CN105929080A - 一种治疗神经根型颈椎病的中药制剂的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗神经根型颈椎病的中药制剂的含量检测方法。该方法通过高效液相色谱法进行测定，包括川芎的含量测定、白芍的含量测定、葛根的含量测定中的一种或几种。本发明提供的治疗神经根型颈椎病的中药制剂含量测定方法，对治疗神经根型颈椎病的中药制剂质量标准进行了提高、完善，与现行标准相比，该方法操作简便、快速、检测成本低、测定结果准确，且能较全面反映其配方组成，确保了治疗神经根型颈椎病中药制剂质量的安全、均一、稳定、有效、可控。

Description

一种治疗神经根型颈椎病的中药制剂的检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂的检测方法，特别涉及一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，属于医药技术领域。
背景技术
颈痛颗粒收载于中国药典2015年版一部。具有活血化瘀、行气止痛的功效。用于神经根型颈椎病属血瘀气滞、脉络闭阻证。证见颈、肩及上肢疼痛，发僵或窜麻、窜痛。
颈痛颗粒是由如下重量配比的药材制成的：三七250克、川芎750克、延胡索500克、羌活1000克、白芍750克、威灵仙1000克、葛根750克。颈痛胶囊由于效果良好，经临床验证，疗效显著，在临床上备受患者青睐。目前颈痛颗粒质量标准收载了川芎、延胡索乙素、紫花前胡苷、芍药苷、齐墩果酸、葛根的鉴别试验，未对其进行含量测定；颈痛颗粒含量测定项下仅收载了三七中人参皂苷的含量测定方法，现有技术中也未发现对于颈痛颗粒的其他质量检测方法。因此，造成颈痛颗粒质量检测不精准，质量标准有待提高。
中国专利文件CN 105168392A一种速效心痛滴丸及其含量测定方法，公开了川芎的含量测定方法，上述专利中检测的是川芎中的藁本内酯，而并未检测川芎中的阿魏酸。
中国专利文件CN 101738437A检测治疗抑郁症的中药解郁丸中芍药苷含量的方法；中国专利文件CN 103852541A一种治疗糖尿病的中药制剂中粉葛的含量测定方法，公开了一种治疗糖尿病的中药制剂中粉葛的含量测定方法；以上均是芍药或葛根有效成分的单独检测，颈痛颗粒组方复杂，若每一个有效成分都单独检测，检测成本较高。
综上所述，现有技术中无能够准确测定颈痛颗粒中川芎、芍药、葛根成分含量的方法，而对其他药材中的川芎、芍药、葛根的含量测定方法也并不适用于颈痛颗粒制剂。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种治疗神经根型颈椎病的中药制剂的检测方法。
发明概述
本发明使用高效液相色谱法对一种治疗神经根型颈椎病中药制剂中的川芎、芍药、葛根进行了含量测定，该方法操作简便，分析数据准确，确保产品质量安全、稳定、可控。
术语说明：
颈痛颗粒：收载于中国药典2015年版一部。是由如下重量配比的原料制成的：三七250克、川芎750克、延胡索500克、羌活1000克、白芍750克、威灵仙1000克、葛根750克。
本发明所述的治疗神经根型颈椎病的中药制剂包括颈痛颗粒以及按照颈痛颗粒的配方组成制备而成的药学上可接受的任何剂型。
本发明的技术方案如下：
一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，包括如下含量测定方法中的一种或几种：
(1)川芎的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为3-8:22-27:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5-1.0％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20-30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取颈痛颗粒研细，取4-6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数70-90％甲醇50-60mL，密塞，称定重量，振摇，超声30-45分钟，放冷，用体积分数70-90％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
(2)葛根、芍药的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比20-30:70-80的甲醇-质量浓度0.1-0.3％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含80-90μg的溶液，即得；取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60-70μg的溶液，即得；
供试品溶液制备：取颈痛颗粒研细，取4-6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数为50-70％甲醇50-60mL，密塞，称定重量，振摇，超声30-45分钟，放冷，用体积分数50-70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
根据本发明优选的，所述的(1)川芎的含量测定色谱条件与系统适用性试验中流动相为体积份数比6:24:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸。
根据本发明优选的，所述的(2)葛根、芍药的含量测定色谱条件与系统适用性试验中流动相为体积份数比25:75的甲醇-质量浓度0.1％磷酸。
根据本发明优选的，所述的(1)川芎的含量测定或(2)葛根、芍药的含量测定色谱条件与系统适用性试验中流动相流速为1.0mL/min。
根据本发明优选的，所述的(1)川芎的含量测定或(2)葛根、芍药的含量测定供试品溶液的制备中超声处理时间为30分钟。
根据本发明优选的，所述的(1)川芎的含量测定供试品溶液的制备中提取溶剂甲醇溶液的体积分数为70％。
根据本发明优选的，所述的(2)葛根、芍药的含量测定中提取溶剂甲醇溶液的体积分数为50％。
根据本发明进一步优选的，一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，包括如下含量测定方法中的一种或几种：
(1)川芎的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比6:24:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用体积分数70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
(2)葛根、芍药的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75的甲醇-质量浓度0.1％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含80μg的溶液，即得；取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60μg的溶液，即得；
供试品溶液制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用体积分数70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明的有益效果：
本发明使用高效液相色谱法对一种治疗神经根型颈椎病中药制剂中的川芎、芍药、葛根进行了含量测定，本发明中采用同一个样品处理方法，同一个液相检测条件，双波长检测白芍和葛根的有效成分芍药苷及葛根素，检测灵敏度高，方法重现性好，同时大大节省了样品分析检测成本。与现行标准相比，本发明的检测方法操作简便、快速、检测成本低、测定结果准确，重现性好、且能较全面反映颈痛颗粒制剂的配方组成。本发明可用于对颈痛颗粒制剂进行含量测定。
