CN113138253A - 一种刷格痛风散的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了刷格痛风散的检测方法，所述痛风散的原料药由黄柏、大黄、威灵仙、黄连、羌活、川芎、薏苡仁、金钱草、黄芪、蒲公英、山药、土茯苓组成；它包括黄连、黄柏、羌活、威灵仙、金钱草等各药材的薄层检测内容，同时还包括高效液相色谱法。采用本发明方法，可以对刷格痛风散中多种药材和化学成分进行定性检测，从而为刷格痛风散的质量标准控制提供基础，对于刷格痛风散的推广带来了积极意义。

Description

一种刷格痛风散的检测方法

技术领域

本发明涉及民族药物及其质量检测领域。

背景技术

羌医认为噜唔依基(痛风)病症范畴。母模得巫尼依基(风吹过都痛)所以称之为痛风，又名莫得巫迪叠·饶得禾迪·依基(火烧样石头堵塞样痛)属羌医“得迪(堵塞病)”范畴。近年来运用羌医药治疗痛风取得较好疗效，依据本病滋(水)、莫(火)、穆尔(雨水)吉纳咨斯(好吃好喝过盛)之病理，治以清火热除雨水，化厚味食解毒为主，其病位在四肢，特别脚拇趾掌关节好发，是脾胃和肝肾的赛米萨喜居器官功能失调密切相关。由白石滋部、黑石滋部、的功能混乱后产生的火毒石，火毒石不在体内正常运转排泄，而是在体内不断恶性循环，火毒石不断堆积在血管和内脏器官里，堵塞了正常运行的管道，从而使血液水等异常所致，其中异常黑石液水、火毒液晶、黑火毒液晶等异常毒液是主要致病毒体液。人的生命活动靠保质保量的各种营养物质，也就是由机体莫斯(气)、萨(血)滋(水)、吉纳(精微物质)、以及苏莫斯(本气)”来控制。人食用各种高脂肪、高蛋白等营养物质后，在正常情况下脾胃和肝肾肺通过机体莫斯(气)、萨(血)滋(水)、吉纳(精微物质)、以及苏莫斯(本气)”作用下，按照人体各部位和管道赛米的所需把营养物质输送到全身。脾胃和肝肾赛米萨喜居器官功能失调,火毒石不断堆积在血管和内脏器官里，堵塞了正常运行的管道，表情面红目赤、灰暗、痛苦面容，脚趾疼痛不堪，痛不欲生。因此，就诊患者先判别其辨算分型，分析其发病因素、白石滋部、黑石滋部分布、影响因素以及对不同辨算分型与之关联的证候症状，在此基础上采用饮食忌口、适度运动疗法、使用消火剂和祛毒剂以及药物、非药物等综合治疗。其治疗方法，首先让患者生活要有规律，不肥甘厚腻，适度运动，调节情绪，让患者禁忌食用极冰性、火性、不消化、刺激性强、生产气的食物，禁忌饮用阿司匹林类药品、禁用含草酸重的食物，禁止饮酒、禁止服用豆类食物，避免酗酒等。本病由白石滋部、黑石滋部、的功能混乱后产生的火毒石，火毒石不断堆积在血管和内脏器官里使血液水等异常所致；应采用消火、祛毒疗法及协调疗法。其中消火剂和祛毒剂，黑石液水、火毒液晶、黑火毒液晶等异常毒液，纠正不良的运行塞米管道，促进正常脾胃肝肾肺和机体莫斯(气)、萨(血)滋(水)吉纳(精微物质)、以及苏莫斯(本气)”的生成，恢复各脏腑器官的功能状态。根据不同辨算分析患者与之相关联系的证候症状消除及恢复情况，采用专用药物及非药物治疗。常用的药物有:外用噜唔依基膏、口服：噜唔依基散。主要起消肿止痛、软坚散结、化石通管、益肺健脾健肾、利水祛毒作用；滋巴赤贝疗法、涂雪猪油疗法、患处贴羌药膏疗法、羌药蒸疗法、羌药洗及羌药浴疗法、羌药茶饮品疗法、萨德洗疗法、针灸疗法、膳食调节疗法等9种。羌医辨算施治痛风，对于高尿酸血症期、急性期、间歇期、慢性期等不同发病期的痛风诊治具有丰富的临床经验，尤其对中重度、难治性痛风、不明原因发热以及痛风石的康复治疗颇有研究，有效康复众多反复治疗无效的痛风患者，这为本项目的完成奠定了基础。羌医治疗噜唔依基(痛风)(英文gout)(拉丁文Tophus(复数为Tophi))方案精准，疗效独特。羌医药从业者与学者共同撰写和编著了《羌医治疗噜唔依基(痛风)性关节炎诊疗常规》，制定不同时期痛风的临床诊断、综合治疗的研究和痛风分型和个体化诊疗技术。

