CN106290340A - 受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，包括以下步骤：(1)配制试剂，包括配制磺基水杨酸水溶液和甲苯；(2)脯氨酸标准曲线制作；(3)从烟叶中提取脯氨酸；(4)样品脯氨酸含量的测定：(5)在烟草5～6片真叶期移入二氯喹啉酸添加浓度为1.04×10‑3mg/kg、2.08×10‑3mg/kg、4.17×10‑3mg/kg、8.33×10‑3mg/kg、1.67×10‑2mg/kg药土中，分别在7d、14d、21d、28d、35d采用步骤(1)～(4)测量烟叶的脯氨酸含量，本方法解决了现有技术中烟叶受到氯喹啉酸侵害后脯氨酸影响与变化测定准确度不够的问题。

Description

受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法
技术领域
本发明涉及化学分析检测领域，特别是指受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法。
背景技术
二氯喹啉酸是防除稻田稗草的特效选择性除草剂，属激素型喹啉羧酸类除草剂，杂草中毒症状与生长素类作用相似，主要用于防治稗草且适用期很长，1-7叶期均有效。水稻安全性好。
有关研究表明二氯喹啉酸作为激素类除草剂，能够刺激乙烯在植物体内积累。二氯喹啉酸的靶标位点位于细胞壁的生物合成中，在禾本科植物中起到细胞壁合成抑制剂的作用，不同禾本科植物作用位点对二氯喹啉酸的敏感性。乙烯可抑制细胞壁合成酶的活性从而减少细胞壁的合成，乙烯含量的提高引起了ABA的积累，ABA在调节植物生长、叶片衰老、气孔开放起重要的作用。
二氯喹啉酸在土壤中有积累作用，对烟草生产会产生明显的药害。我国部分烟田曾因氯喹啉酸出现大面积烟草畸形生长现象，症状为新叶先出现不正常生长,叶缘下卷，叶片向背皱缩,致使叶片狭长，严重者呈线状，严重影响烟草的产量和质量。
由于烟草这一作物的特殊性，对于其受到氯喹啉酸的影响将直接影响烟农的收成，以及烟叶的质量，因此，对于氯喹啉酸对烟草的影响，需要进行多方面的，准确的，可靠的分析，目前，对于农药侵害植物的分析虽然有报道以及一般性的分析方法，但针对氯喹啉酸对烟草侵害的研究分析还相对较少，在氯喹啉酸对烟叶中脯氨酸的影响，研究也不够透彻，造成在氯喹啉酸对烟草的侵害的程度，影响等少有深入的了解，并且分析的结果上还存在较大的准确度差异。
发明内容
本发明提出一种受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，解决了现有技术中烟叶受到氯喹啉酸侵害后脯氨酸影响与变化测定准确度不够的问题。
本发明的技术方案是这样实现的：受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)配制试剂，包括配制磺基水杨酸水溶液和甲苯；
(2)脯氨酸标准曲线制作；
(3)从烟叶中提取脯氨酸；
(4)样品脯氨酸含量的测定：
待试管冷却至室温后，吸取上清液2mL，加2mL冰乙酸和3mL显色液，于沸水浴中加热40min，进行甲苯萃取和比色；
从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数：
式中：
C--提取液中脯氨酸浓度，由标准曲线求得；
V--提取液总体积；
a--测定时所吸取得体积；
W--样品重；
(5)在烟草5～6片真叶期移入二氯喹啉酸添加浓度为1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg药土中，分别在7d、14d、21d、28d、35d采用步骤(1)～(4)测量烟叶的脯氨酸含量。
进一步，步骤(1)中，试剂的配制采用以下配比和参数：
3％磺基水杨酸水溶液；
甲苯：2.5％酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol·L-1磷酸以3：2混合，作为溶剂进行配制。
进一步，步骤(3)包括以下步骤：剪取第四片展开的烟叶，去中脉剪碎混匀；称取样品0.3g，置于大试管中，加入5mL 3％磺基水杨酸溶液，加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。
本发明的所述受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，针对烟草的特性，结合对氯喹啉酸的侵害机理研究，对农药侵害过程中脯氨酸含量的变化，试剂的选配，操作环境、参数等进行了较为严格的调整与控制，使得到的氯喹啉酸侵害烟叶的脯氨酸的含量的测量更加准确，可靠，为合理使用氯喹啉酸以及消除影响，提供科学的依据。
附图说明
图1为脯氨酸标准曲线；
图2为二氯喹啉酸对烟草叶片脯氨酸含量的动态分析。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
烟草种子采用品种为K326。温室播种，育苗，于五至六片真叶期移栽，进行农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定
