CN103235082B - 精乌胶囊的检测方法 - Google Patents
精乌胶囊的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103235082B CN103235082B CN201310151037.XA CN201310151037A CN103235082B CN 103235082 B CN103235082 B CN 103235082B CN 201310151037 A CN201310151037 A CN 201310151037A CN 103235082 B CN103235082 B CN 103235082B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- medicinal material
- need testing
- methyl alcohol
- add
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了 一种胶囊剂的检测方法 ，该胶囊剂是用 何首乌、制黄精、酒蒸女贞子和墨旱莲 制备而成。 本发明在现有质量检测基础上增加了 对 何首乌和女贞子 的鉴别以及对 游离蒽醌和结合蒽醌的含量测测定， 改进了对 黄精和墨旱莲的鉴别以及对 2,3,5,4 ′ - 四羟基二苯乙烯 -2-O- β -D- 葡萄糖苷（ C20H22O9 ）含量测定 ，可以对精乌胶囊的主要药物成分进行更有效控制 ，使得精乌胶囊的质量监控水平有了很大的提高。既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物的检测方法，特别是一种用于主治失眠多梦、耳鸣健忘、头发脱落及须发早白的中药胶囊剂（通用名称或药品名称精乌胶囊）的检测方法，属于制药技术领域。
背景技术
精乌胶囊是一种比较受市场欢迎的产品，具有补肝肾、益精血及壮筋骨的功效，可用于失眠多梦，耳鸣健忘，头发脱落及须发早白等症状。精乌胶囊配方中的制何首乌、黄精（制）、女贞子（酒蒸）和墨旱莲分别是精乌胶囊的特征性指标成份。在现有的精乌胶囊质量标准中，不包含对何首乌和女贞子的鉴别以及游离蒽醌和结合蒽醌的含量限度，而且对黄精和墨旱莲的鉴别以及对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）含量测定方法也有不足，因此对产品质量的控制存在不足。为了更进一步保证该产品的质量及更有利于对该产品质量的监督、管理，所以有必要对该产品的检测方法进行改进，从而更进一步保证该产品的质量和疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种精乌胶囊的检测方法。本发明在现有质量检测基础上增加了对何首乌和女贞子的鉴别以及对游离蒽醌和结合蒽醌的含量测定，改进了对黄精和墨旱莲的鉴别以及对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）含量测定，可以对精乌胶囊的主要药物成分进行更有效控制。
本发明的目的可通过下列技术方案来实现：精乌胶囊的检测方法，它包括以下步骤：
性状：本品为胶囊剂，内容物为棕黄色粉末；气微香，味微苦涩；
鉴别：（1）取本品内容物0.2g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，通过大孔树脂柱（内径1.2cm，柱高15cm），用水100ml洗脱，弃去洗脱液，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材0.25g，加乙醇50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以7∶3的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开至3.5cm，取出，晾干，再以20∶1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开至7.5cm，取出， 晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（2）取本品内容物2.7g，加70%乙醇30ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄精对照药材3g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶4∶1∶1的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以用50%硫酸乙醇配制的5%香草醛溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（3）取本品内容物2.7g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣加3∶2的无水乙醇-三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材0.5g，加水50ml，加热微沸1小时，滤过，蒸干，残渣加3∶2的无水乙醇-三氯甲烷1ml使溶解，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以50∶1的环已烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（4）取本品内容物5.4g，加70%甲醇25ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理45分钟，滤过，滤液蒸至无醇味，加水15ml，搅匀，滤过，滤液置分液漏斗中，用60～90℃的石油醚振摇提取3次，每次20ml，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材0.5g，加水50ml，加热微沸1小时，取下，放冷，滤过，滤液浓缩至30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以20∶5∶1的30-60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的精乌胶囊的检测方法还包括：
检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定；
含量测定：
（1）2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，照高效液相色谱法测定，避光操作；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶70的甲醇-水为流动相；检测波长320nm；理论板数以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加稀乙醇45ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理45分钟，取下，放冷，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒含制何首乌以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）计，不得少于6.0mg；
