CN104887771A - 一种治疗神经根型颈椎病的药物制剂及其制备方法和质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗神经根型颈椎病的药物制剂及其制备方法和质量检测方法，其特征在于本发明是在原有专利的实施基础上的延伸，即本发明药物制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊剂，制备方法是在原专利的基础上，在生产工艺上进行优化和筛选，在技术上采用现代化的新设备、新技术、新方法，适合工业化大生产；质量标准研究是在原标准的基础上进行完善和改进，采用HPLC法同时测定成品中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量，以及对所有药味进行薄层鉴别来全面控制质量，保证了临床疗效。

Description

一种治疗神经根型颈椎病的药物制剂及其制备方法和质量检测方法

技术领域

本发明属于中药制剂领域，涉及一种治疗神经根型颈椎病的药物制剂及其制备方法和质量检测方法。

背景技术

颈椎病是临床常见病，多发病，随着现代社会生活节奏加快，工作方式变化，电脑、空调广泛使用，人们遭受风寒湿邪侵袭及屈颈机率都大幅度增加，其发病率不断上升（3.8%上升至10%），且发病年龄不断提前（55岁降至39岁），已取代腰腿疼痛上升成为骨科临床主要病症。神经根型颈椎病是最常见的一种类型的颈椎病，占所有颈椎病类型的60-70%，目前临床上治疗除重症患者必须采用手术外，其余多采用化药来止痛消炎，不能治本，副作用大；中医药在骨伤科颈椎疾患这一类现代医学难治性疾病的治疗领域，具有独特优势，但市场上中成药较少，以颈复康为代表的现有中成药，其功能主治均为治疗所有类型颈椎病，治疗面广，针对性不强，疗效不够突出，疗程相对较长；专门治疗神经根型颈椎病的药物市场仍为空白。

本发明人在对神经根型颈椎病的病因病机、治法治则等进行多年潜心研究之后，禀承吸取历代医家对颈椎病的认识精华，严格遵守治法治则，进行君臣佐使组方配伍，结合现代药剂学、药理学、临床研究成果，研究开发了国家首个批准的治疗神经根型颈椎病的中成药——颈痛颗粒，获得国家药监局的新药证书和生产批件，并申请了该产品的相关发明专利并获得专利授权（专利号：ZL03112032.6，专利名称：一种用于治疗颈椎病的药剂及其制备方法）。

颈痛颗粒自2004年上市以来，受到广大临床医师和患者的欢迎，销售额逐年稳步上升。但产品在生产和销售过程中，还存在以下不完善之处：

1、本品为颗粒剂，在冲服过程中口感苦重，再加上挥发油是喷洒到颗粒表面，挥发油的气味更是影响了产品的口感，导致了部分患者的依从性不好，尤其是年轻患者；

2、生产工艺中在挥发油加入工艺上，是采用喷洒的方式，喷入颗粒中，这种处理挥发油的方式，在90年代是最为常见的工艺，但在多年生产过程中发现，该工艺对挥发油有效成分损失很大，在喷洒过程中、干燥过程中以及成品贮藏过程中均易造成挥发油的损失；此外，将其喷洒到片剂和胶囊剂制剂中，由于挥发油的不断挥发渗出，极易导致片剂花片、胶囊壳变性破裂，严重影响产品的稳定性。经分析本品处方组成中，羌活、威灵仙挥发油成分为颈痛颗粒活血化瘀止痛快速起效的主要物质基础，如果不能保证其含量，即无法保证产品的临床疗效；

3、生产工艺中在三七粉碎工艺方面，采用普通粉碎设备，粉碎成100-120目的形式，加入到制剂中，由于粒度较大，不利于三七药材止痛有效成分人参皂苷、三七皂苷等的吸收和利用，影响了产品疗效的发挥；

4、制剂工艺是采用清膏合并、干燥、再粉碎、制粒、再干燥的方式，工艺繁琐，耗能费时且容易导致污染的不足，最为重要的是，有效成分会因长时间高温高湿、反复干燥受热而造成含量损失降低，影响疗效。

5、质量标准中，在鉴别项下，仅对组方中的4味药进行薄层鉴别，羌活、威灵仙均未进行质量控制；在含量测定项下，是采用薄层扫描法测定三七有效成分人参皂苷Rg1含量，测定手段较为落后，中国药典2010年版基本全部采用现有成熟的高效液相色谱法控制含量，鲜见采用薄层扫描测定含量的了，并且对于三七来讲，仅测定一个指标含量指标人参皂苷Rg1含量，已无法满足中药现代化“多成分、多指标”质量控制的要求。