附图说明：
图1为阿魏酸含量测定阴性对照色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图2为阿魏酸对照品高效液相色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图3为颈痛颗粒中阿魏酸含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图4为阿魏酸线性关系图；横坐标是浓度，单位：mg/mL；纵坐标是峰面积，单位：微伏·秒。
图5为15101073批颈痛颗粒中阿魏酸含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图6为15101074批颈痛颗粒中阿魏酸含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图7为15101075批颈痛颗粒中阿魏酸含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图8为葛根素含量测定阴性对照色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图9为葛根素对照品高效液相色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图10为颈痛颗粒中葛根素含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图11为芍药苷含量测定阴性对照色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图12为芍药苷对照品高效液相色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图13为颈痛颗粒中芍药苷含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图14为葛根素线性关系图；横坐标是浓度，单位：mg/mL；纵坐标是峰面积，单位：微伏·秒。
图15为芍药苷线性关系图；横坐标是浓度，单位：mg/mL；纵坐标是峰面积，单位：微伏·秒。
图16为15101073批颈痛颗粒中葛根素含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图17为15101074批颈痛颗粒中葛根素含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图18为15101075批颈痛颗粒中葛根素含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图19为15101073批颈痛颗粒中芍药苷含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图20为15101074批颈痛颗粒中芍药苷含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
图21为15101075批颈痛颗粒中芍药苷含量检测色谱图；横坐标是时间，单位：分钟；纵坐标是电压，单位：微伏。
具体实施方式
下面结合实验例和实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实验例1：川芎的含量测定
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：waters e2695，waters2998二极管阵列检测器，Empower3工作站；METTLER TOLEDO XPE205电子天平；
对照品：阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)批号：0773-9910；
供试样品：颈痛颗粒(山东明仁福瑞达制药股份有限公司)批号：15101073、15107074、15101075。
2.色谱条件
照高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比6:24:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm，流速1.0mL/min。
3.对照品的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20μg的溶液，即得。
4.供试品溶液制备：取颈痛颗粒适量，研细，取约4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.提取方法选择实验
表1提取方法选择表
处理方法 浸泡 超声
阿魏酸含量(mg/g) 0.86 0.93
结果表明：超声较浸泡提取更加充分，故选择超声为供试品的处理方法。
6.提取溶剂选择实验
表2提取溶剂选择表
结果表明：体积分数70％甲醇与甲醇提取效果基本一致，甲醇成本较高，考虑本品的溶解性及安全性，选择70％甲醇为提取溶剂。
7.提取时间选择实验
表3提取时间选择表
超声时间(min) 15 30 45
阿魏酸含量(mg/g) 0.84 0.93 0.93
结果表明：阿魏酸在30min与45min时，提取程度基本一致，说明阿魏酸在30min时已经基本提取完毕，故选择30min为提取时间。
8.系统适用性试验及阴性干扰试验
在上述色谱条件下，分别精密量取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见附图1-3。结果表明，供试品色谱图中阿魏酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性对照无干扰。
9.标准曲线的制备和线性关系考察
精密量取阿魏酸对照品贮备溶液(49.4μg/mL)2mL、3mL、4mL、5mL、6mL，分别置10mL容量瓶中，用体积分数70％甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)线性关系良好。阿魏酸线性关系见图4。
表4阿魏酸标准曲线结果表
序号 浓度(μg/mL) 峰面积(A)
1 9.88 532054
2 14.82 785896
3 19.76 1063250
4 24.7 1305468
5 29.64 1594643
回归方程：y＝53537x-1637
相关系数：R＝0.9997
10.精密度试验
分别精密量取阿魏酸对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.63％。结果表明，仪器精密度良好。
表5阿魏酸精密度数据表
11.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算峰面积的相对标准偏差，RSD＝0.60％。结果表明，供试品中阿魏酸在6小时内溶液稳定性良好。
表6稳定性数据表
12.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中阿魏酸的含量，RSD＝1.57％。结果表明，分析方法重复性良好。
表7重复性数据表
13.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入阿魏酸对照品，此功能定其含量，计算回收率，阿魏酸平均回收率为96.80％，RSD＝1.35％。表明该测定方法测定结果准确。
表8回收率数据表
14.样品测定
取颈痛颗粒3批，测定并计算阿魏酸的含量，结果如下。
表9含量数据表
批号 含量(mg/g)
15101073 0.91
15101074 0.90
15101075 0.92
阿魏酸含量高效液相检测图谱见图5-图7。
