CN107941964B - 一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,属于农产品检测技术领域,主要包括:(1)农产品汽爆处理,先利用复合酶解液进行初处理,再利用碱性水蒸汽进行汽爆处理,得到农产品浆液和含有二甲戊灵的冷凝液;(2)农产品浆液处理,对汽爆后的农作物浆液进行处理得到上清液;(3)定容过滤,将上清液和冷凝液进行混合后,再利用净化微球进行吸附净化处理;(4)使用液相色谱仪检测;(5)结果分析。总之,本发明分析速度快、准确率高、检出限低,添加回收率稳定在91%以上,且相对标准偏差小,大大提高了工作效率。
Description
技术领域
本发明属于农产品检测技术领域,具体涉及一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法。
背景技术
二甲戊灵又名二甲戊乐灵、除芽通、除草通、施田补,为触杀型土壤封闭处理剂,纯品为橙黄色结晶体,熔点54-58℃,25℃时蒸气压为40mPa,密度为1.19,水中的溶解度小于0.5mg/L,在5-130℃范围内稳定,对酸碱稳定,缓慢光分解。是一种优秀的旱田作物选择性除草剂,可以广泛应用于玉米、大豆、花生、棉花、直播旱稻、马铃薯、烟草、蔬菜等多种作物田除草。目前,二甲戊灵是世界第3大除草剂,销售额仅次于灭生性除草剂草甘膦、百草枯,也是世界上销售额最大的选择性除草剂。
二甲戊灵作为除草剂在农林业生产中发挥着极其重要的作用,主要抑制分生组织细胞分裂,不影响杂草种子的萌发,而是在杂草种子的萌发过程中幼芽、茎和根吸收药物后起作用。双子叶植物吸收部位为下胚轴、单子叶植物为幼芽,其受害症状是幼芽和次生根生长被抑制。该药杀草谱广,对多种一年生杂草有良好的防效。但随着实际使用量的增加,人们对其在土壤中的吸附能力,以及对地下水质量等环境影响方面的研究也日益重视。目前已开展二甲戊灵在土壤和农作物中残留方面的研究。
目前,用于二甲戊灵残留分析的主要方法有固相分离反相液相色谱法、高效液相色谱法、毛细管气相色谱法和气相色谱法等,例如,朱挺等报道了用弗罗里硅土净化、气相色谱检测豆类蔬菜中二甲戊灵农药残留;张丽芬等报道了二甲戊乐灵在大蒜中残留分析方法的研究;孙福生等报道了基质固相分散-反相液相色谱法测定蔬菜中二甲戊乐灵农药残留。但无论使用那种分析方法,在对农作物进行预处理时大部分都过于简单,会影响二甲戊灵残留分析结果。
发明内容
针对以上技术问题,本发明提供一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法。
本发明的技术方案为:一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,主要包括以下步骤:
(1)农产品汽爆处理:准确称取20-30g农产品,先用纯水清洗1-2次,去除表面杂质,将清洗后的农产品、纯水、复合酶解液以质量比为1:1:0.3-0.5混合后装入汽爆罐中,利用蒸汽发生器向汽爆罐内通入碱性水蒸汽,控制汽爆罐内温度在35-40℃,静置预分解10-15min;将所述碱性水蒸汽梯度升温,并间歇梯度通入惰性气体维持压力在1-2kpa内,进行汽爆处理12min,打开放气阀,迅速放气,并利用冷凝回收装置回收冷凝液,隔氧保存待用;汽爆处理能够打破农作物细胞壁的屏障结构,有利于提取残留在细胞内液的二甲戊灵,相较于简单的化学药剂提取,利用汽爆处理能够最大化提取出残留在农作物各个组织中的二甲戊灵。
(2)农产品浆液处理:将汽爆罐内的农产品浆液分离置于100ml离心管中,并利用50ml纯水分两次对汽爆罐进行清洗,并将清洗后的液体加入所述离心管中,与农产品浆液进行混合,再加入20-30ml乙腈、2.5-3g氯化钠、4-6g无水硫酸镁,搅拌均匀,在40-50℃的水浴下进行均质提取3-5min,最后以7000r/min离心10min,分离得到上清液;部分二甲戊灵在汽爆过程中进入碱性水蒸汽中,并经过冷凝后,停留在所述冷凝液中,利用化学药剂再对农作物剩下的二甲戊灵进行提取,由于经过汽爆处理过后,农作物中的纤维组织都得到了有效的分离,因此再次进行提取,相较于未经任何处理的提取效率和精确度更高。
