CN113884455A - 一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒及其检测方法,涉及脯氨酸技术领域,为解决现有检测的过程需要较长的时间,导致降低了检测的工作效率的问题。该快速检测脯氨酸含量的试剂盒:通过用磺基水杨酸提取脯氨酸,再经过加热处理后,使脯氨酸与酸性茚三酮溶液反应生成红色,最后加入甲苯萃取后,在520nm测定吸光度由此得出脯氨酸的含量,可提高效率且提高简化了测定流程。
Description
技术领域
本发明属于脯氨酸含量检测技术领域,具体涉及一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒及其检测方法。
背景技术
脯氨酸广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,脯氨酸脯氨酸测定存在一些问题,逆境条件处理植物脯氨酸浓度一般远高于该值,测定时需要进行范围延展或多次稀释,一般取样量在0.2-0.5g,不利于实验室小微量材料的重复取样测定,脯氨酸增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
如今在对脯氨酸脯氨酸含量检测的试剂盒,在检测的过程需要较长的时间,导致降低了检测的工作效率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒及其检测方法,以解决上述背景技术中提出检测的过程需要较长的时间,导致降低了检测的工作效率的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒,包括:提取液、试剂一、试剂二、试剂三。
通过采用上述技术方案,将测定液分为提取液、试剂一、试剂二、试剂三四种,提高最终测定结果的准确度,同时简化检测步骤。
进一步地,所述提取液为磺基水杨酸。
通过采用上述技术方案,磺基水杨酸含量为1.5g与水相混合得出提取液。
进一步地,所述试剂一为冰乙酸。
通过采用上述技术方案,冰乙酸含量为25ml。
进一步地,所述试剂二为茚三酮溶、冰醋酸、浓磷酸和水的混合液。
通过采用上述技术方案,茚三酮溶0.625g、15ml冰醋酸、4ml浓磷酸和6ml水相混合。
进一步地,所述试剂三为甲苯。
通过采用上述技术方案,甲苯ml。
一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒的检测方法,按照先后顺序包括以下步骤:
S1:首先将分光光度计预热,调节波长至520nm,蒸馏水调零;
S2:取0.5mL样本+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二与有盖试管中,置95℃水浴中保温30min,每10min振荡一次;
S3:待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值A,得到脯氨酸含量。
通过采用上述技术方案,将提取液与各个试剂内设定好所含材料的成分和保存温度,可以有效的保障试剂的活性,避免影响试剂的测定准确度,通过步骤1、步骤2和步骤3完整对脯氨酸含量进行测定,提高效率的同时简化和完善了测定流程
进一步地,在步骤S3中,所述脯氨酸含量通过公式y=0.0521x-0.0021计算,其中x为脯氨酸含量,所述y为吸光值A。
通过采用上述技术方案,上述提供的脯氨酸含量计算方法可以根据不同的测定对象在通过试剂后通过公式得出最终的含量,例如:
按照血清(浆)体积计算
脯氨酸含量(μg/mL)=[(A+0.0021)÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2)=192×(A+0.0021)
按照蛋白浓度计算
脯氨酸含量(μg/mg脯氨酸t)=[(A+0.0021)÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
按照样本质量计算
脯氨酸含量(μg/g鲜重)=[(A+0.0021)÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021)÷W
按照细菌或细胞密度计算
脯氨酸含量(μg/104cell)=[(A+0.0021)÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)
V1:加入反应体系中样本体积,0.5mL;V2:加入提取液体积,1mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数500万。
进一步地,在步骤S1、S2和S3中,所述提取液、试剂一、试剂二和试剂三均为4℃保存。
通过采用上述技术方案,可以保证活性提高测定数据的准确性。
进一步地,在步骤S2中,所述水浴采用水浴锅,所述振荡采用台式离心机。
通过采用上述技术方案,水浴锅可以起到保温作用,而台式离心机可以每每10min振荡一次便于分离脯氨酸。
进一步地,在步骤S1中,所述分光光度计预热时间为30min以上。
通过采用上述技术方案,可调式移液器为色素转移提供稳定性。
本发明的技术效果和优点:该快速检测脯氨酸含量的试剂盒中通过用磺基水杨酸提取脯氨酸,再经过加热处理后,使脯氨酸与酸性茚三酮溶液反应生成红色,最后加入甲苯萃取后,在520nm测定吸光度由此得出脯氨酸的含量,可提高效率且提高简化了测定流程。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒,按照脯氨酸测定包括以下试剂:包括包括:提取液、试剂一、试剂二、试剂三。
提取液为磺基水杨酸
试剂一为冰乙酸。
试剂二为茚三酮溶、冰醋酸、浓磷酸和水的混合液。
试剂三为甲苯。
还包括其检测方法,按照先后顺序包括以下步骤:
S1:首先将分光光度计预热,调节波长至520nm,蒸馏水调零;
S2:取0.5mL样本+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二与有盖试管中,置95℃水浴中保温30min,每10min振荡一次;
S3:待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值A,得到脯氨酸含量。
进一步地,在步骤S3中,所述脯氨酸含量通过公式y=0.0521x-0.0021计算,其中x为脯氨酸含量,所述y为吸光值A。
进一步地,在步骤S1、S2和S3中,所述提取液、试剂一、试剂二和试剂三均为4℃保存。
在步骤S2中,水浴采用水浴锅,振荡采用台式离心机。
在步骤S1中,分光光度计预热时间为30min以上。
实施例1
培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。
实施例2
组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行匀浆;之后置95℃水浴振荡提取10min;10000g,25℃离心10min,取上清,冷却后待测。
实施例3
血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),充分混匀,之后置95℃水浴振荡提取10分钟,10000g,25℃离心10分钟,取上清,冷却后待测。
工作原理:首先用酸性茚三酮加热处理后,溶液即为红色,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低,在520nm波长下比色,从标准曲线上查出或用回归方程计算脯氨酸的含量。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒,其特征在于:包括提取液、试剂一、试剂二、试剂三。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒,其特征在于:所述提取液为磺基水杨酸。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒,其特征在于:所述试剂一为冰乙酸。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒,其特征在于:所述试剂二为茚三酮溶、冰醋酸、浓磷酸和水的混合液。
5.根据权利要求1所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒及其检测方法,其特征在于:所述试剂三为甲苯。
6.一种根据权利要求1所述的快速检测脯氨酸含量的试剂盒的检测方法,其特征在于:按照先后顺序包括以下步骤:
S1:首先将分光光度计预热,调节波长至520nm,蒸馏水调零;
S2:取0.5mL样本+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二与有盖试管中,置95℃水浴中保温30min,每10min振荡一次;
S3:待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值A,得到脯氨酸含量。
7.根据权利要求6所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒的检测方法,其特征在于:在步骤S3中,所述脯氨酸含量通过公式y=0.0521x-0.0021计算,其中x为脯氨酸含量,所述y为吸光值A。
8.根据权利要求6所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒的检测方法,其特征在于:在步骤S1、S2和S3中,所述提取液、试剂一、试剂二和试剂三均为4℃保存。
9.根据权利要求6所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒的检测方法,其特征在于:在步骤S2中,所述水浴采用水浴锅,所述振荡采用台式离心机。
10.根据权利要求6所述的一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒的检测方法,其特征在于:在步骤S1中,所述分光光度计预热时间为30min以上。
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