CN102408996B - 一种生防菌盾壳霉Chy-1C-1的可湿性粉剂及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种生物农药的制备方法，具体涉及一种生防菌盾壳霉可湿性粉剂的制备方法。本发明提供的盾壳霉可湿性粉剂配方为：保藏号为CCTCC NO：M 2010238的盾壳霉(Coniothyrium minitans)Chy-1C-1生产的盾壳霉分生孢子，其含量大于108个/g，十二烷基苯磺酸钠1％～1.5％，木质素磺酸钙或木质素磺酸钠5％～10％，黄原胶1％，硫酸锌0.1％，抗坏血酸(10％)，用硅藻土补齐至盾壳霉可湿性粉剂的全量。本发明制备的盾壳霉可湿性粉剂能有效防治多种作物菌核病，是一种安全、高效、专门防治作物菌核病的生物农药，可以防治油菜菌核病、向日葵菌核病、大棚蔬菜菌核病等在内的多种作物菌核病。
Description
技术领域
本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一株防治菌核病的生防菌盾壳霉Chy-1C-1菌株的分离筛选，包含该菌株的可湿性粉剂，其制备方法与应用。
背景技术
油菜是我国长江中下游流域广大地区广泛种植的油料作物。2000年以来，油菜栽培面积和油菜籽产量持续增加。核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]引起的菌核病一直是油菜上的常发性病害，是制约油菜产量和品质的限制因子。在一般年份，油菜菌核病的发病率为10％～30％，减产5％～7％。在发病重的年份，发病率高达80％，减产达30％～70％。国内外的研究证实利用重寄生真菌盾壳霉(Coniothyriumminitans)防治菌核病是替代化学防治以及弥补抗病资源匮乏的重要措施。研究表明：盾壳霉不仅对油菜菌核病有效，而且对向日葵菌核病、菜豆菌核病、三叶草菌核病、花生菌核病、莴苣菌核病和洋葱白腐病等病害均有防治效果。配制盾壳霉可湿性粉剂可适用于田间土壤使用和喷雾使用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一株对核盘菌有强寄生致腐作用的盾壳霉菌株，本发明还提供了利用该菌株制备的盾壳霉的微生物制剂，其中包括一种可湿性粉剂，其制备方法与应用。
一、盾壳霉Chy-1C-1菌株的分离筛选：
盾壳霉Chy-1C-1分离与鉴定：申请人的发明人于1995年5月从中国湖北省长阳县蔬菜种植园土壤中分离、筛选得到一株对核盘菌菌核具有强寄生致腐作用的盾壳霉菌株，申请人将其命名为盾壳霉(Coniothyrium minitans)Chy-1C-1。本发明的盾壳霉Chy-1C-1分离和筛选采用核盘菌菌核诱捕法(Adames等，1980)和稀释平板方法，菌种鉴定工作参照魏景超《真菌鉴定手册》上海科学技术出版社，1979版介绍的方法。
申请人于2010年9月17日将分离筛选的能够防治菌核病的生防菌菌株盾壳霉(Coniothyrium minitans)Chy-1C-1，送至湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCCNO：M 2010238。
二、盾壳霉Chy-1C-1的菌学特征：
分生孢子黑褐色、椭球形、表面不平，大小为3.5-4.7μm×5.3-8.8μm(平均3.9×6.4μm)，取幼嫩(白色小点)的分生孢子器压片可见成排排列的基部宽阔的产孢细胞。在PDA平板上，菌丝初期无色，气生菌丝不发达，菌丝一边扩展，菌落表面一边形成白色分生孢子器，随培养时间的延长，菌落逐渐变褐，孢子器吐出黑色水滴即溢出分生孢子。盾壳霉Chy-1C-1的菌丝在10-28℃范围内均能生长，最适生长温度为20℃，最高温度为30℃，盾壳霉Chy-1C-1在pH2-11的环境中均能生长，pH3-4最适宜于其生长。在pH4的PDA平板上菌落日扩展0.7cm。
三、盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的制备
申请人利用上述保藏号为CCTCC NO：M 2010238的生防菌盾壳霉Chy-1C-1制备成一种能够防治油菜菌核病的可湿性粉剂，按质量百分比计的组成为：保藏号为CCTCC NO：M 2010238的盾壳霉Chy-1C-1分生孢子1×108个/g；润湿剂：十二烷基苯磺酸钠1～1.5％；分散剂：木质素磺酸钙或木质素磺酸钠5～10％；粘着剂：黄原胶1％；孢子萌发促进剂：硫酸锌0.1％；紫外线保护剂：维生素C(抗坏血酸)10％；用硅藻土补齐至盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的全量，将上述组分混合搅拌均匀，使盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的粒径达到44～74μm即可。