(3)定容过滤:将所述上清液和冷凝液进行混合,得到混合液,加入盐酸调节pH至4-6,加入与所述混合液质量比为1:2净化微球,振荡混合2min,再以5000r/min离心3min,取上层清液,并将所述上层清液在无氧环境下氮吹定容至3-5ml,过0.22um滤膜,得到精滤液;
(4)使用液相色谱仪检测:
A)标准溶液的配制:取标准储备溶液,用体积比为8:2的甲醇和水溶液逐级稀释至浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0ug/ml的标准工作液;
B)使用液相色谱仪检测标准工作液和所述精滤液;
(5)结果分析:根据称取的农产品质量及检测的浓度利用公式计算出农产品中二甲戊灵的含量;所述公式为:其中,W为农产品二甲戊灵的含量,mg/kg;c为精滤液中二甲戊灵浓度,mg/L;V为定容体积,mL;m为称取农产品的质量,g。
进一步地,所述复合酶解液按照质量百分比计包括:1.2-2.4%碱性蛋白酶、1.4-2.6%蛋白酶K、7.5-8.9%α-淀粉酶、4.0-4.6%果胶酶、3.5-4.1%木聚糖酶、0.5-1.2%微生物酶、12.3-15.6%纤维素酶,余量为磷酸缓冲液。复合酶解液中的酶种类丰富,适用于多种农作物,经过复合酶解液的初步处理,能够缩短汽爆处理的时间。
进一步地,所述碱性水蒸汽为含有10-13%NH3的纯水水蒸汽,或者为含有20-30%Na2CO3纯水水蒸汽,碱性水蒸汽相较于中性水蒸汽更利于快速渗透农作物组织内部,可提高汽爆的速率。
进一步地,所述惰性气体间歇梯度通入的工艺参数为:第1-4min,惰性气体流速为15-20m/s,通气间隔为3-5s;第4-8min,惰性气体流速为10-14m/s,通气间隔为6-8s;第8-12min,惰性气体流速为3-8m/s,通气间隔为10-12s。
进一步地,所述惰性气体为氮气、氩气、氦气任意一种,为汽爆处理提供惰性氛围,防止检测成分与氧气发生反应,影响检测结果。
进一步地,所述净化微球按照质量百分比计包括:3.5-5.1%硅酸镁、5.1-6.3%纳米有机蒙脱土、6.0-7.4%明胶、11.6-12.8%纳米硅酸凝胶、5.8-6.9%微晶纤维素、6.8-9.2%木质素磺酸钠、5.3-6.5%炭黑、2.5-5.4%乳化剂、13.4-15.5%疏水性有机溶剂、0.3-0.6%成孔剂,余量为去离子水,硅酸镁、纳米有机蒙脱土、纳米硅酸凝胶、微晶纤维素、炭黑均具有良好的吸附和净化作用,能够对上清液中的色素和杂质进行吸附和净化。
更进一步地,所述净化微球的制备方法包括以下步骤:
S1:将所述乳化剂、炭黑加入所述疏水性有机溶剂中,混合均匀后,得到油相;
S2:将所述木质素磺酸钠、微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土加入到所述去离子水中,经过漩涡振荡2min和超声分散3min,得到悬混液,得到水相;木质素磺酸钠作为性能良好的分散剂,能够使微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土非水溶性固体均匀分散在水中,便于后期混合均匀;
S3:将所述水相和油相混合后依次加入所述纳米硅酸凝胶、成孔剂,机械搅拌1-15min形成乳状液;
S4:将所述乳状液加入到预热至100℃-120℃的反应容器中,通过超声细胞破碎仪对乳状液中的液滴进行破碎;将各种吸附净化剂在分子结构上进行充分混合,发挥最大功效;
S5:在S4得到的乳状液中加入所述明胶,机械搅拌均匀,并通过微波加热至明胶完全溶解,得到乳胶体;加入明胶的作用是为了进行定型。
S6:将所述乳胶体进行超声冷却,使乳胶体固化,分离后得到粒径为0.1-0.5mm的净化微球。最后得到的净化微球,吸附净化效果优良,可以大大排除杂质相对检测结果的干扰,并且还有利于回收再利用。
进一步地,所述梯度升温的工艺参数为:第一步,先利用所述碱性水蒸汽将所述汽爆罐内温度以5-10℃/min的速度升至60-65℃,保持1-2min,灭活酶的活性;第二步,再将汽爆罐内温度以20-25℃/min的速度升至150-160℃,进行汽爆处理。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