（2）游离蒽醌和结合蒽醌，照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以80∶20的甲醇-0.1%磷酸为流动相；检测波长254nm；理论板数以大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml含大黄素20μg、含大黄素甲醚8μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，取下，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液A（测游离蒽醌用）；另精密吸取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，水浴蒸干，加8%盐酸溶液20ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理5分钟，加三氯甲烷20ml，水浴中加热回流1小时，取出，立即冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次15ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液B（测总蒽醌用）；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与两种供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒游离蒽醌含量以大黄素（C15H10O5）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.25mg/粒；本品每粒结合蒽醌含量（结合蒽醌含量为总蒽醌含量减去游离蒽醌含量）以大黄素（C15H10O5）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.25mg/粒。
前述的精乌胶囊的检测方法中，所述精乌胶囊，按照重量份计，是用制何首乌500g、制黄精500g、酒蒸女贞子704g和墨旱莲250g，按下述方法制备成1000粒胶囊剂；以上四味，取制何首乌200g，粉碎成细粉，剩余制何首乌与其余黄精等三味加水煎煮三次，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.1，加入乙醇使含醇量达60%，充分搅拌，静置24小时，取上清液回收乙醇并浓缩至稠膏，冷后加入制何首乌细粉，搅匀后，烘干，粉碎，装入胶囊，制成1000粒，即得；
与现有技术比较，本发明在现有质量检测基础上增加了对何首乌和女贞子的鉴别以及对游离蒽醌和结合蒽醌的含量测测定，改进了对黄精和墨旱莲的鉴别以及对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）含量测定，可以对精乌胶囊的主要药物成分进行更有效控制，使得精乌胶囊的质量监控水平有了很大的提高。既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
申请人经过多次对何首乌药材、黄精药材、女贞子药材、墨旱莲药材进行摸索试验，最后确定为以上鉴别方法。
对何首乌药材进行摸索试验，试验记录如表1所示：
表1
试验结果表明，本发明提供的对何首乌的鉴定方法（对应试验号3）可行，斑点重现性好，分离效果好，无拖尾现象。
对黄精药材进行摸索试验，试验记录如表2所示：
表2
试验结果表明：本发明提供的对黄精的鉴别方法（对应试验号3）可行，斑点重现性好，分离效果好，无拖尾现象。
对女贞子药材进行摸索试验，试验记录如表3所示：
表3
试验结果表明：本发明提供的对女贞子的鉴别方法（对应试验号3）可行，斑点重现性好，分离效果好，无拖尾现象。
对墨旱莲材进行摸索试验，试验记录如表4所示：
表4
试验结果表明：本发明提供的对墨旱莲的鉴别方法（对应试验号3）可行，斑点重现性好，分离效果好，无拖尾现象。
为了验证本发明提供的含量测定方法的合理性，申请人对该方法进行了试验研究。
2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定：
1、仪器：LC-10AVP系列高效液相色谱仪（双泵，日本岛津），LC-10AVP系列高效液相色谱仪（单泵，日本岛津），CH-250型超声波清洗机（北京创新德超声电子研究所220V、50HZ-60HZ），AUW220D电子天平（日本岛津）。
2、试药：2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品（批号1241-201102，中国药品生物制品检定所），乙醇为分析纯，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水（自制）。
3、专属性：按处方量配制缺制黄精药材的阴性对照品，依照本发明提供的含量测定方法测定，从阴性对照样品溶液的检测图谱分析，其它成分对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的测定无干扰。
4、线性关系考察：精密称取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品31.6821mg置25ml容量瓶中，加稀乙醇至刻度，溶解摇匀，再分别精密量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml置25ml容量瓶中加稀乙醇稀释至刻度摇匀，制成10.138272μg/ml、20.276544μg/ml、30.414816μg/ml、40.553088μg/ml、50.69136μg/ml的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液，分别取上述5种对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，进行2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷测定，以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积A对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷浓度C进行线性回归，线性回归方程：y=2.4818×104C+29714.44842，线性范围：10.138272μg/ml～50.69136μg/ml，相关系数r=0.99969，实验结果见表1。
表1线性关系
实验结果表明，以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷浓度在10.138272μg/ml～50.69136μg/ml范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系。
5、重复性实验：取同一供试品（批号110207），按本发明提供的供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液6份，按本发明所提供的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定方法对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量进行测定，结果见表2。
表2重复性测定结果(n=6)
6、中间精密度实验：取同一供试品（批号110208）依本发明提供的供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液6份，在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同仪器分别按本发明所提供的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定方法对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量进行测定，结果见见表3和4。
表3仪器1中间精密度测定结果(n=6)
表4仪器2中间精密度测定结果（n=6）
根据上述12份实验结果，计算在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同仪器分别测定的平均含量为：8.49975mg/粒，相对标准差（RSD%）为0.12%，表明本发明所提供的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定方法中间精密度良好。