结论：15101073、15101074及15101075批颈痛颗粒中阿魏酸的含量分别为：0.91mg/g、0.90mg/g、0.92mg/g。本发明含量测定方法能够稳定检测出颈痛颗粒中主药川芎中阿魏酸的含量，检测灵敏度高，方法重现性好。
综上：本发明含量测定的方法通过控制颈痛颗粒中主药川芎中阿魏酸的含量，从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，同时研究发现了以体积份数比30:70的甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸流动相的检测方法。
实验例2：葛根、芍药的含量测定
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：waters e2695，waters2998二极管阵列检测器，Empower3工作站；METTLER TOLEDO XPE205电子天平；
对照品：葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)批号：110752-200511；
芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)批号：110736-200737；
供试样品：颈痛颗粒(山东明仁福瑞达制药股份有限公司)批号：15101073、15101074、15101075。
2.色谱条件
照高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75甲醇-质量浓度0.1％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm，流速1.0mL/min。
3.对照品的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含80μg的溶液，即得。取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60μg的溶液，即得。
4.供试品溶液制备：取颈痛颗粒适量，研细，取约4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.提取方法选择实验
表10提取方法选择表
结果表明：超声较浸泡提取更加充分，故选择超声为供试品的处理方法。
6.提取溶剂选择实验
表11提取溶剂选择表
结果表明：质量浓度40％甲醇、50％甲醇及70％甲醇提取效果基本一致，综合考虑成本并保证本品中葛根素和芍药苷能被充分提取，选择50％甲醇为提取溶剂。
7.提取时间选择实验
表12提取时间选择表
结果表明：葛根素和芍药苷在30min与40min时，提取程度基本一致，说明在30min时两种成分已经基本提取完毕，故选择30min为提取时间。
8.系统适用性试验及阴性干扰试验
在上述色谱条件下，分别精密量取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图8-13。结果表明，供试品色谱图中葛根素和芍药苷与其相邻色谱峰的分离度大于均1.5，且阴性对照无干扰。
9.标准曲线的制备和线性关系考察
(1)葛根素标准曲线的制备和线性关系考察
精密量取葛根素对照品贮备溶液(0.1594mg/mL)3mL、4mL、5mL、6mL、7mL，分别置10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)线性关系良好。葛根素线性关系见图14。
表13葛根素标准曲线结果表
序号 浓度(mg/mL) 峰面积(A)
1 0.0478 2109898
2 0.0638 2887965
3 0.0797 3616012
4 0.0956 4356784
5 0.1116 4998756
回归方程：y＝4.55E+07x–2.93E+04
相关系数：R＝0.9994
(2)芍药苷标准曲线的制备和线性关系考察
精密量取芍药苷对照品贮备溶液(0.1224mg/mL)3mL、4mL、5mL、6mL、7mL，分别置10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积(A)对对照品浓度(C)线性关系良好。芍药苷线性关系见图15。
表14芍药苷标准曲线结果表
序号 浓度(mg/mL) 峰面积(A)
1 0.0367 478124
2 0.0490 629878
3 0.0612 793896
4 0.0734 956532
5 0.0857 1099987
回归方程：y＝1.28E+07x+6521
相关系数：R＝0.9997
10.精密度试验
(1)分别精密量取葛根素对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.25％。结果表明，仪器精密度良好。
表15葛根素精密度数据表
(2)分别精密量取芍药苷对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差，RSD＝0.34％。结果表明，仪器精密度良好。
表16芍药苷精密度数据表
11.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察6小时，计算葛根素和芍药苷峰面积的相对标准偏差，葛根素峰面积RSD＝0.51％，芍药苷峰面积RSD＝0.33％。结果表明，供试品中葛根素和芍药苷在6小时内溶液稳定性良好。
表17葛根素稳定性数据表
表18芍药苷稳定性数据表
12.重复性试验
取本品，重复测定6次，计算样品中葛根素和芍药苷的含量，葛根素RSD＝0.93％，芍药苷RSD＝1.91％。结果表明，分析方法重复性良好。
表19葛根素重复性数据表
表20芍药苷重复性数据表
13.回收率试验
精密称取同一批样品6份，精密加入葛根素和芍药苷对照品，此功能定其含量，计算回收率，葛根素平均回收率为95.31％，RSD＝1.05％，芍药苷平均回收率为93.75％，RSD＝1.73％，表明该测定方法测定结果准确。
表21葛根素回收率数据表
表22芍药苷回收率数据表
14.样品测定
取颈痛颗粒3批，测定并计算葛根素和芍药苷的含量，结果如下。
表23含量数据表
葛根素含量检测高效液相色谱图见图16-图18。芍药苷含量检测高效液相色谱图见图19-21。
结论：15101073、15101074及15101075批颈痛颗粒中葛根素的含量分别为：8.28mg/g、8.31mg/g、8.35mg/g；芍药苷的含量分别为3.53mg/g、3.49mg/g、3.57mg/g。本发明含量测定方法能够稳定检测出颈痛颗粒中葛根素和芍药苷的含量，检测灵敏度高，方法重现性好。
综上：本发明含量测定的方法通过控制颈痛颗粒中主药葛根中葛根素的含量以及白芍中芍药苷的含量，从而控制制剂的质量。本法比较了不同溶剂、不同提取时间、不同提取方法等供试品处理方法，并且研究发现了以体积份数比25:75甲醇-0.1％磷酸为流动相的检测方法，采用双波长同时测定葛根素和芍药苷的含量。
以下实施例1-3中所检测的颈痛颗粒购自山东明仁福瑞达制药股份有限公司。
实施例1：
一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，包括如下含量测定方法：
(1)川芎的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比6:24:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入质量浓度70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用质量浓度70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
(2)葛根、芍药的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75的甲醇-质量浓度0.1％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含80μg的溶液，即得；取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60μg的溶液，即得；