(1)本发明的利用汽爆处理技术对农作物进行预处理,汽爆处理能够打破农作物细胞壁的屏障结构,有利于提取残留在细胞内液的二甲戊灵,相较于简单的化学药剂提取,利用汽爆处理能够最大化提取出残留在农作物各个组织中的二甲戊灵。由于单纯的汽爆可能会增加检测周期,因此,先将农作物在35-40℃温度下通过复合酶解液进行初步处理,再利用含有10-13%NH3或20-30%Na2CO3纯水水蒸汽代替普通水蒸汽,加快渗透农作物组织内部,可提高汽爆的速率。
(2)经过汽爆处理后,部分二甲戊灵在汽爆过程中进入碱性水蒸汽中,并经过冷凝后,停留在所述冷凝液中,利用化学药剂再对农作物剩下的二甲戊灵进行提取,由于经过汽爆处理过后,农作物中的纤维组织都得到了有效的分离,因此再次进行提取,相较于未经任何处理的提取效率和精确度更高。
(3)在进行检测前利用需要对待测液进行吸附净化,排除干扰项,相较于传统的利用无水硫酸镁和PSA进行简单处理,本发明将多种吸附净化剂进行合理融合,得到的净化微球,吸附净化效果优良,可以大大排除杂质相对检测结果的干扰,并且还有利于回收再利用。
总之,本发明分析速度快、准确率高、检出限低,添加回收率稳定在91%以上,且相对标准偏差小,大大提高了工作效率。
具体实施方式
实施例1
一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,主要包括以下步骤:
(1)农产品汽爆处理:准确称取20g农产品,先用纯水清洗1次,去除表面杂质,将清洗后的农产品、纯水、复合酶解液以质量比为1:1:0.3混合后装入汽爆罐中,其中,所述复合酶解液按照质量百分比计包括:1.2%碱性蛋白酶、1.4%蛋白酶K、7.5%α-淀粉酶、4.0%果胶酶、3.5%木聚糖酶、0.5%微生物酶、12.3%纤维素酶,余量为磷酸缓冲液。复合酶解液中的酶种类丰富,适用于多种农作物,经过复合酶解液的初步处理,能够缩短汽爆处理的时间。利用蒸汽发生器向汽爆罐内通入碱性水蒸汽,所述碱性水蒸汽为含有10%NH3的纯水水蒸汽,或者为含有20%Na2CO3纯水水蒸汽,碱性水蒸汽相较于中性水蒸汽更利于快速渗透农作物组织内部,可提高汽爆的速率。控制汽爆罐内温度在35℃,静置预分解10min;将所述碱性水蒸汽梯度升温,并间歇梯度通入氮气维持压力在1kpa内,进行汽爆处理12min,打开放气阀,迅速放气,并利用冷凝回收装置回收冷凝液,隔氧保存待用;汽爆处理能够打破农作物细胞壁的屏障结构,有利于提取残留在细胞内液的二甲戊灵,相较于简单的化学药剂提取,利用汽爆处理能够最大化提取出残留在农作物各个组织中的二甲戊灵。其中,所述氮气间歇梯度通入的工艺参数为:第1-4min,惰性气体流速为15m/s,通气间隔为3s;第4-8min,惰性气体流速为10m/s,通气间隔为6s;第8-12min,惰性气体流速为3m/s,通气间隔为10s。其中,所述梯度升温的工艺参数为:第一步,先利用所述碱性水蒸汽将所述汽爆罐内温度以5℃/min的速度升至60℃,保持1min,灭活酶的活性;第二步,再将汽爆罐内温度以20℃/min的速度升至150℃,进行汽爆处理。
(2)农产品浆液处理:将汽爆罐内的农产品浆液分离置于100ml离心管中,并利用50ml纯水分两次对汽爆罐进行清洗,并将清洗后的液体加入所述离心管中,与农产品浆液进行混合,再加入20ml乙腈、2.5g氯化钠、4g无水硫酸镁,搅拌均匀,在40℃的水浴下进行均质提取3min,最后以7000r/min离心10min,分离得到上清液;部分二甲戊灵在汽爆过程中进入碱性水蒸汽中,并经过冷凝后,停留在所述冷凝液中,利用化学药剂再对农作物剩下的二甲戊灵进行提取,由于经过汽爆处理过后,农作物中的纤维组织都得到了有效的分离,因此再次进行提取,相较于未经任何处理的提取效率和精确度更高。
(3)定容过滤:将所述上清液和冷凝液进行混合,得到混合液,加入盐酸调节pH至4,加入与所述混合液质量比为1:2净化微球,振荡混合2min,再以5000r/min离心3min,取上层清液,并将所述上层清液在无氧环境下氮吹定容至3ml,过0.22um滤膜,得到精滤液;其中,所述净化微球按照质量百分比计包括:3.5%硅酸镁、5.1%纳米有机蒙脱土、6.0%明胶、11.6%纳米硅酸凝胶、5.8%微晶纤维素、6.8%木质素磺酸钠、5.3%炭黑、2.5%乳化剂、13.4%疏水性有机溶剂、0.3%成孔剂,余量为去离子水,硅酸镁、纳米有机蒙脱土、纳米硅酸凝胶、微晶纤维素、炭黑均具有良好的吸附和净化作用,能够对上清液中的色素和杂质进行吸附和净化。