7、稳定性试验：精密量取同一供试品(批号110209)依本发明提供的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按规定的时间进样，共测6次,以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积计，结果见表5。
表5稳定性试验
结果表明,供试品在10h内,2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积积分值前后无明显变化。
8、回收率试验：采用加样回收法。精密称取批号：100201的精乌胶囊（含量为8.07mg/粒）供试品9份,按供试品含2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷量的80%、100%、120%，精密加入2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照溶液（1.267284mg/ml）分别0.8ml、1.0ml、1.2ml。各浓度平均3份，每份检测2次，按本发明提供的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，各取10μl注入液相色谱仪，进行2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷测定，结果见表6。
表6加样回收率测定（n=9）
结果表明，2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的回收率为99.62%，RSD=0.31%。
9、样品测定：分别精密称取供试品（批号：081001、090601、090701、090901、090902、091101、091102、100201、100401、100402），依照本发明提供的供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别对10批精乌胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量进行测定，结果见表7。
表710批样品测定结果（n=2）
| 批号 | 含量1（mg/粒） | 含量2（mg/粒) | 平均含量（mg/粒) |
| 081001 | 7.99 | 8.10 | 8.0 |
| 090601 | 9.36 | 9.34 | 9.3 |
| 090701 | 10.74 | 10.78 | 10.8 |
| 090901 | 10.12 | 10.27 | 10.2 |
| 090902 | 7.75 | 7.88 | 7.8 |
| 091101 | 7.91 | 7.85 | 7.9 |
| 091102 | 7.12 | 6.95 | 7.0 |
| 100201 | 8.07 | 8.08 | 8.1 |
| 100401 | 6.88 | 6.86 | 6.9 |
| 100402 | 8.37 | 8.38 | 8.4 |
根据上述10批样品测定结果，规定本品每粒含制何首乌以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）计，不得少于6.0mg/粒。
游离蒽醌和结合蒽醌：
1、仪器：LC-10AVP系列高效液相色谱仪（双泵，日本岛津），LC-10AVP系列高效液相色谱仪（单泵，日本岛津），CH-250型超声波清洗机（北京创新德超声电子研究所220V、50HZ-60HZ），AUW220D电子天平（日本岛津）。
2、试药：大黄素对照品（批号110752-200912，中国药品生物制品检定所），大黄素甲醚对照品（批号10543-200909，中国药品生物制品检定所），三氯甲烷和磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水（自制）。
3、专属性：按处方量配制缺制何首乌药材的阴性对照品，依照本发明提供的含量测定方法测定，从阴性对照样品溶液的检测图谱分析，其它成分对大黄素、大黄素甲醚的测定无干扰。
4、线性关系考察：精密分别称取大黄素对照品31.5279mg、大黄素甲醚对照品12.5681mg置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解摇匀，再分别精密量取0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，置25ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀，制成大黄素含量为10.088928μg/ml、15.133392μg/ml、20.177856μg/ml、25.22232μg/ml、30.266784μg/ml，大黄素甲醚含量为4.021792μg/ml、6.032688μg/ml、8.043584μg/ml、10.05448μg/ml、12.065376μg/ml的混合对照品溶液，各取10μl注入高效液相色谱仪，进行大黄素、大黄素甲醚测定，以大黄素、大黄素甲醚峰面积A对大黄素、大黄素甲醚浓度C进行线性回归，线性回归方程：大黄素y=2.6187×104C+36512.4786，线性范围：10.088928μg/ml～30.266784μg/ml，相关系数r=0.99989；大黄素甲醚y=1.3641×104C+27432.6627，线性范围：4.021792μg/ml～12.065376μg/ml，相关系数r=0.99993，实验结果见表1和2。
表1大黄素线性关系
表2大黄素甲醚线性关系
根据实验结果，以大黄素、大黄素甲醚峰面积与进样量呈良好线性关系。
5、重复性实验：取同一供试品（批号110207）依本发明提供的供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液6份，按本发明提供的大黄素和大黄素甲醚含量的测定方法测定大黄素和大黄素甲醚含量，结果见表3。
表3大黄素、大黄素甲醚HPLC重复性测定结果（n=6）
结果表明，大黄素含量的平均值为0.4552mg/粒，标准差S为：0.0291mg/粒，相对标准差RSD为：0.32%；大黄素甲醚含量的平均值为0.3751mg/粒，标准差S为：0.0198mg/粒，相对标准差RSD为：0.24%，表明本发明所提供的大黄素和大黄素甲醚含量的测定方法重复性好。
6、中间精密度实验：取同一供试品（批号110208）依本发明提供的供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液6份，在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同仪器分别依法测定，结果见表4和5。
表4仪器1中间精密度测定结果（n=6）
表5仪器2中间精密度测定结果（n=6）
根据上述12份实验结果，计算在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同仪器分别测定的大黄素含量的平均值为0.4365mg/粒，相对标准差RSD为：0.12%；大黄素甲醚含量的平均值为0.3471mg/粒，相对标准差RSD为：0.12%，表明本发明提供的大黄素和大黄素甲醚含量的测定方法中间精密度良好。
7、稳定性试验：精密量取同一供试品(批号110209)按本发明提供的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按规定的时间进样，共测6次,以大黄素峰面积及大黄素甲醚峰面积，结果见表6。
表6稳定性试验
结果表明,供试品在10h内,大黄素峰面积及大黄素甲醚峰面积的积分值前后无明显变化。
8、回收率试验：采用加样回收法。精密称取批号：090901的精乌胶囊（游离蒽醌含量为0.334mg/粒）供试品9份,按供试品含2大黄素量的80%、100%、120%精密加入大黄素对照溶液（1.261116mg/ml）分别0.3ml、0.4ml、0.5ml。各浓度平均3份，每份检测2次，按本发明提供的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，各取10μl注入液相色谱仪，进行大黄素测定。结果见表7。
