CN104569166B - 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 - Google Patents
一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104569166B CN104569166B CN201310486071.2A CN201310486071A CN104569166B CN 104569166 B CN104569166 B CN 104569166B CN 201310486071 A CN201310486071 A CN 201310486071A CN 104569166 B CN104569166 B CN 104569166B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- weight portion
- liquid
- solvent
- detection method
- pharmaceutical composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供一种用于治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法,该检测方法包括采用液相色谱法检测所述药物组合物中天麻素的含量;还可以包括采用高效液相色谱法检测所述药物组合物中黄芪甲苷的含量,以及采用薄层色谱法检测所述药物组合物中丹参素钠。本发明所述的检测方法,有助于更加准确地控制所述药物组合物质量,使所述药物组合物质量达到稳定、可控、高效及安全,克服现有技术的不足,为更好的地满足医疗的需要提供有力保证。
Description
技术领域
本发明属于制药技术领域,具体涉及一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物的检测方法,特别是涉及一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的胶囊剂(痫愈胶囊)的检测方法。
背景技术
痫愈胶囊由黄芪、党参、丹参、柴胡、酸枣仁、远志、天麻、钩藤、石菖蒲、胆南星、当归、僵蚕、六神曲、郁金、甘草、制白附子十六味中药材组成,具有豁痰开窍,安神定惊,熄风解痉之功效,用于治疗风痰闭阻所致的用于治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛。方中诸药具有协同作用,能够达到标本兼治的目的。在全国各地医院临床应用过程中,证明其具有显著的临床疗效,深得广大医务工作者和患者的信任。
在现有的痫愈胶囊的检测方法中,仅对黄芪药材中的黄芪甲苷和丹参药材中的原儿茶醛进行了薄层色谱定性鉴别,并对甘草中的甘草酸进行了含量(HPLC)测定。原儿茶醛存在于多种药材中,并非丹参的指标性特有成分,且与活性相关性差。因此,以原儿茶醛为指标成分定性鉴别丹参,专属性差,不能反映药品的质量。另外,现有技术中定量测定项目少,例如对主要成分天麻、黄芪就没有定量检测。所以,有必要进一步完善该产品的检测方法,从而更进一步保证该产品的质量和疗效。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物的新的检测方法,该检测方法能够弥补现有方法的不足,有效控制药物的质量,使药物质量达到稳定、可控、高效及安全的标准,从而更好地满足医疗需要。
为实现上述发明目的,本发明采用如下技术方案:
一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法,所述药物组合物由以下十六味药材制备而成:
黄芪、党参、丹参、柴胡、酸枣仁、远志、天麻、钩藤、石菖蒲、胆南星、当归、僵蚕、六神曲、郁金、甘草、制白附子;
所述检测方法包括采用液相色谱法检测天麻素,所述液相色谱的条件包括:
填充剂为耐水型十八烷基硅烷键合硅胶;
流动相为混合液I;所述混合液I由体积比为1-20∶99-80的A液、B液组成;所述A液选自乙腈、甲醇或乙腈-甲醇混合液,所述B液选自重量体积百分浓度0.01%-1.0%的磷酸水溶液或重量体积百分浓度0.01%-0.5%的醋酸水溶液;
流速为0.5ml/min-1.0ml/min,优选为0.6ml/min;
柱温为20-40℃,优选为30℃;
检测器为紫外检测器,检测波长220nm。
优选的,所述混合液I中,A液为乙腈,B液为重量体积百分浓度0.05%磷酸水溶液,A液、B液的体积比为3∶97。
本发明所述检测方法中,所述液相色谱法检测天麻素,包括如下步骤:
(1)色谱条件与系统适用性试验
以耐水型十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;在所述色谱条件下,理论板数以天麻素峰计算应不低于5000;
(2)对照品溶液的制备
取天麻素对照品,精密称定,加流动相制成每lml含50μg天麻素的溶液,即得;
(3)供试品溶液的制备
取所述药物组合物约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(4)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入效液相色谱仪,测定,即得。
本发明所述检测方法,还包括采用液相色谱法检测黄芪甲苷,所述液相色谱的条件包括:
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶
流动相为混合液II;所述混合液II由体积比为25-45∶75-55的C液和D液组成;所述C液选自乙腈、甲醇或乙腈-甲醇混合液,所述B液选自水、或重量体积百分浓度0.05%-2.0%的无机酸或有机酸的水溶液;
检测器为蒸发光散射检测器检;
漂移管温度为65-130℃,优选为110℃。
优选的,所述混合液II中,C液为乙腈,D液为水,C液和D液的体积比为35∶65。
本发明所述检测方法中,所述液相色谱法检测黄芪甲苷,包括如下步骤:
(1)色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;在所述色谱条件下,理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
(2)对照品溶液的制备
取黄芪甲苷对照品,精密称定,加甲醇制成每1m1含0.2mg黄芪甲苷的溶液,即得。