刷格痛风散为羌医药历经百余年的经验方，由黄柏、大黄、威灵仙、黄连、羌活、川芎、薏苡仁、金钱草、黄芪、蒲公英、山药、土茯苓12味药组成。12味药协同作用，具有消肿止痛、软坚散结、化石通管、益肺健脾健肾、利水祛毒作用，羌医用于高尿酸血症期、急性期、间歇期、慢性期等不同发病期的痛风诊治，尤其对中重度、难治性痛风、不明原因发热以及痛风石的康复治疗，有效康复众多反复治疗无效的痛风患者。多年临川使用经验表明该方疗效确切，安全有效，对痛风有很好的治疗效果。

但是，该药物至今没有相关的质量研究方案，在其生产、销售和使用过程中，可能会对该产品的推广带来一定的影响。

发明内容

为此，本发明的目的在于提供可以有效控制刷格痛风散质量的检测方法。

具体的，本发明提供了刷格痛风散的检测方法，其特征在于：所述痛风散的原料药由黄柏、大黄、威灵仙、黄连、羌活、川芎、薏苡仁、金钱草、黄芪、蒲公英、山药、土茯苓组成；它包括黄连的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，得供试品溶液；

(2)取黄连作为对照药材，同(1)法提取，得黄连对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水＝5：3：0.5：0.5作为展开剂，紫外365nm下检测。

采用上述方法，可以使得黄连的相应斑点清晰可见，无拖尾，展开效果良好(参见图1)。

在预实验中，发明人还采用了其他关于黄连的展开剂：如乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水(5：3：1：1)，在该展开条件下，斑点离溶剂前沿较近，比移值大，且斑点间分离度不是很好(参见图2)；又如正丁醇：冰醋酸：水7：1：2，正丁醇：冰醋酸7：1，正丁醇：冰醋酸7：3，正丁醇：冰醋酸7：5(图3)等，均未能实现斑点较好分离，无法与对照品进行对照鉴定。

其中，它包括大黄的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，提取物在酸水溶液中反应后，乙醚萃取，取乙醚层，除去溶剂后，三氯甲烷溶解得供试品溶液；

(2)取大黄作为对照药材，同(1)法提取，得大黄对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以60～90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15：5：1作为展开剂，紫外365nm下检测。其中，它包括羌活的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，得供试品溶液；

(2)取羌活作为对照药材，同(1)法提取，得羌活对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯＝4：1.2作为展开剂，紫外365nm下检测。

羌活的薄层检测中，还可以取羌活醇、异欧前胡素作为对照品进行检测，即分别取对照品，甲醇溶解后，即得对照品溶液。

采用上述方法，可以使得羌活的相应斑点清晰可见，展开效果良好(参见图4)。

预实验中，还使用了二甲苯：乙酸乙酯(4：1)作为展开剂，但该条件下无法将异欧前胡素成分分离开(参见图5)。

其中，它包括金钱草的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，提取物经水-乙醚萃取，水层在盐酸存在下反应，乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层除去溶剂，甲醇溶剂后得供试品溶液；

(2)分别取槲皮素、山奈酚作为对照品，甲醇溶解，分别得到槲皮素对照品溶液、山奈酚对照品溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸＝10：6：1作为展开剂，喷1～5％三氯化铝乙醇溶液，100℃以上加热，紫外365nm下检测。

