CN103630648B - 一种抗感染药物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抗感染药物的检测方法，包括黄芩的鉴别，还包括黄连的鉴别、黄柏的鉴别、冰片的鉴别、乙醇含量的检测、黄芩含量的测定和黄连和黄柏含量的测定，这种抗感染药物的检测方法，采用气相色谱仪对复方三黄酊的乙醇含量进行测定，同时采用薄层色谱和高效液相色谱仪进行各组份的鉴别和含量测定。测定准确，切实保证了制剂的质量，改变了药品质量无标准的现状，确保药物有效成分在合格范围，从而保证了患者用药安全、有效。

Description

一种抗感染药物的检测方法

技术领域

本发明提供了一种药物的检测方法，尤其是一种抗感染药物的检测方法。

背景技术

急性创伤感染、慢性皮肤溃疡、褥疮、烧烫伤是外科常见的疾病。传统的治疗方法是采取清洁换药，即使用抗菌消毒剂（碘制剂，乙醇，醋酸氯己定等）处理创面，然后无菌包扎；治疗慢性皮肤溃疡即在上述治疗的基础上配合红外线照射。由于抗菌消毒药没有直接抗炎消肿作用，对改善创面红肿、渗出等效果较差。采用复方三黄酊局部湿敷治疗，使药物直接持续地作用于患部，药物以透皮给药的方式迅速渗透，可快速发挥其抗菌消炎、止痛消肿、祛腐生肌功效，并及时缓解分泌物对组织的损害，使患部组织有了体液连续性更新的条件。且随着辅料的更换，将细菌及坏死组织清除，避免了细菌内、外毒素和代谢产物对组织的滞留性破坏，为创面创造了清洁、无菌的良性环境。复方三黄酊具有清热、解毒、抗菌消炎，消肿、祛腐生肌、清凉止痛作用，可加速创面的愈合，具有很好的临床疗效。

 但由于该药物制备周期长，难以控制主要成分的含量，且提取溶媒乙醇的含量难以测定，原质量标准只能对其中一种主要成分黄芩苷进行鉴别；主要成分的含量测定标准没有建立，无法保证药物的质量，因而临床疗效不一。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种抗感染药物的检测方法，以有效检测药物的质量，保证疗效。

本发明是这样实现的，一种抗感染药物的检测方法，包括黄芩的鉴别，所述的抗感染药物是由如下方法制备的，原料药物的配比为，黄连 90—110重量份、 黄柏90—110重量份、黄芩90—110重量份、冰片4—6重量份；按配比分别称取各原料药物，将黄连、黄柏、黄芩研成粗粉后，按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液250ml-300ml的比例，向粗粉中加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液，并搅拌均匀，使粗粉充分膨胀，然后将膨胀后的粗粉装入渗漉筒内，按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液450-500ml的比例，缓缓加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液，待粗粉内的空气排出，并有18—22ml的乙醇溶液从渗漉筒上的放料阀流出后，关闭放料阀、盖上渗漉筒，浸渍46—50小时，用渗漉法缓慢渗漉，收集初漉液和续滤液，静置、滤过后成滤液，加入冰片，制成混合液，用体积百分比浓度为50%的乙醇溶液，将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至1000ml，搅拌均匀，分装，制成抗感染药物；

所述的检测方法是，

（1）、黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取上述方法制备的抗感染药物10ml，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取黄连对照药材（购自中国药品生物制品检定所）0.1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品（购自中国药品生物制品检定所）5.0mg，加甲醇10ml，制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

薄层板：硅胶G薄层板（TLC Silica gel 60，50 Glass plates 10×20cm，德国默克公司生产）；

展开剂：甲苯－异丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水（6:1.5:3:1.5:0.3），置于氨蒸气饱和的展开缸中；

点样量：吸取上述溶液各2μl；

展开条件：温度 26 ℃、相对湿度 62％；

检视：紫外灯（365nm）下；

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

（2）、黄柏的鉴别

供试品溶液的制备：取上述方法制备的抗感染药物10ml，滤过，滤液挥干，残渣加体积百分比浓度为1%的醋酸甲醇溶液1ml使其溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材（购自中国药品生物制品检定所）0.2g，加体积百分比浓度为1%的醋酸甲醇溶液20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至2ml作为对照药材溶液；

薄层板：硅胶G薄层板（TLC Silica gel 60，50 Glass plates 10×20cm，德国默克公司生产）；

展开剂：三氯甲烷－甲醇－水（30:15:4）下层溶液，置于氨蒸气饱和的展开缸中；

点样量：吸取供试品溶液、对照药材溶液各2μl；

展开条件：温度 26 ℃、相对湿度 62％；

检视：紫外灯（365nm）下 ；

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

（3）冰片的鉴别

供试品溶液的制备：取上述方法制备的抗感染药物10ml，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使其溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取冰片对照品（购自中国药品生物制品检定所）5mg，加乙酸乙酯10ml制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；

薄层板：硅胶G薄层板（TLC Silica gel 60，50 Glass plates 10×20cm，德国默克公司生产）；

展开剂：苯－乙酸乙酯（19:1）；

点样量：吸取上述溶液各5μl；

展开条件：温度 26 ℃、相对湿度 62％；

显色剂：将1g香草醛溶于100ml硫酸溶液中获得的香草醛硫酸溶液；检视：日光下；

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；

（4）乙醇含量的检测

仪器与试药： Agilent6890N气相色谱仪，乙醇和正丙醇为色谱纯；

色谱条件与系统适用性试验：

检测器：火焰离子化检测器，色谱柱：HP－INNOWax  Polyethlene Glycol，产品号：19091N－133，内径：250.00μm，长度：30.0m，液膜厚度：0.25μm；

起始温度为80℃，维持7分钟，再以每分钟10℃的速率升温至110℃；进样口温度：190℃；检测器温度：220℃，理论板数按正丙醇峰计算不低于8000，乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0，分流比：20:1；

校正因子的测定：精密量取恒温至20℃的无水乙醇4ml、5ml、6ml，分别置于100ml量瓶中，分别精密加入恒温至20℃的正丙醇（内标物质）5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取上述三种溶液1μl，注入液相色谱仪，分别连续进样3次，测定峰面积；经计算，得到校正因子；

供试品溶液的制备：精密量取恒温至20℃的供试品10ml，置于100ml量瓶中，精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取1μl续滤液注入气相色谱仪，测定，即得乙醇含量；

（5）黄芩含量的测定

仪器：Agilent1200系列高效液相色谱仪；

色谱柱：Inertex  C18  5u  250×4.6mm，甲醇为色谱纯，黄芩苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，含量以质量百分比浓度计为94.0%）；

色谱条件：选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－0.2mol/L磷酸溶液（43∶57）为流动相；检测波长280nm，理论板数以黄芩苷峰计不少于3000，柱温：30℃，流速：1.0m/lmin，进样量：5μl；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品7.30mg和6.33mg（含量以质量百分比浓度计为94.0%），分别置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（对照品溶液浓度分别为0.0686mg/ml和0.05950mg/ml）；

供试品溶液的制备：精密量取上述方法制备的抗感染药物6ml，置于25ml容量瓶中，加入甲醇并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

（6）黄连和黄柏含量的测定

仪器与试药：Agilent1200系列高效液相色谱仪，色谱柱：Inertex  C18  5u  250×4.6mm，乙腈为色谱纯（德国默克公司生产），盐酸小檗碱对照品（购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，含量以质量百分比浓度计为86.8%）；

色谱条件：选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH值至3.0）（30∶70）为流动相；检测波长:345 nm，理论板数以盐酸小檗碱峰计不少于5000，柱温：30℃，流速：1.0m/lmin；

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品13.08mg和11.41mg（含量以质量百分比浓度计为86.8%），分别置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置于100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，过滤，即得（对照品溶液浓度为：0.0227mg/ml和0.0198mg/ml）；

供试品溶液的制备：精密量取上述方法制备的抗感染药物1.20ml，置于蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇分次溶解转移至50ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

这种抗感染药物的检测方法，采用气相色谱仪对复方三黄酊的乙醇含量进行测定，同时采用薄层色谱和高效液相色谱仪进行各组份的鉴别和含量测定。测定准确，切实保证了制剂的质量，改变了药品质量无标准的现状，确保药物有效成分在合格范围，从而保证了患者用药安全、有效。

附图说明

图1是黄连薄层色谱图。图中，2、3为供试品，1为黄连对照药材，4为盐酸小檗碱。

图2是黄柏薄层色谱图。图中，1为黄柏对照药材；2、3、4为供试品。

图3是冰片薄层色谱图。图中，1为供试品；2为冰片对照品。

图4是乙醇含量对照品溶液气相色谱图。

图5是供试品溶液气相色谱图。

图6是黄芩苷对照品HPLC色谱图。

图7是供试品HPLC色谱图。

图8是黄芩苷标准曲线图。

图9是盐酸小檗碱对照品HPLC色谱图。

图10是供试品HPLC色谱图。

图11是盐酸小檗碱标准曲线图。

具体实施方式

下面进一步说明本发明。

在抗感染药物的制备中，黄连、黄柏、黄芩研成的粗粉的粗细度为过10目筛。

在抗感染药物的制备中，渗漉速度等其他操作工艺与现有的单渗漉法相同，不再详述。

在抗感染药物的制备中，“按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液450-500ml的比例，缓缓加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液，”中，粗粉的重量以加入乙醇溶液前计。同样，“用体积百分比浓度为50%的乙醇溶液将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至1000ml，”粗粉的重量也以加入乙醇溶液前计。

所述的色谱柱HP－INNOWax Polyethlene Glycol，为HP-INNOWAX(Crosslinkws Polyethlene Glycol交链聚乙二醇)。Agilent6890N气相色谱仪又称为安捷伦6890N气相色谱仪。

黄芩的鉴别方法是，取上述方法制备的抗感染药物5ml，蒸干，残渣加甲醇1ml 使其溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1ｍg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以将1g三氯化铁溶于100ml乙醇溶液中获得的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

在乙醇含量的检测、黄芩含量的测定、黄连和黄柏含量的测定中，按选定的色谱条件进行试验，色谱峰分离条件好。

在进行所述的乙醇含量的检测中，校正因子的测定时，实际测定对照品溶液的峰面积及校正因子得到表1所示结果。

表1  乙醇含量测定对照品溶液的峰面积及校正因子

在进行所述的乙醇含量的检测中，取1μl注入气相色谱仪，进行实际测定时，测定6批样品，得到表2所示结果。

 表2  6批样品乙醇含量测定结果

 根据配方及工艺流程，6批含量测定在47.9%～53.8%，结果平均值为51.7%，因此确定乙醇含量为45.0%～55.0%为合格标准。

在黄芩含量的测定中，可进行方法学考察。

 1、线性关系的考察

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品7.30mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（对照品溶液浓度为：0.06862mg/ml）。

分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl，10μl注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值。以对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为y = 3652.55866 x -2.06597 ，相关系数r²=1。结果见表3及图8。

表3黄芩苷线性关系考察结果

试验结果表明，黄芩苷在 0.06862μｇ ～ 0.6862μｇ之间进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2、仪器精密度试验

精密吸取黄芩苷对照品溶液（浓度0.06862mg/ml）5μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，按上述测定方法进行测定，计算RSD。结果见表4。

 表4 仪器精密度试验结果

 试验结果显示仪器精密度良好。

3、黄芩苷对照品稳定性试验

精密吸黄芩苷对照品溶液（浓度0.06862mg/ml）5μl，注入液相色谱仪，每隔一段时间进样一次，测定黄芩苷的峰面积积分值，共考察12小时，计算RSD，以观察样品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。结果见表5。

表5 稳定性试验结果

试验结果表明供试品溶液在12小时内稳定性良好，能够满足测定需要。

 4 、重复性试验

取上述方法制备的抗感染药物（生产单位：滨州医学院附属医院；批号：20120508），按照供试品溶液的制备方法，平行制备6份样品，按上述方法和条件进行测定，计算每份的含量。结果见表6。

表6重复性试验结果

试验结果表明测定方法的重复性良好。

5、加样回收率试验

取已测知黄芩苷含量的样品（生产单位：滨州医学院附属医院；批号：20120508，黄芩苷含量0.351mg/ml ）3.00ml，共取6份，置25ml容量瓶中，精密加入黄芩苷对照品储备液（浓度为0.111mg/ml）10.00ml，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述测定方法进行测定，计算回收率。结果见表7。

 表7 加样回收率试验结果

 

试验结果表明测定方法的回收率良好。  

6、样品测定                            

按上述测定方法和条件，对已生产的6批样品进行了测定，测定结果见表8。

 表8  黄芩苷含量测定结果

根据6批样品测定结果，含黄芩以黄芩苷计不少于0.30mg/ml为合格标准。

在黄连和黄柏含量的测定中，也可进行方法学考察。

1、线性关系的考察

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品11.41mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过（对照品溶液浓度为：0.0198mg/ml）作为对照品溶液。

分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl，10μl注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值。以对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为y = 10487.18694 x-9.51589 ，相关系数r²=0.99994。结果见表9及图11。

 表9盐酸小檗碱线性关系考察结果

试验结果表明，盐酸小檗碱在 0.0198～ 0.198μｇ之间的进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2、仪器精密度试验

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（浓度0.0198mg/ml）5μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，按上述测定方法进行测定，计算RSD。结果见表10。

  表10 仪器精密度试验结果

  

 试验结果显示仪器精密度良好。

3、盐酸小檗碱对照品稳定性试验

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（浓度0.0227mg/ml）5μl，注入液相色谱仪，每隔一段时间进样一次，测定盐酸小檗碱的峰面积积分值，共考察12小时，计算RSD，以观察样品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。结果见表11。

表11 稳定性试验结果

 试验结果表明供试品溶液在12小时内稳定性良好，能够满足测定需要。

4、重复性试验

取取上述方法制备的抗感染药物（生产单位：滨州医学院附属医院；批号：20120508），按照供试品溶液的制备方法，平行制备6份样品，按上述方法和条件进行测定，计算每份的含量。结果见表12。

 表12 重复性实验结果

 试验结果表明测定方法的重复性良好。

5、加样回收率试验

取已测知盐酸小檗碱含量的样品（生产单位：滨州医学院附属医院；批号：20111128，黄芩苷含量0.452mg/ml ）0.500ml，共取6份，置50ml容量瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（浓度为0.198mg/ml）2.00ml，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述测定方法进行测定，计算回收率。结果见表13。

 表13 加样回收率试验结果

试验结果表明测定方法的回收率良好。              

6、样品测定                           

按上述测定方法和条件，对已生产的6批样品进行了测定，测定结果见表14。

 表14 盐酸小檗碱含量测定结果

据6批样品测定结果，含黄连和黄柏以盐酸小檗碱计不少于0.40mg/ml为合格标准。

Claims (1)

1.一种抗感染药物的检测方法，包括黄芩的鉴别，其特征在于，所述的抗感染药物是由如下方法制备的，原料药物的配比为，黄连90—110重量份、黄柏90—110重量份、黄芩90—110重量份、冰片4—6重量份；按配比分别称取各原料药物，将黄连、黄柏、黄芩研成粗粉后，按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50％的乙醇溶液250ml－300ml的比例，向粗粉中加入体积百分比浓度为50％的乙醇溶液，并搅拌均匀，使粗粉充分膨胀，然后将膨胀后的粗粉装入渗漉筒内，按每100g粗粉加入体积百分比浓度为50％的乙醇溶液450－500ml的比例，缓缓加入体积百分比浓度为50％的乙醇溶液，待粗粉内的空气排出，并有18—22ml的乙醇溶液从渗漉筒上的放料阀流出后，关闭放料阀、盖上渗漉筒，浸渍46—50小时，用渗漉法缓慢渗漉，收集初漉液和续滤液，静置、滤过后成滤液，加入冰片，制成混合液，用体积百分比浓度为50％的乙醇溶液，将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至1000ml，搅拌均匀，分装，制成抗感染药物；

所述的检测方法是，

(1)、黄连的鉴别

供试品溶液的制备：取上述方法制备的抗感染药物10ml，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取黄连对照药材0.1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品5.0mg，加甲醇10ml，制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

薄层板：硅胶G薄层板；

展开剂：甲苯－异丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水，体积比为6：1.5：3：1.5：0.3，置于氨蒸气饱和的展开缸中；

点样量：吸取上述溶液各2μl；

展开条件：温度26℃、相对湿度62％；

检视：紫外灯365nm下；

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

(2)、黄柏的鉴别

供试品溶液的制备：取上述方法制备的抗感染药物10ml，滤过，滤液挥干，残渣加体积百分比浓度为1％的醋酸甲醇溶液1ml使其溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.2g，加体积百分比浓度为1％的醋酸甲醇溶液20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至2ml作为对照药材溶液；

薄层板：硅胶G薄层板；

展开剂：三氯甲烷－甲醇－水，体积比为30：15：4的下层溶液，置于氨蒸气饱和的展开缸中；

点样量：吸取供试品溶液、对照药材溶液各2μl；

展开条件：温度26℃、相对湿度62％；

检视：紫外灯365nm下；

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

(3)、冰片的鉴别

供试品溶液的制备：取上述方法制备的抗感染药物10ml，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使其溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取冰片对照品5mg，加乙酸乙酯10ml制成每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；

薄层板：硅胶G薄层板；

展开剂：苯－乙酸乙酯，体积比为19：1；

点样量：吸取上述溶液各5μl；

展开条件：温度26℃、相对湿度62％；

显色剂：将1g香草醛溶于100ml硫酸溶液中获得的香草醛硫酸溶

液；检视：日光下；

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；

(4)、乙醇含量的检测

仪器与试药：Agilent6890N气相色谱仪，乙醇和正丙醇为色谱纯；

色谱条件与系统适用性试验：

检测器：火焰离子化检测器，色谱柱：HP－INNOWax Polyethlene Glycol，产品号：19091N－133，内径：250.00μm，长度：30.0m，液膜厚度：0.25μm；

起始温度为80℃，维持7分钟，再以每分钟10℃的速率升温至110℃；进样口温度：190℃；检测器温度：220℃，理论板数按正丙醇峰计算不低于8000，乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0，分流比：20：1；

校正因子的测定：精密量取恒温至20℃的无水乙醇4ml、5ml、6ml，分别置于100ml量瓶中，分别精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取上述三种溶液1μl，注入液相色谱仪，分别连续进样3次，测定峰面积；经计算，得到校正因子；

供试品溶液的制备：精密量取恒温至20℃的供试品10ml，置于100ml量瓶中，精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取1μl续滤液注入气相色谱仪，测定，即得乙醇含量；

(5)、黄芩含量的测定

仪器：Agilent1200系列高效液相色谱仪；

色谱柱：Inertex C18 5μm 250×4.6mm，甲醇为色谱纯，黄芩苷对照品；

色谱条件：选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－0.2mol/L 磷酸溶液：43∶57为流动相；检测波长280nm，理论板数以黄芩苷峰计不少于3000，柱温：30℃，流速：1.0ml/min，进样量：5μl；

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品7.30mg和6.33mg，分别置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：精密量取上述方法制备的抗感染药物6ml，置于25ml容量瓶中，加入甲醇并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(6)、黄连和黄柏含量的测定

仪器与试药：Agilent1200系列高效液相色谱仪，色谱柱：Inertex C18 5μm 250×4.6mm，乙腈为色谱纯，盐酸小檗碱对照品；

色谱条件：选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾30∶70为流动相；检测波长：345nm，理论板数以盐酸小檗碱峰计不少于5000，柱温：30℃，流速：1.0ml/min；

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品13.08mg和11.41mg，分别置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置于100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，过滤，即得；

供试品溶液的制备：精密量取上述方法制备的抗感染药物1.20ml，置于蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇分次溶解转移至50ml容量瓶中，加入 甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。