CN102198210B - 消结安制剂的质量检测及含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种药品制剂的质量控制方法，特别是涉及消结安制剂中土茯苓的薄层色谱鉴别、含量测定。本方法是针对消结安制剂中土茯苓的专属性成分作为指标性成分制订的薄层色谱鉴别和/或含量测定方法，所述的专属性成分为落新妇苷，所述的消结安制剂是由以下原料药制成的中药复方制剂：功劳木1100、三叉苦750、益母草750、鸡血藤750、土茯苓900、连翘750。本发明用专属性强的薄层色谱鉴别的方法可以准确、可靠的鉴别土茯苓，用目前普遍采用的高效液相色谱法准确测定消结安制剂中落新妇苷的含量，对监测、控制药材采购、制剂生产过程和市场上制剂产品的质量，对确保产品安全、有效、质量稳定如一具有实际意义。采用本方法能有效解决市场上供应的土茯苓品种基原混乱的问题，确保严格按照国家药品标准生产消结安制剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种药品制剂的质量控制方法，特别是涉及消结安制剂中土茯苓的薄层色谱鉴别、含量测定。
背景技术
消结安(原名乳癖安消)是由功劳木、三叉苦、益母草、鸡血藤、土茯苓、连翘等六味药材组成的中药复方制剂，包括胶囊剂、口服液等剂型，消结安胶囊现行质量标准收载于《国家中成药标准汇编》地标升国标口腔肿瘤儿科分册(411-414页)，标准编号：WS-10433(ZD-0433)-2002，消结安口服液现行质量标准收载于《国家中成药标准汇编》地标升国标口腔肿瘤儿科分册(415-418页)，标准编号：WS-10646(ZD-0646)-2002。消结安具有活血化瘀，软坚散结的功能。临床用于气滞血瘀所致乳癖，乳腺小叶增生，卵巢囊肿，子宫肌瘤见上述证候者。
上述消结安现行国家药品标准均是采用TLC法鉴别功劳木成分盐酸小檗碱和盐酸巴马汀；采用高效液相色谱法测定功劳木成分盐酸小檗碱含量。同时，专利200610046839.4公开了一种乳癖安消制剂中功劳木含量的检测方法及测定标准，方法采用高效液相色谱法测定功劳木成分盐酸小檗碱含量。专利200610047040.7公开了一种乳癖安消颗粒的鉴别方法，方法以盐酸小檗碱和盐酸巴马汀为对照品，采用TLC法鉴别功劳木成分；以盐酸水苏碱为对照品，采用TLC法鉴别益母草成分。专利200610150616.2公开了治疗妇科疾病的乳癖安消药物制剂及其制法和质量控制方法，方法采用TLC法鉴别盐酸小檗碱和盐酸巴马汀；采用TLC法鉴别盐酸水苏碱；采用TLC法鉴别连翘；采用TLC法鉴别鸡血藤；采用高效液相色谱法测定功劳木成分盐酸小檗碱含量；采用高效液相色谱法测定连翘成分连翘苷含量。目前，尚没有消结安制剂中土茯苓成分的鉴别方法和含量测定方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以消结安制剂中土茯苓成分的鉴别方法和/或含量测定方法对消结安制剂进行质量控制的消结安制剂的质量控制方法。
本发明所述的消结安制剂的质量控制方法，是针对消结安制剂中土茯苓的专属性成分作为指标性成分制订的薄层色谱鉴别和/或含量测定方法，所述的专属性成分为落新妇苷，所述的消结安制剂是由以下原料药制成的中药复方制剂：功劳木1100、三叉苦750、益母草750、鸡血藤750、土茯苓900、连翘750。
上述的中药复方制剂包括胶囊剂、口服液体制剂、片剂、颗粒剂、注射剂、外用贴膏剂、凝胶剂、膜剂、气雾剂、搽剂或酊剂。
本发明所述的薄层色谱鉴别方法为：
称取供试品，供试品含落新妇苷0.1～10mg；或量取供试品，供试品含落新妇苷0.1～10mg，浓缩至干；在上述供试品中加入5～50ml溶剂，所述的溶剂为体积百分比30～99％的甲醇、甲醇、甲醇-乙酸乙酯(5～95∶95～5)、乙酸乙酯、正丁醇、体积百分比30～95％的乙醇、无水乙醇中的任意一种，超声处理5～60分钟，或加热回流10～90分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至1～10ml，或滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～10ml使溶解，作为供试品溶液；
另取落新妇苷对照品适量，加甲醇或乙醇制成每1ml含0.2～10mg的溶液，作为对照品溶液；