供试品溶液制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入质量浓度70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用质量浓度70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
实施例2：
一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，包括如下含量测定方法：
川芎的含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比8:22:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.8％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数80％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声40分钟，放冷，用体积分数80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
实施例3：
一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，包括如下含量测定方法：
葛根、芍药的含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-质量浓度0.5％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含70μg的溶液，即得；取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60μg的溶液，即得；
供试品溶液制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数75％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声35分钟，放冷，用体积分数75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

Claims (8)

1.一种治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，包括如下含量测定方法中的一种或几种：
(1)川芎的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比为3-8:22-27:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5-1.0％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20-30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取颈痛颗粒研细，取4-6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数70-90％甲醇50-60mL，密塞，称定重量，振摇，超声30-45分钟，放冷，用体积分数70-90％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
(2)葛根、芍药的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比20-30:70-80的甲醇-质量浓度0.1-0.3％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含80-90μg的溶液，即得；取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60-70μg的溶液，即得；
供试品溶液制备：取颈痛颗粒研细，取4-6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数为50-70％甲醇50-60mL，密塞，称定重量，振摇，超声30-45分钟，放冷，用体积分数50-70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，所述的(1)川芎的含量测定色谱条件与系统适用性试验中流动相为体积份数比6:24:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸。
3.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，所述的(2)葛根、芍药的含量测定色谱条件与系统适用性试验中流动相为体积份数比25:75的甲醇-质量浓度0.1％磷酸。
4.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，所述的(1)川芎的含量测定或(2)葛根、芍药的含量测定色谱条件与系统适用性试验中流动相流速为1.0mL/min。
5.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，所述的(1)川芎的含量测定或(2)葛根、芍药的含量测定供试品溶液的制备中超声处理时间为30分钟。
6.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，所述的(1)川芎的含量测定供试品溶液的制备中提取溶剂甲醇溶液的体积分数为70％。
7.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，所述的(2)葛根、芍药的含量测定中提取溶剂甲醇溶液的体积分数为50％。
8.如权利要求1所述的治疗神经根型颈椎病中药制剂的检测方法，其特征在于，包括如下含量测定方法中的一种或几种：
(1)川芎的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比6:24:70的乙腈-甲醇-质量浓度0.5％冰醋酸为流动相，检测波长为321nm；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含20μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取颈痛颗粒研细，取4g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积分数70％甲醇50mL，密塞，称定重量，振摇，超声30分钟，放冷，用体积分数70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
(2)葛根、芍药的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：
照中国药典2015年版通则0512高效液相色谱法测定；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75的甲醇-质量浓度0.1％磷酸为流动相，葛根素检测波长为250nm，芍药苷检测波长为230nm；
对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含80μg的溶液，即得；取芍药苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL含60μg的溶液，即得；
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