(1)、试剂配制
3％磺基水杨酸水溶液；
甲苯；
2.5％酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol·L-1磷酸以3：2混合，作为溶剂进行配置，此液在4℃下2～3d有效。
(2)、脯氨酸标准曲线制作
表1脯氨酸标准曲线
准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250mL，其浓度为100μg·mL-1。再取此液10mL，用蒸馏水稀释至100mL，即成10μg·mL-1的脯氨酸标准液。取7支具塞有刻度试管按表1加入各个试剂。混合后加玻璃球塞，在沸水浴中加热40min。取出冷却后向各个试管加入5mL甲苯充分振荡，以萃取红色物质。后吸取甲苯层以0号管为对照在波长520nm下比色。以吸光度为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，如图1所示，求线性回归方程。
(3)、脯氨酸的提取
剪取第四片展开的烟叶，去中脉剪碎混匀。称取样品0.3g，共三份，分别置于大试管中，加入5mL 3％磺基水杨酸溶液，加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。
(4)、样品脯氨酸含量的测定
待试管冷却至室温后，吸取上清液2mL，加2mL冰乙酸和3mL显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制作方法进行甲苯萃取和比色。
从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。
式中C--提取液中脯氨酸浓度(μg)，由标准曲线求得；
V--提取液总体积(mL)；
a--测定时所吸取得体积(mL)；
W--样品重g。
(5)在烟草5～6片真叶期移入二氯喹啉酸添加浓度为1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg药土中，分别在7d、14d、21d、28d、35d采用步骤(1)～(4)测量烟叶的脯氨酸含量。
测定结果如图2所示，可以看出，二氯喹啉酸处理对烟草叶片脯氨酸的含量影响是极为显著的，随着移植时间的延长，对照和处理烟草叶片脯氨酸含量均有上升趋势，处理较对照提高更加明显，不同施药量处理烟草叶片含量均高于对照，并且随二氯喹啉酸施用量的升高，烟草叶片脯氨酸的含量上升趋势明显。
移植后7d，处理烟草和对照烟草叶片脯氨酸差异不显著。移植后35d，对照烟草叶片脯氨酸含量为0.58mg·g-1，二氯喹啉酸浓度为1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg处理烟草叶片中脯氨酸含量分别为0.75mg·g-1、1.19mg·g-1、1.48mg·g-1、1.51mg·g-1、1.76mg·g-1，处理较对照分别提高30.93％、107.38％、157.30％、161.29％、204.82％。结果表明，经二氯喹啉酸处理，烟草叶片脯氨酸含量升高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制试剂，包括配制磺基水杨酸水溶液和甲苯；
(2)脯氨酸标准曲线制作；
(3)从烟叶中提取脯氨酸；
(4)样品脯氨酸含量的测定：
待试管冷却至室温后，吸取上清液2mL，加2mL冰乙酸和3mL显色液，于沸水浴中加热40min，进行甲苯萃取和比色；
从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数：
式中：
C--提取液中脯氨酸浓度，由标准曲线求得；
V--提取液总体积；
a--测定时所吸取得体积；
W--样品重；
(5)在烟草5～6片真叶期移入二氯喹啉酸添加浓度为1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg药土中，分别在7d、14d、21d、28d、35d采用步骤(1)～(4)测量烟叶的脯氨酸含量。
2.如权利要求1中所述受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：步骤(1)中，试剂的配制采用以下配比和参数：
3％磺基水杨酸水溶液；
甲苯：2.5％酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol·L-1磷酸以3：2混合，作为溶剂进行配制。
3.如权利要求1中所述受农药侵害烟叶的脯氨酸含量的测定方法，其特征在于：步骤(3)包括以下步骤：剪取第四片展开的烟叶，去中脉剪碎混匀；称取样品0.3g，置于大试管中，加入5mL 3％磺基水杨酸溶液，加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。
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