本发明具有以下优点：
本发明对作物菌核病高效，对人畜无毒；成本低；适合多种园艺蔬菜菌核病的防治。本发明的制剂生产中没有用到有机溶剂，降低了生产过程中和产品中的污染，也不会产生溶剂中毒。
以上对本发明所提供的制备盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的方法进行了详细介绍，本文中应用了具体实施例对本发明的原理及实施方法进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本发明书内容不应理解为对本发明的限制。
具体实施方式
实施例1：盾壳霉菌株Chy-1C-1的分离与鉴定
申请人的发明人李国庆1995年5月从中国湖北省长阳县蔬菜种植园土壤中分离、筛选得到一株对核盘菌菌核具有强寄生致腐作用的盾壳霉菌株，申请人将其命名为盾壳霉(Coniothyrium minitans)Chy-1C-1。本发明的盾壳霉Chy-1C-1分离和筛选采用核盘菌菌核诱捕法(Adames等，1980)和稀释平板方法，菌种鉴定工作参照魏景超《真菌鉴定手册》上海科学技术出版社，1979版介绍的方法。
该菌株盾壳霉(Coniothyrium minitans)Chy-1C-1菌株已于2010年9月17日送交用于专利程序的位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(英文简称CCTCC)保藏，其保藏编号为CCTCCNO：M 2010238。
实施例2：盾壳霉Chy-1C-1的固体发酵
在250ml三角瓶中进行发酵。每瓶装10g粉碎好的油菜秸秆，添加50ml水，添加5g可溶性淀粉和5g酵母粉(购自商品试剂)，盾壳霉Chy-1C-1分生孢子接种量为5×106个孢子/瓶，在20℃培养室培养12d，使盾壳霉Chy-1C-1孢子平均产量为2×109孢子/g干秸秆。发酵情况见图1，其中图1A为发酵料发酵前，图1B为发酵后，图1C是油菜秆发酵前后对比。
实施例3：盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的制备
将实施例2所述发酵料加水清洗，过滤去除固体杂质，得孢子液离心浓缩盾壳霉，低温冷冻干燥得盾壳霉Chy-1C-1分生孢子原粉。盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的原料组成如下：保藏号为CCTCC NO：M2010238的盾壳霉Chy-1C-1的分生孢子含量为1×108个/g；其余组分按质量百分比计：润湿剂：十二烷基苯磺酸钠(1.5％)；分散剂：木质素磺酸钙或木质素磺酸钠(10％)；粘着剂：黄原胶(1％)；孢子萌发促进剂：硫酸锌(0.1％)；紫外线保护剂：维生素C(10％)；用硅藻土补齐至盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的全量。先将盾壳霉Chy-1C-1分生孢子粉与润湿剂、分散剂、粘着剂充分搅拌混合均匀，然后依次加入孢子萌发促进剂、紫外线保护剂和载体，边加入边搅拌均匀，于粉碎机中充分粉碎，使盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的粒径为44～74μm即可。以下实施例与此相同。制得的可湿性粉剂见图2
实施例4：盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的质量指标的检测
实施例3所述盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂中盾壳霉的分生孢子含量为1×108个/g；润湿剂：十二烷基苯磺酸钠(1％)；分散剂：木质素磺酸钙或木质素磺酸钠(5％)；粘着剂：黄原胶(1％)；孢子萌发促进剂：硫酸锌(0.1％)；紫外线保护剂：抗坏血酸(10％)；用硅藻土补齐至盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的全量。
盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的质量指标分析结果：
盾壳霉Chy-1C-1分生孢子含量为1×108个/g；活孢率为90％；含水量为2.4-4.6％；润湿时间为90-110s；细度测定，通过325目筛的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂为90％；pH值为5.3-5.7；总悬浮率为75％；盾壳霉Chy-1C-1分生孢子悬浮率为90％；货架期：4℃下可储藏210天，30℃下可储藏80天。
实施例4：盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂防治甘蓝型油菜菌核病的田间试验
2004年春季的田间试验安排在湖北省咸宁市咸安区向阳湖镇北枫桥村进行。供试油菜品种为甘蓝型油菜华油杂6号(为华中农业大学选育，一个中国全国推广的甘蓝型油菜新品种)。油菜长势均匀一致。试验设5个处理：(1)本发明的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂3.0×107个孢子/m2；(2)本发明的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂8.0×108个孢子/m2；(3)本发明的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂2.4×109个孢子/m2；(4)菌核净70％可湿性粉剂(美国巨邦农资国际贸易公司生产)45μg/m2；(5)对照喷清水。每一处理设3个小区，小区面积为10m2，各处理小区按完全随机区组排列。用背负式手动喷雾器于3月14日和3月21日两次将各处理药剂或水均匀喷在甘蓝型油菜株冠(花、枝条)上。
2005年试验处理同2004年。每一处理设3个小区，小区面积为10m2，各处理小区按完全随机区组排列。用背负式手动喷雾器于3月29日和4月5日两次将各处理药剂或清水均匀喷在油菜株冠上(花、枝条)。
油菜收获前对各处理小区油菜逐株调查，记载菌核病发病油菜植株及其病级。将油菜菌核病病级分为5级(0，1，2，3，4)，各病级发病情况如下：0级：油菜植株没有发生菌核病。1级：油菜植株1/3以下分枝数发生菌核病或主茎病斑长度不超过3cm。2级：油菜植株1/3-2/3的分枝发生菌核病或发病分枝数在1/3以下，但主茎病斑超过3cm。3级：油菜植株2/3以上分枝数发病或发病分枝数在2/3以下及主茎中下部病斑超过3cm。4级：油菜植株2/3的分枝发生菌核病或主茎的病斑长度超过10cm。根据病级、发病植株数和调查的植株总数计算各小区的发病率、病情指数和相对防效。结果如下：
表1本发明的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂对甘蓝型油菜菌核病的防治效果
由表1可知，本发明盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂处理的油菜植株发病率和发病指数都比对照的低，本发明制备的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的防效与商品菌核净可湿性粉剂没有显著差异。田间实验结果表明本发明制备的盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂对油菜菌核病具有较好的防治作用，该制剂具有良好的生防价值，可以对其进行进一步地开发与应用。
主要参考文献
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Claims (2)
1.包含保藏号为CCTCC NO：M2010238的防治菌核病的生防菌盾壳霉(Coniothyriumminitans)Chy-1C-1的微生物制剂，该制剂是一种可湿性粉剂，其特征在于由如下组分组成，按质量百分比计：
保藏号为CCTCC NO：M2010238盾壳霉分生孢子：分生孢子含量为1×108个/g；
润湿剂：十二烷基苯磺酸钠1～1.5％；
分散剂：木质素磺酸钙或木质素磺酸钠5～10％；
粘着剂：黄原胶1％；
孢子萌发促进剂：硫酸锌0.1％；
紫外线保护剂：维生素C10％；
用硅藻土补齐至盾壳霉Chy-1C-1可湿性粉剂的全量。
2.权利要求1所述的可湿性粉剂在油菜菌核病防治中的应用。
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