保鲜剂，且检测时间较长，如文献“液相色谱-质谱测定蔬菜、水果中四种保鲜剂的残留量”前处理过程复杂，且采用固相萃取柱净化，耗时较长；文献“分散固相萃取-高效液相色谱法快速测定果蔬中的6种保鲜剂残留量”虽采用分散固相萃取快速净化方式，但其检测的种类较少。本发明可同时检测出口蔬菜中多种保鲜剂，检测步骤简便、准确度和精密度高、耗时短，前处理阶段一般需要37min，且检测所用的超高效液相色谱串联质谱仪可同时检测正负离子，而不需要多次进样检测。
附图说明
图1为抑霉唑标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图2为毒死蜱标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图3为多菌灵标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图4为噻菌灵标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图5为咪鲜胺标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图6为嘧霉胺标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图7为腈菌唑标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图8为氟硅唑标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图9为丙环唑标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图10为三唑酮标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图11为异菌脲标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图12为腈苯唑标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图13为对羟基苯甲酸丁酯标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图14为对羟基苯甲酸丙酯标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图15为对羟基苯甲酸乙酯标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图16为对羟基苯甲酸甲酯标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图17为乙萘酚标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图18为对苯基苯酚标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图（0.02mg/L）；
图中横坐标表示各保鲜剂保留时间，纵坐标表示各保鲜剂的响应强度。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式做进一步的描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
1）提取
利用均质仪将蔬菜原样制成蔬菜匀浆，称取10.00g蔬菜匀浆（精确至0.01g）于50mL离线管中，加入20mL正己烷-乙酸乙酯（1+2，V/V）溶液，涡旋混匀2min，水平振荡5min，再加入5.00g（精确至0.01g）氯化钠，再次涡旋混匀1min，5000r/min离线3min，吸取10mL上清液Ⅰ于15mL离线管中，待净化。
2）净化样本
分别称取100mg 乙二胺-N-丙基硅烷（PSA，60μm）和500mg无水硫酸钠于10mL上清液Ⅰ中，涡旋混匀2min，5000r/min离线3min，吸取上清液Ⅱ于25mL旋蒸瓶中。
3）浓缩
将旋蒸瓶置于40℃以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入1mL乙腈-水（5+5，V/V）涡旋振荡，溶解旋蒸瓶中残渣，过滤膜（0.22μm亲油性尼龙66膜）过滤后，供UPLC-MS/MS测定。
4）UPLC-MS/MS测定条件
色谱柱：C18，50×2.1mm（内径），1.7μm，或相当者；
流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱程序如下：
时间/min 乙腈/% 2mmol/L乙酸铵缓冲液/%
0 5 95
1 5 95
7 90 10
9 90 10
9.5 5 95
10 5 95。
各化合物保留时间：见表1；
质谱参数：见表1；
柱温：40℃；
流速：0.3mL/min；
进样量：1μL；
预运行时间：3.0min；
总运行时间：10min；
超高效液相色谱串联质谱测定
根据样品中被测物的含量，选定峰面积相近的基质工作溶液。基质工作溶液和样液中各种保鲜剂的响应值均应在一定的线性范围内。试样溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表2的要求。基质工作溶液和样液等体积穿插进样测定，在上述色谱条件下，各目标化合物的参考保留时间见中表1。十八种保鲜剂标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图参见图1～图18。
表2试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围
5）结果计算
用色谱数据处理机或按公式（1）计算试样中保鲜剂的含量，计算结果须扣除空白值；
（1）
式中：
——待测试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克；
——从超高效液相色谱串联质谱图上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升；
——样液最终定容体积，单位为毫升；
m——最终样液所代表的待测试样质量，单位为克。
出口蔬菜中添加10.0μg/kg浓度水平的待测保鲜剂进行回收试验，平行测定6次的平均回收率和相对标准偏差见表2。
表3加标平均回收率和相对标准偏差
由以上实例可以看出，本发明实施例通过溶剂提取、净化、浓缩等对出口蔬菜中多种保鲜剂进行了检测，方法有较高的灵敏度、准确度和精密度。
Claims (2)
1.出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取
按每1g蔬菜匀浆与2mL正己烷-乙酸乙酯溶液的比例，加入蔬菜匀浆与正己烷-乙酸乙酯溶液于离心管中，涡旋混匀2min，水平振荡5min，再按每1g蔬菜匀浆加入0.5g氯化钠的比例加入氯化钠于离心管中，再次涡旋混匀1min，5000r/min离心3min，吸取上清液Ⅰ于离心管中，待净化；
2)净化样本
将乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸钠按重量比1:5加入所述装有上清液Ⅰ的离心管中，涡旋混匀2min，5000r/min离心3min，吸取上清液Ⅱ于旋蒸瓶中；
3)浓缩
将旋蒸瓶置于40℃以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入1mL乙腈-水，涡旋振荡，溶解旋蒸瓶中残渣，过滤膜过滤后，供UPLC-MS/MS测定；
4)UPLC-MS/MS测定，测定条件如下：
色谱柱：C18；
流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱；所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
各化合物保留时间和质谱参数见表1，其中带*的代表定性离子和定量离子；
柱温：40℃；
流速：0.3mL/min；
进样量：1μL；
预运行时间：3.0min；
总运行时间：10min；
表1
获得超高效液相色谱串联质谱图；
5)结果计算
用色谱数据处理机或按公式(1)计算试样中保鲜剂的含量，计算结果须扣除空白值；
式中：
Xi——待测试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克；
Ci——从超高效液相色谱串联质谱图上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升；
V——样液最终定容体积，单位为毫升；
m——最终样液所代表的待测试样质量，单位为克。
2.根据权利要求1所述出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，其特征在于：步骤3)中所述过滤膜为0.22μm亲油性尼龙66膜。
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