采用上述方法，可以使得金钱草的相应斑点清晰可见，展开效果良好(参见图6)。

预实验中，还使用了二甲苯：甲酸乙酯：甲酸(10：8：0.3)作为展开剂，比移值略小，且斑点间分离度也不是很好(参见图7)。

进一步地，三氯化铝乙醇溶液的浓度为3％，加热温度为105℃。

其中，它包括黄柏的薄层检测内容：

(1)取痛风散，含有1～5％醋酸的甲醇或乙醇提取，得到供试品溶液；

(2)取黄柏作为对照药材，同(1)法提取，得黄柏对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5：3：0.5：0.5作为展开剂，喷稀碘化必钾溶液显色。

预实验中，除了上述展开条件，分别使用了乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5：3：0.5：0.5、氯仿：甲醇：水(6：1)、氯仿：甲醇：水(6：1：0.1)、乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水(5：3：1：1)，但只有乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5：3：0.5：0.5时，与对照药材相同的斑点比移值适中，斑点分离度好，所以选用该展开系统(图8)。

进一步地，醋酸含量为1％。

其中，它包括威灵仙的薄层检测内容：

(1)取痛风散，无水乙醇提取，提取物在酸水溶液中反应后，60～90℃石油醚萃取，石油醚层除去溶剂后，无水乙醇溶解得供试品溶液；

(2)取威灵仙作为对照药材，同(1)法提取，得威灵仙对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝10：1：0.05作为展开剂，喷8～12％硫酸乙醇溶液，100℃以上加热，紫外365nm下检测。

采用上述方法，可以使得威灵仙的相应斑点清晰可见，展开效果良好(参见图9)。

预实验中，还使用了环己烷：乙酸乙酯：甲酸(5：3：0.1)，无法有效展开；还使用了甲苯：乙酸乙酯：甲酸：水(10：1：0.1)，靠近原点的两个斑点分离度效果较差。

进一步地，喷10％硫酸乙醇溶液，加热温度105℃。

进一步地，它还包括如下高效液相色谱法：

色谱柱：C₁₈

流动相：乙腈A-0.1～0.5％磷酸水溶液B，梯度程序为0～5min，5％～17％A；5～9min，17％～21％A；9～25min，21％～27％A；25～34min，27％～33％A；34～43min，33％～60％A；43～56min，60％～68％A；56～68min，68％～85％A；68～72min，85％～95％A；

流速0.8～1.2mL/min。

其中，检测波长可以通过全波段扫描确定，本发明中可以选择250nm。

其中，高效液相色谱中检测如下的化合物包括如下：没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚。

本发明还提供了刷格痛风散的检测方法，它采用高校液相色谱法进行检测，其中以没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，包括如下内容：

色谱柱：C₁₈

流动相：乙腈A-0.1～0.5％磷酸水溶液B，梯度程序为0～5min，5％～17％A；5～9min，17％～21％A；9～25min，21％～27％A；25～34min，27％～33％A；34～43min，33％～60％A；43～56min，60％～68％A；56～68min，68％～85％A；68～72min，85％～95％A；

流速0.8～1.2mL/min，所得色谱图参见图10。

预实验中，还采用了其他流动相条件，例如：

方法一：0～5min，5％～21％(A)；5～8min，21％～27％(A)；8～28min，27％～46％(A)；28～33min，46％～75％(A)；33～45min，75％～85％(A)；45～47min，85％～95％(A)，色谱图见图11；

方法二：0～5min，5％～18％(A)；5～8min，18％～25％(A)；8～28min，25％～48％(A)；28～33min，48％～73％(A)；33～48min，73％～90％(A)；48～50min，90％～95％(A)，色谱图见图12。

液相流速也可以选为1mL/min。

采用本发明方法，可以对刷格痛风散中多种药材和化学成分进行定性检测，从而为刷格痛风散的质量标准控制提供基础，对于刷格痛风散的推广带来了积极意义。

附图说明

图1黄连的薄层色谱图：展开剂：乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水(5：3：0.5：0.5)

图2黄连薄层色谱图：展开剂：乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水(5：3：1：1)

图3黄连薄层色谱图：展开剂：正丁醇：冰醋酸7：5

图4羌活薄层色谱图：展开剂：甲苯-乙酸乙酯＝4：1.2

图5羌活薄层色谱图：展开剂：二甲苯：乙酸乙酯(4：1)