所述净化微球的制备方法包括以下步骤:
S1:将所述乳化剂、炭黑加入所述疏水性有机溶剂中,混合均匀后,得到油相;
S2:将所述木质素磺酸钠、微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土加入到所述去离子水中,经过漩涡振荡2min和超声分散3min,得到悬混液,得到水相;木质素磺酸钠作为性能良好的分散剂,能够使微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土非水溶性固体均匀分散在水中,便于后期混合均匀;
S3:将所述水相和油相混合后依次加入所述纳米硅酸凝胶、成孔剂,机械搅拌1min形成乳状液;
S4:将所述乳状液加入到预热至100℃℃的反应容器中,通过超声细胞破碎仪对乳状液中的液滴进行破碎;将各种吸附净化剂在分子结构上进行充分混合,发挥最大功效;
S5:在S4得到的乳状液中加入所述明胶,机械搅拌均匀,并通过微波加热至明胶完全溶解,得到乳胶体;加入明胶的作用是为了进行定型。
S6:将所述乳胶体进行超声冷却,使乳胶体固化,分离后得到粒径为0.1mm的净化微球。最后得到的净化微球,吸附净化效果优良,可以大大排除杂质相对检测结果的干扰,并且还有利于回收再利用。
(4)使用液相色谱仪检测:
A)标准溶液的配制:取标准储备溶液,用体积比为8:2的甲醇和水溶液逐级稀释至浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0ug/ml的标准工作液;
B)使用液相色谱仪检测标准工作液和所述精滤液;
(5)结果分析:根据称取的农产品质量及检测的浓度利用公式计算出农产品中二甲戊灵的含量;所述公式为:其中,W为农产品二甲戊灵的含量,mg/kg;c为精滤液中二甲戊灵浓度,mg/L;V为定容体积,mL;m为称取农产品的质量,g。
实施例2
一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,主要包括以下步骤:
(1)农产品汽爆处理:准确称取25g农产品,先用纯水清洗2次,去除表面杂质,将清洗后的农产品、纯水、复合酶解液以质量比为1:1:0.4混合后装入汽爆罐中,其中,所述复合酶解液按照质量百分比计包括:1.8%碱性蛋白酶、2.0%蛋白酶K、8.2%α-淀粉酶、1.3%果胶酶、3.8%木聚糖酶、0.85%微生物酶、13.95%纤维素酶,余量为磷酸缓冲液。复合酶解液中的酶种类丰富,适用于多种农作物,经过复合酶解液的初步处理,能够缩短汽爆处理的时间。利用蒸汽发生器向汽爆罐内通入碱性水蒸汽,所述碱性水蒸汽为含有12%NH3的纯水水蒸汽,或者为含有25%Na2CO3纯水水蒸汽,碱性水蒸汽相较于中性水蒸汽更利于快速渗透农作物组织内部,可提高汽爆的速率。控制汽爆罐内温度在37℃,静置预分解13min;将所述碱性水蒸汽梯度升温,并间歇梯度通入氮气维持压力在1.5kpa内,进行汽爆处理12min,打开放气阀,迅速放气,并利用冷凝回收装置回收冷凝液,隔氧保存待用;汽爆处理能够打破农作物细胞壁的屏障结构,有利于提取残留在细胞内液的二甲戊灵,相较于简单的化学药剂提取,利用汽爆处理能够最大化提取出残留在农作物各个组织中的二甲戊灵。其中,所述氮气间歇梯度通入的工艺参数为:第1-4min,惰性气体流速为17m/s,通气间隔为4s;第4-8min,惰性气体流速为12m/s,通气间隔为7s;第8-12min,惰性气体流速为5.5m/s,通气间隔为11s。其中,所述梯度升温的工艺参数为:第一步,先利用所述碱性水蒸汽将所述汽爆罐内温度以7℃/min的速度升至62℃,保持1.5min,灭活酶的活性;第二步,再将汽爆罐内温度以22℃/min的速度升至155℃,进行汽爆处理。
(2)农产品浆液处理:将汽爆罐内的农产品浆液分离置于100ml离心管中,并利用50ml纯水分两次对汽爆罐进行清洗,并将清洗后的液体加入所述离心管中,与农产品浆液进行混合,再加入25ml乙腈、2.7g氯化钠、5g无水硫酸镁,搅拌均匀,在45℃的水浴下进行均质提取4min,最后以7000r/min离心10min,分离得到上清液;部分二甲戊灵在汽爆过程中进入碱性水蒸汽中,并经过冷凝后,停留在所述冷凝液中,利用化学药剂再对农作物剩下的二甲戊灵进行提取,由于经过汽爆处理过后,农作物中的纤维组织都得到了有效的分离,因此再次进行提取,相较于未经任何处理的提取效率和精确度更高。