表7大黄素HPLC加样回收率测定（n=9）
9、样品测定：分别精密称取供试品（批号：081001、090601、090701、090901、090902、091101、091102、100201、100401、100402），依照本发明提供的供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别对10批精乌胶囊中游离蒽醌及结合蒽醌的含量按本发明所提供的含量测定方法进行测定，结果见表8。
表810批样品中游离蒽醌，结合蒽醌测定结果（n=2）
根据上述10批样品测定结果，规定本品每粒含游离蒽醌以大黄素（C15H10O5）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.25mg/粒。含结合蒽醌以大黄素（C15H10O5）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.25mg/粒。
总结：通过我们对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）、大黄素（C15H10O5），大黄素甲醚（C16H12O5）含量测定的修定方法进行分析方法学验证（专属性、线性关系考察、重复性实验、中间精密度实验、稳定性试验、回收率试验、样品测定）考察后，此方法简便、灵敏、精密度好，可为精乌胶囊中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、游离蒽醌和结合蒽醌的测定方法。
本发明使用的药剂、检测方法中的参数选择都是申请人经过反复试验、比较、筛选、总结得到的，是上述众多因素的协同作用才得到本发明的有益效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例：
精乌胶囊的检测方法，它包括以下步骤：
性状：本品为胶囊剂，内容物为棕黄色粉末；气微香，味微苦涩；
鉴别：（1）取本品内容物0.2g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，通过大孔树脂柱（内径1.2cm，柱高15cm），用水100ml洗脱，弃去洗脱液，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材0.25g，加乙醇50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以7∶3的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开至3.5cm，取出，晾干，再以20∶1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开至7.5cm，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
（2）取本品内容物2.7g，加70%乙醇30ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄精对照药材3g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶4∶1∶1的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以用50%硫酸乙醇配制的5%香草醛溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（3）取本品内容物2.7g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣加3∶2的无水乙醇-三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材0.5g，加水50ml，加热微沸1小时，滤过，蒸干，残渣加3∶2的无水乙醇-三氯甲烷1ml使溶解，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以50∶1的环已烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（4）取本品内容物5.4g，加70%甲醇25ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理45分钟，滤过，滤液蒸至无醇味（约剩余8ml），加水15ml，搅匀，滤过，滤液置分液漏斗中，用60～90℃的石油醚振摇提取3次，每次20ml，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材0.5g，加水50ml，加热微沸1小时，取下，放冷，滤过，滤液浓缩至30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以20∶5∶1的30-60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定；
含量测定：
（1）2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，照高效液相色谱法测定，避光操作；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶70的甲醇-水为流动相；检测波长320nm；理论板数以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加稀乙醇45ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理45分钟，取下，放冷，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒含制何首乌以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C20H22O9）计，不得少于6.0mg；
（2）游离蒽醌和结合蒽醌，照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以80∶20的甲醇-0.1%磷酸为流动相；检测波长254nm；理论板数以大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml含大黄素20μg、含大黄素甲醚8μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，取下，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液A（测游离蒽醌用）；另精密吸取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，水浴蒸干，加8%盐酸溶液20ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理5分钟，加三氯甲烷20ml，水浴中加热回流1小时，取出，立即冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次15ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液B（测总蒽醌用）；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与两种供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒游离蒽醌含量以大黄素（C15H10O5）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.25mg/粒；本品每粒结合蒽醌（结合蒽醌含量为总蒽醌含量减去游离蒽醌含量）含量以大黄素（C15H10O5）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.25mg/粒。