图6金钱草薄层色谱图：展开剂：正己烷：乙酸乙酯：甲酸(10：6：1)

图7金钱草薄层色谱图：展开剂：二甲苯：甲酸乙酯：甲酸(10：8：0.3)

图8金钱草薄层色谱图：展开剂：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5：3：0.5：0.5

图9威灵仙薄层色谱图：展开剂：甲苯：乙酸乙酯：甲酸：水(10：1：0.05)

图10刷格痛风散HPLC色谱图，A：混合对照品溶液 B：刷格痛风散供试品，

其中，1.没食子酸 2.紫花前胡苷 3.落新妇苷 4.盐酸小檗碱 5.槲皮素 6.芦荟大黄素 7.大黄酸 8.羌活醇 9.大黄素 10.异欧前胡素 11.大黄酚 12.大黄素甲醚

图11方法一高效液相色谱图

图12方法二高效液相色谱图

具体实施方式

实施例所用原料如下：

黄柏：本品为芸香科植物黄皮树PheliodendronchinenseSchncid的干燥树皮。习称“川黄柏”。剥取树皮后，除去粗皮，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第318页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

生大黄：本品为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheumtanguticum Maxim.exBalf.或药用大黄Rheum offcinale Baill.的干燥根和根茎。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。标准收载于《中国药典》2020版一部第24页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

威灵仙：本品为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲Clematis hexapetalaPall.或东北铁线莲Clematis manshuricaRupr.的干燥根和根茎。秋季采挖，除去泥沙，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第262页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

黄连：本品为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.Cheng et Hsiao或云连CoptisteetaWall.的干燥根茎。以上三种分别习称“味连”、“雅连”、“云连”。秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥，撞去干燥须根。标准收载于《中国药典》2020年版一部第316页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

羌活：本品为伞形科植物羌活NotopterygiumincisumTing ex H.T.Chang或宽叶羌活NotopterygiumfranchetiiH.de Boiss.的干燥根茎和根。春、秋二季采挖，除去须根及泥沙，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第190页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

川芎：本品为伞形科植物川芍Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。夏季当茎上的节盘显著突出，并略带紫色时采挖，除去泥沙，晒后烘干，再去须根。标准收载于《中国药典》2020年版一部第42页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

薏苡仁：本品为禾本科植物惹米Coixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁。秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下果实，再晒干，除去外壳、黄褐色种皮和杂质，收集种仁。标准收载于《中国药典》2020年版一部第393页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

金钱草：本品为报春花科植物过路黄LysimachiachristinaeHance的干燥全草。夏、秋二季采收，除去杂质，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第229页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

黄芪：本品为唇形科植物黄芩Scutellariabaicalensis Georgi的干燥根。春、秋二季采挖，除去须根和泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第314页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

蒲公英：本品为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolzcumHand.-Mazz.、碱地蒲公英Taraxacum borealisinenseKitam.或同属数种植物的干燥全草。春至秋季花初开时采挖，除去杂质，洗净，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第367页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

山药：本品为薯预科植物薯预DioscoreaoppositaThunb.的干燥根茎。冬季茎叶枯萎后采挖，切去根头，洗净，除去外皮和须根，干燥，习称“毛山药”；或除去外皮，趁鲜切厚片，干燥，称为“山药片”；也有选择肥大顺直的干燥山药，置清水中，浸至无干心，闷透，切齐两端，用木板搓成圆柱状，晒干，打光，习称“光山药”。标准收载于《中国药典》2020年版一部第30页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

土茯苓：本品为百合科植物光叶菝葜Smilax glabra Roxb.的干燥根茎。夏、秋二季采挖，除去须根，洗净，干燥；或趁鲜切成薄片，干燥。标准收载于《中国药典》2020年版一部第19页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

实施例1本发明膏剂的制备

将配方中的药品：黄柏、大黄、威灵仙、黄连、羌活、川芎、薏苡仁、金钱草、黄芪、蒲公英、山药、土茯苓，按量称取。以上十二味药材，粉碎成细粉，过六号筛，混匀，包装，即得。