(3)定容过滤:将所述上清液和冷凝液进行混合,得到混合液,加入盐酸调节pH至5,加入与所述混合液质量比为1:2净化微球,振荡混合2min,再以5000r/min离心3min,取上层清液,并将所述上层清液在无氧环境下氮吹定容至4ml,过0.22um滤膜,得到精滤液;其中,所述净化微球按照质量百分比计包括:4.3%硅酸镁、5.7%纳米有机蒙脱土、6.7%明胶、12.2%纳米硅酸凝胶、6.35%微晶纤维素、8.0%木质素磺酸钠、5.9%炭黑、3.95%乳化剂、14.45%疏水性有机溶剂、0.45%成孔剂,余量为去离子水,硅酸镁、纳米有机蒙脱土、纳米硅酸凝胶、微晶纤维素、炭黑均具有良好的吸附和净化作用,能够对上清液中的色素和杂质进行吸附和净化。
所述净化微球的制备方法包括以下步骤:
S1:将所述乳化剂、炭黑加入所述疏水性有机溶剂中,混合均匀后,得到油相;
S2:将所述木质素磺酸钠、微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土加入到所述去离子水中,经过漩涡振荡2min和超声分散3min,得到悬混液,得到水相;木质素磺酸钠作为性能良好的分散剂,能够使微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土非水溶性固体均匀分散在水中,便于后期混合均匀;
S3:将所述水相和油相混合后依次加入所述纳米硅酸凝胶、成孔剂,机械搅拌1-15min形成乳状液;
S4:将所述乳状液加入到预热至110℃的反应容器中,通过超声细胞破碎仪对乳状液中的液滴进行破碎;将各种吸附净化剂在分子结构上进行充分混合,发挥最大功效;
S5:在S4得到的乳状液中加入所述明胶,机械搅拌均匀,并通过微波加热至明胶完全溶解,得到乳胶体;加入明胶的作用是为了进行定型。
S6:将所述乳胶体进行超声冷却,使乳胶体固化,分离后得到粒径为0.3mm的净化微球。最后得到的净化微球,吸附净化效果优良,可以大大排除杂质相对检测结果的干扰,并且还有利于回收再利用。
(4)使用液相色谱仪检测:
A)标准溶液的配制:取标准储备溶液,用体积比为8:2的甲醇和水溶液逐级稀释至浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0ug/ml的标准工作液;
B)使用液相色谱仪检测标准工作液和所述精滤液;
(5)结果分析:根据称取的农产品质量及检测的浓度利用公式计算出农产品中二甲戊灵的含量;所述公式为:其中,W为农产品二甲戊灵的含量,mg/kg;c为精滤液中二甲戊灵浓度,mg/L;V为定容体积,mL;m为称取农产品的质量,g。
实施例3
一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,主要包括以下步骤:
(1)农产品汽爆处理:准确称取30g农产品,先用纯水清洗2次,去除表面杂质,将清洗后的农产品、纯水、复合酶解液以质量比为1:1:0.5混合后装入汽爆罐中,其中,所述复合酶解液按照质量百分比计包括:2.4%碱性蛋白酶、2.6%蛋白酶K、8.9%α-淀粉酶、4.6%果胶酶、4.1%木聚糖酶、1.2%微生物酶、15.6%纤维素酶,余量为磷酸缓冲液。复合酶解液中的酶种类丰富,适用于多种农作物,经过复合酶解液的初步处理,能够缩短汽爆处理的时间。利用蒸汽发生器向汽爆罐内通入碱性水蒸汽,所述碱性水蒸汽为含有13%NH3的纯水水蒸汽,或者为含有30%Na2CO3纯水水蒸汽,碱性水蒸汽相较于中性水蒸汽更利于快速渗透农作物组织内部,可提高汽爆的速率。控制汽爆罐内温度在40℃,静置预分解15min;将所述碱性水蒸汽梯度升温,并间歇梯度通入氮气维持压力在2kpa内,进行汽爆处理12min,打开放气阀,迅速放气,并利用冷凝回收装置回收冷凝液,隔氧保存待用;汽爆处理能够打破农作物细胞壁的屏障结构,有利于提取残留在细胞内液的二甲戊灵,相较于简单的化学药剂提取,利用汽爆处理能够最大化提取出残留在农作物各个组织中的二甲戊灵。其中,所述氮气间歇梯度通入的工艺参数为:第1-4min,惰性气体流速为20m/s,通气间隔为5s;第4-8min,惰性气体流速为14m/s,通气间隔为8s;第8-12min,惰性气体流速为8m/s,通气间隔为12s。其中,所述梯度升温的工艺参数为:第一步,先利用所述碱性水蒸汽将所述汽爆罐内温度以10℃/min的速度升至65℃,保持2min,灭活酶的活性;第二步,再将汽爆罐内温度以25℃/min的速度升至160℃,进行汽爆处理。