(3)供试品溶液的制备
取所述药物组合物约5g,精密称定,加甲醇50m1,加热回流30分钟,滤过,用甲醇适量洗涤滤纸及滤渣,合并滤液,蒸干,残渣加水30ml分次使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30ml,合并正丁醇液,用氨试液洗涤3次,每次30ml,弃去氨液,再用水洗涤3次,每次30ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(4)测定
分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
本发明所述检测方法,还包括采用薄层色谱法鉴定丹参素钠;
所述薄层色谱条件包括:采用硅胶G薄层板和体积比为3-7:1-4:0.5-2,优选为5∶2∶1的溶剂E、溶剂F和溶剂G组成的展开剂;所述溶剂E选自氯仿、乙酸丁酯、正丁醇、二氯甲烷或乙醚,所述溶剂F选自乙酸乙酯、甲酸甲酯、丙酮、乙醇或甲醇,所述溶剂G选自水、甲酸甲酯、冰醋酸或甲酸。
优选的,所述展开剂中,溶剂E为氯仿,溶剂F为丙酮,溶剂G为甲酸,溶剂E、溶剂F、溶剂G的体积比5∶2∶1。
所述薄层色谱法鉴定丹参素钠,包括如下步骤:
(1)取所述药物组合物,加水20-40ml,密塞,超声处理20-60分钟,取上清液加稀盐酸调节pH值至2,加选自乙酸乙酯、石油醚和乙醚中的一种溶剂振摇提取1-4次,每次10-30ml,合并提取液,蒸干,残渣加选自甲醇、乙醇、乙腈、石油醚和乙醚中的一种溶剂使溶解,作为供试品溶液;
优选的,取所述药物组合物,加水25ml,密塞,超声处理30分钟,取上清液加稀盐酸调节pH值至2,加乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并提取液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;
(2)另取丹参素钠对照品,加甲醇溶解作为对照品溶液;
(3)吸取上述两种溶液各2-10μl,优选为5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,采用所述展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视。
优选的,本发明所述药物组合物由以下十六味药材制备而成:
黄芪100-200重量份、党参100-200重量份、丹参100-200重量份、柴胡30-120重量份、酸枣仁70-150重量份、远志30-120重量份、天麻70-150重量份、钩藤70-150重量份、石菖蒲70-150重量份、胆南星30-120重量份、当归100-200重量份、僵蚕50-200重量份、六神曲30-120重量份、郁金30-120重量份、甘草30-120重量份、制白附子10-60重量份;
优选的,本发明所述药物由以下十六味药材制备而成:
黄芪140重量份、党参140重量份、丹参140重量份、柴胡70重量份、酸枣仁105重量份、远志70重量份、天麻105重量份、钩藤105重量份、石菖蒲105重量份、胆南星70重量份、当归140重量份、僵蚕105重量份、六神曲70重量份、郁金70重量份、甘草70重量份、制白附子35重量份;
通过如下方法制备:
以上十六味,僵蚕、六神曲粉碎成细粉,过筛,备用;其余十四味加水煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.36的稠膏,加入上述细粉,混合均匀,真空干燥,粉碎成细粉,用80%乙醇适量制粒,在70℃干燥,装入胶囊,即得。
在一个具体实施方案中,所述药物组合物为胶囊剂,一个处方量(即制1000粒)配比如下:黄芪140g、党参140g、丹参140g、柴胡70g、酸枣仁105g、远志70g、天麻105g、钩藤105g、石菖蒲105g、胆南星70g、当归140g、僵蚕105g、六神曲70g、郁金70g、甘草70g、制白附子35g;通过如下方法制备:
以上十六味,僵蚕、六神曲粉碎成细粉,过筛,备用;其余黄芪等十四味加水煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.36(60℃)的稠膏,加入上述细粉,混合均匀,真空干燥,粉碎成细粉,用80%乙醇适量制粒,在70℃干燥,装入胶囊,即得。
上述胶囊即为痫愈胶囊。
在一个具体实施方案中,本发明提供一种所述痫愈胶囊的检测方法;所述检测方法包括采用液相色谱法检测天麻素的含量,采用液相色谱法检测黄芪甲苷的含量,和采用薄层层析法鉴别丹参素钠。
其中,采用高效液相色谱法测定所述天麻素的含量,包括如下步骤:
(1)色谱条件与系统适用性试验
以耐水型十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱温30℃;流动相为混合液I;所述混合液I由体积比为为3∶97的乙腈和重量体积百分浓度0.05%的磷酸溶液责成;检测器为紫外检测器,检测波长220nm。理论板数以天麻素峰计算应不低于5000。
(2)对照品溶液的制备
取天麻素对照品适量,精密称定,加流动相制成每lml含50μg天麻素的溶液,作为对照品溶液。即得。
(3)供试品溶液的制备
取所述痫愈胶囊的内容物适量,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
(4)阴性对照溶液的制备
按所述痫愈胶囊处方比例和工艺制备不含天麻的阴性样品,按照供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。
(5)测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入效液相色谱仪,测定,即得。
上述检测方法中,阴性样品无干扰,样品峰型良好,重现性良好,可以作为测定痫愈胶囊中天麻素含量的依据。
采用液相色谱法检测所述黄芪甲苷的含量,包括如下步骤:
(1)色谱条件与系统适应性试验
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶
流动相为混合液II;所述混合液II由体积比为35∶65的乙腈和水组成;
检测器为蒸发光散射检测器检;
漂移管温度为110℃;
理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
(2)对照品溶液的制备
取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1m1含0.2mg黄芪甲苷的溶液,即得。
(3)供试品溶液的制备
取痫愈胶囊内容物适量,研细,取约5g,精密称定,加甲醇50m1,加热回流30分钟,滤过,用甲醇适量洗涤滤纸及滤渣,合并滤液,蒸干,残渣加水30ml分次使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30ml,合并正丁醇液,用氨试液洗涤3次,每次30ml,弃去氨液,再用水洗涤3次,每次30ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
(4)阴性对照液的制备
按所述痫愈胶囊处方比例和工艺制备不含黄芪的阴性样品,按照供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。
(5)测定
分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
上述检测方法中,阴性样品无干扰,样品峰型良好,重现性良好,可以作为测定痫愈胶囊中黄芪甲苷含量的依据。
采用薄层层析法鉴别丹参素钠,包括如下步骤:
取所述痫愈胶囊10粒的内容物,加水25ml,密塞,超声处理30分钟,离心,取上清液加稀盐酸调节pH值至2,加乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;
另取丹参素钠对照品,加甲醇制成每1ml含1mg丹参素的溶液,作为对照品溶液;
再取按上述痫愈胶囊处方比例和工艺制备的不含丹参的阴性对照样品,按照所述供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。
照薄层色谱法(参见《中国药典》2010版一部附录VIB)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为5∶2∶1的氯仿-丙酮-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏至斑点显色清晰,置紫外光灯365nm下检视。
上述检测方法中,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色的斑点;上述鉴定方法阴性无干扰,样品重现性良好,可以作为鉴别痫愈胶囊中丹参的依据。
与现有技术相比,本发明至少存在以下有益效果:
1、本发明了增加了天麻素的含量测定。天麻为痫愈胶囊处方中的君药,主要化学成分有天麻素、天麻苷元、香草醛、香草醇、倍半萜类、嘌呤类等,其中天麻素是天麻的最主要成分。药理学研究表明,天麻有保护神经细胞、抗惊厥、镇静催眠、镇痛、增强免疫及抗炎、抗衰老作用,是痫愈胶囊发挥豁痰开窍,安神定惊,息风止痉功能的主要物质基础。但现有痫愈胶囊的质量检测方案中,却没有对天麻进行定量或定性测定。为了更好地控制制剂质量,本发明对天麻中天麻素的含量利用高效液相色谱法进行了测定。经过方法学考察证明本法灵敏度高,重复性好,回收率良好,且阴性对照无干扰。整个试验过程可操作性强,可以作为控制本品内在质量的指标之一。
2、黄芪为痫愈胶囊处方中的主药,主要化学成分有黄酮类、皂苷类以及多糖等,其中黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分之一。近年来,国内外已对其药代动力学、药理作用和机制、以及安全性等进行深入研究。黄芪甲苷具有保护心血管、促进神经干细胞增殖、增强机体免疫功能、抗炎、抗衰老等多方面的生物学功。现有技术中仅用定性的薄层色谱法对黄芪进行检测,为了更好地控制制剂质量,本发明采用专属性强、灵敏度高的液相色谱法进行含量测定。经过方法学考察证明本法灵敏度高,重复性好,回收率良好,且阴性对照无干扰。整个试验过程可操作性强,可以作为控制本品内在质量的指标之一。
3、本发明更换了丹参TLC鉴别方法,选择了专属性更强的丹参素钠进行控制,此方法阴性无干扰,样品重性形良好,可以作为鉴别痫愈胶囊中丹参的依据。
本发明通过对所述治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物,尤其是痫愈胶囊中天麻素、黄芪甲苷、丹参素钠等多种成分进行定量、定性检测,能够更加全面地反映药品质量,从而更有效地控制药品的质量,使药品质量稳定可控,最终提高产品的疗效及生物利用度,更好地满足医疗的需要,保证患者用药的有效安全。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明的实施方案,其中:
图1显示的是实施例2中的液相色谱图,1号峰为天麻素的吸收峰;其中,图1A是天麻素对照品色谱图;图1B是痫愈胶囊供试品色谱图;图1C是不含天麻的阴性对照色谱图。
图2显示的是实施例3中的液相色谱图,2号峰为黄芪甲苷的吸收峰;其中,图2A是黄芪甲苷对照品色谱图;图2B是痫愈胶囊供试品色谱图;图2C是不含黄芪的阴性对照色谱图。
图3显示的是实施例4中丹参素钠薄层色谱图,其中,1是阴性对照品,2和8是丹参素钠对照品,3-7、9-13为痫愈胶囊样品。
具体实施方式
下面通过实施例详细说明本发明,应当理解,下述实施例仅用于说明本发明,而不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中,所用的各种中药材、试剂等,如无特殊说明,都可以通过市售途径获得。
其中,天麻素对照品(批号:110807-200205)购于中国药品生物制品检定所;
黄芪甲苷对照品(批号:10781-200613)购于中国药品生物制品检定所;
丹参素钠(批号:110855-200809)购于中国药品生物制品检定所。
实施例1一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的胶囊剂(痫愈胶囊)
1、中药原料处方:黄芪140g、党参140g、丹参140g、柴胡70g、酸枣仁105g、远志70g、天麻105g、钩藤105g、石菖蒲105g、胆南星70g、当归140g、僵蚕105g、六神曲70g、郁金70g、甘草70g、制白附子35g,共制成1000粒。
2、制备方法:以上十六味,僵蚕、六神曲粉碎成细粉,过筛,备用;其余黄芪等十四味加水煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.36(60℃)的稠膏,加入上述细粉,混合均匀,真空干燥,粉碎成细粉,用80%乙醇适量制粒,在70℃干燥,装入胶囊,即得。
实施例2液相色谱法检测天麻素
一、方法学研究
1、测定波长的选择:
称取天麻素对照品适量,以乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)混合液溶解,在200~900nm范围内进行光谱扫描,结果天麻素在220nm波长处有最大吸收,与中国药典2010年版一致,故检测波长选定为220nm。
2、色谱条件与系统适用性试验:
以十八烷基硅烷键合硅胶(耐水型)为填充剂;流动相由乙腈和重量体积比为0.05%磷酸水溶液构成;流速为0.6ml/min;检测波长为220nm。对流动相中乙腈和0.05%磷酸水溶液的体积比进行了考察,结果见表1。
表1 流动相比例考察结果
表1结果显示,乙腈-0.05%磷酸水溶液的体积比为3:97时,天麻素的分离度较高,以天麻素计的理论塔板数最高,保留时间适中。因此,优选的流动相为体积比3:97的乙腈-0.05%磷酸水溶液。在此条件下,理论板数以天麻素峰计算应不低于5000,分离度不小于1.5。
3、对照品溶液的制备
取天麻素对照品适量,精密称定,加流动相制成每lml含50μg天麻素的溶液,作为对照品溶液。
4、专属性实验:
按照实施例1的中药原料处方及制备方法,制备不含天马的阴性样品。取所述不含天麻的阴性样品内容物适量,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得阴性对照液。
取制备得到的阴性对照液10μl,注射入高效液相色谱仪,结果见图1。在所述色谱条件下,阴性对照在与天麻素对照品相同保留时间处未出现色谱峰。表明阴性无干扰,专属性强。
5、提取方法考察:
参考《中国药典》2010年版一部天麻项下的含量测定前处理方法,对提取溶剂进行了考察,分别用稀乙醇和乙醇作为提取溶剂。实验发现,稀乙醇提取率较高,但是色谱图中杂质峰较多,溶剂峰吸收度大,导致基线较高,故选择乙醇作为提取溶剂。
对于提取方法,考察了超声提取和加热回流的提取率,结果表明加热回流比超声提取效率高,故选择加热回流提取。再对加热时间进行考察,结果显示时间对含量影响不大(RSD为2.7%),考虑含量值,确定回流时间为40分钟。结果见表2。
表2 不同提取方法及时间考察结果
因此,优选的供试品制备方法如下:
取待测样品适量,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
6、线性关系考察:
精密称取天麻素对照品11.43mg,置25ml量瓶中,加流动相使溶解,定容至刻度,摇匀;再精密吸取3ml,置25ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为对照品溶液,浓度为:54.864μg/ml。分别精密吸取对照品溶液(54.864μg/ml)1、2、5、10、20、25μl,按上述色谱条件进行测定,以对照品的进样量(μg)为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:
Y(峰面积)=3184960.54X(进样量)-19051.34,R=1,
结果表明,天麻素在0.05486~1.3716μg范围内线性关系良好,结果见表3。
表3 天麻素标准曲线测定结果
7、精密度试验:
精密吸同一浓度的对照品溶液,重复进样7次,每次10μl,按上述色谱条件测定峰面积,结果见表4:天麻素峰面积积分值的相对标准偏差0.3%。
表4 精密度实验结果
测定结果表明,本方法精密度良好。
8、稳定性试验:
取实施例1制备的所述痫愈胶囊内容物,照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,分别于0小时,3小时,6小时,9小时,12小时,18小时,24小时进样,测定。结果见表5。
表5 稳定性实验结果
结果表明,本品24小时内稳定性良好。
9、重复性试验:
取实施例1制备的所述痫愈胶囊内容物6份,按供试品制备方法制成供试品溶液,同法测定,测定结果见表6。
表6 重复性试验结果
结果表明,本方法重复性良好。
10、回收率试验:
采用加样回收法,分别精密加入浓度为1.205mg/ml的天麻素对照品溶液各1ml,蒸干,精密称取已知含量的实施例1制备的所述痫愈胶囊内容物(含量为1.177mg/g)1g,按前述方法制备供试品溶液,按前述色谱条件测定,计算回收率,结果见表7。
表7 回收率实验结果
结果表明,本品具有良好的回收率。
通过以上研究,建立了利用液相色谱法检测痫愈胶囊中天麻素的方法,即:
1、色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶(耐水型)为填充剂;以乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)为流动相;流速为0.6ml/min;检测波长为220nm。理论板数以天麻素峰计算应不低于5000。
2、对照品溶液的制备
取天麻素对照品适量,精密称定,加流动相制成每lml含50μg天麻素的溶液,作为对照品溶液。
3、供试品溶液的制备
取待测样品适量,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4、测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入效液相色谱仪,测定,即得。
二、对9批样品的测定结果
按照实施例1所述的处方和制备方法,制备9批痫愈胶囊,每批分别取胶囊内容物适量,按照上述方法制备供试品溶液,进行测定。含量测定结果如表8所示。
表8 9批样品含量测定结果
通过对9批样品含量测定,考虑到药材来源以及制剂生产、贮藏、结合药典规定的药材含量及转移率结果,制定所述痫愈胶囊每粒含天麻以天麻素计,不得少于0.095mg。
实施例3液相色谱法检测黄芪甲苷
一、方法学研究
1、色谱条件与系统适用性实验:
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水为流动相;蒸发光散射检测器检测。对流动相和蒸发光散射检测器漂移管温度进行了考察,结果见表9和10。
表9 流动相比例考察
表10 漂移管温度考察
表9结果显示,乙腈-水的体积比为35:65时,黄芪甲苷的分离度最高,以黄芪甲苷计的理论塔板数较高,保留时间适中。因此,优选的流动相为体积比35:65的乙腈-水。
表10结果显示,漂移管温度为110℃时,基线噪音低且理论塔板数最高。因此,漂移管温度优选为110℃。
在上述优选的色谱条件下,理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
2、对照品溶液的制备:
取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1m1含0.2mg黄芪甲苷的溶液,即得。
3、专属性试验:
按照实施例1的中药原料处方及制备方法,制备不含黄芪的阴性样品。取所述不含黄芪的阴性样品内容物适量,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得阴性对照液。
取制备得到的阴性对照液10μl,注射入高效液相色谱仪,结果见附图2,表明阴性无干扰,专属性强。
4、提取方法考察:
参考《中国药典》2010年版一部黄芪项下的含量测定前处理方法,对提取方法进行考察,比较超声提取和加热回流的提取率,表明加热回流比超声提取提取效率高;再对加热提取时间进行了考察,结果见表11。结果显示提取时间对含量影响不大(RSD为1.2%),考虑含量值及提取简便性,确定提取时间为30分钟。
另对萃取次数进行了考察,分别提取3次、4次、5次,结果见表11。结果表明萃取4次基本完全(第4次和第5次RD为1.2%),故确定萃取次数为4次。
表11 不同提取方法、时间及萃取次数测定结果
因此,优选的供试品制备方法为:
取待测样品适量,研细,取约5g,精密称定,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,用适量甲醇洗涤滤纸及滤渣,合并滤液,蒸干,残渣加水30ml分次使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30ml,合并正丁醇液,用氨试液洗涤3次,每次30ml,弃去氨液,再用水洗涤3次,每次30ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
5、线性关系考察:
精密称取黄芪甲苷对照品9.32mg,置50ml量瓶中,加甲醇适量使溶解,定容至刻度,摇匀,作为对照品溶液,浓度为:0.1864mg/ml。分别精密吸取对照品溶液2、5、10、20、25、50ul,按上述色谱条件进行测定,以对照品的进样量(μg)的log值为横坐标,以峰面积积分值的log值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:
Y(峰面积)=1.5532X(进样量)+5.7683,R=0.999
结果表明,黄芪甲苷在0.3728~9.32μg范围内log线性关系良好,结果见表12。
表12 黄芪甲苷标准曲线测定结果
峰:黄芪甲苷
名字 | 水平 | X值 | 响应值 | 校正值 | %值差 | 手动 | 忽略 | |
1 | 黄芪甲苷 | 0.372800 | 131678.500000 | 0.382201 | 2.522 | 否 | 否 | |
2 | 黄芪甲苷 | 0.372800 | 116277.000000 | 0.352787 | -5.368 | 否 | 否 | |
3 | 黄芪甲苷 | 0.932000 | 553806.000000 | 0.963680 | 3.399 | 否 | 否 | |
4 | 黄芪甲苷 | 0.932000 | 516077.000000 | 0.920883 | -1.193 | 否 | 否 | |
5 | 黄芪甲苷 | 1.864000 | 1518262.000000 | 1.844668 | -1.037 | 否 | 否 | |
6 | 黄芪甲苷 | 1.864000 | 1527068.000000 | 1.851549 | -0.668 | 否 | 否 | |
7 | 黄芪甲苷 | 3.728000 | 4683918.000000 | 3.809906 | 2.197 | 否 | 否 | |
8 | 黄芪甲苷 | 3.728000 | 4732192.000000 | 3.835140 | 2.874 | 否 | 否 | |
9 | 黄芪甲苷 | 4.660000 | 6591488.000000 | 4.747229 | 1.872 | 否 | 否 | |
10 | 黄芪甲苷 | 4.660000 | 6652191.000000 | 4.775330 | 2.475 | 否 | 否 | |
11 | 黄芪甲苷 | 9.320000 | 18228832.000000 | 9.138250 | -1.950 | 否 | 否 | |
12 | 黄芪甲苷 | 9.320000 | 17461233.000000 | 8.888613 | -4.629 | 否 | 否 |
6、精密度试验:
精密吸取同一对照品溶液进样6次,测定峰面积,以峰面积的log值计算,结果如表13。
表13 精密度实验结果
结果表明:精密度良好。
7、稳定性试验:
取实施例1制备的所述痫愈胶囊内容物适量,照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,分别在2、4、6、8、12、18小时测定,测得数据如表14:
表14 黄芪甲苷稳定性测定结果
结果表明:18小时内供试品溶液的稳定性良好。
8、重复性试验:
取实施例1制备的所述痫愈胶囊内容物6份,照供试品制备方法制成供试品溶液,同法测定,测定结果见表15。
表15 黄芪甲苷重复性试验
9、回收率试验:
采用加样回收法,精密称取已知含量的实施例1制备的所述痫愈胶囊内容物(含量为0.219mg/g)2.5g,共6份,分别精密加入浓度为0.426mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液各1ml,照前述方法制备供试品溶液,按前述色谱条件测定,计算回收率,结果见表16。
表16 回收率实验结果
结果表明,本品具有良好的回收率。
通过以上方法学考察,建立了如下液相色谱法测定黄芪甲苷的方法:
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。
1、色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(35∶65)为流动相;蒸发光散射检测器检测。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
2、对照品溶液的制备
取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1m1含0.2mg黄芪甲苷的溶液,即得。
3、供试品溶液的制备
取待测样品量,研细,取约5g,精密称定,加甲醇50m1,加热回流30分钟,滤过,用甲醇适量洗涤滤纸及滤渣,合并滤液,蒸干,残渣加水30ml分次使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30ml,合并正丁醇液,用氨试液洗涤3次,每次30ml,弃去氨液,再用水洗涤3次,每次30ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4、测定
分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
二、9批样品的含量测定
按照实施例1所述处方和制备方法,共制备9批样品,按照前述含量测定方法,测定其中黄芪甲苷的含量,结果如表17所示。
表17 样品中黄芪甲苷含量测定结果
通过对9批样品含量测定,考虑到药材来源以及制剂生产、贮藏、药典规定并结合水煮工艺的转移率及样品测定值,制定痫愈胶囊每粒含黄芪甲苷不得少于0.048mg。
实施例4薄层色谱法检测丹参素钠
1、试验条件:双槽展开缸(上海信谊);硅胶G(薄层色谱用,青岛海洋化工厂);羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司);薄层板自制,厚度0.3mm。其余试剂均为分析纯。
2、试验步骤:取实施例1制备的所述痫愈胶囊10粒的内容物,加水25ml,密塞,超声处理30分钟,离心,取上清液加稀盐酸调节pH值至2,加乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
另取丹参素钠对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
按照实施例1的中药原料处方及制备方法,制备不含丹参的阴性样品。取所述不含丹参的阴性样品内容物4g,照供试品溶液的制备方法,同法制成阴性对照溶液。
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-甲酸(5∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图3。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照色谱中无相应斑点,表明此方法专属性好。
总之,本发明所述的检测方法,有助于更加准确地控制所述用于治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物,尤其是痫愈胶囊的质量,使痫愈胶囊质量达到稳定、可控、高效及安全,克服现有技术的不足,为更好地满足医疗的需要提供有力保证。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明,本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形,只要不脱离本发明的精神,均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (12)
1.一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法,所述药物组合物由以下十六味药材制备而成:
黄芪、党参、丹参、柴胡、酸枣仁、远志、天麻、钩藤、石菖蒲、胆南星、当归、僵蚕、六神曲、郁金、甘草、制白附子;
其特征在于:所述药物组合物通过如下方法制备:
以上十六味,僵蚕、六神曲粉碎成细粉,过筛,备用;其余十四味加水煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时,第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.36的稠膏,加入上述细粉,混合均匀,真空干燥,粉碎成细粉,用80%乙醇适量制粒,在70℃干燥,装入胶囊,即得;
所述检测方法包括采用液相色谱法检测天麻素,所述液相色谱的条件包括:
填充剂为耐水型十八烷基硅烷键合硅胶;
流动相为混合液I;所述混合液I中,A液为乙腈,B液为重量体积百分浓度0.05%磷酸水溶液,A液、B液的体积比为3∶97
流速为0.6ml/min;
柱温为30℃;
检测器为紫外检测器,检测波长220nm;
所述液相色谱法检测天麻素,包括如下步骤:
(1)色谱条件与系统适用性试验
以耐水型十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;在所述色谱条件下,理论板数以天麻素峰计算应不低于5000;
(2)对照品溶液的制备
取天麻素对照品,精密称定,加流动相制成每lml含50μg天麻素的溶液,即得;
(3)供试品溶液的制备
取所述药物组合物约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,称定重量,水浴回流40分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,蒸干,残渣加流动相适量使溶解,转移至10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(4)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入效液相色谱仪,测定,即得。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法还包括采用液相色谱法检测黄芪甲苷,所述液相色谱的条件包括:
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶
流动相为混合液II;所述混合液II由体积比为25-45∶75-55的C液和D液组成;所述C液选自乙腈、甲醇或乙腈-甲醇混合液,所述D液选自水、或重量体积百分浓度0.05%-2.0%的无机酸或有机酸的水溶液;
检测器为蒸发光散射检测器检;
漂移管温度为65-130℃。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述混合液II中,C液为乙腈,D液为水,C液和D液的体积比为35∶65。
4.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,漂移管温度为110℃。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述液相色谱法检测黄芪甲苷,包括如下步骤:
(1)色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;在所述色谱条件下,理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000;
(2)对照品溶液的制备
取黄芪甲苷对照品,精密称定,加甲醇制成每1m1含0.2mg黄芪甲苷的溶液,即得;
(3)供试品溶液的制备
取所述药物组合物约5g,精密称定,加甲醇50m1,加热回流30分钟,滤过,用甲醇适量洗涤滤纸及滤渣,合并滤液,蒸干,残渣加水30ml分次使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30ml,合并正丁醇液,用氨试液洗涤3次,每次30ml,弃去氨液,再用水洗涤3次,每次30ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(4)测定
分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法还包括采用薄层色谱法鉴定丹参素钠;
所述薄层色谱条件包括:采用硅胶G薄层板和体积比为3-7:1-4:0.5-2的溶剂E、溶剂F和溶剂G组成的展开剂;所述溶剂E选自氯仿、乙酸丁酯、正丁醇、二氯甲烷或乙醚,所述溶剂F选自乙酸乙酯、甲酸甲酯、丙酮、乙醇或甲醇,所述溶剂G选自水、甲酸甲酯、冰醋酸或甲酸。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述展开剂中,溶剂E为氯仿,溶剂F为丙酮,溶剂G为甲酸,溶剂E、溶剂F、溶剂G的体积比5∶2∶1。
8.根据权利要求6或7所述的检测方法,其特征在于,所述薄层色谱法鉴定丹参素钠,包括如下步骤:
(1)取所述药物组合物,加水20-40ml,密塞,超声处理20-60分钟,取上清液加稀盐酸调节pH值至2,加选自乙酸乙酯、石油醚和乙醚中的一种溶剂振摇提取1-4次,每次10-30ml,合并提取液,蒸干,残渣加选自甲醇、乙醇、乙腈、石油醚和乙醚中的一种溶剂使溶解,作为供试品溶液;
(2)另取丹参素钠对照品,加甲醇溶解作为对照品溶液;
(3)吸取上述两种溶液各2-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,采用所述展开剂,展开,取出,晾干,置氨蒸气中熏至斑点显色清晰,置紫外光灯365nm下检视。
9.根据权利要求8所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)的操作为:取所述药物组合物,加水25ml,密塞,超声处理30分钟,取上清液加稀盐酸调节pH值至2,加乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并提取液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液。
10.根据权利要求8所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(3)中,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl。
11.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述药物组合物由以下十六味药材制备而成:
黄芪100-200重量份、党参100-200重量份、丹参100-200重量份、柴胡30-120重量份、酸枣仁70-150重量份、远志30-120重量份、天麻70-150重量份、钩藤70-150重量份、石菖蒲70-150重量份、胆南星30-120重量份、当归100-200重量份、僵蚕50-200重量份、六神曲30-120重量份、郁金30-120重量份、甘草30-120重量份、制白附子10-60重量份。
12.根据权利要求11所述的检测方法,其特征在于,所述药物组合物由以下十六味药材制备而成:
黄芪140重量份、党参140重量份、丹参140重量份、柴胡70重量份、酸枣仁105重量份、远志70重量份、天麻105重量份、钩藤105重量份、石菖蒲105重量份、胆南星70重量份、当归140重量份、僵蚕105重量份、六神曲70重量份、郁金70重量份、甘草70重量份、制白附子35重量份。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310486071.2A CN104569166B (zh) | 2013-10-16 | 2013-10-16 | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310486071.2A CN104569166B (zh) | 2013-10-16 | 2013-10-16 | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104569166A CN104569166A (zh) | 2015-04-29 |
CN104569166B true CN104569166B (zh) | 2016-08-17 |
Family
ID=53085727
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310486071.2A Active CN104569166B (zh) | 2013-10-16 | 2013-10-16 | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104569166B (zh) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104820039B (zh) * | 2015-05-12 | 2016-08-10 | 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 | 天麻中天麻素的含量的测定方法 |
CN105866274A (zh) * | 2016-04-05 | 2016-08-17 | 牡丹江友搏药业股份有限公司 | 一种复方草决明茶的质量检测方法 |
CN109406651B (zh) * | 2018-11-01 | 2021-06-25 | 贵州大隆药业有限责任公司 | 一种治疗心神不宁药物组合物的质量检测方法 |
CN113791152B (zh) * | 2021-09-10 | 2023-02-28 | 西安千禾药业股份有限公司 | 一种hplc法测定痫愈胶囊中多种有效成分含量的方法 |
CN115494175A (zh) * | 2022-09-26 | 2022-12-20 | 西安千禾药业股份有限公司 | 一种痫愈胶囊的含量测定方法 |
CN116898929A (zh) * | 2023-07-21 | 2023-10-20 | 大彭世纪科技有限公司 | 一种安神补脑保健汤 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1785409A (zh) * | 2005-11-17 | 2006-06-14 | 西安千禾药业有限责任公司 | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物及其制备方法 |
-
2013
- 2013-10-16 CN CN201310486071.2A patent/CN104569166B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1785409A (zh) * | 2005-11-17 | 2006-06-14 | 西安千禾药业有限责任公司 | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
归芍合剂中丹参的鉴别和芍药苷的含量测定;庞鹏;《药学与临床研究》;20071231;第15卷(第3期);第2.1节 * |
痫愈胶囊质量标准研究;谢强胜 等;《化学分析计量》;20071231;第16卷(第2期);第46页正文第1段、第3.1小节 * |
黄芪药材中黄芪甲苷含量测定方法的改进;陈有根 等;《中国新药杂志》;20081231;第17卷(第21期);摘要 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104569166A (zh) | 2015-04-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104569166B (zh) | 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法 | |
CN101850070B (zh) | 中药唐草片的检测方法 | |
CN105477166B (zh) | 一种独活寄生汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法 | |
CN101732607B (zh) | 一种花芪中药制剂的质量检测方法 | |
CN101167788B (zh) | 一种用于久病虚损,气阴不足的贞芪扶正中药制剂质控方法 | |
CN103235082B (zh) | 精乌胶囊的检测方法 | |
CN103197027A (zh) | 芪蛭通络胶囊的质量控制方法 | |
CN112903867A (zh) | 一种苓桂术甘汤物质基准的质量控制方法 | |
CN101708208B (zh) | 治疗关节肿痛的胶囊制剂的检测方法 | |
CN104198619A (zh) | 一种小儿止咳糖浆的质量检测方法 | |
CN108459090B (zh) | 济川煎组合物的质量控制方法 | |
CN101181319A (zh) | 一种中药及其制剂的质量控制方法 | |
CN102218122B (zh) | 一种海龙蛤蚧口服液的检测方法 | |
CN109668970A (zh) | 一种中药组合物的超高效液相色谱检测方法 | |
CN102441057B (zh) | 一种养血清脑颗粒的hplc指纹图谱检测方法 | |
CN103169864B (zh) | 增液汤配方颗粒及其制备方法、用途和检测方法 | |
CN102228645A (zh) | 一种治疗小儿食积的中药组合物的质量控制方法 | |
CN101204434A (zh) | 一种消栓滴丸质量标准及检验方法 | |
CN100594034C (zh) | 治疗糖尿病的降糖甲制剂及其制备方法和检测方法 | |
CN105628851B (zh) | 一种中药制剂的检测方法 | |
CN102068627A (zh) | 一种中药制剂心脑静片的质量控制方法 | |
CN105004833A (zh) | 一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法 | |
CN103048410B (zh) | 一种治疗睡眠障碍的薄膜包衣片的检测方法 | |
CN115541756B (zh) | 车前科中药药材或制剂的指纹图谱的构建方法、检测方法和鉴别方法 | |
CN1939472B (zh) | 一种治疗糖尿病的复方制剂的检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: High tech Zone Zhang Bayi Road 710065 Shaanxi city of Xi'an province No. 1 Huixin IBC-B block 11 layer Patentee after: Xi'an Millennium pharmaceutical Limited by Share Ltd Address before: High tech Zone Zhang Bayi Road 710065 Shaanxi city of Xi'an province No. 1 Huixin IBC-B block 11 layer Patentee before: Xian Qianhe Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
CP01 | Change in the name or title of a patent holder |