实施例2黄连的薄层鉴别

精密称取黄连对照药材1g，加甲醇10ml，超声30min，过滤，滤液作为黄连对照药材溶液。精密称取刷格痛风散2g，加甲醇20ml，同法制得供试品溶液。按照“刷格痛风散制备工艺”制备缺黄连的“阴性对照品”，按照“供试品溶液方法”制备，制得黄连阴性对照品溶液。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5：3：0.5：0.5)为展开剂，分别吸取黄连对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各8～10ul，在同一硅胶G板上行展开，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

实验结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的主斑点，阴性对照无干扰。

实施例3大黄的薄层鉴别

精密称取大黄对照药材1g，加甲醇20ml，浸泡1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30min，立刻冷却，用乙醚分两次振摇萃取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解。精密称取刷格痛风散2g，按照对照药材制备方法制得供试品溶液。按照“刷格痛风散制备工艺”制备缺大黄的“阴性对照品”，按照“供试品溶液方法”制备，制得大黄阴性对照品溶液。以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)为展开剂，分别吸取大黄对照药材溶液、供试品溶液、大黄阴性对照品溶液各8～13ul，在同一硅胶G板上行展开，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

实验结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显两个相同的主斑点，阴性对照无干扰。

实施例4羌活的薄层鉴别

精密称羌活醇和异欧前胡素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得作为对照品溶液。精密称取羌活对照药材1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液作为对照药材溶液。精密称取刷格痛风散2g，加甲醇10ml，超声30min，过滤，滤液作为供试品溶液。按照“刷格痛风散制备工艺”制备缺羌活的“阴性对照品”，按照“供试品溶液方法”制备，制得羌活阴性对照溶液。以以甲苯-乙酸乙酯(4：1.2)为展开剂，分别吸取羌活醇、异欧前胡素对照品溶液、羌活对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5～10ul，点在同一硅胶G板上，展开，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的主斑点，阴性对照无干扰。

实施例5金钱草的薄层鉴别

精密称取槲皮素和山奈酚对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。精密称取刷格痛风散2g，加80％甲醇20ml，加热回流1h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，乙醚萃取2次，每次10ml，弃去乙醚液，水液加稀盐酸10ml，水浴加热1h，迅速冷却，乙酸乙酯萃取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，用水30ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，即得供试品溶液。按照“刷格痛风散制备工艺”制备缺金钱草的“阴性对照品”，按照“供试品溶液方法”制备，制得金钱草阴性对照溶液。以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(10：6：1)为展开剂，分别吸取槲皮素、山奈酚对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5～8ul，点在同一硅胶G板上，展开，晾干，喷3％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的主斑点，阴性对照无干扰。

实施例6黄柏的薄层鉴别

精密称取黄柏对照药材1g，加1％醋酸甲醇溶液10ml超声30min，滤过，滤液作为对照药材溶液。精密称取刷格痛风散2g，加1％醋酸甲醇溶液10ml超声30min，滤过，滤液作为供试品溶液。按照“刷格痛风散制备工艺”制备缺黄柏的“阴性对照品”，按照“供试品溶液方法”制备，即得阴性对照溶液。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5：3：0.5：0.5)为展开剂，分别吸取黄柏对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各12～18ul，点在同一硅胶G板上，展开，晾干，喷稀碘化必钾溶液。

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的主斑点，阴性对照无干扰。

实施例7威灵仙的薄层鉴别

精密称取威灵仙对照药材1g，加无水乙醇20ml溶解，加热回流2小时，滤过，滤液加盐酸3ml，加热回流1小时，加水10ml，放冷，加石油醚(60～90℃)25ml，振摇萃取，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇4ml使溶解。精密称取刷格痛风散2g，同对照药材制备方法制得供试品溶液。按照“刷格痛风散制备工艺”制备缺威灵仙的“阴性对照品”，按照“供试品溶液方法”制备，制得威灵仙阴性对照溶液。以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10：1：0.05)为展开剂，分别吸取黄柏对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各12～18ul，点在同一硅胶G板上，展开，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的主斑点，阴性对照无干扰。

