CN104692551A - 一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法 - Google Patents

Abstract

一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，涉及一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。本发明是为了解决目前磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量时甲苯废液量大，直接倒掉对环境污染严重，试验成本高的技术问题。本发明：一、脱色；二、过滤。本发明优点：本发明可以减少应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液对环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本，并且操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性研究具有一定应用价值；本发明的甲苯回收率：85％；活性炭回收利用次数：8次，并且适用于大量样品的处理。

Description

一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法

技术领域

本发明涉及一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。

技术背景

在逆境条件下(旱、盐碱、热、冷、冻)，植物体内脯氨酸(proline，Pro)的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性。植物脯氨酸含量测定是植物生理学实验的常用方法，广泛用于作物、牧草、园艺植物、园林植物等各种植物科学研究。磺基水杨酸法是测定植物体内脯氨酸含量的常用方法，在实验室产生的甲苯废液量大，直接倒掉对环境污染严重，试验成本高。

发明内容

本发明是为了解决目前磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量时甲苯废液量大，直接倒掉对环境污染严重，试验成本高的技术问题，而提供一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。

本发明的一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法是按以下步骤进行的：

一、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭，用震荡仪震荡2min，得到溶液Ⅰ；所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液的体积与活性炭的质量比为1mL:0.01g；

二、过滤：将步骤一得到的溶液Ⅰ采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收液。

磺基水杨酸法是测定植物体内脯氨酸含量的方法：

1.标准曲线的绘制

(1)在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，得到标准溶液，此标准液中每mL含脯氨酸100μg；

(2)系列脯氨酸浓度的配制：取6个50mL容量瓶，分别盛入步骤1(1)得到的标准溶液0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL，2.5mL及3.0mL，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1μg/mL，2μg/mL，3μg/mL，4μg/mL，5μg/mL和6μg/mL；

(3)取6支试管，向6支试管中分别加入2mL步骤1(2)得到的6种浓度的系列标准浓度的脯氨酸溶液、2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，每支试管在沸水浴中加热30min，自然冷却至室温，向各试管中准确加入4mL甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液；

(4)用注射器轻轻吸取各试管中的上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以纯净的甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色；

(5)标准曲线的绘制：先求出吸光度值(Y)依脯氨酸浓度(X)而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2mL测定液中脯氨酸的含量(μg/2ml)。

2.样品的测定：

(1)脯氨酸的提取：准确称取待测植物叶片0.5g，置大管中，然后向管中加入5mL质量分数为3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，(提取过程中要经常摇动)，冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液；

(2)吸取2mL步骤2(1)得到的脯氨酸的提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入2mL冰醋酸和2mL的酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min，溶液即呈红色；

(3)冷却后加入4mL甲苯，摇荡30S，静置片刻，取上层液至10mL离心管中，在转速为3000rpm下离心5min；

(4)用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm波长处比色，得到甲苯废液，求得吸光度值。

磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的原理：用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出(或用回归方程计算)脯氨酸的含量。

本发明优点：

一、本发明可以减少应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液对环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本；

二、本发明具有操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性研究具有一定应用价值；

三、本发明方法能够回收磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量测定用甲苯萃取液，甲苯回收率：85％；活性炭回收利用次数：8次，并且适用于大量样品的处理。

具体实施方式：

具体实施方式一：本实施方式是一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，具体是按以下步骤进行的：

一、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭，用震荡仪震荡2min，得到溶液Ⅰ；所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液的体积与活性炭的质量比为1mL:0.01g；

二、过滤：将步骤一得到的溶液Ⅰ采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收液。

本实施方式优点：

一、本发明可以减少应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液对环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本；

二、本发明具有操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性研究具有一定应用价值；

三、本发明方法能够回收磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量测定用甲苯萃取液，甲苯回收率：85％；活性炭回收利用次数：8次，并且适用于大量样品的处理。

采用下述试验验证本发明效果：

试验一：本试验为一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，具体是按以下步骤进行的：

一、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭，用震荡仪震荡2min，得到溶液Ⅰ；所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液的体积与活性炭的质量比为1mL:0.01g；

二、过滤：将步骤一得到的溶液Ⅰ采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收液。

三、将步骤二得到的甲苯回收液作为磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯萃取液，最后又得到甲苯废液。

再重复步骤一至三7次，测试用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量时使用不同回收次数的甲苯回收液后在波长为A₅₂₀的吸光度，如表1所示，随着回收次数的增加，吸光度变化规律不明显，但增加幅度不大，在8次回收以内，增加幅度均极小，可以应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯。

回收次数为0指的是用市售的甲苯应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量；回收次数为1指的是试验一步骤二中得到的甲苯回收液应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量。

表1

利用试验一中不同回收次数的甲苯回收液，用磺基水杨酸法萃取从苜蓿根颈提取的脯氨酸和茚三酮的反应液，测定在波长为A₅₂₀处的吸光度，并计算苜蓿根颈的脯氨酸含量，比较不同回收次数甲苯回收液对苜蓿根颈脯氨酸含量测定的影响，并确定适宜的回收次数。结果如表2所示，利用回收利用7次的甲苯回收液，萃取脯氨酸含量测定的生成物，脯氨酸含量测定值与实际值差异均较小，误差小于5％，因此，在回收利用1～7次后的甲苯回收液，再利用其萃取脯氨酸与茚三酮反应液，仍然可以满足实验要求。

表2

Claims (1)

1.一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，其特征在于应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法是按以下步骤进行的：

一、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭，用震荡仪震荡2min，得到溶液Ⅰ；所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液的体积与活性炭的质量比为1mL:0.01g；

二、过滤：将步骤一得到的溶液Ⅰ采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收液。