(2)农产品浆液处理:将汽爆罐内的农产品浆液分离置于100ml离心管中,并利用50ml纯水分两次对汽爆罐进行清洗,并将清洗后的液体加入所述离心管中,与农产品浆液进行混合,再加入30ml乙腈、3g氯化钠、6g无水硫酸镁,搅拌均匀,在50℃的水浴下进行均质提取5min,最后以7000r/min离心10min,分离得到上清液;部分二甲戊灵在汽爆过程中进入碱性水蒸汽中,并经过冷凝后,停留在所述冷凝液中,利用化学药剂再对农作物剩下的二甲戊灵进行提取,由于经过汽爆处理过后,农作物中的纤维组织都得到了有效的分离,因此再次进行提取,相较于未经任何处理的提取效率和精确度更高。
(3)定容过滤:将所述上清液和冷凝液进行混合,得到混合液,加入盐酸调节pH至6,加入与所述混合液质量比为1:2净化微球,振荡混合2min,再以5000r/min离心3min,取上层清液,并将所述上层清液在无氧环境下氮吹定容至5ml,过0.22um滤膜,得到精滤液;其中,所述净化微球按照质量百分比计包括:5.1%硅酸镁、6.3%纳米有机蒙脱土、7.4%明胶、12.8%纳米硅酸凝胶、6.9%微晶纤维素、9.2%木质素磺酸钠、6.5%炭黑、5.4%乳化剂、15.5%疏水性有机溶剂、0.6%成孔剂,余量为去离子水,硅酸镁、纳米有机蒙脱土、纳米硅酸凝胶、微晶纤维素、炭黑均具有良好的吸附和净化作用,能够对上清液中的色素和杂质进行吸附和净化。
所述净化微球的制备方法包括以下步骤:
S1:将所述乳化剂、炭黑加入所述疏水性有机溶剂中,混合均匀后,得到油相;
S2:将所述木质素磺酸钠、微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土加入到所述去离子水中,经过漩涡振荡2min和超声分散3min,得到悬混液,得到水相;木质素磺酸钠作为性能良好的分散剂,能够使微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土非水溶性固体均匀分散在水中,便于后期混合均匀;
S3:将所述水相和油相混合后依次加入所述纳米硅酸凝胶、成孔剂,机械搅拌15min形成乳状液;
S4:将所述乳状液加入到预热至120℃的反应容器中,通过超声细胞破碎仪对乳状液中的液滴进行破碎;将各种吸附净化剂在分子结构上进行充分混合,发挥最大功效;
S5:在S4得到的乳状液中加入所述明胶,机械搅拌均匀,并通过微波加热至明胶完全溶解,得到乳胶体;加入明胶的作用是为了进行定型。
S6:将所述乳胶体进行超声冷却,使乳胶体固化,分离后得到粒径为0.5mm的净化微球。最后得到的净化微球,吸附净化效果优良,可以大大排除杂质相对检测结果的干扰,并且还有利于回收再利用。
(4)使用液相色谱仪检测:
A)标准溶液的配制:取标准储备溶液,用体积比为8:2的甲醇和水溶液逐级稀释至浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0ug/ml的标准工作液;
B)使用液相色谱仪检测标准工作液和所述精滤液;
(5)结果分析:根据称取的农产品质量及检测的浓度利用公式计算出农产品中二甲戊灵的含量;所述公式为:其中,W为农产品二甲戊灵的含量,mg/kg;c为精滤液中二甲戊灵浓度,mg/L;V为定容体积,mL;m为称取农产品的质量,g。
结果与分析
实施例1-3加标回收测得值分别为3.66×10-1ug/ml、3.81×10-1ug/ml、3.73×10- 1ug/ml,添加的量为4×10-1ug/ml,回收率分别为91.5%、95.3%、93.2%,都在91%以上,本方法满足检测要求。
Claims (3)
1.一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,其特征在于,主要包括以下步骤:
(1)农产品汽爆处理:准确称取20-30g农产品,先用纯水清洗1-2次,去除表面杂质,将清洗后的农产品、纯水、复合酶解液以质量比为1:1:0.3-0.5混合后装入汽爆罐中,利用蒸汽发生器向汽爆罐内通入碱性水蒸汽,控制汽爆罐内温度在35-40℃,静置预分解10-15min;将所述碱性水蒸汽梯度升温,并间歇梯度通入惰性气体维持压力在1-2kpa内,进行汽爆处理12min,打开放气阀,迅速放气,并利用冷凝回收装置回收冷凝液,隔氧保存待用;所述复合酶解液按照质量百分比计包括:1.2-2.4%碱性蛋白酶、1.4-2.6%蛋白酶K、7.5-8.9%α-淀粉酶、4.0-4.6%果胶酶、3.5-4.1%木聚糖酶、0.5-1.2%微生物酶、12.3-15.6%纤维素酶,余量为磷酸缓冲液;所述惰性气体间歇梯度通入的工艺参数为:第1-4min,惰性气体流速为15-20m/s,通气间隔为3-5s;第4-8min,惰性气体流速为10-14m/s,通气间隔为6-8s;第8-12min,惰性气体流速为3-8m/s,通气间隔为10-12s;
(2)农产品浆液处理:将汽爆罐内的农产品浆液分离置于100ml离心管中,并利用50ml纯水分两次对汽爆罐进行清洗,并将清洗后的液体加入所述离心管中,与农产品浆液进行混合,再加入20-30ml乙腈、2.5-3g氯化钠、4-6g无水硫酸镁,搅拌均匀,在40-50℃的水浴下进行均质提取3-5min,最后以7000r/min离心10min,分离得到上清液;
(3)定容过滤:将所述上清液和冷凝液进行混合,得到混合液,加入盐酸调节pH至4-6,加入与所述混合液质量比为1:2净化微球,振荡混合2min,再以5000r/min离心3min,取上层清液,并将所述上层清液在无氧环境下氮吹定容至3-5ml,过0.22um滤膜,得到精滤液;
所述净化微球按照质量百分比计包括:3.5-5.1%硅酸镁、5.1-6.3%纳米有机蒙脱土、6.0-7.4%明胶、11.6-12.8%纳米硅酸凝胶、5.8-6.9%微晶纤维素、6.8-9.2%木质素磺酸钠、5.3-6.5%炭黑、2.5-5.4%乳化剂、13.4-15.5%疏水性有机溶剂、0.3-0.6%成孔剂,余量为去离子水;
所述净化微球的制备方法包括以下步骤:
S1:将所述乳化剂、炭黑加入所述疏水性有机溶剂中,混合均匀后,得到油相;
S2:将所述木质素磺酸钠、微晶纤维素、硅酸镁、纳米有机蒙脱土加入到所述去离子水中,经过漩涡振荡2min和超声分散3min,得到悬混液,得到水相;
S3:将所述水相和油相混合后依次加入所述纳米硅酸凝胶、成孔剂,机械搅拌1-15min形成乳状液;
S4:将所述乳状液加入到预热至100℃-120℃的反应容器中,通过超声细胞破碎仪对乳状液中的液滴进行破碎;
S5:在S4得到的乳状液中加入所述明胶,机械搅拌均匀,并通过微波加热至明胶完全溶解,得到乳胶体;
S6:将所述乳胶体进行超声冷却,使乳胶体固化,分离后得到粒径为0.1-0.5mm的净化微球。
(4)使用液相色谱仪检测:
A)标准溶液的配制:取标准储备溶液,用体积比为8:2的甲醇和水溶液逐级稀释至浓度分别为0,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0ug/ml的标准工作液;
B)使用液相色谱仪检测标准工作液和所述精滤液;
2.如权利要求1所述的一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,其特征在于,所述惰性气体为氮气、氩气、氦气任意一种。
3.如权利要求1所述的一种利用液相色谱法测定农产品中二甲戊灵含量的方法,其特征在于,所述梯度升温的工艺参数为:第一步,先利用所述碱性水蒸汽将所述汽爆罐内温度以5-10℃/min的速度升至60-65℃,保持1-2min,灭活酶的活性;第二步,再将汽爆罐内温度以20-25℃/min的速度升至150-160℃,进行汽爆处理。
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CN114397398A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-26 | 江苏中宜金大分析检测有限公司 | 一种基于离子色谱法测定土壤中硝酸盐氮的检测方法 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010008135A (ja) * | 2008-06-25 | 2010-01-14 | Gastec:Kk | 可燃性ガス・蒸気の爆発試験装置 |