发明内容

本发明的目的，就是为了解决现有治疗神经根型颈椎病的唯一中成药——颈痛颗粒剂型单一的不足，提供一种克服颗粒剂味苦重的弊端，服用及携带方便的片剂和胶囊剂剂型。上述两个产品均获得国家药监局批准，取得新药证书及生产批件，克服了颗粒剂服用的口感中药味苦重的不足之处，使良药不再苦口；又充分发挥了片剂、胶囊剂体积小，浓度高，服用及携带方便的特点，为本方剂又增添了新剂型，满足了不同患者的要求，尤其是成为年轻患者的首选。

本发明的另一目的，就是为了解决颈痛系列产品制剂在生产工艺中存在的技术不足和弊端，提供一种能够有效保证产品疗效，适应中药现代化的要求的新型制备方法。如采用新型粉碎设备对三七进行微粉化；对羌活、威灵仙挥发油采用β－环糊精包合工艺，实现大生产；对清膏采用一步制粒工艺。在对上述改进和提高的内容相继进行研究后，向国家局提出补充申请，并先后获批。

、微粉化技术：

本发明对处方中的君药三七，采用微粉化技术及设备，将其粉碎至200-300目，可以有效增加水溶性浸出物的含量，从而进一步大大提高了三七的生物利用度，有效保证了产品疗效，结果见表1。

表1  三七粉碎不同粒度对水溶性浸出物含量的影响

                                                  

由表可看出，随着粒度的减小，三七的水溶性浸出物逐渐增加，以200-300目的三七粉，水溶性浸出物含量最高，是普通细粉（100-120目）的1.28倍，从而使水溶性有效成分人参皂苷的生物利用度有所提高。

、β－环糊精包合技术及包合设备：

本发明采用将挥发油用β－环糊精包合成包合物的技术。目前国内外有许多挥发油包合技术的文献发表，但均局限于实验室小试研究，真正将挥发油包合技术成功应用于中药大生产的并不多见，我们采用β-环糊精包合设备，在一个反应罐内，连续完成包合（具有独立的蒸汽加热管道，可以满足温度为40～60℃±1℃的包结反应条件；具有双层搅拌桨，搅拌速度可以保证挥发油及β-CD溶液充分混匀，反应完全）、冷沉（同时具有冰盐水冷却管道，可以满足0～10℃冷沉24h的条件）及滤过分离（下端配有过滤器，上清液一次放出，包结物混悬液一次出液）过程，减少了工序和周转次数，一次生产量可以达到100kg，操作简便，生产效率高。经多年的生产验证，包合率一直稳定在85～90%。

①包结工艺优选试验：

用正交表L₉（3⁴）筛选了挥发油倍他环糊精包结的最佳工艺条件，因素水平表见表2。

表2  因素水平表

   

2.包结方法：取已知倍他环糊精含量的溶液100ml(4g倍他环糊精溶于100ml水)，共取9份，于相应温度（60℃、50℃、40℃）,恒温，在转速300转/分搅拌下加入挥发油（1.4 ml、1.2 ml、1.0 ml），并继续搅拌包结至规定时间（4h、3h、2h），冰箱中冷藏24h，滤过，冷水洗涤包结物，抽干后于50℃减压干燥，称重，计算包结物收得率。

 

试验方案和结果见表2，方差分析表见表3。

表3  L ₉ （3 ⁴ ）正交表

表4 方差分析表

F_1-0.1（2，2）=9         F_1-0.05（2，2）=19         F_1-0.01（2，2）=99

试验结果表明，C因素即挥发油加入量为显著性因素，其中以挥发油加入量1.2ml，搅拌温度为40℃，搅拌时间为3h为最佳包结工艺。

    按以上包结工艺，进行三批放大试验，计算包结物收得率，结果见表5。

 