按照重量份计，所述精乌胶囊是用制何首乌500g、制黄精500g、酒蒸女贞子704g和墨旱莲250g，按下述方法制备成1000粒胶囊剂；以上四味，取制何首乌200g，粉碎成细粉，剩余制何首乌与其余黄精等三味加水煎煮三次，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.1，加入乙醇使含醇量达60%，充分搅拌，静置24小时，取上清液回收乙醇并浓缩至稠膏，冷后加入制何首乌细粉，搅匀后，烘干，粉碎，装入胶囊，制成1000粒。
Claims (1)
1.精乌胶囊的检测方法，按照重量份计，所述精乌胶囊是用制何首乌500g、制黄精500g、酒蒸女贞子704g和墨旱莲250g，按下述方法制备成1000粒胶囊剂；取制何首乌200g，粉碎成细粉，剩余制何首乌与制黄精、酒蒸女贞子和墨旱莲加水煎煮三次，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.1，加入乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置24小时，取上清液回收乙醇并浓缩至稠膏，冷后加入制何首乌细粉，搅匀后，烘干，粉碎，装入胶囊，制成1000粒；其特征在于，它包括以下步骤：
性状：本品为胶囊剂，内容物为棕黄色粉末；气微香，味微苦涩；
鉴别：(1)取本品内容物0.2g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，通过大孔树脂柱，用水100ml洗脱，弃去洗脱液，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材0.25g，加乙醇50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶3的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开至3.5cm，取出，晾干，再以20∶1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开至7.5cm，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品内容物2.7g，加70％乙醇30ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄精对照药材3g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶4∶1∶1的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以用50％硫酸乙醇配制的5％香草醛溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取本品内容物2.7g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液置水浴上挥干，残渣加3∶2的无水乙醇-三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材0.5g，加水50ml，加热微沸1小时，滤过，蒸干，残渣加3∶2的无水乙醇-三氯甲烷1ml使溶解，制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以50∶1的环已烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)取本品内容物5.4g，加70％甲醇25ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理45分钟，滤过，滤液蒸至无醇味，加水15ml，搅匀，滤过，滤液置分液漏斗中，用60～90℃的石油醚振摇提取3次，每次20ml，合并石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材0.5g，加水50ml，加热微沸1小时，取下，放冷，滤过，滤液浓缩至30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5～10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以20∶5∶1的30～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
该检测方法还包括：
检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定；
含量测定：
(1)2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，照高效液相色谱法测定，避光操作；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶70的甲醇-水为流动相；检测波长320nm；理论板数以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加稀乙醇45ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理45分钟，取下，放冷，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒含制何首乌以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计，不得少于6.0mg；
(2)游离蒽醌和结合蒽醌，照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以80∶20的甲醇-0.1％磷酸为流动相；检测波长254nm；理论板数以大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品和大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml含大黄素20μg、含大黄素甲醚8μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，取下，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液A；另精密吸取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，水浴蒸干，加8％盐酸溶液20ml，用功率为250W，频率为40kHz的超声波超声处理5分钟，加三氯甲烷20ml，水浴中加热回流1小时，取出，立即冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次15ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液B；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液A和供试品溶液B各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每粒游离蒽醌含量以大黄素(C15H10O5)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量计，不得少于0.25mg/粒；本品每粒结合蒽醌含量以大黄素(C15H10O5)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量计，不得少于0.25mg/粒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310151037.XA CN103235082B (zh) | 2013-04-27 | 2013-04-27 | 精乌胶囊的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310151037.XA CN103235082B (zh) | 2013-04-27 | 2013-04-27 | 精乌胶囊的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103235082A CN103235082A (zh) | 2013-08-07 |