再取土茯苓对照药材0.1～2g，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液1～10μl和对照品溶液1～10μl、对照药材溶液1～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用三氯甲烷-甲醇-甲酸(3～5∶0.5～1.5∶0.05)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(4～6∶3～5∶2)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(11～15∶30～35∶9)、环己烷-丙酮-甲酸(0.5～1.5∶5～7∶0.05)中的任意一种作为展开剂，展开，取出，晾干，以5％香草醛10％硫酸乙醇溶液、2％三氯化铁乙醇溶液、1％三氯化铝乙醇溶液中的任意一种作为显色剂，显色，检视；供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述的含量测定方法为：
用高效液相色谱法(《中国药典》一部附录VI D)测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-酸水溶液(20～60∶80～40)、乙腈-酸水溶液(10～30∶90～70)、甲醇-乙腈-酸水溶液(5～55∶5～35∶90～10)中的任意一种为流动相，检测波长为291±5nm；理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 取落新妇苷对照品适量，精密称定，加体积百分比30％～99％的甲醇或甲醇制成每1ml含10～500μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 称取供试品，供试品含落新妇苷0.1～20mg，精密称定；或精密量取供试品，供试品含落新妇苷0.1～20mg，蒸干；在上述供试品中精密加入体积百分比30％～99％的甲醇或甲醇或体积百分比30％～95％的乙醇15～150ml，称定重量，超声处理10～60分钟，或加热回流10～90分钟，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2～50μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明涉及土茯苓中落新妇苷的薄层色谱鉴别和/或含量测定方法在消结安制剂质量检测中的应用。
土茯苓是消结安中的主要成分。土茯苓性甘、淡，味平，归肝、胃经。土茯苓具有除湿，解毒，通利关节等功能。临床用于湿热淋浊，带下，痈肿，瘰疬，疥癣，梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛，筋骨疼痛等。土茯苓还用于卵巢囊肿、痛经等的治疗。
药材基原正确，质量稳定可控，是保证中药成方制剂产品安全、有效、均一、质量稳定可控的基础。由于土茯苓干燥后比较难以切制、破碎，同时，不切制的土茯苓原药材又较难干燥，所以，市场上的土茯苓药材(商品药材)基本都是切制成片的“饮片”。再加上外观性状相似和地方习用名、同名异物等原因，导致土茯苓(为百合科植物光叶菝葜Smilax glabraRoxb.的干燥根茎。中国药典[S].一部，2005.第14-15页)常与金荞麦(为蓼科植物金荞麦Fagopyrum dibotrys(D.Don)Hara的干燥根茎)相混淆(刘毅。对云南中药材市场几种常用药物品种混乱的纠正。云南中医中药杂志，2007，28(5)：23-24)，同时还常与萆薢(为薯蓣科植物绵萆薢Dioscorea septemloba ThUnb.或福州薯蓣Dioscorea futschauensisUline ex R.kunth的干燥根茎；或薯蓣科植物粉背薯蓣Dioscorea hypoglauca Palibin的干燥根茎)和菝葜(为百合科植物菝葜Smilax china L.的根茎)相混淆(王清伟。萆薢、土茯苓、菝葜的临床鉴别及应用。陕西中医，2000，21(8)：378)。这种品种和使用上的混乱，如果不通过严格、科学的方法、标准予以解决，必将影响到相关产品的有效性和安全性。
含落新妇苷是土茯苓的重要特征，落新妇苷具有抗炎、利尿和镇痛作用【张白嘉.土茯苓及落新妇苷抗炎、镇痛、利尿作用研究。中药药理与临床2004；20(1)：11-12】，因此也是土茯苓和消结安的主要活性成分。
基于上述原因，针对消结安制剂中土茯苓的专属性成分，建立土茯苓相关的薄层色谱鉴别和含量测定的方法和标准，对于控制产品质量，确保产品的有效性和安全性，具有非常重要的意义。
本发明针对土茯苓药材实际情况，针对消结安制剂现有质量控制方法存在的问题和不足，提供了一种消结安制剂的鉴别方法和含量测定方法，可以对制剂中是否含有土茯苓进行鉴别，对含土茯苓的量进行测定，从而对生产过程和市场上的产品进行监控，能够提高产品质量，辨别产品真伪、优劣，具有实际意义。
土茯苓薄层色谱鉴别方法研究：专属性试验
将各药材分别粉碎成最粗粉，称取功劳木22g、三叉苦15g、益母草15g、鸡血藤15g、连翘15g，混合，加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，静置，滤过；滤液减压浓缩至稠膏，75℃真空干燥，粉碎，加入淀粉90mg、滑石粉300mg及硬脂酸镁10mg，混匀，用75％乙醇制成颗粒，干燥，过筛，即得土茯苓阴性供试品。分别称取土茯苓阴性供试品1.2g和消结安胶囊(批号09090505)内容物1.5g，分别加甲醇15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液分别浓缩至2ml，作为土茯苓阴性溶液和供试品溶液。另取落新妇苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液。再取土茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(4∶1∶0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。土茯苓阴性色谱中，在与落新妇苷对照品色谱和土茯苓对照药材色谱相应的位置上，不显示相同颜色的斑点，而供试品色谱中，在与落新妇苷对照品色谱和土茯苓对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰，方法专属性好。
消结安中落新妇苷含量HPLC测定方法研究：
1、材料
供试品为消结安胶囊(批号09050602、09052208、09070405、09082214、09082617、09082820、09090505、09100701、09101514、09112609)，消结安口服液(批号09080201、09081704、09091401)，均由云南良方制药有限公司生产。
2、仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪；SK3300HP型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。落新妇苷对照品(南京泽朗医药科技有限公司，批号PS090706，HPLC纯度99.94％)，土茯苓对照药材(中国药品生物制品检定所，121439-200401)，硅胶G板(厚度0.20-0.25mm，海洋牌，青岛海洋化工厂)，HPLC用甲醇和乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
3、色谱条件
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱或Kromasil C18 5μ 4.6mm×250mm色谱柱；以甲醇-0.3％冰醋酸溶液(35∶65)为流动相；检测波长291nm；柱温30℃，流速1.0ml·min-1，进样体积10μl。
4、提取方法选择
考察了回流提取法和超声提取法2种提取方法对消结安胶囊中落新妇苷含量测定的影响，结果表明，2种提取方法的提取率一致，其中，以超声提取操作简便、快速，相对较好。
5、提取溶剂选择
取消结安胶囊(批号09090505)内容物，混匀，称取6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入30％甲醇、60％甲醇、甲醇、95％乙醇、60％乙醇、30％乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，分别用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照上述色谱条件，依法检测，计算落新妇苷含量。结果表明，几种提取溶剂的提取率基本一致，其中，以甲醇为提取溶剂效果最佳。
6、检测波长选择
落新妇苷甲醇溶液(30μg·ml-1)在200～800nm范围内扫描，结果在291nm处有最大吸收，因此，选择291nm为检测波长。
7、流动相选择
考察了乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸溶液、乙腈-0.3％冰醋酸溶液、甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸溶液、甲醇-0.3％冰醋酸溶液、甲醇-0.1％甲酸溶液、甲醇-0.1％三氟乙酸溶液、甲醇-乙腈-0.3％冰醋酸溶液9个流动相系统。结果表明，以乙腈-水、甲醇-水作为流动相时，落新妇苷色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度小于1.2，不符合中国药典一部附录VI D的要求，不能选用；其他7个流动相系统的色谱效果基本一致，各系统适用性试验参数均可达到要求，其中，以甲醇-0.3％冰醋酸溶液为流动相所得色谱峰峰形最好，分离效果最佳。
8、专属性试验
取各药材，分别粉碎成最粗粉，称取功劳木22g、三叉苦15g、益母草15g、鸡血藤15g、连翘15g，混合，加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，静置，滤过；滤液减压浓缩至稠膏，75℃真空干燥，粉碎，加入淀粉90mg、滑石粉300mg及硬脂酸镁10mg，混匀，用75％乙醇制成颗粒，干燥，过筛，即得土茯苓阴性供试品。取土茯苓阴性供试品0.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为土茯苓阴性溶液，照上述色谱条件，依法检测。结果见图3，落新妇苷对照品HPLC色谱图见图1。在与落新妇苷对照品色谱峰保留时间相应的位置上，土茯苓阴性无色谱峰，而供试品有保留时间相同的色谱峰，见图2。阴性无干扰，方法专属性好。
9、线性关系试验
精密称取落新妇苷对照品10.00mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，分别精密量取0.20、0.50、2.0ml置25ml量瓶中，精密量取2.0ml置10ml量瓶中，精密量取1.0ml置2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别得每1ml含落新妇苷8、20、80、200、500μg的对照品溶液，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件，依法测定，记录峰面积。结果见表1。
表1 HPLC法测定落新妇苷含量线性关系试验结果
以落新妇苷进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，经回归处理，回归方程为峰面积Y＝2.6463X-37.427，相关系数r＝0.9998。结果表明，落新妇苷进样量在80～5000μg范围内线性关系良好。
10、精密度试验
精密吸取100μg·ml-1落新妇苷对照品溶液，照上述色谱条件重复进样6次，记录峰面积。结果见表2，结果表明，色谱系统精密度良好。
表2 HPLC法测定落新妇苷含量精密度试验结果
11、供试品溶液稳定性试验
取消结安胶囊(批号09090505)内容物0.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、24小时，依法测定，计算落新妇苷的含量，结果见表3。
表3 落新妇苷含量测定供试品溶液稳定性试验结果
结果表明，供试品溶液在24小时内较稳定，但有下降趋势，宜在6小时内测定。
12、重复性试验
取消结安胶囊(批号09090505)内容物，混匀，称取6份，每份约0.5g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照上述色谱条件，分别依法测定，计算落新妇苷含量，结果见表4。
表4 消结安胶囊落新妇苷含量测定重复性试验结果
结果表明，本测定方法的重复性较好。
13、准确度试验(加样回收率)
取消结安胶囊(批号09090505，落新妇苷含量为3.55mg·g-1)内容物，混匀，称取6份，每份约0.25g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入100μg·ml-1落新妇苷对照品甲醇溶液10ml，再精密加入甲醇15ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照上述色谱条件，分别依法测定，计算落新妇苷含量，结果见表5。
表5消结安胶囊落新妇苷含量测定准确度试验结果
结果表明，本法的回收率较好，准确度较高。
14、样品测定结果和含量标准(限度)
取消结安胶囊内容物0.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照上述色谱条件，依法测定，计算落新妇苷含量，10批消结安胶囊样品测定结果见表6。
表6 10批消结安胶囊样品中落新妇苷含量测定结果
测定结果表明，10批消结安胶囊中落新妇苷含量最高为4.14mg·g-1，最低为1.10mg·g-1，总平均含量为2.613mg·g-1，总平均含量的70％为2.613mg·g-1，折合每粒含落新妇苷0.695mg。据此，我们拟订含量限度为：消结安胶囊每粒含土茯苓以落新妇苷(C21H22O11)计，不得不少于0.70mg。
本发明的优点和效果如下：
1、本发明用专属性强的薄层色谱鉴别的方法可以准确、可靠的鉴别土茯苓，用目前普遍采用的高效液相色谱法准确测定消结安制剂中落新妇苷的含量，对监测、控制药材采购、制剂生产过程和市场上制剂产品的质量，对确保产品安全、有效、质量稳定如一具有实际意义。
2、采用本发明方法鉴别消结安制剂中的土茯苓、落新妇苷，能有效排除复方中其他成分的干扰，薄层色谱效果好，斑点清晰，与其他斑点分离良好，耐用性好，阴性无干扰，专属性强。采用本发明方法测定消结安制剂中土茯苓专属性成分落新妇苷含量，能有效排除复方中其他成分的干扰，分离效果好，色谱峰峰型好，分离度、理论板数、拖尾因子，重复性等系统适用性指标均符合现行版《中国药典》规定，加样回收率高，准确度好，线性关系好，阴性无干扰，专属性强。
3、采用本方法能有效解决市场上供应的土茯苓品种基原混乱的问题，确保严格按照国家药品标准生产消结安制剂。
附图说明
图1是落新妇苷对照品HPLC色谱图。
图2是消结安胶囊HPLC色谱图。
图3是土茯苓阴性HPLC色谱图。
图中：
色谱条件为：
色谱柱：Kromasil C18 5μ4.6mm×250mm 柱温：30℃
流动相：甲醇-0.3％醋酸溶液(35∶65) 检测波长：291nm
流速：1.0ml·min-1 进样体积：10μl
仪器配置为：
四元泵带真空脱气机(G1311A) 手动进样器(0603)
柱温箱(G1316A) 紫外检测器(G1314A)
仪器控制及数据处理：Agilent Chemstation。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。
实施例1：称取供试品(如称取09090505批消结安胶囊内容物1.5g)，供试品含落新妇苷5mg；或量取供试品(如量取09080201批消结安口服液10ml)，供试品含落新妇苷5mg，浓缩至干；在上述供试品中加甲醇15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取落新妇苷对照品3mg，加甲醇1ml使溶解，作为对照品溶液。再取土茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(4∶1∶0.05)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例2：实施例1中所述显色剂更换为2％三氯化铁乙醇溶液，喷以显色剂后，在日光下检视，其它同实施例1。
实施例3：实施例1中所述显色剂更换为1％三氯化铝乙醇溶液，喷以显色剂后，置紫外光灯(365nm)下检视，其它同实施例1。
实施例4：实施例1中所述展开剂更换为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶2)，其它同实施例1。
实施例5：实施例1中所述展开剂更换为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(13∶32∶9)，其它同实施例1。
实施例6：实施例1中所述展开剂更换为环己烷-丙酮-甲酸(1∶6∶0.05)，其它同实施例1。
实施例7：实施例1中所述供试品的提取方法加甲醇15ml更换为加甲醇60ml，其它同实施例1。
实施例8：实施例1中所述供试品的提取方法超声处理15分钟更换为加热回流30分钟或加热回流60分钟，其它同实施例1。
实施例9：实施例1中所述供试品的提取溶剂甲醇更换为30％甲醇、60％甲醇、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇或正丁醇，提取方法为：加提取溶剂15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。其它同实施例1。
实施例10：实施例1中所述供试品的提取溶剂甲醇更换为乙酸乙酯、正丁醇、无水乙醇或甲醇-乙酸乙酯(75∶25)，其它同实施例1。
实施例11：实施例1中所述供试品溶液的制备方法更换为：称取供试品(如称取09090505批消结安胶囊内容物1.5g)，供试品含落新妇苷5mg，加水15ml，超声处理15分钟；或量取供试品(如量取09080201批消结安口服液10ml)，供试品含落新妇苷5mg，加水使成15ml；在上述供试品中加乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。其它同实施例1。
实施例12：实施例1中所述供试品溶液的制备方法更换为：称取供试品(如称取09090505批消结安胶囊内容物1.5g)，供试品含落新妇苷5mg，加水15ml，超声处理15分钟；或量取供试品(如量取09080201批消结安口服液10ml)，供试品含落新妇苷5mg，加水使成15ml；在上述供试品中加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干；残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。其它同实施例1。
实施例13：实施例1中所述供试品溶液、对照品溶液和对照药材溶液的溶剂均由甲醇更换为乙醇。其它同实施例1。
实施例14：用高效液相色谱法(《中国药典》一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.3％冰醋酸溶液(35∶65)为流动相，检测波长为291nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取落新妇苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 称取供试品，供试品含落新妇苷2.5mg，精密称定；或精密量取供试品，供试品含落新妇苷2.5mg，蒸干；在上述供试品中精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
测定结果，消结安胶囊(批号09090505)含土茯苓以落新妇苷(C21H22O11)计为3.52mg·g-1；消结安口服液(批号09080201)含土茯苓以落新妇苷(C21H22O11)计为0.258mg·ml-1。
实施例15：实施例14中所述流动相更换为甲醇-0.1％磷酸溶液(35∶65)，其它同实施例14。
实施例16：实施例14中所述流动相更换为乙腈-0.3％冰醋酸溶液(15∶85)，其它同实施例14。
实施例17：实施例14中所述流动相更换为乙腈-0.1％磷酸溶液(15∶85)，其它同实施例14。
实施例18：实施例14中所述流动相更换为甲醇-0.1％甲酸溶液(35∶65)，其它同实施例14。
实施例19：实施例14中所述流动相更换为甲醇-0.1％三氟乙酸溶液(35∶65)，其它同实施例14。
实施例20：实施例14中所述流动相更换为甲醇-乙腈-0.3％冰醋酸溶液(20∶10∶70)，其它同实施例14。
实施例21：实施例14中所述供试品溶液的制备中的提取方法超声处理15分钟更换为加热回流30分钟或加热回流60分钟，其它同实施例14。
实施例22：实施例14中所述供试品溶液的制备中的提取溶剂甲醇更换为30％甲醇、60％甲醇、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇，对照品溶液用相应溶剂溶解制备，其它同实施例14。
实施例23：实施例14中所述供试品溶液的制备更换为：称取供试品(如称取09090505批消结安胶囊内容物0.3g)，供试品含落新妇苷1mg，精密称定，加水25ml，超声处理30分钟；或精密量取供试品(如精密量取09080201批消结安口服液2ml)，供试品含落新妇苷1mg，加水使成25ml；在上述供试品中加乙酸乙酯振摇提取4次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。其它同实施例14。
实施例24：实施例14中所述供试品溶液的制备更换为：称取供试品(如称取09090505批消结安胶囊内容物0.3g)，供试品含落新妇苷1mg，精密称定，加水25ml，超声处理30分钟；或精密量取供试品(如精密量取09080201批消结安口服液2ml)，供试品含落新妇苷1mg，加水使成25ml；在上述供试品中加水饱和正丁醇振摇提取6次，每次25ml，合并正丁醇液，蒸干；残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。其它同实施例14。
Claims (6)
1.一种消结安制剂的质量检测及含量测定方法，其特征在于是针对消结安制剂中土茯苓的专属性成分作为指标性成分制订的薄层色谱鉴别和/或含量测定方法，所述的专属性成分为落新妇苷，所述的消结安制剂是由以下原料药制成的中药复方制剂：功劳木1100、三叉苦750、益母草750、鸡血藤750、土茯苓900、连翘750；
所述的薄层色谱鉴别方法为：
称取供试品，供试品含落新妇苷0.1～10mg；或量取供试品，供试品含落新妇苷0.1～10mg，浓缩至干；在上述供试品中加入5～50ml溶剂，所述的溶剂为体积百分比30～99％的甲醇、甲醇、甲醇-乙酸乙酯5～95∶95～5、乙酸乙酯、正丁醇、体积百分比30～95％的乙醇、无水乙醇中的任意一种，超声处理5～60分钟，或加热回流10～90分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至1～10ml，或滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇1～10ml使溶解，作为供试品溶液；
另取落新妇苷对照品适量，加甲醇或乙醇制成每1ml含0.2～10mg的溶液，作为对照品溶液；
再取土茯苓对照药材0.1～2g，同法制成对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液1～10μl和对照品溶液1～10μl、对照药材溶液1～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用三氯甲烷-甲醇-甲酸3～5∶0.5～1.5∶0.05、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸4～6∶3～5∶2、甲苯-乙酸乙酯-甲酸11～15∶30～35∶9、环己烷-丙酮-甲酸0.5～1.5∶5～7∶0.05中的任意一种作为展开剂，展开，取出，晾