表5  三批倍他环糊精包结物得率考察

以上结果表明，本包结工艺操作简便，稳定性好，适于生产。

②挥发油喷洒加入与倍他环糊精包结物加入的比较试验——对颈痛胶囊挥发油含量的影响

分别将不同工艺制备的本发明颈痛胶囊（工艺一：挥发油喷洒加入，工艺二：倍他环糊精包结物加入），按照中国药典版附录ⅩD. 挥发油测定法（甲法）测定。

实验方法:分别取不同工艺制备的供试品各1000粒，取内容物，研细，使能通过三号筛，并混合均匀，分别取工艺一、工艺二样品各200g（含油量约为5.4ml），分别取两份，分别称定重量(准确至0.01g), 置1000ml烧瓶中，加水500ml与沸石，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，置电热套中，提取挥发油至尽，约5小时，放冷，读取挥发油体积，结果见表6。 

表6   不同工艺制备的颈痛胶囊挥发油含量比较

实验结果表明：按照工艺一（挥发油直接喷洒加入）制备的样品，在制备过程中，挥发油含量损失达25.9%，按照工艺二(挥发油倍他环糊精包结物加入)制备的样品，在制备过程中，挥发油损失仅为14.8%。

③挥发油喷洒加入与倍他环糊精包结物加入的比较试验——对颈痛胶囊产品6个月稳定性的影响

以颈痛胶囊为例，取实验②项下工艺一样品及工艺二样品，室温放置6个月后，进行挥发油含量比较，按上述挥发油测定试验条件操作，结果见表7。

表7   不同工艺制备的颈痛胶囊挥发油含量比较（放置6个月后）

 

结果表明，按照挥发油直接喷入工艺制备的颈痛胶囊挥发油含量为2.8ml，已损失近48.0%，并且部分胶囊壳表面出现硬脆断裂现象，影响了产品外观及临床疗效。而按照包结工艺制备的颈痛胶囊挥发油含量仍为4.6ml，存放过程中未见损失。

④挥发油喷洒加入与倍他环糊精包结物加入的比较试验——对颈痛颗粒产品6个月稳定性的影响

以颈痛颗粒为例，取室温放置6个月的原专利挥发油喷洒的颗粒和挥发油包结的颗粒，进行挥发油含量比较，按上述挥发油测定试验条件操作，结果见表8。

表8   不同工艺制备的颈痛胶囊挥发油含量比较（放置6个月后）

   

结果表明，采用挥发油包结工艺制成的颗粒剂，放置6个月后，挥发油含量仍较高。

⑤挥发油喷洒加入与倍他环糊精包结物加入的比较试验——对颈痛片产品6个月稳定性的影响

以颈痛片为例，取不同工艺制备的本发明颈痛片（工艺一：挥发油喷洒加入，工艺二：倍他环糊精包结物加入，含油量约为5.3ml）样品，室温放置6个月后，进行挥发油含量比较，按上述挥发油测定试验条件操作，结果见表9。

表9  不同工艺制备的颈痛片挥发油含量比较（放置6个月后）

 

挥发油含量测定结果表明，按照挥发油直接喷入工艺制备的颈痛片挥发油含量为3.2ml，已损失近55.0%，并且部分片剂表面出现花片现象，影响了产品外观及临床疗效。而按照包结工艺制备的颈痛片挥发油含量为4.4ml，存放过程中未见损失。

综上所述，本发明以颈痛颗粒、颈痛胶囊、颈痛片为例，通过正交试验，以及三批中试放大生产，确定挥发油倍他环糊精包结最佳工艺条件；并对不同工艺制备的产品进行对比试验，结果表明，采用挥发油倍他环糊精包结工艺制备的颈痛胶囊及颈痛片，挥发油在制备及放置过程中，损失少，能更有效保证临床疗效。

、在制剂过程中采用先进的一步制粒技术：

三七中有效成分人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1，在高温高湿条件下，即使是80℃以下真空干燥8小时，其含量仍会降低达20%以上；并且，传统中药颗粒剂的制粒工序需要干燥、粉碎、混合、制粒、再干燥等过程，工艺繁琐，耗能费时且容易导致污染。本发明对一步制粒工艺进行了研究：

①制粒温度及其他条件的筛选

在本品的生产过程中，发现制粒温度对产品有较大影响。进一步作了筛选。

表10     不同制粒温度对制粒过程的影响

结果表明，本品最佳制粒温度在70℃，温度过高容易导致颗粒发粘而聚结，导致塌锅，而温度过低则制粒、干燥速度较慢。因此确定本品制粒温度为60～70℃。喷雾速度、风机转速、雾化压力等设备运行条件可根据不同的设备型号自行调节。

②一步制粒工艺与原制粒工艺对有效成分含量、生产周期的影响：

分别取不同工艺制备的本发明颈痛颗粒（工艺一：原专利工艺，清膏加三七粉，混合，干燥，制粒；工艺二：清膏加三七粉，混合，一步制粒），按照本品规定的质量标准项下含量测定条件测定有效成分人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量，结果见下表。

表11   不同制粒条件对人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1含量的影响 

*：均已折算到药材的百分含量

结果表明，不同制粒方式对混合清膏中人参皂苷Rg₁及Re含量影响较大，原专利工艺，采用干燥、粉碎、制粒工艺，生产周期长，工序周转多，极容易导致污染，受热时间长达36小时，人参皂苷含量损失近50%；本发明采用一步制粒工艺，混合、喷雾、成粒、干燥几步工序在同一容器内一步完成，仅需6小时，减少工序和周转次数，有效防止污染，在此工艺条件下，人参皂苷受热时间大大缩短，含量转移率在80%以上。同时，因为工序和时间缩短，可有效节能60%～80%。

本发明的再一目的，就是在生产工艺改进的基础上，提高完善颈痛系列产品的质量标准，对成品组方内所有药味均进行质量控制，包括三七的显微鉴别；川芎、延胡索及所含成分延胡索乙素、羌活所含成分紫花前胡苷、白芍所含成分芍药苷、威灵仙所含成分齐墩果酸、葛根及所含成分葛根素的薄层鉴别；采用HPLC色谱法测定三七有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。并向国家局提出补充申请，先后获批。

表12  本发明专利与原专利产品质量检测指标对比

从表中可以看出，本发明专利对产品质量标准进行了系统深入的研究，新增和提高了质量检测指标，尤其是在含量测定方面，采用高效液相色谱法，与薄层扫描法相比，该方法具有分辨率高，准确度高的特点，同时测定指标也由原专利的单一成分增加为三个成分，从而使颈痛系列产品的质量标准日臻完善，更加全面、有效的控制药品质量，进而保证临床疗效。

换言之，本发明是在原发明专利（专利号：ZL03112032.6，专利名称：一种用于治疗颈椎病的药剂及其制备方法）的基础上的延伸。

本发明者经过对本项目的反复锐意研究，经过上述对原专利的系统深入的工艺改进、技术创新和标准完善提高后，完成了本发明。经产品上市后，陆续多次对产品的临床疗效进行验证和研究，如2004-2006年治疗神经根型颈椎病患者43例，总有效率达93.3%；2004-2006年治疗神经根型颈椎病患者76例，总有效率达95.24%；2005-2006年治疗神经根型颈椎病患者60例，总有效率达96.67%；2006-2007年治疗神经根型颈椎病患者45例，总有效率达94.3%；2006年治疗神经根型颈椎病患者84例，总有效率达94.05%；2008-2009年治疗神经根型颈椎病患者52例，总有效率达96.15%。上述临床验证结果表明，本发明经工艺改进、技术创新后，产品疗效较原发明专利的临床疗效（总有效率92%）更加显著。

本发明的技术方案是：

1、三七粉碎成微粉；

2、羌活、威灵仙提取挥发油，挥发油用倍他环糊精包结成包结物，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣再加水煎煮1小时，滤液备用；

3、葛根、白芍加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤液与上述两水溶液合并、浓缩、醇沉，回收乙醇，浓缩后成为在50℃下相对密度为1.25～1.30的清膏；

4、川芎、延胡索用乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，弃去滤渣，提取液回收乙醇，浓缩成50℃下相对密度为1.25～1.30的清膏；

5、两种清膏合并，加入三七微粉、挥发油倍他环糊精包结物、糊精,制粒，分装，即为颗粒剂；或两种清膏合并，加入三七微粉、挥发油倍他环糊精包结物,制粒，加入适量微晶纤维素和硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即为片剂；或两种清膏合并，加入三七微粉、挥发油倍他环糊精包结物,制粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，即为胶囊剂。

经过上述锐意研究，完成了本发明，取得了如下有益效果：

1、剂型齐全，满足患者需求：

本发明片剂和胶囊剂的研制成功，克服了颗粒剂在服用时的口感中药味苦、重的不足之处，使良药不再苦口；又充分发挥了片剂、胶囊剂体积小，浓度高，服用及携带方便的特点，为本方剂又增添了新剂型，满足了不同患者的要求，尤其是成为年轻患者的首选。

、微粉化技术：

采用微粉化技术及设备，提高了三七的生物利用度，有效保证了产品疗效。

、β－环糊精包合技术：

采用将挥发油用β－环糊精包合成包合物的技术，并将其应用于中药大生产，达到如下效果：（1）保证了挥发油含量，奠定了产品起效迅速的物质基础，进而保证疗效；（2）应用到片剂和胶囊剂制剂中，成功避免了传统工艺中喷入挥发油导致的片剂花片、胶囊壳变性破裂的问题；（3）本挥发油β－环糊精包合工艺可为全国中药产业起到示范作用，使含有挥发性成分即医嘱“后入”的药味（广泛用于感冒和心脑血管、骨伤科及外科用药）的有效成分得以保留。采用该技术可令中成药起效更迅速，疗效更突出。 

、在制剂过程中采用先进的一步制粒技术：

本发明采用的一步制粒工艺，达到如下效果：（1）保证有效成分含量；（2）有效防止污染：减少了工序和周转次数。（3）缩短生产周期。（4）节能降耗：因为工序和时间缩短，大大节约了蒸汽、电等能源，可节能40%～50%。

、质量标准完善可控

提高完善了颈痛系列产品的质量标准，对成品组方内所有药味均进行质量控制，尤其是采用HPLC法同时测定成品中人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量，突破以往中成药标准中以“单成分、单指标”控制，而由“多成分、多指标”进行质量控制。可以更加全面、有效的控制药品质量，进而保证临床疗效。

具体实施方式

实施例1：

三七250g粉碎成微粉；羌活1000g、威灵仙1000g提取挥发油，挥发油用倍他环糊精（1ml：3.3g）包结成包结物，煎液滤过；药渣再加水煎煮1小时，滤过，合并二次滤液，备用；葛根750g、白芍750g加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述滤液合并，浓缩至相对密度为1.12(50℃)，加乙醇使含醇量达60%，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤渣用60%乙醇洗涤一次，洗涤液滤过，与上述滤液合并，回收乙醇,浓缩至相对密度为1.26 (50℃)的清膏；川芎750g、延胡索500g加乙醇加热回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，合并提取液，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.26(50℃)的清膏；与上述清膏合并，混匀，加入三七微粉及挥发油倍他环糊精包结物、糊精，制成1000g颗粒，即得本发明颗粒剂——颈痛颗粒。

实施例2：

三七250g粉碎成微粉；羌活1000g、威灵仙1000g提取挥发油，挥发油用倍他环糊精（1ml：3.3g）包结成包结物，煎液滤过；药渣再加水煎煮1小时，滤过，合并二次滤液，备用；葛根750g、白芍750g加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述滤液合并，浓缩至相对密度为1.14(50℃)，加乙醇使含醇量达60%，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤渣用60%乙醇洗涤一次，洗涤液滤过，与上述滤液合并，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.27(50℃)的清膏；川芎750g、延胡索500g加乙醇加热回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，合并提取液，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇， 浓缩至相对密度为1.27(50℃)的清膏；与上述清膏合并，混匀，加入三七微粉及挥发油倍他环糊精包结物，制粒，加入微晶纤维素及硬脂酸镁，压制成1000片，包衣，即得本发明片剂——颈痛片。

实施例3：

三七250g粉碎成微粉；羌活1000g、威灵仙1000g提取挥发油，挥发油用倍他环糊精（1ml：3.3g）包结成包结物，煎液滤过；药渣再加水煎煮1小时，滤过，合并二次滤液，备用；葛根750g、白芍750g加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述滤液合并，浓缩至相对密度为1.15(50℃)，加乙醇使含醇量达60%，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤渣用60%乙醇洗涤一次，洗涤液滤过，与上述滤液合并，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.29(50℃)的清膏；川芎750g、延胡索500g加乙醇加热回流提取二次,第一次2小时，第二次1小时，合并提取液，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇， 浓缩至相对密度为1.28(50℃)的清膏；与上述清膏合并，混匀，加入三七微粉及挥发油倍他环糊精包结物，制粒，加入硬脂酸镁，装胶囊，制成1000粒，即得本发明胶囊剂——颈痛胶囊。

实施例4：

对本发明颈通系列产品处方中所有药味均进行质量控制，包括三七的显微鉴别；川芎、延胡索及所含成分延胡索乙素、羌活所含成分紫花前胡苷、白芍所含成分芍药苷、威灵仙所含成分齐墩果酸、葛根及所含成分葛根素的薄层鉴别；采用HPLC色谱法测定三七有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。以本发明系列产品的颗粒剂为例，阐述本发明的质量控制方法。

三七的显微鉴别：取本品，置显微镜下观察：淀粉粒甚多，单粒圆形，半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物（三七）。

川芎的薄层鉴别：取本品3g，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液6μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

延胡索及延胡索乙素的薄层鉴别：取本品3g，加乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水（浓氨试液调节pH值至9～10）10ml使溶解，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各6μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—三氯甲烷—甲醇（7.5：4：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

羌活所含成分紫花前胡苷的薄层鉴别：取本品1g，加甲醇5ml，超声处理20分钟，静置，取上清液作为供试品溶液。另取紫花前胡苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用3%醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

白芍所含成分芍药苷的薄层鉴别：取芍药苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液3μl及[鉴别]（2）项下的供试品溶液6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

威灵仙所含成分齐墩果酸的薄层鉴别：取本品1g，加乙醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液浓缩至约20ml，加盐酸3ml，加热回流1小时，加水10ml，放冷，加石油醚（60～90℃）25ml振摇提取，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇10ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.45mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸（20：3：0.2）为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和30分钟，展距15cm以上，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

葛根及葛根素的薄层鉴别：取葛根对照药材0.8g，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液。另取葛根素对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取川芎鉴别项下的供试品溶液6μl、上述对照药材和对照品溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水（7：2.5：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

三七有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量测定：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于3000。

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0～17	18	82
17～50	18→36	82→64

精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.5mg、人参皂苷Rb1 0.5mg、三七皂苷R1 0.1mg的混合溶液，即得。取装量差异项下的本品适量，研细，取约1.3g，精密称定，加乙醚40ml，加热回流30分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣及滤纸挥尽乙醚，再精密加入甲醇40ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量, 摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次10ml，合并正丁醇液，用2%碳酸钠溶液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗至中性（2次，每次20ml），取正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。 

Claims (4)

1.一种治疗神经根型颈椎病的系列中药制剂，其特征在于剂型包含颗粒剂，片剂，胶囊剂；其制备方法是：

（1）三七粉碎成微粉；

（2）羌活、威灵仙提取挥发油，挥发油用倍他环糊精包结成包结物，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣再加水煎煮1小时，滤液备用；

（3）葛根、白芍加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤液与上述两水溶液合并、浓缩、醇沉，回收乙醇，浓缩后成为在50℃下相对密度为1.25～1.30的清膏；

（4）川芎、延胡索用乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，弃去滤渣，提取液回收乙醇，浓缩成50℃下相对密度为1.25～1.30的清膏；

（5）两种清膏合并，加入三七微粉、挥发油倍他环糊精包结物、糊精,制粒，分装，即为颗粒剂；或两种清膏合并，加入三七微粉、挥发油倍他环糊精包结物,制粒，加入适量微晶纤维素和硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即为片剂；或两种清膏合并，加入三七微粉、挥发油倍他环糊精包结物,制粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，即为胶囊剂。

2.如权利要求1所述的一种治疗神经根型颈椎病的系列中药制剂的制备方法，其特征在于步骤（2）中挥发油包结条件是：挥发油与倍他环糊精的体积质量之比为1:3.3，包结控制温度是40℃，控制搅拌时间是3小时。

3.如权利要求1所述的一种治疗神经根型颈椎病的系列中药制剂的制备方法，其特征在于步骤（3）中两水溶液合并、浓缩、醇沉条件是：浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.15的浓缩液，加乙醇使含醇量达60%，搅匀，冷藏过夜。

4.如权利要求1所述的一种治疗神经根型颈椎病的系列中药制剂，其特征在于其质量检测指标为：三七的显微鉴别；川芎、延胡索及所含成分延胡索乙素、羌活所含成分紫花前胡苷、白芍所含成分芍药苷、威灵仙所含成分齐墩果酸、葛根及所含成分葛根素的薄层鉴别；采用HPLC色谱法测定三七有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。