实施例8高效液相色谱法检测

1色谱条件：

Diamonsil 5μm C₁₈(250×4.6mm Column，1.8μm)色谱柱，柱温30℃，流速1mL/min，进样量2μL，以乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱，洗脱条件为：0～5min，5％～17％(A)；5～9min，17％～21％(A)；9～25min，21％～27％(A)；25～34min，27％～33％(A)；34～43min，33％～60％(A)；43～56min，60％～68％(A)；56～68min，68％～85％(A)；68～72min，85％～95％(A)；检测波长为250nm。

2对照品溶液的制备：

精密称取各对照品适量，加甲醇溶液制成1mg/mL的对照品储备液，备用。

3供试品的制备：

精密称取刷格痛风散1g置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液10mL，密塞，超声处理30分钟，滤过，取续滤液，浓缩至5mL，0.22μm有机滤膜滤过后用于HPLC分析。在上述色谱条件下，特征峰分离度良好，色谱图见图10。

4方法学考察

线性关系考察分别将没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚12种对照品的混合对照品溶液稀释一定倍数后，过0.22μm微孔滤膜，按照色谱条件进样10μL，记录各对照品峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标(Y)，对照品质量浓度为横坐标(X)进行线性回归，12种成分的线性回归方程和线性范围结果如下：没食子酸线性回归方程：y＝8550.5x-173.66，R²＝0.9983，线性范围：0.03～0.50mg/mL；紫花前胡苷线性回归方程：y＝3161.4x-106.48，R²＝0.9968，线性范围：0.03～0.69mg/mL；落新妇苷线性回归方程：y＝1247x-41.622，R²＝0.9987，线性范围：0.05～0.90mg/mL；盐酸小檗碱线性回归方程：y＝17898x-534.12，R²＝0.979，线性范围：0.04～3.0mg/mL；槲皮素线性回归方程：y＝17609x-527.97，R²＝0.9960，线性范围：0.03～0.54mg/mL；芦荟大黄素线性回归方程：y＝26159x-396.79，R²＝0.9988，线性范围：0.02～0.43mg/mL；大黄酸线性回归方程：y＝23147x-460.15，R²＝0.9983，线性范围：0.02～0.41mg/mL；大黄酚线性回归方程：y＝9017x-98.288，R²＝0.9987，线性范围：0.02～0.42mg/mL；羌活醇线性回归方程：y＝29839x-589.69，R²＝0.9988，线性范围：0.03～0.60mg/mL；大黄素线性回归方程：y＝8418.2x-155.04，R²＝0.9985，线性范围：0.02～0.46mg/mL；异欧前胡素线性回归方程：y＝17392x-324.13，R²＝0.9987，线性范围：0.03～0.50mg/mL；大黄素甲醚线性回归方程：y＝6569.9x-144.45，R²＝0.9950，线性范围：0.02～0.41mg/mL；结果表明线性关系良好。

精密度试验取对照品混合溶液，按照色谱条件连续进样6次，测定没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚色谱峰各峰面积值，计算其RSD。结果显示各RSD分别为1.47％、1.53％、1.66％、1.54％、1.02％、1.71％、1.20％、1.11％、1.58％、1.23％、1.28％、1.05％，表明仪器精密性良好。

重现性试验取同一刷格痛风散样品，按供试品溶液的配制进行前处理，制备6份供试品溶液，进样分析，按色谱条件进样，测定没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚的色谱峰各峰面积值，计算其RSD。结果显示各RSD分别为1.00％、1.44％、1.61％、1.19％、0.76％、1.71％、1.98％、1.37％、1.75％、1.91％、1.92％、1.32％，表明此方法重现性良好。

稳定性试验取同一刷格痛风散样品，按供试品溶液的配制进行前处理，制备供试品溶液，按色谱条件进样，分别在0、2、4、8、12、24h进样，测定没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚的色谱峰各峰面积值，计算其RSD。结果显示各RSD分别1.81％、1.49％、1.65％、1.50％、1.03％、1.82％、1.43％、1.76％、1.94％、1.98％、1.92％、1.93％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

加样回收率试验精密称取已知含量的刷格痛风散样品，称取6份，每份1g，各组分别加入各对照品溶液适量(分别相当于药材中各个对照品含量的50％)，按供试品溶液的配制进行前处理制备供试品溶液，按照色谱条件进样，测定没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚的色谱峰各峰面积值，计算各被测成分的平均加样回收率和RSD。结果显示各平均回收率分别为：99.58％、99.05％、97.24％、102.75％、98.92％、98.27％、97.95％、98.62％、98.03％、99.48％、98.03％、98.84％；RSD分别为：1.21％、1.67％、1.09％、1.49％、1.49％、1.45％、1.19％、1.29％、0.97％、0.76％、1.19％、1.17％。

5样品测定

分别称取各批次刷格痛风散样品1g，按照前述检测而方法，计算样品中各成分的含量，见表1。

说明上述HPLC方法，可以有效的从刷格痛风散复杂的化学成分中检测到多种目标化合物，且检测结果准确、重复性高。

表1刷格痛风散含量测定结果(mg/g)

Claims (10)

1.刷格痛风散的检测方法，其特征在于：所述痛风散的原料药由黄柏、大黄、威灵仙、黄连、羌活、川芎、薏苡仁、金钱草、黄芪、蒲公英、山药、土茯苓组成；它包括黄连的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，得供试品溶液；

(2)取黄连作为对照药材，同(1)法提取，得黄连对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水＝5：3：0.5：0.5作为展开剂，紫外365nm下检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它包括大黄的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，提取物在酸水溶液中反应后，乙醚萃取，取乙醚层，除去溶剂后，三氯甲烷溶解得供试品溶液；

(2)取大黄作为对照药材，同(1)法提取，得大黄对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以60～90℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15：5：1作为展开剂，紫外365nm下检测。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它包括羌活的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，得供试品溶液；

(2)取羌活作为对照药材，同(1)法提取，得羌活对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯＝4：1.2作为展开剂，紫外365nm下检测。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它包括金钱草的薄层检测内容：

(1)取痛风散，甲醇或乙醇提取，提取物经水-乙醚萃取，水层在盐酸存在下反应，乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层除去溶剂，甲醇溶剂后得供试品溶液；

(2)分别取槲皮素、山奈酚作为对照品，甲醇溶解，分别得到槲皮素对照品溶液、山奈酚对照品溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸＝10：6：1作为展开剂，喷1～5％三氯化铝乙醇溶液，100℃以上加热，紫外365nm下检测。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它包括黄柏的薄层检测内容：

(1)取痛风散，含有1～5％醋酸的甲醇或乙醇提取，得到供试品溶液；

(2)取黄柏作为对照药材，同(1)法提取，得黄柏对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5：3：0.5：0.5作为展开剂，喷稀碘化必钾溶液显色。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它包括威灵仙的薄层检测内容：

(1)取痛风散，无水乙醇提取，提取物在酸水溶液中反应后，60～90℃石油醚萃取，石油醚层除去溶剂后，无水乙醇溶解得供试品溶液；

(2)取威灵仙作为对照药材，同(1)法提取，得威灵仙对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝10：1：0.05作为展开剂，喷8～12％硫酸乙醇溶液，100℃以上加热，紫外365nm下检测。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它还包括如下高效液相色谱法：

色谱柱：C₁₈

流动相：乙腈A-0.1～0.5％磷酸水溶液B，梯度程序为0～5min，5％～17％A；5～9min，17％～21％A；9～25min，21％～27％A；25～34min，27％～33％A；34～43min，33％～60％A；43～56min，60％～68％A；56～68min，68％～85％A；68～72min，85％～95％A；

流速0.8～1.2mL/min。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：检测波长为250nm。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：高效液相色谱中检测如下化合物：没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚。

10.刷格痛风散的检测方法，其特征在于：它采用高校液相色谱法进行检测，其中以没食子酸、紫花前胡苷、落新妇苷、盐酸小檗碱、槲皮素、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、异欧前胡素、大黄酚、大黄素甲醚为对照品，包括如下内容：

色谱柱：C₁₈

流动相：乙腈A-0.1～0.5％磷酸水溶液B，梯度程序为0～5min，5％～17％A；5～9min，17％～21％A；9～25min，21％～27％A；25～34min，27％～33％A；34～43min，33％～60％A；43～56min，60％～68％A；56～68min，68％～85％A；68～72min，85％～95％A；

流速0.8～1.2mL/min。

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