干，以5％香草醛10％硫酸乙醇溶液、2％三氯化铁乙醇溶液、1％三氯化铝乙醇溶液中的任意一种作为显色剂，显色，检视；供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的含量测定方法为用高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-酸水溶液20～60∶80～40、乙腈-酸水溶液10～30∶90～70、甲醇-乙腈-酸水溶液5～55∶5～35∶90～10中的任意一种为流动相，检测波长为291±5nm；理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 取落新妇苷对照品适量，精密称定，加体积百分比30％～99％的甲醇或甲醇制成每1ml含10～500μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 称取供试品，供试品含落新妇苷0.1～20mg，精密称定；或精密量取供试品，供试品含落新妇苷0.1～20mg，蒸干；在上述供试品中精密加入体积百分比30％～99％的甲醇或甲醇或体积百分比30％～95％的乙醇15～150ml，称定重量，超声处理10～60分钟，或加热回流10～90分钟，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2～50μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的消结安制剂的质量检测及含量测定方法，其特征在于所述的薄层 色谱鉴别方法为：
称取供试品，供试品含落新妇苷5mg；或量取供试品，供试品含落新妇苷5mg，浓缩至干；在上述供试品中加甲醇15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取落新妇苷对照品3mg，加甲醇1ml使溶解，作为对照品溶液；再取土茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸4∶1∶0.05为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.如权利要求1所述的消结安制剂的质量检测及含量测定方法，其特征在于所述的薄层色谱鉴别方法中供试品溶液按下述方法制备：称取供试品，供试品含落新妇苷5mg，加水15ml，超声处理15分钟；或量取供试品，供试品含落新妇苷5mg，加水使成15ml；在上述供试品中加乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；或加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干；残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
4.如权利要求1所述的消结安制剂的质量检测及含量测定方法，其特征在于所述的含量测定方法为用高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.3％冰醋酸溶液35∶65为流动相，检测波长为291nm；理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 取落新妇苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 称取供试品，供试品含落新妇苷2.5mg，精密称定；或精密量取供试品，供试品含落新妇苷2.5mg，蒸干；在上述供试品中精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.如权利要求1所述的消结安制剂的质量检测及含量测定方法，其特征在于所述的含量测定方法中所述色谱条件流动相中所用的酸水是体积百分比为0.05～5.0％的冰醋酸水溶液、0.01～1.0％磷酸水溶液、0.05～5.0％甲酸水溶液或0.01～0.5％三氟乙酸水溶液中的任一种。
6.如权利要求1所述的消结安制剂的质量检测及含量测定方法，其特征在于所述的含量测定方法中供试品溶液按下述方法制备：称取供试品，供试品含落新妇苷1mg，精密称定，加水25ml，超声处理30分钟；或精密量取供试品，供试品含落新妇苷1mg，加水使成25ml；在上述供试品中加乙酸乙酯振摇提取4次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；或加水饱和正丁醇振摇提取6次，每次25ml，合并正丁醇液，蒸干；残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
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