CN102273474A (zh) * | 2011-08-22 | 2011-12-14 | 吴元林 | 一种含春雷霉素与吡唑醚菌酯的杀菌剂组合物及其应用 |
JP4932096B2 (ja) * | 2001-07-27 | 2012-05-16 | 株式会社エス・ディー・エス バイオテック | 除草活性成分を含有する顆粒水和剤及びその製造方法 |
CN104931597A (zh) * | 2015-01-05 | 2015-09-23 | 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心 | 能同时检测水产品中多种类药物残留的方法 |
CN106018380A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-10-12 | 王毅红 | 一种农药残留检测方法 |
CN106226432A (zh) * | 2016-08-09 | 2016-12-14 | 中国水稻研究所 | 一种食用大米安全质量分级方法 |
CN106353412A (zh) * | 2016-11-15 | 2017-01-25 | 江苏今世缘酒业股份有限公司 | 一种快速定性定量检测粮食中农残含量的方法 |
CN106381320A (zh) * | 2016-09-27 | 2017-02-08 | 济南米铎碳新能源科技有限公司 | 纤维低聚糖的制备方法 |
CN106433685A (zh) * | 2016-09-21 | 2017-02-22 | 安徽瀚景观规划设计院有限公司 | 一种基于丙烯酸树脂的土壤修复材料的制备方法 |
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Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4932096B2 (ja) * | 2001-07-27 | 2012-05-16 | 株式会社エス・ディー・エス バイオテック | 除草活性成分を含有する顆粒水和剤及びその製造方法 |
JP2010008135A (ja) * | 2008-06-25 | 2010-01-14 | Gastec:Kk | 可燃性ガス・蒸気の爆発試験装置 |
CN102273474A (zh) * | 2011-08-22 | 2011-12-14 | 吴元林 | 一种含春雷霉素与吡唑醚菌酯的杀菌剂组合物及其应用 |
CN104931597A (zh) * | 2015-01-05 | 2015-09-23 | 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心 | 能同时检测水产品中多种类药物残留的方法 |
CN106018380A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-10-12 | 王毅红 | 一种农药残留检测方法 |
CN106226432A (zh) * | 2016-08-09 | 2016-12-14 | 中国水稻研究所 | 一种食用大米安全质量分级方法 |
CN106433685A (zh) * | 2016-09-21 | 2017-02-22 | 安徽瀚景观规划设计院有限公司 | 一种基于丙烯酸树脂的土壤修复材料的制备方法 |
CN106381320A (zh) * | 2016-09-27 | 2017-02-08 | 济南米铎碳新能源科技有限公司 | 纤维低聚糖的制备方法 |
CN106353412A (zh) * | 2016-11-15 | 2017-01-25 | 江苏今世缘酒业股份有限公司 | 一种快速定性定量检测粮食中农残含量的方法 |
Non-Patent Citations (1)
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