| CN103235082B true CN103235082B (zh) | 2015-01-21 |
Family
ID=48883133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310151037.XA Active CN103235082B (zh) | 2013-04-27 | 2013-04-27 | 精乌胶囊的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103235082B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104383261B (zh) * | 2014-10-27 | 2018-05-11 | 贵州神奇药业有限公司 | 一种保健胶囊及其制备方法和鉴别方法 |
| CN108562685B (zh) * | 2018-06-26 | 2020-05-12 | 成都中医药大学 | 一种黄精、桑叶和玉竹配伍药物组合物质量检测方法 |
| CN110763642B (zh) * | 2018-07-27 | 2023-07-07 | 九芝堂股份有限公司 | 一种中药制剂的检测方法 |
| CN111735889B (zh) * | 2020-08-19 | 2021-02-09 | 广东一方制药有限公司 | 化湿败毒组合物的质量检测方法 |
| CN111983106B (zh) * | 2020-08-19 | 2021-06-22 | 广东一方制药有限公司 | 化湿败毒组合物的质量控制方法 |
| CN112180000B (zh) * | 2020-08-19 | 2021-09-10 | 广东一方制药有限公司 | 化湿败毒组合物的检测方法 |
| CN114306491B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-02-28 | 江苏七○七天然制药有限公司 | 一种首乌生发胶囊及其制备、检测和成分鉴别方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3525363A1 (de) * | 1985-07-16 | 1987-01-22 | Puetter Medice Chem Pharm | Verfahren zur herstellung von auf wedelolacton- und/oder desmethylwedelolacton standardisierten extrakten aus eclipta alba und verwendung der extrakte zur herstellung eines lebertherapeutikums |
| GB2439925B (en) * | 2006-07-10 | 2009-01-14 | Chongqing Inst Of Ecological M | Anti-obesity plant extract comprising anthraquinones and its method of preparation |
| CN101711834A (zh) * | 2009-12-22 | 2010-05-26 | 贵州盛世龙方制药股份有限公司 | 一种药物组合物制剂精乌制剂的制备方法 |
-
2013
- 2013-04-27 CN CN201310151037.XA patent/CN103235082B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103235082A (zh) | 2013-08-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103235082B (zh) | 精乌胶囊的检测方法 | |
| CN101850070A (zh) | 中药唐草片的质量标准及检测方法 | |
| CN106353469B (zh) | 一种中药品质的综合评价方法 | |
| CN103197027A (zh) | 芪蛭通络胶囊的质量控制方法 | |
| CN105259295A (zh) | 参枝苓口服液的质量检测方法 | |
| CN101961381A (zh) | 一种丹参配方颗粒的制备方法及其检测方法 | |
| CN104483315A (zh) | 中药制剂壮腰补肾丸的检测方法 | |
| CN101708208B (zh) | 治疗关节肿痛的胶囊制剂的检测方法 | |
| CN109342631A (zh) | 中药组合物的hplc指纹图谱的构建方法及中药组合物的质量检测方法 | |
| CN104569166B (zh) | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 | |
| CN113917041A (zh) | 一种牡丹皮标准汤剂质量检测方法 | |
| CN102441057B (zh) | 一种养血清脑颗粒的hplc指纹图谱检测方法 | |
| CN100437112C (zh) | 一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法 | |
| CN105301168A (zh) | 通络化痰胶囊的质量检测方法 | |
| CN103285306A (zh) | 益气补肾的中药组合物的制备方法及检测方法 | |
| CN101204434A (zh) | 一种消栓滴丸质量标准及检验方法 | |
| CN100464188C (zh) | 治疗抑郁症的药物制剂的质量控制方法 | |
| CN102218122A (zh) | 一种海龙蛤蚧口服液的质量控制检测方法 | |
| CN102175629B (zh) | 一种基于生物活性检测的熟地黄品质评价方法 | |
| CN103211907A (zh) | 四物汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法 | |
| CN101385808B (zh) | 朱珀安神丹的检测方法 | |
| CN104345108B (zh) | 一种清肝片的定性定量检测方法 | |
| CN101979027A (zh) | 金泽冠心胶囊的检测方法 | |
| CN105929080B (zh) | 一种治疗神经根型颈椎病的中药制剂的检测方法 | |
| CN102038921A (zh) | 中药制剂温经丸的质量控制方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 558000 No. 32, middle section of Qishan Avenue, Daping Town, Duyun City, Qiannan Buyei and Miao Autonomous Prefecture, Guizhou Province Patentee after: GUIZHOU SHENGSHI LONGFANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 550001 10th floor, West building, Longgang International Center, No. 117, Zhonghua Middle Road, Guiyang, Guizhou Patentee before: GUIZHOU SHENGSHI LONGFANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |